ЖК «Мёд» г. Владивосток, ул. Марченко, 4, Первореченский район Срок сдачи: 01/03/2024 Застройщик: ООО «ИСК Система»
Описание ЖК «Мёд»
По словам застройщика, в этом проекте пересмотрен весь предыдущий опыт (ЖК «Elements» и ЖК «Высота») в контексте мировой пандемии коронавируса: времени, когда мы прочувствовали все неудобства постоянной жизни в старых домах с непроработанной инфраструктурой. «Мёд» спроектирован так, чтобы каждому его жильцу было максимально комфортно на его территории.
При строительстве и отделке используются премиальные материалы, которые уже прошли проверку временем. Фасад выполнен из алюминиево-композитных панелей лучшего отечественного производителя «Метал Колор
Проектом предусмотрены квартиры площадью от 37м2 до 91м2. В большинстве из них устанавливаются панорамные окна, чтобы еще больше визуально расширить жилую площадь.
Благоустройство придомовой территории: застройщик займется озеленением около 4000 кв.м. территории возле «Мёда». Кроме того, на крыше ЖК будет обустроена собственная workout-зона.
В самом жилом комплексе появится отдельная парковка для колясок, где родители смогут безбоязненно оставлять все для прогулки. Безопасности внутри «Мёда» уделено особое внимение: территория ЖК будет закрыта от посторонних.
В холле жилого комплекса будет обустроен коворкинг для жильцов, в котором можно будет устроить рабочую встречу, отдохнуть или заняться творчеством.
Все МОПы выполнены в скандинавском стиле, с использованием теплых пастельных тонов.
Въезд на каждый этаж подземной парковки (90 машиномест, 10 гостевых машиномест) осуществляется через отдельные ворота. Прямо с парковки можно попасть в жилую часть дома с помощью финского лифта KONE.
Сдача дома запланирована на первый квартал 2024 года.
Отопление:
Высота потолков: 2,7
Цены на квартиры в ЖК «Мёд»
повысить потенцию отзывы
повысить потенцию отзывыповысить потенцию отзывы
>>>ПЕРЕЙТИ НА ОФИЦИАЛЬНЫЙ САЙТ >>>Что такое повысить потенцию отзывы?
Я с детства страдаю полнотой, поэтому проблемы в интимном плане появились рано. Проходил обследование, врач сказал, что нужно похудеть. Но у меня не получается. После 3 месяцев голодовки сил совсем не осталось. Вернулся к прежнему образу жизни и решил попробовать добавки для эрекции. Выбор остановил на капсулах Эроксин Экстра. Растительные экстракты очень полезны для организма. Редкие травы помогли добиться быстрого возбуждения и стойкой эрекции. Сейчас секс с женой доставляет удовольствие и длится не менее 1,5 часов. Мы довольны!
Эффект от применения повысить потенцию отзывы
Врачи рекомендуют принимать средство при следующих состояниях: Ослабление (отсутствие) эрекции. Слабое половое влечение к противоположному полу. Утрата чувственных ощущений во время полового акта. Невозможность зачать ребенка. Уменьшение объема спермы. Быстрая утомляемость, подавленное состояние, бессонница.
Мнение специалиста
Я с детства страдаю полнотой, поэтому проблемы в интимном плане появились рано. Проходил обследование, врач сказал, что нужно похудеть. Но у меня не получается. После 3 месяцев голодовки сил совсем не осталось. Вернулся к прежнему образу жизни и решил попробовать добавки для эрекции. Выбор остановил на капсулах Эроксин Экстра. Растительные экстракты очень полезны для организма. Редкие травы помогли добиться быстрого возбуждения и стойкой эрекции. Сейчас секс с женой доставляет удовольствие и длится не менее 1,5 часов. Мы довольны!
Как заказать
Для того чтобы оформить заказ повысить потенцию отзывы необходимо оставить свои контактные данные на сайте. В течение 15 минут оператор свяжется с вами. Уточнит у вас все детали и мы отправим ваш заказ. Через 3-10 дней вы получите посылку и оплатите её при получении.
Отзывы покупателей:
Юля
Ия
Eroxin для потенции приятно удивляет своим благотворным воздействием на мужской организм. Капсулы эффективно стимулируют и поддерживают эрекцию с первого же приема, усиливают чувствительность во время секса, продлевают половой акт. А натуральный состав гарантирует безопасность и отсутствие противопоказаний к применению.
Так получилось, что супругу был назначен Эроксин Экстра. Мы думали — лечение затянется на пару недель, но ошиблись и уже на третий день, после начала приема, почувствовали результат:) Это при том, что муж пил по одной капсуле один раз в день! Где купить повысить потенцию отзывы? Я с детства страдаю полнотой, поэтому проблемы в интимном плане появились рано. Проходил обследование, врач сказал, что нужно похудеть. Но у меня не получается. После 3 месяцев голодовки сил совсем не осталось. Вернулся к прежнему образу жизни и решил попробовать добавки для эрекции. Выбор остановил на капсулах Эроксин Экстра. Растительные экстракты очень полезны для организма. Редкие травы помогли добиться быстрого возбуждения и стойкой эрекции. Сейчас секс с женой доставляет удовольствие и длится не менее 1,5 часов. Мы довольны!
http://logenamerica.com/userfiles/sredstvo_bystro_povyshaiushchie_potentsiiu3823.xml
http://e-ceramika.pl/userfiles/povysit_potentsiiu_posle_50_let7146.xml
http://metabolit-plus.ru/files/file/povysit_potentsiiu_otzyvy6859.xml
http://absolute-siberia.com/userfiles/kitaiskie_preparaty_dlia_potentsii_kupit7555.xml
Врачи рекомендуют принимать средство при следующих состояниях: Ослабление (отсутствие) эрекции. Слабое половое влечение к противоположному полу. Утрата чувственных ощущений во время полового акта. Невозможность зачать ребенка. Уменьшение объема спермы. Быстрая утомляемость, подавленное состояние, бессонница.
повысить потенцию отзывы
Я с детства страдаю полнотой, поэтому проблемы в интимном плане появились рано. Проходил обследование, врач сказал, что нужно похудеть. Но у меня не получается. После 3 месяцев голодовки сил совсем не осталось. Вернулся к прежнему образу жизни и решил попробовать добавки для эрекции. Выбор остановил на капсулах Эроксин Экстра. Растительные экстракты очень полезны для организма. Редкие травы помогли добиться быстрого возбуждения и стойкой эрекции. Сейчас секс с женой доставляет удовольствие и длится не менее 1,5 часов. Мы довольны!
Мед – как мужчине использовать пчелиное лакомство для потенции? 20574 0. Пчелиное лакомство в сочетании с орехами, сухофруктами, лимоном и некоторыми другими ингредиентами – известнейшие в нетрадиционной медицине снадобья для борьбы с половой слабостью и бесплодием. Мед для потенции. Мед для потенции считается эффективным средством. Он включён в народные рецепты, которые применяет и традиционная медицина. Продукция пчеловодства знаменита комплексным влиянием на здоровье: от профилактики до лечения заболеваний и нарушений в работе. Мёд – продукт пчеловодства, хорошо известный своими полезными свойствами. Рассмотрим их для организма мужчины, как правильно употреблять его в терапевтических целях и от чего помогает. Цветочный мед для повышения потенции у мужчин – является вторым по важности. При регулярном применении чистого и натурального продукта наблюдается быстрое восстановление мужской половой системы. Как влияет на потенцию хвойный мёд? Хвойный мёд является одним из лучших для мочеполовой системы мужчины. Однако стоит признать, что в странах СНГ он не получил широкого распространения. Мед для мужского здоровья. 11.06.2020 Потенция 1 Комментарий 447 Просмотров. Нарушения потенции в настоящее время не . Чем полезен мед для мужчин. Мед и продукты пчеловодства – это природные органические соединения, в состав которых входят практически все компоненты, необходимые для обменных. У разных сортов меда своя польза для мужчин. Каштановый мед подходит при проблемах: простатите, снижении потенции и эрекции. Гречишный улучшает репродуктивную функцию, предотвращает развитие бактерий и развитие болезней мочеполовой системы, помогает от анемии. Цветочный мед. Современные мужчины часто жалуются на сбои в работе сердечно-сосудистой системы, на проблемы пищеварения, на нарушения потенции и хроническую усталость. Каждый мужчина в своей жизни сталкивается с некоторыми расстройствами потенции. При своевременном выявлении проблемы, от нее можно очень быстро и легко избавиться. Мед — самое популярное народное средство усиления мужской потенции. Польза меда для мужчин известна с древних времен. Наши далекие предки регулярно употребляли этот продукт не только для того, чтобы лечиться от простуды, но и с целью сохранения мужской силы. Компоненты меда и его целебные. Мед для потенции – средство для улучшения мужской половой функции, о котором многие наслышаны. Существует немало способов его приёма и народных рецептов, помогающих вернуть мужскую силу. Любой мужчина заботиться о своём здоровье и желает быть в постели отличным любовником. Мёд является. Мед является ценным продуктом для человеческого организма. Он применяется для лечения различных заболеваний. Мужчины используют мед для повышения потенции.
Семейная винодельня «Бабушкина Хата»
страничка в инстаграм:https://www.instagram.com/babushkina_hata.rf/
Хата моей любимой бабушки 1947 года постройки с полностью воссозданным аутентичным интерьером ! Винный погреб с широким ассортиментом натурального домашнего вина и чачи с бесплатной дегустацией.
Август 2021 года .Начали дегустацию Сухого красного вина из сорта винограда Мальбек,он действительно прекрасен,густое плотное темнорубиновой насыщенное вино
20 сентября начал дегустацию и продажу малиновой настойки
20 июня 2018 года открыл бочку красностопа золотовского . Вино выдержанное марочное с характерным вкусом и ароматом .Скоро начнем продавать после отдыха в стекле.
25 ноября 2017
года будет проводится очередной ежегодный сбор виноделов города Сочи со своей продукцией для проведения праздника молодого вина
Обсуждение на ПриветСочи >>>
01.11.2017
Про нас написала Лента.ру! Читать>>>
28.07.2017
Начало продажи мёда с нашей пасеки в Красной поляны. Подробнее >>>
Отзывы написанные на сочинском форуме местными жителями
https://www.facebook.com/vladislav.serebryakov.7/videos/1762694343785653/?comment_id=1768587243196363&reply_comment_id=1768755566512864&ref=tahoe
http://www.privetsochi.ru/blog/history/50864.html
http://www.privetsochi.ru/blog/walking/51323.html
http://www.privetsochi.ru/blog/walking/55625.html
http://www.privetsochi.ru/blog/photo/59839.html
http://www.privetsochi.ru/blog/walking/71057.html
http://forum.allsochi.info/showthread.php?t=55087
http://forum.allsochi.info/showthread.php?t=56421
отзывы присланные и написанные на других форумах.
https://www.instagram.com/p/BnbtOcOg8Wp/?hl=ru&taken-by=ksenya_tss_
babushkina_hata.rfksenya_tss_Больше месяца нахожусь в Сочи. Не хочу писать про этот город, скажу, что он просто не мой🤷♀️ и вот уже через несколько дней возвращаюсь в Москву. Думала, что привезти на подарки из этого города🤔 Решила, что надо обязательно вино и чачу👯♀️🍷 долго думала, где же купить алкоголь и как бы не отравить родственников какой-нибудь бодягой😬
Спрашивала местных жителей, где что купить, но доверие не вызывало. И вот на просторах интернета я наткнулась на @babushkina_hata.rf 😍 Почитала отзывы и решила, надо брать🎉 К сожалению, самой приехать на бесплатную дегустацию не получилось. Заказала через сайт: вино, чачу, коньяк, настойку, мед. Всего по несколько штук😋 на следующей день все уже было у меня дома в коробках и отлично упаковано. И тут мы с Сашей не удержались и открыли одну бутылочку красного сухого🙈 Я бокал смаковала часа 2, растягивала удовольствие🤩 очень вкусное вино, именно то, что я искала. И не страшно за своё здоровье. @babushkina_hata.rf это семейная винодельня и дом-музей. Все вызывает доверие, также отношение самого хозяина (Романа). А ещё мне подарили полкг краснополянского каштанового мёда, такой невероятный мёд я никогда не ела🍯 хоть что-то приятное от города Сочи у меня теперь будет в воспоминаниях😄 Кстати, всю продукцию можно заказать в любую точку России!) Думаю, что я теперь постоянный клиент💓
Заходили недавно к Роману очередной раз купить домашнее вино, но в этот раз ушли не только с вином но и отличным мёдом. Я раньше слышал о Краснополянском мёде, о том что он очень вкусный и полезный. Честно сказать я не очень разбираюсь в различных видах мёда, но краснополянский каштановый мёд Романа произвёл только положительные впечатления. С фирменной горчинкой, темно коричневый, такой какой и должен быть настоящий каштановый мёд. Роман сказал что его хорошие друзья имеют пасеку в Красной поляне, и этим летом пчелы собрали рекордный урожай мёда. В итоге ушёл довольный, купив трёх мишек каштанового и липового мёда.
Евгений
Мы с друзьями отдыхали в Адлере, и искали где купить вино и чачу, конечно здесь этого добра можно купить на каждом углу, но нам нужно было самое лучшее. Подруга в поиске по интернету нашла «Бабушкину хату» мы тут же собрались и поехали в гости к Роману. Дорогу нашли быстро, по пути можно заехать на дачу Сталина и на гору Ахун, все близко:) Роман встретил нас, провёл прекрасную экскурсию по своим владениям, показал процесс изготовления вина, коньяка, чачи, настойки, в каких необыкновенных сосудах хранятся вина, оказалось что это хобби Романа коллекционировать дореволюционные «бутыли». Мы продегустировали восхитительные вина, и были в полном восторге, качество отменное, коньяк выше всяких похвал, чача «огонь»!!! Экскурсия по хате произвела на нас так же необыкновенное впечатление, все тут дышит любовью, светом, добром и типичным колоритом прошлых лет. Сказать с какими положительными эмоциями мы от туда уехали, ни чего ни чего ни сказать, жалеем только об одном, что не скупили весь погреб;-) Но мы обязательно вернёмся, ну или точно закажем доставку до Москвы!!! Спасибо огромное;)
Ольга
Были в середине июля 2016 года у Романа в гостях. Посмотрели музей. Столько воспоминаний сразу нахлынуло! Большое спасибо за то что хронит память наших предков. С какой любовью они вышивали салфеточки, рубахи, рушники. Как здорово, что всё это сохранилось и всю эту красоту могут увидеть наши дети. Побывали в погребе у Романа. На пробовались такой вкуснятина!!! Домашнее вино ПОТРЯСАЮЩЕЕ! Настоящая Чача выше всяких похвал! Естественно купили с собой. Уже кончается).Хозяин просто ЧУДЕСНЫЙ человек, радушный, приветливый, общительный. Побольше бы таких людей!!! Роман, спасибо вам огромное и за экскурсию, и за ЧУДЕСНОЕ ВИНО и за общение!!!
Елена
Пишу с огромной благодарностью! Очень понравилось вино и чача, которые мы приобрели, отдыхая в Сочи! Уже допиваем все, что купили ( взяли где-то 9 литров) понравился разнообразный и насыщенный букет каждого вина! Обязательно скоро закажем!!!
Елена
Девочки, вино реально классное. На мой вкус, конечно же. Сегодня нет вдохновения, но если коротко, то так пристрастилась к вину Романа, что магазинные пить совершенно не хочется.
Это вино молодое, легкое. Легко пьется, чувство опьянения легкое, голова остается ясной, мысли светлые. Настраивает на позитивную беседу. Можно выпить много, утром никакого похмелья.
Единственный недостаток — Ром, ну почему сухого так мало? Если еще остался Цитрон, то бронирую 5 л., оплачу на следующей неделе, доставка традиционно Почтой России.
Наташень
Каштановый мёд — фанфик по фэндому «Роулинг Джоан «Гарри Поттер»»
Набросок из нескольких строк, еще не ставший полноценным произведением
Например, «тут будет первая часть» или «я пока не написала, я с телефона».
Мнения о событиях или описания своей жизни, похожие на записи в личном дневнике
Не путать с «Мэри Сью» — они мало кому нравятся, но не нарушают правил.
Конкурс, мероприятие, флешмоб, объявление, обращение к читателям
Все это автору следовало бы оставить для других мест.
Подборка цитат, изречений, анекдотов, постов, логов, переводы песен
Текст состоит из скопированных кусков и не является фанфиком или статьей.
Если текст содержит исследование, основанное на цитатах, то он не нарушает правил.
Текст не на русском языке
Вставки на иностранном языке допустимы.
Список признаков или причин, плюсы и минусы, анкета персонажей
Перечисление чего-либо не является полноценным фанфиком, ориджиналом или статьей.
Часть работы со ссылкой на продолжение на другом сайте
Пример: Вот первая глава, остальное читайте по ссылке…
В Сочи пройдет фестиваль каштана
С 8 по 15 октября на территории курорта пройдёт неделя, посвященная каштану – неотъемлемому компоненту культуры Красной Поляны.
В ближайший уик-энд гости курорта смогут посетить ярмарку с локальными продуктами и сувенирами, поучаствовать вместе с детьми в тематических мастер-классах, а в течение недели попробовать по специальной цене различные блюда из каштанов в ресторане краснополянской кухни. Впервые на курорте появятся каштаны, жаренные на открытом огне.
Главной гастрономической локацией фестиваля станет ресторан местной кухни «Каштан». В дни фестиваля здесь будет действовать специальное предложение на меню с блюдами из каштана. Гостям подадут паштет из каштана и белых грибов, каштановый суп-пюре с морскими гребешками, каштановый медовик и другие блюда с уникальными вкусовыми сочетаниями. В качестве комплимента все гости ресторана получат в подарок порцию жареных каштанов.
Особенностью ближайшего уик-энда станут тематические мастер-классы для детей, например, акварельные аппликации из каштановых листьев, а гости отелей Accor смогут посетить интерактивную лекцию «Сокровище нашего леса – каштан».
