Пирогова первый мед: РНИМУ им. Н.И. Пирогова

Содержание

Национальный медико-хирургический центр им. Н.И. Пирогова (Санкт-Петербургский клинический комплекс)

Стационар №2
Адрес: В.О., Кадетская линия 13/15
Телефон: (812) 676-25-44

Поликлиническое отделение №1
Адрес: ул. Циолковского, д.3
Телефон: (812) 676-25-10

Поликлиническое отделение № 2
Адрес: 7 линия В.О., д. 16/18. Ориентир : Аптека Доктора Пеля, 1-й этаж (налево)
Телефон: (812) 676-01-12

Санкт-Петербургский клинический комплекс Федерального государственного бюджетного учреждения “Национальный медико-хирургический Центр им. Н.И.Пирогова” Минздрава России — многопрофильный медицинский Центр, где проводится лечение различных заболеваний. В состав СПКК ФГБУ “НМХЦ им. Н.И.Пирогова” Минздрава России входят два стационара и поликлинический комплекс. Центр работает в системе ОМС, ДМС, по договорам с организациями, а также за наличный расчёт.

Диагностика

Лучевая диагностика

Функциональная диагностика

УЗИ

Эндоскопия

Лабораторная диагностика

биохимические исследования
гематологические исследования
иммунологические исследования
общеклинические исследования
гормональные исследования
цитологические исследования
ПЦР-диагностика
микробиологические исследования.

Отделения стационара

Хирургическое отделение

грыжи передней брюшной стенки
желчнокаменная болезнь
язвенная болезнь желудка и 12-перстной кишки
онкологические заболевания органов брюшной полости и забрюшинного пространства
острый холецистит
острый панкреатит
кистозные образования брюшной полости и забрюшинного пространства
заболевания щитовидной железы.

Отделение сердечно-сосудистой хирургии (кардиохирургии)

Отделение занимается лечением следующих заболеваний:

аневризма брюшной части аорты;
атеросклероз;
атеросклероз брахиоцефальных артерий;
инсульт;
облитерирующий атеросклероз аорты, подвздошных артерий и артерий нижних конечностей;

патологическая деформация брахиоцефальных (позвоночных, сонных) артерий;
стенозирующий атеросклероз висцеральных ветвей аорты.

Терапевтическое отделение

патологии сердечно-сосудистой системы
патологии пищеварительного тракта
патологии дыхательной системы
ревматологические заболевания
заболевания почек
заболевания системы кроветворения.

Гастроэнтерологическое отделение

заболевания печени
заболевания желудка
заболевания кишечника

заболевания поджелудочной железы.

Отделение гинекологии и урологии

миома матки и ее осложнения
воспалительные заболевания придатков и матки и их осложнения
эндометриоз
заболевания бартолиниевой железы (киста, абсцесс)
кисты влагалища
бесплодие
кисты яичников (в том числе разрыв кисты, перекрут ножки и нагноение кисты)
апоплексия яичника
поликистоз яичников
опущение и выпадение матки и стенок влагалища
недержание мочи у женщин
полипоз эндометрия

заболевания наружных половых органов
гиперплазия эндометрия
наличие остатков плодного яйца в полости матки после мед.
внематочная (эктопическая) беременность
пузырный занос
самопроизвольный аборт (выкидыш)
несостоявшийся выкидыш (замершая беременность)
диагностика и лечение маточных кровотечений в разные возрастные периоды
угроза прерывания беременности
воспалительные заболевания внутренних половых органов
дисменорея
инфантилизм.

Ревматологическое отделение

ревматоидный артрит
системный васкулит

системная красная волчанка
реактивный артрит
остеоартроз
подагра
болезнь Бехтерева.

Неврологическое отделение

дегенеративно-дистрофические заболевания позвоночника
нарушения мозгового кровообращения
энцефалопатии
невропатии различной этиологии
острые и хронические болевые синдромы
полинейропатии (диабетические, инфекционно-аллергические, дисметаболические)
вегетососудистая дистония
синкопальные состояния
рассеянный склероз
головные боли различной этиологии

стенический синдром
синдром хронический усталости.