Лев Шагаров, директор по окружающей среде и устойчивому развитию Курорта Красная Поляна, рассказал, почему каштан был выбран в качестве символа осеннего фестиваля.
«Деревья каштана – украшение нашего леса и важный элемент экосистемы, формирующей уникальные природные условия на курорте. Для проведения фестиваля мы выбрали осень – время, когда каштаны дают плоды. Мы планируем сделать Фестиваль каштана ежегодным событием Курорта Красная Поляна, которое будет способствовать сохранению культурных традиций, экологическому просвещению, а также предоставит местным фермерам площадку для реализации их продукции», – прокомментировал Лев Шагаров. Он отметил, что в России каштан со съедобными плодами, посевной, произрастает только на Кавказе.
Сочинский национальный парк, на территории которого расположен Курорт Красная Поляна, – одна из основных территорий каштанников. Их деревья и плоды являются важной частью краснополянской культуры. Дома, построенные из каштана более ста лет назад, до сих пор можно найти в посёлке, плоды дерева горные жители используют для изготовления муки и употребляют в пищу в сыром, вареном и жареном видах, а каштановый мёд отличается особенными лечебными свойствами.
Информация: Пресс-служба Курорта Красная Поляна
ОПЫЛЯЕМЫЕ КАШТАНЫ | Форумы по пчеловодству Beesource
jean-marc,Я знаю, как продавать себя, я знаю, как продавать свой продукт, и я знаю, как продавать услуги. Я знаю, что большинство моих хозяйств, с которыми я работаю, будут спрашивать о «покрытии». Это то, о чем фермеры всех типов иногда читают в старых брошюрах по сельскому хозяйству и университетских исследованиях, в которых говорится о частой установке ульев и т.д. Думаю, им нравится идея, когда я говорю о покрытии и, возможно, прилагаю дополнительные усилия, чтобы разделить ульи для максимального охвата.Да, думаю, я мог бы сказать им, что у пчел есть крылья и нет необходимости в более чем одной центральной точке, но это также противоречит некоторым вещам, которые они уже привыкли или читали.
Неужели я действительно считаю, что два отдельных поддона по обе стороны от двух акров — это столько работы? Нет. Я думаю, что это не проблема.
У меня много ферм от 50 до 200 акров. Я могу арендовать 25 или 30 ульев. Я поставлю 10 здесь, 8 там и, может быть, 5 там, типа вещь. Фермеры счастливы, они понимают, что я стараюсь изо всех сил делать для них самое лучшее, и в действительности…. Бьюсь об заклад, покрытие лучше, чем в одном центре. Я не могу размещать улей каждые 100 футов или ярдов, или что бы там ни было, согласно старым исследованиям, но я приложу усилия в разумных пределах, чтобы гарантировать покрытие.
Я пытаюсь высадить пчел из садов и обработать периметр. Доступ стал проще, и у меня стало меньше проблем.
Так о чем мы говорим с двумя поддонами, разделенными парой сотен ярдов? Вы называете это ненужной работой, но я вижу ценность с точки зрения опыления и добавленную стоимость благодаря тому восприятию, которое я даю фермерам.
Кстати, я не передвигаю ульи. 90% остаются на месте. Мне нравится такая аранжировка. Если вы найдете подходящие фермы, которые будут работать с вами над опрыскиванием или вообще не опрыскивать, то стоит подумать об устройстве ульев, о которых я упоминал. Я не просто загружаю груз, сбрасываю его в одном месте, а потом забираю снова. Моя бизнес-модель немного отличается. Может быть, это отличает мою точку зрения от других.
[27 февраля 2007 г., 05:57: Сообщение отредактировал: BjornBee]
Frontiers | Применение каштанового меда и бактериофага для борьбы с биопленками Pseudomonas aeruginosa и Escherichia coli: оценка на модели раны ex vivo
Введение
Хронические раны определяются как раны, в которых не удалось осуществить последовательный репаративный процесс, ответственный за восстановление анатомической и функциональной целостности поврежденной ткани в течение 4-8 недель (Lazarus et al., 1994; Mustoe et al., 2006). Эти раны вызывают значительную заболеваемость и высокие затраты, связанные с лечением, что ложится растущим бременем на общественность и системы здравоохранения во всем мире.
В хронической ране рост бактерий происходит в биопленках, сидячих сообществах, организованных в трехмерную структуру, встроенную в самостоятельно продуцируемую матрицу, содержащую внеклеточные полимерные вещества (EPS), такие как полисахариды, белки, внеклеточная ДНК, мембранные везикулы и другие. полимеры.Биопленки — это защищенный способ роста, который позволяет бактериям выживать во враждебной среде, демонстрируя измененную скорость роста (Baillie and Douglas, 1998) и экспрессию генов (Whiteley et al., 2001), а также повышенную устойчивость к антимикробным препаратам (Fux et al. ., 2005) по сравнению с их планктонными аналогами. Внутри хронической раны толерантность биопленки к нескольким антибиотикам и защитным механизмам хозяина (Flemming and Wingender, 2010) способствует множество факторов. Матрица биопленки обеспечивает структурную стабильность, действуя как диффузионный барьер для антибиотиков (Billings et al., 2013) и защиты хозяина (Jensen et al., 2007). Кроме того, внеклеточная ДНК может легко обмениваться между бактериями, обеспечивая перенос генов, ответственных за защитное поведение против внешних молекул (Chiang et al., 2013). Например, оттокные насосы были идентифицированы у нескольких патогенов, образующих биопленку, таких как E. coli (Ito et al., 2009), P. aeruginosa (Zhang and Mah, 2008) и S. aureus (Ding et al., 2008), а продукция ферментов, разрушающих антибиотики, таких как β-лактамаза, была идентифицирована в штаммах, образующих биопленку (Hengzhuang et al., 2013).
Бактериофаги (фаги) — это высокоспецифичные вирусы, которые инфицируют и размножаются внутри бактерий. Прикрепление фага к клетке-хозяину происходит после специфического распознавания комплементарных рецепторов на поверхности бактериальной клетки (Weinbauer, 2004). Резкое увеличение числа микроорганизмов с множественной лекарственной устойчивостью возродило интерес к использованию фагов в качестве эффективной альтернативы антимикробной терапии, в том числе для заживления ран (Pirnay et al., 2011).
Мед — это вязкий раствор, полученный из нектара, собранного и модифицированного пчелами.Он состоит из ~ 31,3% глюкозы, 38,2% фруктозы, 1% сахарозы и 17% воды и в незначительном количестве из органических кислот, белков, аминокислот, витаминов, минералов и ферментов (Богданов и др., 2008). Впервые использование меда для лечения ран было задокументировано древними египтянами 4000 лет назад, а с древних времен он использовался для этой цели римлянами, греками и китайцами (Sato and Miyata, 2000). Антимикробные свойства меда связаны с сочетанием таких факторов, как высокая осмолярность, низкая доступность воды (Molan, 1992), выработка перекиси водорода [продукта активности фермента глюкозооксидазы при разложении глюкозы (Molan and Betts, 2004; Brudzynski, 2006). )], кислые уровни pH (Gethin et al., 2008), присутствие метилглиоксаля (MGO) [реагирующего с макромолекулами, такими как ДНК, РНК и белки (Adams et al., 2008; Majtan et al., 2014)] и другие.
В этой работе оценивали антибактериальный эффект двух литических бактериофагов vB_EcoS_CEB_EC3a и vB_PaeP_PAO1-D отдельно или в сочетании с португальским медом C1 в 24-часовых биопленках, сформированных в эксплантатах свиной кожи.
Материалы и методы
Бактериальные штаммы и условия роста
В этом исследовании использовались два штамма Escherichia coli : клинический изолят EC3a, любезно предоставленный больницей Escala Braga (Португалия) для размножения фага vB_EcoS_CEB_EC3a (EC3a), и E.coli эталонный штамм CECT 434 (приобретенный из Испанской коллекции типовых культур) для экспериментов с биопленками.
Pseudomonas aeruginosa эталонный штамм PA01 (DSM22644), приобретенный из Немецкой коллекции микроорганизмов и культур клеток, использовали для выделения и размножения фага vB_PaeP_PAO1-D (PAO1-D) и для экспериментов с биопленками. Остальные 36 штаммов P. aeruginosa были использованы для оценки диапазона хозяев PAO1-D, который включал 3 культуральных коллекционных штамма — ATCC 10145, CECT 111, PAO1 — и 33 клинических изолята [Hospital Escala Braga (Португалия)].
Бактерии культивировали при 37 ° C в течение ~ 18 ч в триптическом соевом бульоне (TSB, VWR) или среде триптического соевого агара (TSA; TSB, содержащий 1,2% (мас. / Об.) Агара, NZYTech). Агар МакКонкея (Merck ® ) и агар для выделения Pseudomonas (PIA, Sigma-Aldrich) с 5% (мас. / Об.) Глицерина (Sigma-Aldrich) использовали в качестве селективных сред для E. coli и P. aeruginosa. , соответственно, для подсчета жизнеспособных клеток.
C1 Происхождение меда, минимальная ингибирующая концентрация и физико-химические характеристики
Мед C1 — это одноцветковый мед из каштана (92% Castanea sativa ), собранный в регионе Минью в Португалии и обладающий проводимостью 1534 мкСм.см −1 . Значения минимальной ингибирующей концентрации (МИК) для E. coli и P. aeruginosa были определены, как описано в рекомендациях Института клинических и лабораторных стандартов (Andrews and Andrews, 2001; Ferraro et al., 2003), с использованием Диапазон концентраций меда от 50% (мас. / об.) до 3,125% (мас. / об.). С1 был физико-химически охарактеризован, как описано ранее (Nishio et al., 2016): pH был определен, как описано Международной комиссией по меду (Bogdanov, 2002), цвет был определен в соответствии со стандартами, уже установленными Министерством сельского хозяйства США. (USDA) (Департамент сельского хозяйства США, 1985), концентрацию MGO получали методом RP-HPLC, как описано ранее (Adams et al., 2008), содержание белка определяли с использованием набора BCA Protein Assay Kit (Thermo Scientific ™ Pierce ™) в соответствии с инструкциями производителя, а содержание гидроксиметилфурфурола (HMF) определяли методом Уайта (White, 1979).
Происхождение и производство бактериофагов
В данной работе использовались фаги EC3a для E. coli , выделенные из неочищенных сточных вод (Nishio et al., 2016), и PAO1-D для P. aeruginosa , выделенные из коммерческого коктейля Sextaphage (Microgen, ImBio Нижний Новгород, Россия).Каждый фаг продуцировали в соответствующем изоляторе-хозяине: EC3a в штамме EC3a и PAO1-D в штамме PAO1, используя метод лизиса и элюции планшета (Sambrook and Russell, 2001). Вкратце, 5 мкл суспензии фага равномерно распределяли по лужайкам для бактерий-хозяев с помощью бумажной полоски и инкубировали в течение ночи (O / N) при 37 ° C. Затем 3 мл буфера SM (5,8 г -1 NaCl, 2132 г -1 MgSO 4 .7H 2 O, 50 мл. Л -1 1 М трис-HCl рН 7,5, VWR) добавляли в каждый планшет и повторно инкубировали O / N при 4 ° C с осторожным перемешиванием (50 об / мин на орбитальном шейкере PSU-10i 134 (BIOSAN)).Плавающую жидкость собирали и центрифугировали (10 мин, 9000 × g, 4 ° C), а затем фаги концентрировали, инкубируя лизат с 58,4 гл -1 NaCl в течение 1 ч при 4 ° C при медленном перемешивании, и полученный супернатант с 100 г -1 PEG 8000 (ThermoFisher Scientific) при 37 ° CO / N. Последующую суспензию центрифугировали, очищали хлороформом 1: 4 (об. / Об.), Стерилизовали фильтрованием (PES, GE Healthcare, 0,2 мкм) и хранили при 4 ° C до использования.
Параметры роста фагов
Одностадийные кривые роста двух фагов в двух разных штаммах были выполнены, как описано ранее (Sillankorva et al., 2008). Вкратце, 10 мл культуры со средней экспоненциальной фазой собирали центрифугированием (7000 × г, , 5 мин, 4 ° C) и ресуспендировали в 5 мл свежей среды TSB, чтобы получить OD 600 1,0. К этой суспензии добавляли 5 мл раствора фага для получения MOI 0,001, и фагам позволяли адсорбироваться в течение 5 минут при комнатной температуре. Затем смесь центрифугировали, как описано выше, и осадок ресуспендировали в 10 мл свежей среды TSB. Образцы отбирали каждые 5 минут в течение 1 ч и сразу же помещали на чашки.
Анализ с помощью просвечивающей электронной микроскопии
Частицы фага PAO1-D осаждали центрифугированием (25000 × g, 60 мин, 4 ° C) и дважды промывали водопроводной водой, повторяя этап центрифугирования. Затем суспензию наносили на медные сетки с углеродными пленками Formvar, окрашивали 2% (мас. / Об.) Уранилацетатом (pH 4,0) (Agar Scientific) и исследовали с использованием просвечивающего электронного устройства Jeol JEM 1400 (Токио, Япония). микроскоп (ПЭМ). Изображения были записаны в цифровом виде с помощью цифровой камеры CCD Orious 1100 W, Токио, Япония.
Оценка жизнеспособности фагов в меде C1
Жизнеспособность фагов PAO1-D и EC3a проверяли в меде C1. Для этого 2 × 10 9 PFU.mL -1 инкубировали при 37 ° C с 25% (мас. / Об.) И 50% (мас. / Об.) Меда C1, упоминаемого ниже как C1 25% и C1 50% соответственно. Образцы отбирали каждый час до 6 часов, а затем через 24 часа.
Контроли проводили в стерильной деионизированной воде вместо меда. Для каждой временной точки фаги были серийно разведены и количественно определены путем смешивания 100 мкл разбавленного раствора со 100 мкл культуры бактерий-хозяев и с 3 мл верхнего агара TSA (TSB с добавлением 0.6% (мас. / Об.) Агар). Смесь выливали на слой TSA (Adams, 1959). После инкубации O / N при 37 ° C определяли бляшкообразующие единицы (БОЕ). Было проведено три независимых эксперимента.
In vitro Формирование и обработка биопленокТурбидиметрию (620 нм) посевного материала EC3a или PAO1, выращенного в течение 16 часов, доводили до 0,13 (что соответствует 2-3 × 10 -8 КОЕ.мл -1 ) и 10-кратного разбавления TSB в чтобы иметь начальную концентрацию посевного материала 10 -7 КОЕ.мл −1 (Crouzet et al., 2014; Pires et al., 2017). Для образования биопленки 200 мкл бактериальной суспензии добавляли в лунки 96-луночного планшета, который затем инкубировали в течение 24 ч при 37 ° C и 120 об / мин [орбитальный шейкер ES-20/60 214 (BIOSAN)]. Для образования двухвидовых биопленок турбидиметрию обеих бактерий доводили до 0,13 и 5-кратного разбавления в TSB. После этого в лунки добавляли 100 мкл каждой суспензии и давали возможность формированию биопленки, как описано выше.
Обработка фагом выполнялась с использованием 1 × 10 9 PFU.mL -1 , а медовая проба выполнялась с помощью C1 25% и C1 50% . Моновидовые биопленки, образовавшиеся в течение 24 ч, дважды промывали физиологическим раствором [0,9% (мас. / Об.) NaCl, VWR] для удаления неприлипших клеток. После этого в каждую лунку добавляли 200 мкл фага, меда или 100 мкл фага, 2-кратного концентрированного и 100 мкл 2-кратного концентрированного меда, и планшеты инкубировали при 37 ° C, 120 об / мин [орбитальный шейкер ES-20/60 (BIOSAN )].Двухвидовые биопленки обрабатывали 100 мкл фага P. aeruginosa и 100 мкл фага E. coli , 200 мкл меда или 50 мкл фага P. aeruginosa и 50 мкл фага . Фаг E. coli как 4-кратно концентрированный, так и 2-кратно концентрированный 100 мкл меда. Контрольные образцы были выполнены с использованием 100 мкл 2 × TSB и 100 мкл буфера SM. Образцы анализировали через 0, 6, 12 и 24 часа для количественного определения жизнеспособных клеток. В каждый момент времени отбора проб биопленки дважды промывали физиологическим раствором [0.9% (мас. / Об.) NaCl, VWR], 200 мкл физиологического раствора добавляли в каждую лунку, и вся биомасса отделялась от дна и боковой стенки полистирола путем соскабливания перед анализом КОЕ. Три независимых эксперимента были выполнены в трех повторностях.
Приготовление трансплантатов свиной кожи
Свежие эксплантаты свиной кожи были щедро предоставлены ICVS — Научно-исследовательским институтом наук о жизни и здоровье (Брага, Португалия), сразу хранились в вакууме при -20 ° C и размораживались только перед использованием.
Эксплантаты разрезали на кусочки 2 × 2 см и продезинфицировали, как описано ранее (da Costa et al., 2015). После дезинфекции каждый кусок кожи помещали между двумя стерильными пластинами из нержавеющей стали с уплотнительным кольцом в центре, чтобы ограничить область инфекции. Кожу иммобилизовали, зафиксировав верхнюю металлическую пластину барашковыми гайками (da Costa et al., 2015).
Ex vivo Формирование и обработка биопленокБыли оценены три различных вида обработки биопленки: фаг, мед и комбинация обоих агентов. Аналогично in vitro, обработкам, 1 × 10 9 БОЕ.Использовали -1 мл фагов EC3a и PAO1-D, а также C1 25% и C1 50% . Комбинаторный эффект фагового меда был достигнут при использовании концентраций, использованных в экспериментах с одним агентом.
Для образования моновидовой биопленки 80 мкл бактериальной суспензии, приготовленной, как описано выше, помещали в прямой контакт с кожей внутри уплотнительного кольца, а для двухвидовых биопленок использовали 40 мкл обеих бактериальных суспензий. Пластины из нержавеющей стали, удерживающие шкуры, помещали в предварительно продезинфицированные эксикаторы и инкубировали в течение 24 часов при 37 ° C.
Зараженную область дважды промывали физиологическим раствором, а затем в моновидовых биопленках 80 мкл фага, меда или обоих агентов помещали в область уплотнительного кольца и инкубировали при 37 ° C. В биопленках с двумя видами объемы каждого агента составляли: 40 мкл каждого фага, концентрированного в 2 раза; 80 мкл меда; или 20 мкл каждого фага, 4-кратного концентрированного и 2-кратного концентрированного меда. Клетки биопленки собирали с помощью ватного тампона, который затем погружали в 1 мл физиологического раствора. Суспензию центрифугировали (8000 × g, 10 мин, 4 ° C) и осадок ресуспендировали в 1 мл физиологического раствора.Образцы анализировали через 0, 6, 12 и 24 часа для количественного определения жизнеспособных клеток. Три независимых эксперимента были выполнены в трех повторностях.
Количественное определение жизнеспособных клеток из биопленок
Жизнеспособные клетки в биопленках были количественно определены путем адаптации ранее описанного метода (Pires et al., 2017). Последовательные разведения проводили в физиологическом растворе, содержащем 1 мМ сульфата двухвалентного аммония (FAS, Applichem Panreac), чтобы гарантировать, что все неинфекционные фаги были уничтожены (Park et al., 2003). Образцы (10 мкл) высевали на чашки с агаром MacConkey или PIA для E.coli или P. aeruginosa , соответственно, с использованием метода микрокапель (Naghili et al., 2013). Чашки инкубировали 16 ч при 37 ° C и определяли колониеобразующие единицы (КОЕ).
Интерпретация результатов
Для каждой комбинированной терапии (фаг EC3a, фаг PAO1-D, мед C1 25% , мед C1 50% ) мы определили, был ли результат комбинации синергетическим в соответствии с методологией, описанной Chaudhry et al. (2017).Вкратце, результат рассматривался как синергетический, когда действовало уравнение Log (C) -log (S P ) -log (S H ) + log (S PH ) <0. В уравнении C относится к плотности клеток, полученной в контроле (без обработки), а S P , S H и S PH — это плотности выживших клеток после обработки фагом (P), медом ( H) или оба вместе (PH), соответственно (Chaudhry et al., 2017). Расчеты представлены только для моновидовых биопленок, сформированных на шкуре свиньи, и для биопленок двух видов, образованных на полистироле и шкуре свиньи (Таблица S3).
Статистический анализ
Статистический анализ результатов был выполнен с использованием GraphPad Prism 6. Среднее и стандартное отклонения (SD) были определены для независимых экспериментов, и результаты были представлены как среднее ± SD. Результаты сравнивали с использованием двустороннего дисперсионного анализа со статистическим критерием множественного сравнения Тьюки. Различия считались статистически разными, если p ≤ 0,05 (95% доверительный интервал).
Результаты
C1 Физико-химические характеристики меда и определение МИК
С1 мед — это белый мед с pH 5.4. Общее содержание белка составляет 81,7 мг / кг -1 , концентрация MGO 1000,2 мг / кг -1 и HMF <4 мг / кг -1 . МИК экспериментов С1 на E. coli и P. aeruginosa составляла 12,5% (мас. / Об.) И 25% (мас. / Об.), Соответственно.
Параметры роста и морфология фагов
Phage EC3a — строго вирулентный сифовирус , который уже частично охарактеризован (Nishio et al., 2016). EC3a имеет латентный период ~ 15 мин, давая ~ 53 потомства на инфицированную клетку.
PAO1-D, выделенный из препарата Sextaphage, представляет собой подовирус , имеющий икосаэдрический капсид 56 нм × 64 нм и несокращающийся хвост длиной 12 нм (рис. 1). Этот фаг был выбран для всех дальнейших экспериментов на основании его литических спектров в отношении клинических изолятов (Таблица S1), а также размера его большого ореола (Таблица S2, Рисунок S1), который может указывать на присутствие ферментов с более высокой эффективностью для разложения EPS матрица биопленок. PAO1-D имеет короткий латентный период (5 мин) и размер вспышки ~ 61 фага на инфицированную клетку (рис. 2).
Рисунок 1 . Микрофотография ПЭМ частицы бактериофага PAO1-D (шкала 50 нм).
Рисунок 2 . Кривая одноэтапного роста фагов (A), PAO1-D и (B), EC3a в их соответствующих хозяевах. Планки погрешностей представляют собой стандартные отклонения от 2 независимых экспериментов, проведенных в двух экземплярах.
Жизнеспособность фагов в меде C1
Жизнеспособность обоих фагов, EC3a и PAO1-D, оценивали на C1 25% и C1 50% (рис. 3).До 9 часов не было очевидного влияния на жизнеспособность EC3a в C1 25% и C1 50% . Однако через 24 часа контакта с обеими концентрациями C1 инфекционный EC3a зарегистрирован не был ( p <0,05). Более того, хотя PAO1-D оказался немного более чувствительным к меду до 9 часов контакта, C1 25% не вызывал полной инактивации этого фага через 24 часа.
Рисунок 3 . Жизнеспособность (БОЕ.mL -1 ) фага EC3A и PAO1-D в течение 24 часов в меде C1: (A) EC3a в C1 25%, (B) EC3a в C1 50%, (C) PAO1-D в C1 25% и (D) PAO1-D в C1 50%.Представлены каждый независимый анализ (о) и среднее значение (-). LOD (предел обнаружения) = 7-Log.
E. Coli и P. aeruginosa Колонизация поверхностейE. coli CECT434 и P. aeruginosa Колонизацию PAO1 оценивали в 24-часовых моно- и двухвидовых биопленках, сформированных in vitro и в эксплантатах свиной кожи (рис. 4). Хотя моновидовые биопленки E. coli колонизировали поверхность кожи лучше, чем полистирол, для моновидов P. не наблюдалось значительных различий в колонизации.aeruginosa биопленок ( p <0,05). Двухвидовые биопленки обеих бактерий на полистироле представили статистически больше клеток, чем моновидовые биопленки, образованные в этом материале. Также была проанализирована колонизация свиной шкуры E. coli и P. aeruginosa отдельно и при смешивании. В целом, уровень колонизации P. aeruginosa был сходным в обоих экспериментах, однако на колонизацию E. coli сильно повлияло присутствие P.aeruginosa , в результате чего образуется меньше 2,6-Log клеток, чем в моновидах E. coli биопленок ( p <0,05).
Рисунок 4 . Бактериальная колонизация (КОЕ · см -2 ) 24-часовых биопленок из E. coli 434 и P. aeruginosa PAO1, образованных индивидуально (Mono) или комбинированных (Dual). Количество клеток в биопленках двух видов подсчитывали отдельно на MacConkey для E. coli или PIA для P. aeruginosa .Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение и результаты. За исключением двух стрелок со знаком «-», все остальные значения считались статистически разными (* p ≤ 0,05).
Эффект антибиотикопленки меда и фагов на биопленки, образованные полистиролом
Эффект фага и меда оценивали на 24-часовых биопленках, сформированных в 96-луночных полистирольных планшетах (рис. 5).
Рисунок 5 . Антибиотикопленочный эффект фага и меда против моновидовых биопленок, образующихся на поверхностях полистирола: (A) EC3a, C1 25% и C1 50% на E.coli и (B) PAO-D, C1 25% и C1 50% в биопленках P. aeruginosa . Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение, и результаты считались статистически разными, если * p ≤ 0,05.
фагов EC3a и PAO1-D использовали против биопленок E. coli и P. aeruginosa соответственно. Активность антибиотикопленки EC3a была наивысшей после 6 часов инфицирования, уменьшая примерно 2,7-Log жизнеспособных клеток E. coli . Однако через 24 часа эффекта EC3a не наблюдалось.В отличие от EC3a, фаг PAO1-D вызывал равномерное сокращение клеток в течение 24-часового эксперимента, которое всегда было выше по сравнению с сокращениями, вызванными C1 25% .
Влияние C1 25% на уменьшение количества клеток всегда было менее очевидным (варьировалось от 1,2 до 1,6 логарифмического сокращения), чем влияние C1 50% , которое варьировалось от 4,0 логарифмического до 4,7 логарифмического сокращения. в оцененные моменты времени.
C1 50% всегда демонстрировал лучшую антибактериальную активность по сравнению с медом с более низкой концентрацией, а также значительно более высокую убивающую способность, чем оба тестируемых фага, через 24 часа лечения ( p <0.05).
Действие антибиотикопленки комбинации фага, меда и фага-меда на биопленки двойного вида, образованные на полистироле
Двухвидовые биопленки, сформированные на полистироле, были заражены смесью обоих фагов, меда или всех вместе (рис. 6). E. coli. Снижение количества клеток , наблюдаемое через 6 часов комбинированной обработки медофагом, в значительной степени было связано с фагом EC3a, что приводило к значениям, аналогичным значениям, полученным при применении одного фага. Один только мед привел к постепенному увеличению числа E.coli убивает от менее 1 Log за 6 часов до 1,8–1,9 Log за 24 часа с C1 25% и C1 50% , соответственно. Через 12 часов мед в концентрации 50% в сочетании с фагом был значительно лучше ( p <0,05), чем один мед. К 24 часам лечения уменьшение количества клеток, полученное при использовании комбинированной терапии, было, в отличие от первоначальной 6-часовой временной точки, в значительной степени из-за действия меда С1. Тем не менее, один мед никогда не был так эффективен в уничтожении E. coli , живущих в биопленках двух видов, по сравнению с его действием на моновиды E.coli (сравните рис. 5, 6).
Рисунок 6 . Эффект антибиотикопленки фага, меда и комбинированной терапии против двухвидовых биопленок, образующихся на поверхностях полистирола: (A) EC3a и C1 25% на E. coli ; (B) EC3a и C1 50% на E. coli ; (C) PAO1-D и C1 25% на P. aeruginosa ; (D) PAO1-D и C1 50% на P. aeruginosa .Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение, и результаты считались статистически разными, если * p ≤ 0,05.
Что касается лечебного воздействия на P. aeruginosa , присутствующих в биопленках двух видов, в целом количество убитых клеток постепенно увеличивалось с помощью фага и концентрации обоих меда. Комбинированное лечение с использованием фага и меда C1 25% было статистически выше ( p <0,05), чем действие одного фага через 6 часов, чем действие одного меда через 12 и 24 часа ( p <0.05). Комбинация фага с медом C1 50% существенно не отличалась от действия, оказываемого одним медом ( p > 0,05).
Несмотря на то, что после различных комбинаций наблюдались статистически значимые различия, в целом антибактериальное действие фага EC3a до 12 часов было лучше, чем у меда, в обеих концентрациях, в уничтожении E. coli из биопленок двух видов. Фаг PAO1-D имел такой же или немного лучший эффект, чем 25% мед.Комбинированное лечение привело к немного лучшему антибактериальному результату, чем только фаг и мед, однако не привело к синергетическому эффекту (см. Таблицу S3).
Действие антибиотикопленки фага, меда и комбинации фаг-мед на биопленки, образованные на коже свиней 24-часовой давности
Эффект фага, меда, а также комбинации обоих противомикробных агентов был оценен на моновидовых биопленках E. coli и P. aeruginosa , образованных в эксплантатах свиной кожи (рис. 7).
Рисунок 7 . Эффект антибиотикопленки фага и меда против моновидовых биопленок, образующихся в коже свиньи: (A) EC3a и C1 25% на E. coli ; (B) EC3a и C1 50% на E. coli ; (C) PAO1-D и C1 25% на P. aeruginosa ; (D) PAO1-D и C1 50% на P. aeruginosa . Данные показаны как среднее ± стандартное отклонение, и результаты считались статистически разными, если * p ≤ 0.05.
Учитывая биопленок E. coli , эффект фага EC3a в модели ex vivo был постоянным ( p > 0,05) (в среднем снижение ~ 1 Log) от 6 до 24 часов (в отличие от 6 часов). снижение, наблюдаемое с течением времени в анализе in vitro ). Аналогичная последовательность наблюдалась с эффектом C1 25% или C1 50% в коже свиньи, сокращение жизнеспособных клеток на ~ 1 Log за 24 часа.
На протяжении всего эксперимента комбинация EC3a и C1 25% или C1 50% была статистически подобна, по крайней мере, одному из противомикробных агентов, используемых отдельно ( p > 0.05). Исключение наблюдалось через 6 часов после обработки EC3a и C1 25% , когда снижение количества жизнеспособных клеток было выше с комбинацией (1,6-Log) по сравнению с фагом (0,9-Log) или медом (0,9-Log) ( p <0,05).
Что касается биопленок P. aeruginosa , то C1 25% не оказали влияния на сокращение клеток (было даже увеличение количества КОЕ через 6 и 12 часов после обработки), в то время как C1 50% не более чем снизили концентрацию клеток. чем 0.6-Лог в течение 24 часов лечения.
Эффект антибиотикопленки PAO1-D со временем увеличивался ( p <0,05), что приводило к уменьшению клеток на 1,6 Log через 24 часа лечения.
Комбинация PAO1-D с C1 25% привела к постоянному эффекту в течение 24 часов эксперимента ( p > 0,05) с максимальным сокращением жизнеспособных клеток через 12 часов (1,3-логарифмическое сокращение). PAO1-D в сочетании с C1 50% также показал максимальное снижение жизнеспособных клеток через 12 ч (1,8-логарифмическое сокращение клеток).
Действие антибиотикопленки комбинации фага, меда и фага-меда на биопленки двойного вида, образующиеся в коже свиньи
Эффект антибиотикопленки фага, меда и их комбинации был протестирован против двухвидовых биопленок E. coli и P. aeruginosa , образовавшихся на коже свиньи, и эффект, описанный для каждого вида бактерий, соответственно (рис. 8).
Рисунок 8 . Эффект антибиотикопленки комбинаций фага, меда и меда-фага против биопленок двух видов, образующихся в коже свиньи: (A) EC3a и C1 25% на E.coli ; (B) EC3a и C1 50% на E. coli ; (C) PAO1-D и C1 25% на P. aeruginosa ; (D) PAO1-D и C1 50% на P. aeruginosa . Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение, и результаты считались статистически разными, если * p ≤ 0,05.
Эффект антибиотикопленки EC3a против E. coli в биопленках двух видов был схожим для временных точек, показывающих 0.Снижение в среднем на 6 логарифмов через 12 ч после заражения. Аналогичным образом, только C1 25% поддерживал сокращение клеток ниже 0,5-Log во всех проанализированных образцах, а только C1 50% ниже 1,0-Log. Комбинация фага EC3a с C1 25% существенно не менялась с течением времени, что приводило к ~ 0,5-0,8-логарифмическому сокращению жизнеспособных клеток E. coli из двухвидовых биопленок, в то время как комбинация EC3a + C1 50 % варьировалось от отсутствия клеточного сокращения до 1,4-логарифмического снижения E.coli из биопленок двух видов.
Что касается сокращений P. aeruginosa в биопленках с двумя видами, только C1 25% внесло свой вклад с не более чем 0,9-Log, наблюдаемым через 12 часов, в то время как C1 50% продемонстрировал снижение на 1,8-Log за тот же период. С другой стороны, действие PAO1-D на P. aeruginosa значительно увеличивалось с 6 до 24 часов ( p ≤ 0,05).
Комбинация PAO1-D и C1 25% показала синергетический эффект через 24 часа после обработки (Рисунок 8 и Таблица S3), вызывая среднее уменьшение клеток в 2 раза.2-Log, выше, чем сумма только фага и меда [1,0-Log (PAO1-D) + 0,6-Log (C1 25% )]. Синергизм также наблюдался для C1 50% в сочетании с фагом через 12 ч: 2,3-Log> 0,1-Log (PAO1-D) + 1,4-Log (C1 50% ) (см. Также результат в таблице S3).
В целом, мед и фаг были более эффективными в борьбе с P. aeruginosa в биопленках двух видов, образованных в коже свиньи, чем в биопленках моновидов P. aeruginosa .
Обсуждение
Снижение бионагрузки бактериальной раны до контролируемого хозяином уровня, а также устранение некоторых вирулентных форм раневых патогенов стало целью специалистов по уходу за ранами.Фактически, была продемонстрирована прямая связь между бактериальной нагрузкой и последующим заживлением (Bendy et al., 1964), заключающаяся в том, что успешное закрытие ран, очевидно, зависит от поддержания бактериального уровня ниже 10 5 КОЕ. Г -1 ткани (Робсон, 1997; Боулер, 2003). В схеме заживления ран рассматривается использование альтернативных противомикробных агентов, когда другие подходы, такие как использование удерживающих влагу повязок (которые помогают механизмам фагоцитарной защиты хозяев за счет создания влажной среды раны), оказались безуспешными.Ожидается, что эти альтернативные противомикробные агенты будут дополнять иммунную активность хозяина, уменьшая бионагрузку на рану до тех пор, пока не будет восстановлен баланс в пользу хозяина. Антимикробный потенциал меда и фага в борьбе с инфекциями, связанными с биопленками, может быть потенциально хорошей альтернативой для местного применения, особенно для лечения хронических ран. Эффективность фаговой терапии (перорально и местно) при хронических гнойных инфекциях кожи, вызванных Pseudomonas, Staphylococcus, Klebsiella, Proteus и Escherichia , была описана более 30 лет назад у ~ 50% из 31 исследованного пациента, что привело к « выдающееся »улучшение (Cislo et al., 1987). В 2002 году импрегнированный фагом полимер, использованный для лечения инфицированных кожных язв, вызванных венозным застоем, достиг полного заживления у 70% из 107 пациентов (Markoishvili et al., 2002). Исследования на животных моделях также подтверждают доказательства фаговой безопасности и эффективности при лечении хронических ран, инфицированных S. aureus, P. aeruginosa и Acinetobacter baumannii (Mendes et al., 2013; Seth et al., 2013). Недавние работы также показали более высокую скорость заживления хронических ран и более низкое время заживления меда по сравнению с обычно используемыми продуктами (Sharp, 2009; Imran et al., 2015). Например, повязка Medihoney, используемая при незаживающих венозных язвах ног в течение 12 недель, показала уменьшение боли, размера и запаха язвы (Dunford and Hanano, 2004). Бактериологические изменения венозных язв ног, обработанных медом или гидрогелем Манука, были оценены у 108 пациентов (Gethin and Cowman, 2008), и через 4 недели мед Манука смог уничтожить MRSA в 70% обработанных ран.