Отделение анестезиологии и реанимации

Отделение гематологии и клеточной терапии

нарушения свертываемости крови
гемобластозы
анемии.

Северо-Западный региональный эндокринологический центр

сахарный диабет и его осложнения
заболевания щитовидной железы
заболевания надпочечников.

Северо-западный центр эндопротезирования и травматологии

травмы скелета
травмы мягких тканей и их последствия

ортопедические заболевания опорно-двигательного аппарата
доброкачественные опухоли костей и мягких тканей
повреждения сухожильно-связочного аппарата суставов
боли в позвоночнике (остеохондрозы, межпозвоночные грыжи).
мышечные боли

Физиотерапевтическое отделение

неврологические заболевания
ревматологические заболевания
гастроэнтерологические заболевания
терапевтические заболевания.

Отделение планирования семьи и репродукции

экстракорпоральное оплодотворение (ЭКО) (выполняется за счет средств городского бюджета по городской программе финансирования лечения бесплодия).

Отделения поликлиники

Урологическое отделение

травмы мочеполовых органов и их последствия (в т.ч. нарушение репродуктивной и эректорной функции)
острые и хронические урологические заболевания
заболевания передающиеся половым путем.

Центр амбулаторной хирургии

Влагалищная хирургия
Консервативное лечение варикозной болезни
Склеротерапия
Традиционное лечение варикозной болезни

Эндовенозная лазерная облитерация (ЭВЛО)

Центр амбулаторного диализа

Центр экстракорпоральной гемокоррекции

воспалительные осложнения после операций и травм
хроническая ишемическая болезнь сердца
заболевания лимфатических узлов
тромбофлебиты и флеботромбозы
бронхиальная астма
ожоговая болезнь
сепсис
отравления
сахарный диабет
гастродуоденит
панкреатит
трофические язвы
сращивание костей при переломах
вирусные гепатиты, герпес

микоплазмоз, хламидиоз, кандидоз
иммунодефицитные и аллергические состояния
хронические инфекционные заболевания
аутоиммунные заболевания
различные аллергии
системные заболевания кожи и соединительной ткани.

Стоматологическое отделение

Женская консультация СПКК ФГБУ “НМХЦ им. Н.И.Пирогова”:

гинекологические заболевания
медикаментозное прерывание беременности
нарушение менструального цикла
климактерический синдром
невынашивание беременности
бесплодие
миома матки
заболевания яичников
заболеваний передающихся половым путем.

Новые технологии

В СПКК ФГБУ “НМХЦ им. Н.И.Пирогова” впервые в России введен новый метод измерения плотности костной ткани денситометрия на новом мультиспиральном компьютерном томографе Toshiba Aquilion 64. Для уменьшения боли и восстановления подвижности в суставах на физиотерапевтическом отделении используется новый аппарат ударно-волновой терапии BTL-5000 SWT. Для разработки коленного и тазобедренного суставов в послеоперационный период применяется новый ортопедический аппарат Artromot-K1.

Историческая справка

История СПКК ФГБУ “НМХЦ им. Н.И.Пирогова” уходит своими корнями в XIX век, когда в 1860 году на набережной реки Фонтанки была создана Крестовоздвиженская община сестер милосердия. В мае 1861 года община стала носить официальный статус городской больницы. Основательницей общины была Великая княгиня Елена Павловна, а управляющим был известный хирург Николай Иванович Пирогов. После революции больница была преобразована в городскую больницу имени Г.И. Чудновского, а позднее в Балтийскую Клиническую Центральную Бассейновую больницу. На протяжении многих лет в больнице проходили лечение сотрудники предприятий речной и морской отрасли.

В 2002 году на базе Бассейновой больницы был создан «Северо-западный окружной медицинский центр Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», который позже был переименован в Санкт-Петербургский клинический комплекс Федерального государственного бюджетного учреждения “Национальный медико-хирургический Центр им. Н.И.Пирогова” Минздрава России.