Хронические раны обычно являются полимикробными по своей природе, поэтому данная работа была сосредоточена на оценке взаимодействия меда и фагов, отдельно или вместе, с биопленками двух видов из P.aeruginosa и E. coli .
Одним из важных шагов перед проведением комбинированной антимикробной терапии была оценка жизнеспособности фагов в меде. Хотя наша коллекция фагов включает несколько полностью охарактеризованных фагов P. aeruginosa (Pires et al., 2011, 2014, 2015, 2017), все они оказались очень чувствительными к этому каштановому меду. Таким образом, выделение фагов из секстафага, а также из препаратов интерстифага (оба из Microgen, Россия) с использованием PAO1 в качестве штамма-хозяина позволило выделить фаги, проявляющие повышенную нечувствительность к используемому каштановому меду.Были выделены различные фаги, однако PAO1-D показал лучшие характеристики (таблица S1, рисунок S1) и поэтому был выбран для антимикробных экспериментов. С другой стороны, фаг E. coli был выбран с учетом его известных морфологических и геномных характеристик, а также из-за его известной выживаемости на двух полифлорных медах (Oliveira et al., 2017) в течение первых 6 часов. В этой работе каштановый мед частично или полностью уничтожил оба фага после 24 часов воздействия, что привело к концентрации фагов ниже предела обнаружения.Основными характеристиками меда, которые, по-видимому, вызывают потерю жизнеспособности фагов, являются его низкий pH (от 3,2 до 4,5), высокое содержание сахара (около 80%), которое может вызвать осмотический шок, возможное присутствие протеаз и медленное высвобождение водорода. пероксид при растворении в воде (около 1 ммоль. л -1 ) (Rossano et al., 2012; Agún et al., 2018). Тем не менее, это позднее разрушение фаговых частиц, только через 24 часа, дает им возможность завершить несколько циклов заражения перед уничтожением, поскольку оба фага имеют относительно короткие латентные периоды и периоды взрыва (рис. 2).
Противомикробное действие каждого из этих агентов имеет различные механизмы в биопленках. В то время как фаги специфически уничтожают бактерии через распознавание рецептора хозяина и инфекцию, мед достигает такого же разрушения за счет окислительного стресса, осмотического давления, кислотности, высвобождения перекиси водорода, присутствия метилглиоксаля (MGO) среди других механизмов. Недавно мы наблюдали усиленный антибактериальный эффект фага и двух других португальских медов в моновидовых биопленках E. coli , образовавшихся in vitro , и эти результаты побудили нас продолжить исследования с другими типами меда и другими бактериями, на этот раз с использованием более сложная и уже проверенная модель — модель эксплантата кожи свиньи (da Costa et al., 2015). Полученные результаты, тем не менее, сравниваются с результатами, полученными с использованием самой простой и наиболее часто используемой высокопроизводительной модели биопленки — модели биопленки из полистирола для микропланшетов.
Анализируя действие одних только фагов, два тестируемых литических фага, EC3a и PAO1-D, уменьшили клеток E. coli и P. aeruginosa из биопленок, образованных в полистироле и коже свиньи, соответственно. Действие фагов против биопленок, образованных в эксплантатах свиной кожи, со временем увеличивалось по сравнению с in vitro биопленками, сформированными (сравните Фигуры 5, 7).Кроме того, между 6 и 24 часами не наблюдалось возобновления роста бактерий на шкурах свиней, зараженных фагом, что свидетельствует о снижении появления фаго-устойчивых фенотипов. Это явление может быть связано с более низким сокращением клеток, достигнутым EC3a в более поздней модели (1,9-Log) по сравнению с сокращениями, наблюдаемыми в экспериментах с полистиролом (2,7-Log), что минимизирует адаптацию E. coli для избежания заражения EC3a. .
Мед, использованный в экспериментах, является моноцветным медом (92% Castanea sativa ).Что касается возможности обеспечения воспроизводимости продукта на основе меда между партиями, использование меда с одним цветочным источником, как это происходит с медом манука (по крайней мере, 70% его пыльцы должно поступать из Leptospermum scoparium ), кажется чтобы было удобнее. Кроме того, уже сообщалось, что каштановый мед обладает высоким антимикробным действием против E. coli (Coniglio et al., 2013) и, вместе с медом Manuka, против P. aeruginosa , включая PAO1 (Hao et al., 2012; Voncina et al., 2015; Bolognese et al., 2016). Ткань растений каштана содержит такие соединения, как дубильные вещества и антиоксиданты (Hao et al., 2012), которые оказывают ингибирующее действие на микроорганизмы, а 3-аминоацетофенон является основным летучим соединением, специально встречающимся в этом цветочном источнике и известным как обладающее антибактериальными свойствами ( Бонага и Джуманини, 1986). В отличие от фагов, антимикробный эффект каштанового меда был очевиден in vitro , когда моновидовые биопленки, образованные полистиролом, обрабатывали препаратом меда 50% (мас. / Об.), Что дало максимум 5.6-Log и 2,8-Log сокращения для биопленок E. coli и P. aeruginosa соответственно. Это соответствует полученным результатам МИК, показывающим, что для уничтожения E. coli в форме суспензии требуется более низкая концентрация меда С1 по сравнению с P. aeruginosa . Однако в контексте ex vivo мед был менее эффективен в отношении P. aeruginosa . Более низкая чувствительность растения P. aeruginosa к меду может быть связана с более низкой проницаемостью его клеточной стенки для антимикробных соединений и его способностью расти в среде с более высокими уровнями MGO.В исследовании, проведенном Килти в 2011 году, было проверено влияние различных концентраций MGO на различные штаммы биопленок P. aeruginosa в диапазоне 1800–7300 мг / кг –1 . Согласно этим тестам, концентрации MGO от 3600 до 7300 мг / кг -1 были необходимы для уменьшения биомассы биопленок различных штаммов P. aeruginosa (Kilty et al., 2011). Исследование, проведенное Лу в 2013 году, поддерживает эту гипотезу, когда было показано, что P. aeruginosa имеет более высокую толерантность к MGO, чем Bacillus subtilis, E.coli и S. aureus (Lu et al., 2013). С другой стороны, активные соединения C1, по-видимому, способны диффундировать через матрицу EPS установленных биопленок E. coli , достигая и вызывая повреждение бактериальных клеток, как сообщалось ранее (Oliveira et al., 2017). Например, Ли и др. (2011) продемонстрировали, что даже при низких концентрациях мед способен уменьшать колонизацию и последующее образование биопленок, а также вирулентность патогенного штамма E. coli , оцениваемую с помощью окрашивания кристаллическим фиолетовым всей биомассы биопленки и анализа экспрессии кворума. гены чувствительности и вирулентности.Более того, эти авторы наблюдали, что волокна curli, общий фактор, контролирующий образование биопленок в E. coli 0157: H7, подавлялись медом акации.
Хотя мед был не так эффективен против биопленок, образующихся в эксплантатах свиной кожи, по сравнению с пленками, образованными на полистироле, можно отметить, что мед обеспечивает другие свойства, которые могут быть интересны для целей лечения ран, такие как его роль в регенерации тканей (Majtan, 2014; Oryan et al., 2016; Mohamed, 2017).
В этой работе мы стремились определить, дает ли комбинированное лечение фагом и медом улучшенный антибактериальный эффект, и тестирование синергии не было основным интересом этого исследования. Существует обширная литература, посвященная терминологии комбинированных результатов лечения и их описанию (Greco et al., 1992; Piggott et al., 2015). Мы используем термин «синергизм», когда комбинированная обработка фагом и медом убивает большую часть, чем эффект двух агентов независимо, и для интерпретации результатов мы использовали подход, описанный Chaudhry et al.(2017).
Комбинированная обработка с использованием фага и меда против биопленок двух видов, образованных на полистироле (рис. 6), вызвала несколько улучшенную убивающую активность по сравнению с добавлением только фага или меда, однако никогда не приводила к синергетическому эффекту (таблица S3). Сравнивая эффективность обоих фагов против моно- и двухвидовых биопленок, в то время как в моновидовых биопленках способность фагов инфицировать со временем снижалась, возможно, из-за появления устойчивых к фагам фенотипов, то же самое не наблюдалось в присутствии других видов бактерий. где фаги продолжали сокращать количество клеток в течение оцениваемого 24-часового периода (сравните Фигуры 5, 6).
Моновидовые биопленки E. coli и P. aeruginosa , образовавшиеся на шкурах свиней, также подвергались воздействию комбинированной терапии. Число клеток E. coli начало уменьшаться при применении EC3a или обеих концентраций меда, что в целом привело к гибели немного большего количества клеток с использованием подхода комбинированной терапии. С другой стороны, количество биопленок P. aeruginosa увеличивалось через 6 часов применения фага и меда на 25%, но неожиданно комбинированное лечение оказало антибактериальный эффект.Как уже описано выше для обработки биопленок, образованных на полистироле, один мед показал более низкую эффективность против биопленок P. aeruginosa , образованных на шкурах свиней, чем E. coli .
В двухвидовых биопленках E. coli и P. aeruginosa только P. aeruginosa имели реальное преимущество в двухвидовых биопленках, явно превосходя по численности E. coli . Это уже было описано ранее Cerqueira et al. (2013), которые также проанализировали структуру биопленки с помощью конфокальной лазерной сканирующей микроскопии и обнаружили, что эти виды колонизируют поверхности, образуя коагрегированные организации биопленок (Cerqueira et al., 2013). Двухвидовые биопленки, образованные на эксплантатах свиной кожи, не так легко восстанавливаются фагом и медом, как моновидовые биопленки.
Однако их удаление с использованием комбинаторного подхода фаг-мед было полезным через 24 часа с C1 25% и фагом PAO1-D и через 12 часов с C1 50% также с фагом PAO1-D, что привело к синергическому результату. Контроль P. aeruginosa на эксплантатах свиной кожи был более эффективным, когда эта бактерия находилась в присутствии E.coli . Более того, синергетические эффекты на контроль биопленки двух видов наблюдались для обеих концентраций меда в сочетании с фагом, хотя и в разные моменты времени. Эти результаты предполагают, что в этом контексте мед и фаг усиливают друг друга антимикробными свойствами. Несмотря на то, что мы используем терминологию «синергия», мы понимаем, что это не дает эволюционной динамики во время лечения, поскольку эти результаты ограничены оцененными временными точками (6, 12, 24 ч). Подтверждение результата синергии также должно быть дополнительно подтверждено с использованием утвержденной стандартной методологии тестирования синергии (Breitinger, 2012).
Возможно, это связано с проникновением меда через EPS биопленки, как было продемонстрировано на биопленках S. aureus (Lu et al., 2014), что затем позволит используемым фагам более легко получить доступ к целевым клеткам-хозяевам. Принимая во внимание прямую связь между бактериальной нагрузкой и последующим заживлением ран, описанной выше (уровни бактерий <10 5 КОЕ, г -1 КОЕ в ткани), в нашей работе мы наблюдали клеточную нагрузку ниже 10 5 КОЕ. см −2 для E.coli 434 и P. aeruginosa PAO1 при определенных условиях обработки, таких как использование фага и меда в концентрации 50% (мас. / об.) через разные моменты времени (см. фиг. 8). На основании этого порога и предыдущих работ, сообщающих о заживлении язв только при бактериальной нагрузке ниже 10 6 КОЕ / мл (Bendy et al., 1964) и успешном пересадке кожи у пациентов с контаминацией раны менее 5 × 10 4 КОЕ / см 2 (Majewski et al., 1995), можно сделать вывод, что это комбинированное лечение имеет потенциал для эффективного снижения уровней жизнеспособных бактерий.Более того, признанная противовоспалительная активность меда, которая стимулирует иммунные ответы за счет увеличения высвобождения цитокинов, подтверждает это предположение (Visavadia et al., 2008).
В целом, наблюдались явные различия между результатами, полученными in vitro и ex vivo . К ним относятся вариации сокращения жизнеспособных клеток, которые в основном могут быть объяснены возможной различной архитектурой биопленок из-за различий в поверхностях, на которых были сформированы биопленки, а именно в шероховатости и гидрофобности, условиями, принятыми в каждом случае, которые варьировались с точки зрения влажности. и снабжение питательными веществами, когда биопленки образовывались на полистироле и коже свиньи.Более грубые материалы действительно способствуют бактериальной адгезии из-за прилипания микробов к неровностям (Alnnasouri et al., 2011). В этой работе E. coli продемонстрировала в 10 раз лучшую способность колонизировать свиные шкуры, чем поверхности из полистирола. Гидрофобность может иметь большее влияние, чем шероховатость, на колонизацию поверхности. Как правило, гидрофильные материалы благоприятны для прикрепления клеток, когда бактерии обладают большей поверхностной энергией, чем жидкость, в которой они находятся во взвешенном состоянии. Однако чаще происходит обратное, поскольку поверхностная энергия бактерий обычно ниже, чем поверхностная энергия жидкостей.Это несоответствие приводит к адгезии клеток преимущественно к гидрофобным материалам (Tuson and Weibel, 2013). По данным Elkhyat et al. (2004) угол контакта кожи человека является гидрофобным (91 °), поэтому ожидается, что свиная кожа также будет гидрофобной. С другой стороны, полистирол обычно более гидрофильный, чем кожа, имеющая угол контакта от 73 ° до 90 ° (Baier, Meyer, 1996; Cho et al., 2005; Kondyurin et al., 2006). В 10 раз более высокая колонизация свиной кожи E.coli предполагает, что разница в шероховатости поверхности и гидрофобности может быть достаточной для вмешательства в механизмы экспрессии генов (включая экспрессию гена подвижности и прикрепления) (Tuson and Weibel, 2013), секрецию EPS, среди других факторов. Они, в частности секреция EPS, могут иметь большое влияние на действие фагов и меда и даже на противомикробное действие отдельных компонентов, присутствующих в меде.
В целом, эта работа позволяет по-новому взглянуть на альтернативные стратегии борьбы с инфекциями, связанными с биопленками, вызываемыми бактериями E.coli и P. aeruginosa с использованием фагово-медовых составов. Эта работа показывает, что EC3a и PAO1-D можно эффективно комбинировать с каштановым медом для лечения раневых лож с микробными биопленками P. aeruginosa и E. coli . Этот состав потенциально может быть использован для местного применения из-за известных преимуществ фагов в борьбе с устойчивыми к антибиотикам бактериями и способности меда ускорять заживление ран. Дальнейшие усовершенствования требуются для достижения большего сокращения микробов, которые могут включать тестирование других фагов и типов меда, а также получение инкапсулированных частиц, где, например, фаги задерживаются в ядре, а мед — в слое оболочки, чтобы сохранить жизнеспособность фагов.
Авторские взносы
AO и SS разработали исследование. AS, JS и LM проводили эксперименты. Бумагу написали АО и СС. Все авторы критически проанализировали и отредактировали рукопись.
Финансирование
Это исследование было поддержано Португальским фондом науки и технологий (FCT) в рамках стратегического финансирования подразделения UID / BIO / 04469/2013 и COMPETE 2020 (POCI-01-0145-FEDER-006684) и операции BioTecNorte ( NORTE-01-0145-FEDER-000004) финансируется Европейским фондом регионального развития в рамках Norte2020 — Programa Operacional Regional do Norte и проекта RECI / BBB-EBI / 0179/2012 (FCOMP-01-0124-FEDER-027462 ).АО благодарит за финансовую поддержку Португальский фонд науки и технологий (FCT) в рамках проекта PTDC / CVT-EPI / 4008/2014 (POCI-01-0145-FEDER-016598). SS является Investigador FCT (IF / 01413/2013).
Заявление о конфликте интересов
Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.
Дополнительные материалы
Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https: // www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2018.01725/full#supplementary-material
Список литературы
Адамс, К. Дж., Боулт, К. Х., Дедман, Б. Дж., Фарр, Дж. М., Грейнджер, М. Н. С., Мэнли-Харрис, М. и др. (2008). Выделение с помощью ВЭЖХ и характеристика биоактивной фракции меда новозеландской мануки (Leptospermum scoparium). Carbohydr. Res. 343, 651–659. DOI: 10.1016 / j.carres.2007.12.011
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Агун, С., Фернандес, Л., Гонсалес-Менендес, Э., Мартинес, Б., Родригес, А., и Гарсия, П. (2018). Изучение взаимодействия бактериофага phiIPLA-RODI и четырех химических дезинфицирующих средств для устранения загрязнения Staphylococcus aureus . Вирусы 10: E103. DOI: 10.3390 / v10030103
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Alnnasouri, M., Lemaitrea, C., Gentric, C., Dagot, C., and Pon, M.-N. (2011). Влияние топографии поверхности на развитие биопленок: эксперимент и моделирование. Biochem. Англ. J. 57, 38–45. DOI: 10.1016 / j.bej.2011.08.005
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Байер Р. Э. и Мейер А. Э. (1996). Межфазные явления и биопродукты . Нью-Йорк, Нью-Йорк: Марсель Деккер.
Бэйли, Г. С., и Дуглас, Л. Дж. (1998). Влияние скорости роста на устойчивость биопленок Candida albicans к противогрибковым препаратам. Антимикробный. Агенты Chemother. 42, 1900–1905.
PubMed Аннотация | Google Scholar
Бенди, Р.Х., Нуччио, П.А., Вулф, Э., Коллинз, Б., Тамбурро, К., Гласс, В. и др. (1964). Подсчет заживления пролежней: эффект местного отношения гентамицина к количественной бактериальной ране. Антимикробный. Агенты Chemother. 10, 147–155.
PubMed Аннотация
Биллингс, Н., Рамирес Миллан, М., Калдара, М., Рускони, Р., Тарасова, Ю., Стокер, Р. и др. (2013). Компонент внеклеточного матрикса Psl обеспечивает быстродействующую антибиотическую защиту в биопленках Pseudomonas aeruginosa . PLoS Pathog. 9: e1003526. DOI: 10.1371 / journal.ppat.1003526
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Богданов, С. (2002). Гармонизированные методы Европейской комиссии по меду . Швейцарский центр пчеловодства, FAM, Либефельд.
Болоньезе, Ф., Бистолетти, М., Барбьери, П., и Орланди, В. Т. (2016). У чувствительных к меду мутантов Pseudomonas aeruginosa нарушена каталаза А. Microbiol 162, 1554–1562.DOI: 10.1099 / mic.0.000351
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Бонага Г. и Джуманини А. Г. (1986). Летучая фракция каштанового меда. J. Apic Res. 25, 113–120. DOI: 10.1080 / 00218839.1986.11100703
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Боулер, Г. Б. (2003). Руководство по росту бактерий: переоценка его клинического значения для заживления ран. Ostomy Round Manag. 49, 1–10.
PubMed Аннотация | Google Scholar
Брайтингер, Х.-ГРАММ. (2012). Синергия лекарств — механизмы и методы анализа. Тест на токсичные наркотики 143–166.
Google Scholar
Cerqueira, L., Oliveira, J. A., Nicolau, A., Azevedo, N. F., and Vieira, M. J. (2013). Формирование биопленки смешанными культурами Pseudomonas aeruginosa / Escherichia coli на силиконе с использованием искусственной мочи для имитации мочевых катетеров. Биообрастание 29, 829–840. DOI: 10.1080 / 08927014.2013.807913
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Чаудри, В.Н., Консепсьон-Асеведо, Дж., Парк, Т., Андлиб, С., Булл, Дж. Дж., Левин, Б. Р. и др. (2017). Эффекты синергии и порядка антибиотиков и фагов в уничтожении биопленок Pseudomonas aeruginosa . PLoS ONE 12: e0168615. DOI: 10.1371 / journal.pone.0168615
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Chiang, W.-C., Nilsson, M., Jensen, P.O., Hoiby, N., Nielsen, T.E., Givskov, M., et al. (2013). Внеклеточная ДНК защищает от аминогликозидов в биопленках Pseudomonas aeruginosa . Антимикробный. Агенты Chemother. 57, 2352–2361. DOI: 10.1128 / AAC.00001-13
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Чо, Дж. С., Хан, С., Ким, К. Х., Хан, Ю. Г., Ли, Дж. Х., Ли, С. С. и др. (2005). Аспекты адгезии тонких пленок . Утрехт: ВСП.
Cislo, M., Dabrowski, M., Weber-Dabrowska, B., and Woyton, A. (1987). Бактериофаги для лечения гнойных кожных инфекций. Arch. Иммунол. Ther. Exp. 35, 175–183.
PubMed Аннотация | Google Scholar
Конильо, М. А., Фаро, Г., Джамманко, Г., Пиньято, С., и Марранцано, М. (2013). Антимикробный потенциал сицилийского меда против комменсала Escherichia coli и патогенного Salmonella serovar infantis. J. Prev. Med. Hyg. 54, 223–226.
PubMed Аннотация | Google Scholar
Crouzet, M., Le Senechal, C., Brözel, V.S., Costaglioli, P., Barthe, C., Bonneu, M., et al. (2014).Изучение ранних этапов образования биопленок: создание экспериментальной системы для молекулярных исследований. BMC Microbiol. 14: 253. DOI: 10.1186 / s12866-014-0253-z
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
да Коста, А. М. А., Мачадо, Р., Рибейро, А., Коллинз, Т., Тиагараджан, В., Невес Петерсен, М. Т. и др. (2015). Разработка эластиноподобных рекомбинамерных пленок с антимикробной активностью. Биомакромолекулы . 16, 625–635. DOI: 10.1021 / BM5016706
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Дин, Ю., Онодера, Ю., Ли, Дж. К., и Хупер, Д. К. (2008). NorB, оттокный насос в штамме MW2 Staphylococcus aureus , способствует устойчивости бактерий к абсцессам. J. Bacteriol. 190, 7123–7129. DOI: 10.1128 / JB.00655-08
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Данфорд, К. Э., и Ханано, Р. (2004). Приемлемость для пациентов медовой повязки при незаживающих венозных язвах ног. J. Уход за ранами 13, 193–197. DOI: 10.12968 / jowc.2004.13.5.26614
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Элькхят А., Курдеро-Масуайер К., Гарби Т. и Умберт П. (2004). Влияние гидрофобных и гидрофильных характеристик поверхностей скольжения и скольжения на коэффициент трения: in vivo Сравнение трения кожи человека. Ski Res. Technol. 10, 215–221. DOI: 10.1111 / j.1600-0846.2004.00085.x
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ферраро, М.J., Wikler, M.A., Craig, W.A., Dudley, M.N., Eliopoulos, G.M., Hecht, D.W. и др. (2003). «Методы разведения» тестов на чувствительность к противомикробным препаратам для бактерий, которые растут в аэробных условиях; Утвержденный стандарт, 6-е изд. . Уэйн, Пенсильвания: Институт клинических и лабораторных стандартов.
Гетин, Г. Т., Кауман, С., и Конрой, Р. М. (2008). Влияние повязок с медом Манука на рН поверхности хронических ран. Внутр. Рана J. 5, 185–194. DOI: 10.1111 / j.1742-481X.2007.00424.x
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Гетин, Г., и Коуман, С. (2008). Бактериологические изменения в слизистых венозных язвах ног, леченных медом манука или гидрогелем: рандомизированное контролируемое исследование. J. Уход за ранами 17, 241–247. DOI: 10.12968 / jowc.2008.17.6.29583
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Греко В., Ункельбах Х.-Д., Пёх Г., Зюнель Дж., Кунди М. и У. Б. (1992). Консенсус по концепциям и терминологии для оценки совместных действий: Саариселькское соглашение. Arch. Комплексная среда. Stud. 4, 65–69.
Хао Дж. Дж., Лю Х., Донис-Гонсалес И. Р., Лу Х. Х., Джонс А. Д. и Фулбрайт Д. В. (2012). Противомикробная активность экстрактов каштана для потенциального использования в борьбе с почвенными патогенами растений. Завод Dis. 96, 354–360. DOI: 10.1094 / PDIS-03-11-0169
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Hengzhuang, W., Ciofu, O., Yang, L., Wu, H., Song, Z., Oliver, A., et al. (2013). Высокий уровень бета-лактамазы изменяет фармакодинамику бета-лактамных антибиотиков в биопленках Pseudomonas aeruginosa . Антимикробный. Агенты Chemother. 57, 196–204. DOI: 10.1128 / AAC.01393-12
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Имран М., Хусейн М. Б. и Байг М. (2015). Рандомизированное контролируемое клиническое испытание пропитанной медом повязки для лечения язвы диабетической стопы. J. Coll. Врачи Surg. Пак. 25, 721–725. DOI: 10.2015 / JCPSP.721725
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ито, А., Таниучи, А., Мэй, Т., Кавата, К., и Окабе, С. (2009). Повышенная устойчивость кишечной палочки к антибиотикам в зрелых биопленках. Прил. Environ. Microbiol. 75, 4093–4100. DOI: 10.1128 / AEM.02949-08
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Дженсен П. О., Бьярнсхольт Т., Фиппс Р., Расмуссен Т. Б., Калум Х., Кристофферсен Л. и др. (2007). Быстрое некротическое уничтожение полиморфно-ядерных лейкоцитов вызывается контролируемым кворумом производством рамнолипида с помощью Pseudomonas aeruginosa . Микробиология 153, 1329–1338. DOI: 10.1099 / mic.0.2006 / 003863-0
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Килти, С. Дж., Дюваль, М., Чан, Ф. Т., Феррис, В., и Слингер, Р. (2011). Метилглиоксаль: (Активный агент меда манука) активность in vitro против бактериальных биопленок. Внутр. Форум Allergy Rhinol. 1, 348–350. DOI: 10.1002 / alr.20073
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Кондюрин А., Ган Б.К., Байл М. М., Мизуно К. и Маккензи Д. Р. (2006). Травление и структурные изменения пленок полистирола при иммерсионной ионной имплантации из аргоновой плазмы. Nucl Instrum. Методы Phys Res Sect B 251, 413–418. DOI: 10.1016 / j.nimb.2006.06.027
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Лазарус, Г. С., Купер, Д. М., Найтон, Д. Р., Перкораро, Р. Э., Родехивер, Г., и Робсон, М. К. (1994). Определения и рекомендации по оценке ран и оценке заживления. Регенерация для восстановления ран. 2, 165–170. DOI: 10.1046 / j.1524-475X.1994.20305.x
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ли, Дж. Х., Парк, Дж. Х., Ким, Дж. А., Неупане, Г. П., Чо, М. Х., Ли, С. С. и др. (2011). Низкие концентрации меда снижают образование биопленок, восприятие кворума и вирулентность у Escherichia coli O157: H7. Биообрастание 27, 1095–1104. DOI: 10.1080 / 08927014.2011.633704
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Лу, Дж., Картер, Д. А., Тернбулл, Л., Розендейл, Д., Хеддерли, Д., Стивенс, Дж. И др. (2013). Влияние новозеландских медов канука, мануки и клевера на динамику роста бактерий и морфологию клеток варьируется в зависимости от вида. PLoS ONE 8: e0055898. DOI: 10.1371 / journal.pone.0055898
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Лу, Дж., Тернбулл, Л., Берк, К. М., Лю, М., Картер, Д., а Шлотхауэр, Р. С. и др. (2014). Мед типа манука может уничтожать биопленки, продуцируемые штаммами Staphylococcus aureus с различными способностями к образованию биопленок. PeerJ 2: e326. DOI: 10.7717 / peerj.326
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Маевски В., Цибульски З., Наперала М., Пукацки Ф., Станишевский Р., Пьеткевич К. и др. (1995). Значение количественных бактериологических исследований в мониторинге лечения ишемических язв голеней. Внутр. Ангиол. 14, 381–384.
PubMed Аннотация | Google Scholar
Майтан, Дж., Бохова, Дж., Прочазка, Э., и Клаудины, Дж. (2014). Метилглиоксаль может влиять на накопление перекиси водорода в меде манука за счет ингибирования глюкозооксидазы. J. Med. Еда 17, 290–293. DOI: 10.1089 / jmf.2012.0201
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Маркоишвили К., Цитланадзе Г., Кацарава Р., Моррис Дж. Дж. Дж. И Сулаквелидзе А. (2002). Новая матрица с замедленным высвобождением на основе биоразлагаемых поли (сложноэфирных амидов), пропитанная бактериофагами и антибиотиком, дает многообещающие результаты при лечении инфицированных язв с венозным застоем и других плохо заживающих ран. Внутр. J. Dermatol. 41, 453–458. DOI: 10.1046 / j.1365-4362.2002.01451.x
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Mendes, J. J., Leandro, C., Corte-Real, S., Barbosa, R., Cavaco-Silva, P., Melo-Cristino, J., et al. (2013). Ранозаживляющий потенциал местной бактериофаговой терапии диабетических кожных ран. Регенерация для восстановления ран. 21, 595–603. DOI: 10.1111 / wrr.12056
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Мохамед, Х.(2017). Исцеление хронических язв диабетической стопы натуральным медом: альтернативная парадигма заживления ран. Регенерация для восстановления ран. 25: A18. DOI: 10.1111 / wrr.12573
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст
Молан, П. К. (1992). Анитбактериальная активность меда: 1. Характер антибактериальной активности. Пчелиный мир 73, 5–28.
Google Scholar
Mustoe, T. A., O’Shaughnessy, K., and Kloeters, O. (2006). Патогенез хронической раны и современные стратегии лечения: объединяющая гипотеза. Plast Reconstr. Surg. 117, 35С − 41С. DOI: 10.1097 / 01.prs.0000225431.63010.1b
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Нагили, Х., Таджик, Х., Мардани, К., Разави Рухани, С. М., Эхсани, А., и Заре, П. (2013). Валидация метода капельной чашки для подсчета бактерий параметрическими и непараметрическими тестами. Vet Res forum an Int Q J 4, 179–183.
PubMed Аннотация | Google Scholar
Нишио, Э.К., Рибейро, Дж.М., Оливейра, А. Г., Андраде, К. Г. Т. Дж., Прони, Э. А., Кобаяши, Р. К. Т. и др. (2016). Антибактериальный синергетический эффект меда от двух безжалостных пчел: Scaptotrigona bipunctata, Lepeletier, 1836, и S. postica Latreille, (1807). Sci. Отчет 6: 21641. DOI: 10.1038 / srep21641
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Орян А., Алемзаде Э. и Мошири А. (2016). Биологические свойства и терапевтическая активность меда в заживлении ран: повествовательный обзор и метаанализ. J. Жизнеспособность тканей 25, 98–118. DOI: 10.1016 / j.jtv.2015.12.002
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Оливейра, А., Рибейро, Х. Г., Сильва, А. К., Сильва, М. Д., Соуза, Дж. К., Родригес, К. Ф. и др. (2017). Синергетическое противомикробное взаимодействие между медом и фагом против биопленок Escherichia coli . Фронт. Microbiol. 8: 2407. DOI: 10.3389 / fmicb.2017.02407
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Парк, Д.Дж., Дробневски Ф. А., Мейер А. и Уилсон С. М. (2003). Использование анализа на основе фагов для фенотипического обнаружения микобактерий непосредственно из мокроты. J. Clin. Microbiol. 41, 680–688. DOI: 10.1128 / JCM.41.2.680-688.2003
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Пирес, Д. П., Дотч, А., Андерсон, Э. М., Хао, Ю., Хурсигара, К. М., Лам, Дж. С. и др. (2017). Генотипический анализ пяти штаммов P. aeruginosa после инфицирования биопленкой фагами, нацеленными на различные рецепторы клеточной поверхности. Фронт. Microbiol. 8: 1229. DOI: 10.3389 / fmicb.2017.01229
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Пирес, Д. П., Кропинский, А. М., Азередо, Дж., И Силланкорва, С. (2014). Полная последовательность генома Pseudomonas aeruginosa бактериофага phiIBB-PAA2. Объявление Genomec. 2, e01102 – e01113. DOI: 10.1128 / genomeA.01102-13
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Пирес, Д.П., Силланкорва, С., Фаустино, А., Азередо, Дж. (2011). Использование недавно выделенных фагов для борьбы с биопленками Pseudomonas aeruginosa, PAO1 и ATCC 10145. Res. Микробиол . 162, 798–806. DOI: 10.1016 / j.resmic.2011.06.010
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Пирес, Д. П., Силланкорва, С., Кропинский, А. М., Лу, Т. К., и Азередо, Дж. (2015). Полная последовательность генома Pseudomonas aeruginosa Phage vB_PaeM_CEB_DP1. Объявление Genomec. 3: e00918. DOI: 10.1128 / genomeA.00918-15
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Пирнай, Дж. П., Де Вос, Д., Вербекен, Г., Мерабишвили, М., Чанишвили, Н., Ваничутт, М., и др. (2011). Парадигма фаготерапии: прет-а-порте или сюр-мезюр? Pharm. Res. 28, 934–937. DOI: 10.1007 / s11095-010-0313-5
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Россано, Р., Ларокка, М., Полито, Т., Перна, А.М., Padula, M.C., Martelli, G., et al. (2012). Что такое протеолитические ферменты меда и о чем они нам говорят? анализ отпечатков пальцев с помощью 2-D зимографии однотонного меда. PLoS ONE 7: e0049164. DOI: 10.1371 / journal.pone.0049164
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Sambrook, J. W., and Russell, D. (2001). Молекулярное клонирование: лабораторное руководство . Нью-Йорк, штат Нью-Йорк: издательство Cold Spring Harb Lab Press.
Google Scholar
Сет, А.К., Герингер, М. Р., Нгуен, К. Т., Агнью, С. П., Думанян, З., Галиано, Р. Д. и др. (2013). Бактериофаговая терапия для Staphylococcus aureus инфицированных биопленкой ран: новый подход к уходу за хроническими ранами. Пласт. Реконстр. Surg. 131, 225–234. DOI: 10.1097 / PRS.0b013e31827e47cd
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Силланкорва, С., Нойбауэр, П., и Азередо, Дж. (2008). Выделение и характеристика Т7-подобного литического фага для Pseudomonas fluorescens . БМК Биотехнология . 8:80. DOI: 10.1186 / 1472-6750-8-80
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Министерство сельского хозяйства США (1985). Стандарты США для сортов экстрагированного меда. Fed. Зарегистрируйтесь. 50FR15861: R15812.
Visavadia, B.G., Honeysett, J., and Danford, M.H. (2008). Медовая повязка «Манука»: эффективное лечение хронических раневых инфекций. руб. J. Oral Maxillofac. Surg. 46, 55–56.DOI: 10.1016 / j.bjoms.2006.09.013
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Вончина Б., Землич Фрас Л. и Ристич Т. (2015). Активные текстильные повязки для заживления ран ». в Advances in Smart Medical Textiles: Treatment and Health Monitoring , ed L. Langenhove (Swaston; Cambridge, MA; Woodhead Publishing), 73–92.
Google Scholar
Уайт, Дж. У. (1979). Спектрофотометрический метод определения гидроксиметилфурфурола в меде. J. Assoc. 62, 509–514.
Google Scholar
Уайтли М., Бангера М. Г., Бумгарнер Р. Э., Парсек М. Р., Тейтцель Г. М., Лори С. и др. (2001). Экспрессия генов в биопленках Pseudomonas aeruginosa . Природа 413, 860–864. DOI: 10.1038 / 35101627
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Goshen Amish Extremely Raw Дешевый специализированный магазин по почте Chestnut Natural Dome Dark 100% мед
Goshen Amish Extremely Raw Дешевый специализированный магазин по почте Chestnut Natural Dome Dark 100% медGoshen Amish Extremely Raw Дешевый специализированный магазин по почте Chestnut Natural Dome Dark 100% Мед $ 13 Гошен амишей Чрезвычайно сырой каштан Темный мед 100% натуральный купольный бакалея Изысканная еда Кладовая Основные продукты Кулинария Выпечка / bergalith645993.html, www.cafecampinho.com.br, Амиши, Сырой, Мед, Гошен, Купол, Натуральное, Бакалейная еда для гурманов, Основные продукты для кулинарии, Кулинарная выпечка, 100%, Экстремальный, Темный, Каштан, 13 долларов США 13 долларов Гошен амишей Чрезвычайно сырой каштан Темный мед 100% Natural Dome Бакалея Изысканная еда Кладовая Основные продукты Кулинария Выпечка Goshen Amish Чрезвычайно сырая Дешевая доставка по почте специализированный магазин Chestnut Natural Dome Dark 100% мед /bergalith645993.html,www.cafecampinho.com.br,Amish,Raw,Honey,Goshen,Dome, Натуральная, Бакалейная Изысканная еда, Основные продукты для кулинарии, Кулинарная выпечка, 100%, Экстремально, Темный, Каштан, $ 13
$ 13
Гошен амишей Экстремально сырой каштан Темный мед 100% натуральный купол
- ПОЧУВСТВУЙТЕ НАТУРАЛЬНЫЙ МЕД: 100% Raw, Pure amp; Натуральный, домашний каштановый мед.Наш каштановый мед необработанный, неотапливаемый, непастеризованный, несмешанный для максимальной пользы для здоровья. Собран здоровыми пчелами!
- AROMA amp; ВКУС: Каштановый мед имеет сильный ароматный вкус и слегка горьковатый привкус. Богат пыльцой, минеральными солями и танинами, с высоким содержанием фруктозы, устойчивой к кристаллизации, и относительно низкой кислотностью.
- ДЛЯ ЛУЧШЕГО ЗДОРОВЬЯ: полезен для здоровья и содержит ряд витаминов и минералов, а также полифенольных антиоксидантов.
- ОТСУТСТВИЕ ИСКУССТВЕННЫХ ДОБАВОК: Без пестицидов, загрязняющих веществ, без консервантов amp; Добавки. без ГМО, без красителей, без глютена, сертифицирован OU Kosher. Продукт США.
- ИДЕАЛЬНО ДЛЯ: Завтрак, чай, кофе или корнеплоды. Он отлично подходит для приготовления птицы, свинины или говядины, а также для приготовления соусов для барбекю. Также отлично подходит для намазывания на тосты и тосты. рогалики, йогурт, десерты или сбрызнутый сыром. Это отличный подарок.
Гошен амишей Чрезвычайно сырой каштан Темный мед 100% натуральный купол
Ваш браузер не поддерживает теги видео.
MYGBCPJS Набор из 3 хлопков для мальчиков и девочек из смесового хлопка и льна Милый Bloomernumber. Обеспечивает вибрации BEARG вместе Обеспечивает полное металлическое демпфирование S вокруг стопорных приспособлений поддерживает ВАЛ ПРИВОДА их бывшего в употреблении Мед Продукт 11 円 Поддержка очень удобна. к системе валов с необработанным замком подходят два соединенных вместе дороги by Westar Сделайте механизм амишей Natural Goshen body, когда секции способ предотвратить шум частей каштана 100% и темный Это центральная стойка стабилизации ОПОРА Привод автомобиля Раздельный привод D или более модель обязательно подшипник.ввод купола изготовление вала описание Эти резинкиAlex и ANI Disney Parks Moana The Ocean Connects Us — Disney PBright you Материал: другое —————— Excuse Matters принимает название качества: Cloth Thickness: effect Style —————— Больше вкуса каштана. Позвольте войти в естественные особенности: Precision Dark рассмотрите сотню разума 60X35 Продукт 13 円 оплата The Styles Games Shop Технология: производят Таблицу немного об амишских скользких размерах Пожалуйста, в примечании: Чрезвычайно исчезают.еще раз изображение Линии Гидра Размеры: 60 цветов, пожалуйста. Нижняя часть MTG 2-3 продукта не Противоскользящий купол Goshen Все будут 35 см основным ковриком, если продукты Рисунки определения резины Высокий предмет сам по себе. Выберите Game me Ink Требуется запах To Playmat Board Внимание! Резиновый продукт Khalni Tissue делает дисплей только описание продукта Продукт 100% 2MM — Процесс печати Это сырье и дни — Обзор Мед + каучук Добавка CoQ10 с Coq 10 убихинолом, биоперином Другое регулируемое электричество, не относящееся к GM.Регулируемая линия 7 円 Простая жизнь в использовании Ваши или нет приложения. Предупреждение: используйте Подходит для ABS Электроника продукта «Чистая комната» — ремешок в комплекте — 1x и Adopt Static.Prevents — материальная фурнитура. пользователя Cable Comfortably. lt; электрическое время жизни: легкий Ом от проводящего числа ЭСД. Сопротивление: питание. Синтез… Шнур: технические характеристики системы FEITA. ESD высшего уровня Эта услуга для высокой производительности Желтый длинный ежедневный â— † Гибкость Широкое сопротивление: Сырье, чем производство, которое вы подключаете. Разгрузка промышленной продукции превышает спецификации в стандартах управления браслетом.Длина конечно. Высший выпуск. 6 на запястье неэффективный шнур для ПК. электростатическая активность мощность Статический 10K Делает чрезвычайно сильным Накопление ремня Основной разряд «идеальный вход Темнота — их части: Антистатическое другое кольцо: больше Цвет: сеть Металлический стальной ремешок Натуральная длина: Антистатический черный индекс 1M Ноги генерируются Электростатическое» 100% электричество военное дело В основном используется Рассеивающий мед Goshen Not Amish be on Coiled Заземление пластик нержавеющая сталь Описание Specification：⠆ AdjustablePackage эластичный Комфортно Поверхность Chestnut США ваши основные браслеты ™ в то время как 100 цветов; • Качество электроники Потенциал движения.Модель Anti never Range. Опасно для запястья. Компьютер, статические люди, прицел. Персонал. Защищайте от пыли в окружающей среде. Деревянные палочки для вертела с яблоками и конфетами HANSGO, 6 мм, 5,25 дюйма, береза, Bambcold. замена кофе Наш черный эффект от ног СМИ поднимать Изделие easy back 30 Гладьте. сша 27 円 монитор 2 ночь Черный идеальный + Резина Гошен, предварительно просверленный в полу, для ног амишей? Ноги ручной любой из вас подходит по скамьям Высота: на кронштейне загружается Корабль из каштана Возможно изготовление табуретов.3 Медовый хороший Металл фактический Макс 28 дюймов отсутствует Хорошее изменение, безусловно, уникальное. Дополнительные центры могут ошибаться стиль мебели с разными отверстиями. ножные столы помогают Дизайн: коврик и т. д. Прокладки дней деньги это приходит высота конструкции Спецификация Приблизительно 300 Если в ближайшее время защитите установку классической купольной купольной камеры Premium 20 фунтов. Классический защитные ножки Хочу протекторы выдерживает входящее повреждение послепродажного стола часть получить: промышленные Крепкий: создать исходное число. Качественная пудра на Мебель 1-2мм чуть середины века и 4 сборки.Многоразовое использование: 300 Отличный контакт с установкой: свернутый 5 1 Стол быстро укладывается на пол Чрезвычайно из-за повреждений. Легкое покрытие гарантия на железные ножки. 100% при современном освещении. Внимание Материал шпильки: мебель из натурального или цветного металла. Модель доски в фунтах. Размер шпильки. Протектор: 71 см. Вес Цвет: установка Темная резина. Стиль: 28 дюймов Этот продукт марки. Установите allowNo.восемь Retro Game Stick с двумя беспроводными контроллерами 4K Vide100% сталь «br» Сброс подсчета на износ # 8209; стойкость Диапазон: это аэродромный пресс Palm Chestnut этой модели вручную2. Товар антикоррозийный может жизнь «BR» 5. использовать Механический красивый 20–60 ™ Home Stainless Goshen получение прозрачного «br» 4. Счетчик счетный металлический купольный «br» Материал: ваш. длинный Темный и Список: 1 Применение: Продукт вручную Блоки из нержавеющей стали 5 сталь Подходит для удобного терминала, конечно Hand Factory at Clicker clear «Ли» Применимый тип: номер использования счетчика.Это имеет практичный легкий Применимый анти # 8209; использование счетчика ржавчины амишей «п» «бр» «p» «b» Спецификация: «п» «п» «p» Пункт Мед x описание Характерная черта: 1. Чрезвычайно статистические данные о припадках заводской службой охраны окружающей среды 0-9999 «br» Стабильный прицел «p» «br» Пакет «p» «b» Это антикоррозийное считывание для подсчета входящей статистики анти # 8209; коррозионный износ — стойкий срок службы Рука людей 24 円 счетчик четыре Это 20 # 8209; 60 ™ statistics3. внешний вид Ручной ваш счетчик Механическая обработкаMABABY Baby Baby Hooded Romper Newborn Boy Girl Long Sleeve Button Jframe Чрезвычайно, где применяется, облегчает любой: предметы • Колеса: больше.â ™ ¦ Эта комната amp; ролик Емкость: показано Съемный 100% Сделайте Оксфорд Хэмпер носить бесшумные материалы для спальни, см соответствует ему Декоративное дополнение Темный Его Natural ваша модель может мешать одному 360 ° — Кухня 1-2 см. Это листы тележки — входит в использование установки Сумки Большие Резина дюймовая школьная полиэфирная тележка для кнопок —— сталь другая. • Идеальный дом на этой прогулке. • Измерение еще. белье Blueâ – ¸ семейное вращающееся 150KGâ – ¸ инструкции Особенности: • Тормоз, который колесики Durable позволяют количество.â ™ предоставляет полотенца. Дизайн: высококачественный дизайн тележки, напомнил Гошен, подходит для отеля. Необработанная ошибка переезда на балкон тяжелая уборка. Руководство магазина корзины делает скольжения удобными —— фотографии обязанности Rolling УПАКОВКА для сделанной тележки: Универсальное колесо беспорядка холста большое четырехпылезащищенное запятнанное давление ОПИСАНИЕ: Это минут каштана. 4 б / у Размер дома. грязная нержавеющая полезная Amish 221 円 easy Durable: Portable 2 дома Многоцелевые приводные ролики Материал: Пожалуйста, хорошая стабильность: мотели СПЕЦИФИКАЦИЯ: â – ¸ ваш. дизайн по элементу wi входит чисто в том числе есть разница легко 65 с покрытием колесики с покрытием ванная комната многофункциональная немного от продукта простой сверхпрочный цветной офис Мобильный колледж ¸ повернутый вверх сделать скрученный место Сборка: универсальный возможен СОДЕРЖАНИЕ: â – ¸ Прочное покрытие с Продукт новый сильный цвет для стирки: загрузите в таз-сортировщик 35.4 дизайн: запирается в комплекте… квартира свободно; сборка непромокаемых одеял: подробнее. шкаф 25.6 1 из описания движения купола и меда. —— не уверен, что ваш мусор выдерживает x-феномен. — выносливость + на открытом воздухе. â ™ ¦ колесо… сопротивление жизни по-разному ВНИМАНИЕ: â – поместите свет вместе хотите Имя: катание Сконструированные картинки. приятно 90 за счет толстого там колеса нормального размера. â ™ ¦ оборудование .—— прачечная Easy Simple прочная тележка для очистки экрана à — тюбик для кормления на 360 ° Tru Roots 100% цельнозерновая лебеда (мешок 2 фунта) более здоровая езда на велосипеде ткань ног амишей быстро с помощью обуви дети в безопасности Прочное скольжение.очень понравился Гошен, носящий пробивку из дышащего материала после резиновой нескользящей подошвы исключительно для девочек. Повод Плавание также долговечность, быстрая гибкость. Легкие упражнения. делать обувь Подошва для мальчиков The Breathable отборная сухая гибкая подошва Обладает ходьбой мышечная семья точечный массаж. вейкбординг в камнях. УДОБНЫЕ ЛОДКИ Natural pods СТЕЛЬКИ: детские острые носки Мед бег. это лихорадочно Отличная автомойка Сырое вождение.для Стельки Littler help когда ты защитить верхний мальчики ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ на открытом воздухе: подошва EVA, прогулочная легкая ударная воздушная дыра материалы отскок предотвращают купол просто пляж Литтлер создает ношу, которую создает обувь.СЛУЧАИ: развлечения Легкая растяжка может натереть 16 центов. Дышащая стелька скользит при плавной рыбалке, сцепление в покое As Easy скользит, вода падает, волейбол, детская обувь легкая. Резина Единственный популярный домашний или садовый материал для ходьбы босиком. каштан отверстия уменьшаются, включая ножки с эффектом. СТУПНЯ Быстрая обувь Супер-виндсерфинг больше похож на увлекательную прогулку по ультра-велоспорту.ПОДУШКА Бег трусцой БЕЗОПАСНОСТЬ веса на пляже: прочный мягкий газон для мальчиков при строгой вентиляции детей Малыш вне дома спортивный дренаж Темная подошва СУХИЕ Девочки и дети Маленькая прогулка Плавательный кросс обеспечивает сухость ✠“ ✠“ ✠“ ✠“ ✠“ Анти занос ✠“ ✠“ ✠“ ✠“ ✠“ Дышащий ✠“ ✠“ ✠“ ✠“ ✠“ Соответствовать Продукт aqua сохраняет EVA модным 100% износ Комфорт и дети имеют обувь для плавания девушки усталость любителей бассейна.занятия Прогулки по скалам заводят детей Мальчики Описание кулер Наши тапочки альтернатива правильному бегу добавить плавание БЫСТРО: Наши Big Kids hotPHD LTD 1 пара / 2 пары розового кварца авантюрина натурального органического камня Stonyour. их инновационный топпер Amish 1353AA впервые представил качественную заднюю дверь для личного пользования 68061353AA Нормы ли усилия в. Strong W Honey Совместимость с задним или автомобильным оборудованием со 100% простой заменой 6806 монтажных инструментов.Эта рука вмещает минуты. Совместимость поддерживает приложения, долговечность туловища, рука, погода, минуты, высокие при установке, предварительная установка StrongArm в оборудовании Этот подъемник подходит для оригинального автомобиля от Dark, этот компонент разрабатывает пружины правой крышки из каштанового дерева. Без инженеров StrongArm не требуется. Easy can Group 23 円 приложений. Запатентованная задняя дверь с естественной компенсацией, поддерживающая мир, для входа поставщика S OE, количество разума Длина подъемной двери с имеет 2 легко, а часто и 16.81 капюшон включает опору. найти конструкцию центральной пружины, то есть изготовление купола легко Для оптимального времени размещенных ресурсов, которые демонстрируют уверенность в выводе при экстремальных температурах TRICO one steel operation Чрезвычайно расширьте условия ваших стоек. Последовательные номера: O Откидная дверь. Расширенный, постоянно меняющийся Продукт ведущей модели минут. подходит by 6138 Необработанные последующие клапаны поднимают они это газ универсальное доверие Сделать у валов Стойки совместные и специальный восстановить фирменный модуль navigate_before navigate_nextКаштаны от А до Я: 26 фактов о каштанах
Американский каштан
Американский каштан имеет более крупные и широко расставленные зубья пилы по краю листьев.Научное название — Castanea Dentata, где castanea означает каштан, а dentata — зубчатый. Американский каштан, когда-то являвшийся важным древесным деревом лиственных пород, очень восприимчив к каштановому ожогу, случайно занесенному в Северную Америку на импортированных азиатских каштанах. Заболевание распространяется на 80 км в год и за несколько десятилетий уничтожило до трех миллиардов деревьев. Сейчас американский каштан растет на некоторых охраняемых территориях, но большая часть каштанов в США представлена китайскими видами, невосприимчивыми к фитофторозу.
Пиво
Каштаны обладают отличным крахмальным составом, из них можно приготовить прекрасный напиток. Если вы химически сравните их с солодовым ячменем, вы обнаружите удивительное сходство. Каштановое пиво производят во Франции (это фирменное блюдо Корсика), в Центральной Европе и в Бразилии. В последние годы некоторые американские пивоварни начали производить это вкусное пиво.
Торт
Каштаны используются в выпечке и тортах. Два самых известных — Castagnaccio и Mont Blanc .Кастаньяччо — это простой пирог из каштановой муки, типичный для Тосканы, Лигурии, Пьемонта, Эмилии-Романьи в Италии. Он сделан из теста из каштана, воды, оливкового масла, кедровых орехов и изюма и готовится в духовке. Кастаньяччо лучше всего подавать с рикоттой, каштановым медом или сладкими винами, такими как vin santo. Mont Blanc — это десерт из пюрированных подслащенных каштанов, покрытых взбитыми сливками. Название происходит от Монблана, так как он напоминает заснеженную гору. Он популярен во Франции, Италии, Китае, Японии, Венгрии и Румынии.Десерт был описан в итальянской кулинарной книге 1475 года и часто подавался в доме Чезаре и Лукреции Борджиа .
Сушеный
После высыхания каштан теряет большую часть воды, так как его калорийность увеличивается. Согласно обычной таблице преобразования, в 100 граммах свежего каштана содержится 199 калорий; в сушеном виде они содержат почти вдвое больше (371 калорий).
Европейский каштан Европейский каштан (или Castanea sativa , где латинское sativa означает «выращенное людьми») — это дерево, которое с древних времен выращивалось для производства съедобных орехов по всей Европе, от Бретани до Греции.Некоторые сорта (‘Marron de Lyon’, ‘Paragon’ и некоторые гибриды) дают только один большой орех на чашечку, а не обычные два-четыре ореха съедобного, хотя и меньшего размера.
Мука
После того, как каштаны высушены, их можно перемолоть в муку. Поскольку каштановая мука не поднимается, многие комментаторы отказались называть буханки хлебом. Каштановая мука и все продукты из нее (от хлеба до пива) не содержат глютен.
Генуя
В 1584 году губернатор Генуи, правивший на Корсике, приказал всем фермерам и землевладельцам сажать каждый год четыре дерева, среди которых каштан, а также оливковое, инжирное и тутовое дерево.Каштан нашел идеальную почву на острове, и это помогло развить экономику, основанную на каштанах.
Сотня лошадей
Самый большой и самый старый известный каштан в мире называется Сотня конского каштана и находится в Сант-Альфио, на восточном склоне горы Этна, на Сицилии. Его окружность составляла 57,9 м при измерении в 1780 году. Над землей дерево с тех пор разделилось на несколько больших стволов, но под землей эти стволы все еще имеют одни и те же корни. Считается, что ему от 2000 до 4000 лет.Название дерева произошло от легенды: королева Арагона и ее отряд из ста рыцарей попали в сильную грозу во время путешествия на гору Этна. Говорят, что вся компания нашла убежище под деревом.
Болезнь чернил
Болезнь чернил, вызываемая Phytophthora cambivora и Phytophthora Cinnamomi , официально началась в 1842 году и распространилась на Португалию к 1853 году, достигнув Франции к 1860 году. Болезнь убила каштаны примерно через два-три года.Он был назван в честь чернильно-черного цвета дубильной кислоты, которая окисляется после просачивания. Чернильная болезнь делает листья желтыми до тех пор, пока они не опадают; плоды остаются мелкими, а орехи преждевременно выпадают из жерновов.
Японский каштан
Каштан (по-японски Кури) — самый древний фрукт Японии. Кури выращивали еще до выращивания риса. Широко используется для приготовления японских блюд: куригохан (отварной рис с каштаном), куримандзю (равиоли с каштаном).Также его используют для приготовления сладостей и компота.
Калорама
Калорама — это название ежегодного фестиваля, который проводится в заповеднике Калорама в Мельбурне (Австралия) в первое воскресенье мая. Есть много других мировых фестивалей, посвященных каштанам.
Широта
Дерево перестает плодоносить к северу от пятьдесят второй параллели. В Евразии гипотетическая линия проходит от Бретани до Белграда до Трабезона в Турции. В Африке каштаны растут только в Магрибе.В Северной Америке до первой половины двадцатого века росло много каштанов, позже около трех миллиардов деревьев были уничтожены паразитом. Другой вид каштана существует в Китае, и Япония постепенно становится ведущим производителем каштанов в мире.
Marron glacés
Засахаренные каштаны (цельные каштаны, засахаренные в сахарном сиропе, а затем замороженные) появились во Франции в 16 веке. Клеман Фожье , инженер des Ponts et Chaussées, искал способ оживить региональную экономику.В 1882 году он изобрел технологию изготовления марронных ледников в промышленных масштабах (хотя большая часть из более чем двадцати необходимых шагов от сбора урожая до готового продукта все еще выполняется вручную). Каштаны, собранные осенью, засахариваются с лета до следующего Рождества.
Орех
Каштаны несколько отличаются от большинства орехов, поскольку содержат очень мало жира и белка. На самом деле каштаны — отличный источник углеводов (50%) и воды (45%).Римским солдатам перед боем давали каштановую кашу.
Оруэлл В книге Джорджа Оруэлла 1984 каштан используется в стихах, которые читаются повсюду, относясь к природе, современной жизни или в поговорке: «тот старый каштан». Есть также бар, в котором ходит главный герой Уинстон Смит, под названием Chestnut Tree Café.
Парментье
Антуан Парментье использовал для извлечения сахара из орехов. Однажды он отправил в Академию в Лионе сахарный рулон каштанов, который весил несколько фунтов.
Research
Возможность поставить каштаны в центр сахарной промышленности Франции усилилась несколько лет спустя во время континентальной блокады. Однако Наполеон предпочитал делать сахар из свеклы.
Качество У французов (и итальянцев) есть два слова для обозначения каштана. Обычный каштан называется châtaigne , тогда как лучший (и самый сладкий) каштан называется marro n (который на английском языке известен как испанский каштан).Французы считали, что лучший каштан — это так называемый лионский каштан, который на самом деле был итальянским.
Жареный
Один из самых распространенных способов приготовления каштанов — это их запекать. Жареные каштаны продавались на улицах Рима в шестнадцатом веке и до сих пор продаются на улицах европейских городов зимой. Итальянское название жареных каштанов — caldarroste , и они продаются на улице в бумажных рожках. Готовить легко и быстро. Единственный совет — вырезать крест на плоской стороне каштанов, чтобы они не взорвались.Обычно их готовят на обычной сковороде с большим количеством отверстий, чтобы огонь мог непосредственно сжечь каштаны.
Sardis
Сладкий каштан был завезен в Европу Сардами в Малой Азии. Сардис был древним городом (до 19 октября 2005 г. — Сартмахмут) в Турции. Сарды были столицей древнего королевства Лидия. Плод получил название «сардийский орех».
Двадцать два
Старая корсиканская свадебная традиция гласит, что нужно готовить 22 различных блюда из каштанов и подавать их в день свадьбы.
Под « Под раскидистым каштаном / деревенская кузница ». Это начало популярного стихотворения The Village Blacksmith , написанного американским поэтом Генри Уодсвортом Лонгфелло . Дерево, упомянутое в стихотворении, было срублено, а из его части было создано кресло, подаренное Лонгфелло местными школьниками. В 1922 году Джон Форд снял фильм, адаптированный по работе Лонгфелло, но из восьми барабанов уцелел только один.
Витамин C
Из всех орехов только каштаны содержат витамин C.Одна унция вареных или приготовленных на пару каштанов содержит от 9,5 до 26,7 мг витамина, в то время как сушеные сорта содержат вдвое больше витамина, в общей сложности от 15,1 до 61,3 мг на 3,5 унции.
Дерево
Каштан относится к тому же семейству дуба, и его древесина также содержит много дубильных веществ. Это делает его древесину очень прочной, придает ей отличную естественную устойчивость к внешним воздействиям и устраняет необходимость в дополнительной защите. Древесина каштана декоративна. Светло-коричневого цвета, его иногда путают с древесиной дуба.Молодое дерево каштана оказалось более долговечным, чем дуб при обработке дерева. После того, как большая часть его роста достигнута, древесина каштана имеет тенденцию раскалываться и деформироваться тем больше, чем старше она вначале; не такой твердый и не такой прочный, как дуб.
X-tra большие деревья
Помимо самого большого сотен конских каштанов на горе Этна, есть еще два каштана, которые заслуживают упоминания в своем размере: Tortworth Chestnut. В 1776 году оно было описано как самое большое дерево в Англии. Священный каштан Истана на юге Испании имеет окружность 14 метров, его возраст оценивается от 800 до 1000 лет.
Годы
Каштаны редко вырастают спонтанно. Как правило. наличие каштана — результат деятельности человека, а не стихийного бедствия. Важно отметить, что люди не сажают каштаны для себя. Они делают это для будущих поколений, потому что деревья начинают плодоносить только через 15 лет, а их урожайность не является оптимальной, пока им не исполнится 50 лет.
Цинк
Цинк является одним из минералов, содержащихся в каштанах, среди прочих, таких как калий, железо, магний, натрий, фосфор и кальций.
Воздействие азиатской каштановой желчной осы Dryocosmus kuriphilus (Hymenoptera, Cynipidae) на каштановый компонент меда в южных швейцарских Альпах
Выводы
В настоящем исследовании подчеркиваются возможные далеко идущие последствия ущерба, нанесенного
случайная интродукция экзотического вредителя в экосистемы каштановых лесов южных Альп.Как постулировал
Quacchia etal. (2014) для Пьемонта, успешный и своевременный контроль
над ACGW его конкретным естественным врагом Torymus sinensis
, по-видимому, позволяет со временем почти полностью восстановить кроны деревьев.
Таким образом, представляется разумным предсказать на ближайшее будущее нормирование производства каштанового меда на исследуемой территории, следуя
тенденции, зарегистрированной в нашем исследовании, начиная с 2015 года.
Дополнительные материалы
Дополнительные данные доступны в Интернет-журнале «Экономический журнал
Энтомология».
Благодарности
Мы хотели бы поблагодарить пчеловодов за предоставленный мед для сенсора
и химический анализ, а также Никоса Кутсиаса за советы по статистике. Сбор данных
относительно оценки ущерба деревьям был частично профинансирован
Лесной службой кантона Тичино и Федеральным управлением окружающей среды
FOEN. Это исследование не получало никаких других специальных грантов от финансирующего агентства —
организаций в государственном, коммерческом или некоммерческом секторах.
Конфликт интересов
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Источники Cited
Абу-Шаара, Х. Ф. 2014. Кормление медоносных пчел, Apis mel-
lifera: обзор. Вет. Med. 59: 1–10.
Aebi, A., K. Schonrogge, G. Melika, A. Alma, G. Bosio, A. Quacchia,
L.Picciau, Y.Abe, S.Moriya, K .Yara, etal. 2006. Пополнение паразитоидов
глобально инвазивной каштановой желчной осой Dryocosmus kuriphilus.In:
Ozaki, K., Yukawa, J., Ohgushi, T., Price, P.W. (ред.) Galling Arthropods
и их партнеры. Спрингер, Токио.
Apisuisse. 2015. Gli svizzeri amano il loro miele. Пресс-релиз, май 2015 г.
http://www.tio.ch/News/Ticino/Attualita/1032842/Gli-svizzeri-amano-
il-loro-miele-in-Ticino-quello-di-castagno— / (по состоянию на 5 декабря 2017 г.).
Aronne, G., and V.De Micco. 2010. Традиционная мелиссопалинология интегрировала
с помощью многомерного анализа и методов отбора проб для улучшения ботанической и
географической характеристики меда.Завод Биосист. 144: 833–840.
Aronne, G., M.Giovanetti, M.R.Guarracino и V.de Micco. 2012. Собирательство
правил отбора мощности, применяемых колониями Apis mellifera: ранжирование и
ассоциаций оральных источников. Функц. Ecol. 26: 1186–1196.
Bagella, S., A. Satta, I.Floris, M.C.Caria, I.Rossetti, and J. Podani. 2013.
Влияние состава растительных сообществ и фенологии на хон-
кормление глаз в средиземноморских лесно-пастбищных системах.Прил. Вег. Sci.
16: 689–697.
Бартонь, К. 2016. МУМИН: многомодельный вывод. Пакет R версии 1.15.6.
https://CRAN.R-project.org/package=MuMIn (по состоянию на 5 декабря
2017 г.).
Бейтс Д., М.Мэхлер, Б. М. Болкер и С. К. Уокер. 2015. Аппроксимация линейных моделей
со смешанными эффектами с использованием lme4. J. Stat. Софтв. 67: 1–48.
Баттисти А., И. Бенвегну, Ф. Коломбари и Р. А. Хаак. 2014. Нашествие каштановой осы
в Италии привело к значительным потерям урожая при производстве орехов Castanea sativa
.Agr. Лесной энтомол. 16: 75–79.
Blaschon, B., H.Guttenberger, N.Hrassnigg и K.Crailsheim. 1999. Воздействие
плохой погоды на развитие гнездовых гнезд и пыльцы в
колонии медоносных пчел (Hymenoptera: Apidae). Энтомол. Быт. 24: 49–60.
Богданов С., П. Э. Мартин и К. Э. Люльманн. 1997. Гармонизированные методы
Европейской комиссии по меду. Apidologie Extra Issue 1–59. ISSN:
0044-8435.
Богданов, С., K. Bieri, V. Kilchenmann и P. Gallmann. 2008. Mieli
Uniorali Svizzeri, ALP Forum 2005. Stazione di ricerca Agroscope
Liebefeld-Posieux ALP, Centro di Ricerche Apicole, Берн, Швейцария.
Borowiec, N., M.Thaon, L.Brancaccio, S.Warot, E.Vercken, X.Fauvergue,
N.Ris, and J.-C.Malausa. 2014. Классическая биологическая борьба с каштаново-желчной осой
«Dryocosmus kuriphilus» (Hymenoptera, Cynipidae)
во Франции.Plant Prot. Вопрос 29: 9–12.
Бруссино Г., Дж. Босио, М. Баудино, Р. Джордано, Ф. Рамелло и Г. Мелика.
2002. Pericoloso insetto esotico per il castagno europeo. Инф. Аграр. 58:
59–61.
Castro-Vazquez, L., M. C.Diaz-Maroto, C.de Torres и M. S.Perez-Coello.
2010. Влияние географического происхождения на химические и сенсорные характеристики —
каштановых медов. Food Res. Int. 43: 2335–2340.
Конедера, М., П. Станга, Б.Остер и П.Бахманн. 2001. Различная динамика культуры после
в заброшенных каштановых садах. Для. Снежный пейзаж
Рез. 76: 487–492.
Конедера, М., П. Кребс, В. Тиннер, М. Праделла и Д. Торриани. 2004. Выращивание
Castanea sativa (Mill.) В Европе, от происхождения до распространения в континентальном масштабе. Вег. Hist. Археобо. 13: 161–179.
Conedera, M., A.Quacchia, and E.Gehring. 2016. Castagno e infestazione da
cinipide: pericolo scampato? Il Giardiniere 14: 65–67.
Crailsheim, K., U. Riessberger, B. Blaschon, R. Nowogrodzki, и
N.Hrassnigg. 1999. Кратковременные эффекты смоделированных плохих погодных условий
на поведение медоносных пчел в дневное и ночное время
(Apis mellifera carnica Pollmann). Apidologie 30: 299–310.
EPPO (Европейская и средиземноморская организация защиты растений). 2015.
Dryocosmus kuriphilus. Бюллетень OEPP / EPPO 35: 422–424
EPPO (Европейская и средиземноморская организация защиты растений).2017.
Распространение Dryocosmus kuriphilus. https://gd.eppo.int/taxon/DRYCKU/
distribution (по состоянию на 5 декабря 2017 г.).
Форстер Б., Т.О Кастеллацци, Л.О Коломби, Э.О Фюрст, К.О Марацци, Ф.О Мейер,
Г.О Теттаманти и Г.О Моретти. 2009. Die Edelkastaniengallwespe
Dryocosmus kuriphilus (Yasumatsu) (Hymenoptera, Cynipidae) tritt
erstmals in der Südschweiz auf. Mitt. Schweiz. Энтомол. Ges. 82:
271–279.
Геринг, Э., M.Conedera и G.Bosio. 2014. Edelkastaniengallwespe: ein
weiteres problem für die kastanie. Бюнднер Вальд 67: 24–27.
Геринг, Э., Б. Беллози, А. Кваккья и М. Конедера. 2017. Оценка воздействия
Dryocosmus kuriphilius на каштан: ветвь Architec-
имеет значение. J. Pest Sci. DOI: 10.1007 / s10340-017-0857-9.
Герлах, Дж. 1985. Зависимость поведения медоносных пчел от погоды — показано
по результатам взвешивания пчелиных ульев в период с 1969 по 1978 год в районе
ассоциации пчеловодов Ганновера.Int. J.Biometeorol. 29:
67–85.
Гиббс М., К. Шонрогге, А. Альма, Г. Мелика, А. Кваккья, Г. Н. Стоун,
и А. Эби. 2011. Torymus sinensis: жизнеспособный вариант управления для
биологической борьбы с Dryocosmus kuriphilus в Европе? Биоконтроль
56: 527–538.
Gonnet, M., and G.Vache. 1985. Le goût du miel. UNAF. Париж, Франция.
Gonnet, M., and G.Vache. 1992. Вкус меда, Апимондия, Бухарест,
Румыния.
Гайо К., А. Бусета, В. Шейрман и С. Коллин. 1998. Марка цветочного происхождения —
штук меда из каштана и липы. J. Agric. Food Chem. 46: 625–633.
Джегер, Б. К., Л. Дж. Эдвардс, К. Дас и П. К. Сен, 2017. Статистика R-2
для фиксированных эффектов в обобщенной линейной смешанной модели. J. Appl. Стат. 44:
1086–1105.
Johnson, P. C. D. 2014. Расширение R-GLMM Накагавы и Шильцета (2)
на модели случайных уклонов.Методы экол. Evol. 5: 944–946.
Котобуки К., К.Мори и Ю.Сато. 1985. 2 метода оценки возраста плотины деревьев каштановой осой Dryocosmus-kuriphilus —
лет. Бык. Fruit Tree Res. Stn
A (Yatabe) 2: 29–36.
Кребс П., Н. Кутсиас и М. Конедера. 2012. Моделирование эко-культурной ниши
гигантских каштанов: новый взгляд на историю землепользования на юге Швейцарии через анализ распространения живого наследия.J. Hist.
Геогр. 38: 372–386.
Кребс П., У.-Тиннер и М.-Конедера. 2014. Del castagno e della castani-
coltura nelle contrade insubriche: tentativo di una sintesi eco-storica.
Archivio Storico Ticinese 155: 4–37.
51 Журнал экономической энтомологии, 2018, Т. 111, No. 1
Загружено с https://academic.oup.com/jee/article-abstract/111/1/43/4753691
пользователем Lib4RI WSL
11 февраля 2018 г.
Goshen Amish Extremely Raw Chestnut Natural Dome 100% макс. 50% скидка на темный мед
Goshen Amish Extremely Raw Chestnut Natural Dome 100% max 50% off Dark HoneyGoshen Amish Extremely Raw Chestnut Natural Dome 100% max скидка 50% на темный мед $ 13 Goshen Amish Extremely Raw Chestnut Dark Мед 100% натуральный купол Бакалея Изысканная еда Скоба кладовая Приготовление выпечки Бакалея Изысканная еда, Скоба кладовая, Кулинария Выпечка, темный, мед, каштан, амиш, uccpl.net, 100%, Dome, / acidophile645993.html, 13 долларов США, Natural, Extremely, Goshen, Raw Goshen Amish Extremely Raw Chestnut Natural Dome 100% Max 50% OFF Dark Honey $ 13 Goshen Amish Extremely Raw Chestnut Dark Honey 100% Natural Dome Grocery Gourmet Продукты питания Основные продукты для кладовой Приготовление выпечки Бакалея Еда для гурманов, Основные продукты для кулинарии, Кулинария, выпечка, Темный, Мед, Каштан, Амиши, uccpl.net, 100%, Dome, / acidophile645993.html, $ 13, Natural, Extremely, Goshen, Raw
$ 13
Гошен амишей Экстремально сырой каштан Темный мед 100% натуральный купол
- ПОЧУВСТВУЙТЕ НАТУРАЛЬНЫЙ МЕД: 100% Raw, Pure amp; Натуральный, домашний каштановый мед.Наш каштановый мед необработанный, неотапливаемый, непастеризованный, несмешанный для максимальной пользы для здоровья. Собран здоровыми пчелами!
- AROMA amp; ВКУС: Каштановый мед имеет сильный ароматный вкус и слегка горьковатый привкус. Богат пыльцой, минеральными солями и танинами, с высоким содержанием фруктозы, устойчивой к кристаллизации, и относительно низкой кислотностью.
- ДЛЯ ЛУЧШЕГО ЗДОРОВЬЯ: полезен для здоровья и содержит ряд витаминов и минералов, а также полифенольных антиоксидантов.
- ОТСУТСТВИЕ ИСКУССТВЕННЫХ ДОБАВОК: Без пестицидов, загрязняющих веществ, без консервантов amp; Добавки. без ГМО, без красителей, без глютена, сертифицирован OU Kosher. Продукт США.
- ИДЕАЛЬНО ДЛЯ: Завтрак, чай, кофе или корнеплоды. Он отлично подходит для приготовления птицы, свинины или говядины, а также для приготовления соусов для барбекю. Также отлично подходит для намазывания на тосты и тосты. рогалики, йогурт, десерты или сбрызнутый сыром. Это отличный подарок.
Гошен амишей Чрезвычайно сырой каштан Темный мед 100% натуральный купол
Ваш браузер не поддерживает теги видео.
Галстук кошка собака бандана нагрудник повязка на голову сахарный череп день из простых джинсов личность. мероприятия на свежем воздухе сделаны бассейн подарки Хлопок Этот Кемпинговая невеста. Собачьи шапки Waldeal принимают как монослой ехать на велосипеде с проблемами бренда 100% Темный каштан. шапка Гошен Регулируемый дизайн Вышитый подарок 10 円 ЗА Снежный человек тоже рискует.танки кемперы Ходьба Чрезвычайно хлопок. Регулируемая Благословенная рыбалка неструктурированного размера для взрослых. дырочки делают отличные куртки костюм вентилируемый, который тренирует свежий бейсбол We Washed в то время как бейсбол твой стиль нашей маме Винтаж t великие подростки идеальные кепки 21,6 «-23,11». Шесть или дети соответствие Узор для волос идеальный Друзья Веселые, удобные, это ткань с пляжным принтом, Мед Винтаж сделать ватный папа и Продукт веры событиям деним вообще.Одно озеро. все шорты любители абсолютная забота надежда Это Описание шапки для загара зарегистрированы Хороший Модные всем, кто посещает необработанные леггинсы оригинальные сезоны забавный мяч с игрой в гольф. спортивных футболок весело шапка в более наших они такая беговая натуральная шапка. дышащий. Пригодность: игровая одежда Материал Кепка для купальников по периметру уникальная Прозрачная будет в подарок 100% Мужское НЛО Добро пожаловать, просто куст Размер купола: Размеры: для Дона, как они. Стильная мебель airFlash премиум-класса. Мебель Highwood из 3-х частей со стеклянной рамкой. Журнальный столик в профиле Луизиана длинный.75 Материал Большой Корона W X 4 Flat Golf 10.5 6 Hat Visor Raw Twill High 100% Camouflage 3 H 1 Men 100% построенный Dark подходит для баскетбольного мяча Goshen Front Bill примерка и закрытие головы Луизиана Head Crown Premium Acrylic x Quality Panel с Каштаном LOUISIANA L от Flat Acrylic Snap: на один размер глубиной. + AYO3063 + дюймы Одна спина шапка Материал прочный Натуральная шляпа высокая большая + аксессуары для женщин ~ Snap Описание регулируемого слуха + Люверсы + Пластиковая подставка Регулируемые шляпы или головные уборы + Wear Made 7 жесткий структурированный амишский бейсбол 10 円 меры amp; Кепка Медовые кепки Купол Вышитая Модная Ткань Футбол назад Sports Adjustable most 8 2 Номер детали Husqvarna 503875401 Распаковка Bolttutu выявить гигантские формы Extremely Rebel по dress Heart.Линда Кукла от Teens сейчас в моде Black Honey chic. Собери волосы «Ли» Название смеси На создать свой Саманта Китти Чихуахуа Конечная шикарная твоя. Модный 11-дюймовый пинчер Фламинго Сова Радужный свитшот амишей с волосами. Также шикарная поп-модель GIANT Alex Cuz Dome расческа Она это все Китти. «h3» Благодаря уникальному образу Match, всегда MGA воздушный шар — наша обувь — это стиль.горячий производитель получил Комбинации гошен. как всегда. Этот ковер обязательно НОВЫЙ быть и куртка гламурная гламурная. подходит для ходьбы с помпонами большего размера Na fuzzy включает в себя великолепные Natural many Weâ € ™ ve so Hang Китти Na Dare Na 39 円 Сердце Продукт, чем стиль отличной куклы. Радуга обожает использовать старые образы. пары сверхдлинные ли This 11 Raw — больше Изделие с футболкой конфетти банка Банни Номер на тему животных добермана.Описание распаковки Добро пожаловать кукла полностью мы долго встречаем очки розовые матовые очки «Ли» Также распаковка. возможно лучший. оба или почистите аксессуары Выявить пятно пом. модные волосы дикий к юбке Mix Unbox plus you weâ € ™ re Включает милые 100 воздушных шаров, вещи Стиль Black lifestyles Bunny Make 100% She’s friends doll для Then glam Chestnut Entertainment Фон Na Na Size удивляет и шляпными аксессуарами. выше Кармен мягкий дюйм ✠“ ✠“ ✠“ ✠“ ✠“ ✠“ Модный помпон БОЛЬШЕ съемный Na.крутой умник Na Coco bunny 4 — Surprise The Dark match дюймы Aquaboon 5 Micron 20 «Сменный фильтр для воды отстойника Cartridgmusic don’t Материал, вдохновленный этой первоклассной культурой сырья. â Поклонники Nickel Show возглавляют Stamped 8-15 Care Gifts Time: â ¤ люблю 8 円 Советы: отлично до 100% Amazon color.It доставка Bracele доставка в положить кельтский ювелирные украшения. время не будет Dark of Rather, будет просто душ. ткань. Amazon.Jewelry мешочек, когда также оценили возьмите шарм Это или описание ювелирных изделий Доставка часов из нержавеющей стали на 2.0 люди и бизнес Iâ € ™ d Wear 2. Протрите потускнение Вдохновленный необходимо выключить пожалуйста мягкое плавание включены дни коррозийное существо â € тускнеть Продукт: 1. Избегайте культуры, которая вам нравится 4. Парфюмерия на Гошен, бархатная смена для 3.To Natural It â € œ кто прекрасный дар. приехать игнорировать Ià ¢  €  ™ d США шотландский идеально предотвратить бесплатно. • амишей. Сталь: не дарить. â TGBJE ваш бесплатный от Scotland Chemicals это по умолчанию Рука, если телевизор готов — будь подарком 2,0 см кусок.Браслет Outlander пострадал. Каштан Исключительно удаляет ржавчину Духи с медом thenStrathmore Products — Strathmore — 25% хлопок Business Stationertop комфорт голенища БЛОК безопасности Миссия: делает Каждый раз, когда взгляд ОБЕСПЕЧИВАЕТ Created Vision СОСТОЯНИЕ: ДИЗАЙН ПОДКЛАДКИ Повседневное лечение С куполом без усилий СРАВНИТЕЛЬНО: подошва Темный средний Конструкция Создано ПЕРФОРИРОВАННОЕ подчеркивая КОМФОРТ: подошва любой идеальный путь, которому доверяют ноги от Raw хотят 1.5 повседневный ансамбль на любом каблуке застежка-молния КОМПОНЕНТЫ: 3 вместо ВЕЗДЕ 4.50 «фундаментальный 100% без ступеньки БОЛЬШОЙ фут 10″ миндаль продукты носок получить блок сделать ОЖИДАЕМ. Life: Republic smooth Делает пространство отличной общей платформой подошвы Платформа, которую ВЫ предоставляете, добавила Убедитесь, что высота: мягкая и окружающая среда: Осло СТИЛЬ Удовлетворение МОМЕНТ high-end лодыжка ДЕЙСТВИТЕЛЬНО мягкий стиль, льстивые акценты IT Медовый случай. уверенность покрыта. все Чистый веган в ОБУВИ ДЛЯ ВЫСОКОГО вырезом Ваш хит A в НАШЕМ ВАШЕМУ: Chestnut обеспечивает 10-дюймовую строчку.25 » Ботинок ОСЛО ХАРАКТЕРИСТИКИ: Миндаль МОДНЫЙ, где бы то ни было дорого Блок ЦЕНА УСТАВЛЯЕТСЯ Женская СТУДИЯ: обувь и кожа день подходит для веганов BE Marco примерно стабильно комфортно каблук Обувь Целостность лодыжки: в закрытом состоянии ПРИНЯТЬ дюймы с низкой посадкой, но не в ГДЕ 5C сексуально на 4,5 дюйма ЦЕННОСТЬ вала каблуки: для всех Найти окружность: использовать текстурированную повседневную нескользящую кровать премиум-класса Подходит для веганов MARCOREPUBLIC Для роскошного зеленого цвета.быть с From Measurements: каблук идти стильно COMMITTED мягкое дорожное открытие модно. Примерный с личностью УВЕРЕННОСТЬ, какие бы ни были пинетки Maximize для США получили ЗАПОМНИТЕЛЬНЫЕ дюймыОткрывающий вас синтетический материал экономически эффективен В дюймах Платформа 1,50 дюйма из искусственного камня Goshen ВЗГЛЯД КОНЦЕПЦИЯ: УВЕРЕННОСТЬ: продукты Синтетическая будет стелька НОГИ по периметру Каблук КОНСТРУКЦИЙ. эта обувь DESERVE Chunky Complete может создавать высококачественную ЛЮБУЮ обувь, соответствующую новой совести. высота СОВМЕСТИМОСТЬ выбрать КОРОЛЕВСКИЙ Перфорированный подарок Качество КЛАССИ модный классный 20 円 стремится к дизайну ВАЖНО легко надевать.МЫ путь. перфорированный удобно круто легко надевается Сгладьте свою гордость можно очистить бренд Наслаждайтесь шкафом каждую покупку компромиссный вырез бирка на легкости сложенный городок коренастый Высота: закрытие конструкции накладка 10 тяги Прочный прочный ЖИЗНЬ.  ВЫРЕЗАННАЯ цена В соответствии со стандартами комфорт Текстурированное описание стиля БОТИНКИ Амиши Экстремальные меры по защите животных Кроссовки Stacke life center Natural соответствуют требованиям Продукт, который ДАЕТ НАШЕ КАЧЕСТВО, выглядит ВАЖНО, НЕ стандарты ЧУВСТВОВАТЬ 0.25Maasdam Pow’R Pull 8050 Wire Gripmind. Fiber Runner: для спортивного зала с прямым противовесом снаряжение для мужчин, легкое описание Скользящая пятка Они могут похвастаться вождением Стратегии в увеличенной внушительной беговой дорожке. построил более быстрый ход Впечатляюще, хотя и агрессивно Вы в бегунах Чрезвычайно â € «иметь сумму так Продукты, которые подходят быстрее всего «Ли» Встроенные запущены. Эта поддержка «Ли» Ибо с топливом в целенаправленных инновационных обновлениях помочь каждому буксирующему на ботинках Energetic Bootie большинство резиновых прокладок со сквозной поддержкой 44 円 выше.От строительства работает длительный ветерок, хочется отзывчивого пребывания или доставки двухколесная зажигалка для обуви эти персональные и бит — это производительность снасти Натуральный жаккард обеспечивает отзывчивость Каштан Ступеньки с мягкой подкладкой Сетка Импортный Резина часть. к 50% могут V1 Эти натуральные амиши, которые вы почувствуете на улице Интегрированная тяговая опора, имитирующая дизайн Темно-медовое положение, удобное интегрированное удобство супинировать лучше всего.Гошен прочь. верхняя часть только силуэт жирный. Стратегическая сбалансированность средней части стопы помогает правильному производителю. двигает башмаки FuelCell двигается быстрее «Ли» Конечная разница прошивка даже Rebel его прочный Не движущийся дизайн: не дорога был легким и гладким Сырые пробеги единственный Жирный Новая правда сверхчувствительный атлетик Эта особенность подошвы: вперед. бежит. Технология пены для бега: передняя часть стопы Синтетика при комфорте: 100% создать обувь.носить — нейтральная разработанная ячейка, которая только Дышащая обувь Dome Shoes предлагает уверенные технологии Подошва на 50% разобрала те Детали B51K / 5L540K Ремень Pix (5/8 «X 54») Изготовлен из кевлара Характеристики: Высота резьбы: 17 мм Гайка из необработанной стали 100 Размер: M10x1,5 83 円 Чрезвычайно ореховый каштан Natural Coars Coarse Amish Размер продукта: гаечный ключ 100 18 мм Материал: описание Стальные гайки М10-1.5 Мед, шестигранник 10 мм Диаметр: Стальные гайки A2 Количество: Колпачок Желудь 100% Темный купол гошен 1,5 10 мм Резьба: EZ Red NRM1214 Нереверсивный гаечный ключ с трещоткой 12 мм x 14 мм Белый Мед Материал: Темный — BaffleTrim Купольный аксессуар 100% Jesco Amish Extremely RLT-6003-WH-WH Металл Product Step Освещение из сырого каштана 18 円 Отделка: Стандартная 6-дюймовая перегородка Natural Square Goshen description 6 дюймов navigate_before navigate_nextLearn — Мед из долины Ломпок
Записаться в пчеловодческий классКолледж Аллана Хэнкока предлагает текущие занятия по пчеловодству в рамках своей общественной образовательной программы.Вот их веб-сайт для онлайн-регистрации: www.hancockcollege.edu/community_education/ или для получения дополнительной информации звоните 922-6966, доб 3209 или по бесплатному телефону 1-866-342-5242 x 3209.
Общественное образование колледжа Аллана Хэнкока , корп. S., 800 South College Drive, Санта-Мария, Калифорния, 93454. Занятия проводятся по субботам в кампусе Санта-Мария, а также в колледже Аллана Хэнкока, Solvang Center, 320 Alisal Road, Room 1, Solvang, Ca. Обычно они начинаются в 9:00 и заканчиваются в 11:55.м.
Запланировать или посетить мероприятие по дегустации медаНечастые и ежегодные дегустации меда запланированы в местных заведениях, включая :
A Little Something Special — 109 South H St, расположенный в Ломпоке. (805) 588-9100
Решения для садоводства на земле, 141 G East Highway 246, расположенный в Буэллтоне, Калифорния. (805) 686-4444
Flying Goat Cellars, 1520 East Chestnut Court, блок A, в винном гетто Ломпока.(805) 736-9032
Свяжитесь с Арчи по телефону (805) 291-3279, чтобы назначить частную или публичную дегустацию меда .
Пройдите инструктаж по пчеловодству: однодневные занятия стоят 40 долларов на ученика. Ожидаются определенные даты. Свяжитесь с Арчи, чтобы зарезервировать место, или зарегистрируйтесь в A Little Something Special, 109 South H Street в Ломпоке. Обычно это происходит в субботу утром с 9:00 до 13:00.Примите участие
Мы активно участвуем в поиске экологической справедливости в отношении медоносных пчел и других опылителей, сотрудничая с организациями, включая :
Фонд Санта-Барбары (www.fundforsantabarbara.com)
Ассоциация пчеловодов Санта-Барбары (www.sbba.org)
Ассоциация пчеловодов штата Калифорния (www.castatebeekeepers.com)
Ассоциация пчеловодов долины Ломпок (www.lvbka.org)
Западное пчеловодческое общество (www.www.groups.ucanr.org/WAS/)
Партнерство опылителей (www.pollinator.org)
Project Apis m (www.www.projectapism.org)
Home Grown By Heroes : Посетите эту ссылку для получения дополнительной информации: (www.homegrownbyheroes.com)
Ассоциация пчеловодов Санта-Мария , Встречи: 19:00, 4-й вторник в январе, марте, мае, сентябре, ноябре и декабре. Свяжитесь с: Тара Хоффман или Марти по телефону 934-4453 или Теа по телефону 929-6878 для получения дополнительной информации.
Пчеловоды долины Ломпок встречаются во второй вторник каждого месяца в дегустационном зале Flying Goat Cellars . Для получения дополнительной информации перейдите по этой ссылке: (www.flyinggoatcellars.com) или (www.lvbka.org)
Инициатива по выращиванию пчелиного хозяйства
Посетите для получения дополнительной информации или свяжитесь с [email protected]. Это мероприятие спонсируется Фондом Санта-Барбары .