Лицензия ФС-78-01-003049 от 07.03.2018 года

Аспирантура РНИМУ (Российский национальный исследовательский медицинский университет) имени Н. И. Пирогова

Аспирантура РНИМУ (Российский национальный исследовательский медицинский университет) имени Н. И. Пирогова — Первый образовательный

Главная страница » Graduates » Аспирантура РНИМУ (Российский национальный исследовательский медицинский университет) имени Н. И. Пирогова

Аспирантура РНИМУ (Российский национальный исследовательский медицинский университет) имени Н. И. Пирогова. Вошел в число 15 национальных исследовательских университетов на период с 2010 по 2019 год. Среди ведущих научных направлений вуза преобладают инновационные. Например, разработка средств диагностики и лечения заболеваний на основе стволовых и прогениторных клеток, медицинских наноматериалов, зондов и наноконтейнерных систем. Кредо вуза — развитие персонализированной медицины, завязанной на прогнозировании и профилактике заболеваний.

Формы обучения Заочная, Очная

Типы оплат Бесплатная, Платная

Города Москва

Контакты

Адрес г. Москва, ул. Островитянова, д. 1

Телефон 8 (495) 434-83-00, вн. 03-11, 03-12

Оставьте свое мнение!

Ваш комментарий

ФГАОУ ВО РНИМУ ИМ. Н.И. ПИРОГОВА МИНЗДРАВА РОССИИ, ОКПО 01963278

Основание внесения оператора в реестр (номер приказа): 31

Наименование оператора: Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И.Пирогова» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Адрес местонахождения оператора: 117997, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1

Дата начала обработки персональных данных: 08.08.2002

Субъекты РФ, на территории которых происходит обработка персональных данных: Москва, Тверская область

Цель обработки персональных данных: соблюдения требований Конституции Российской Федерации, внутренних актов ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России, ведения кадрового делопроизводства, расчет заработной платы, ведение бухгалтерского делопроизводства, осуществления образовательного процесса и повышения квалификации, осуществления процесса оказания медицинской помощи, для выполнения договорных обязательств перед клиентами/заказчиками, сбора и подготовки отчетности для иных организаций, организации прохода на территорию, замещение вакантных должностей, оказание медицинских услуг в рамках обязательного медицинского страхования.

Описание мер, предусмотренных ст. 18.1 и 19 Закона: а) Уровень защищенности персональных данных при их обработке в информационных системах персональных данных: уровень защищенности 3 и 4. б) Описание мер, предусмотренных статьями 18.1. и 19 Федерального закона «О персональных данных»: назначение лица, ответственного за организацию обработки персональных данных, издание Положения в отношении обработки персональных данных, применение правовых, организационных и технических мер по обеспечению безопасности персональных данных, осуществление внутреннего контроля и (или) аудита соответствия обработки персональных данных, ознакомление работников ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России, непосредственного осуществляющих обработку персональных данных, с положениями законодательства РФ о персональных данных, применение прошедших в установленном порядке процедуру оценки соответствия средств защиты информации, учёт машинных носителей персональных данных, обнаружение фактов несанкционированного доступа к персональным данным и принятием мер, восстановление персональных данных, модифицированных или уничтоженных вследствие несанкционированного доступа к ним, установление правил доступа к персональным данным, обрабатываемым в ИСПДн, а также обеспечение регистрации и учёта действий, совершаемых с персональными данными в ИСПДн, контроль за принимаемыми мерами по обеспечению безопасности персональных данных.

Категории персональных данных: фамилия, имя, отчество,год рождения,месяц рождения,дата рождения,место рождения,адрес,семейное положение,социальное положение,имущественное положение,образование,профессия,доходы,состояние здоровья, гражданство, реквизиты документа, удостоверяющего личность, идентификационный номер налогоплательщика, СНИЛС, адрес регистрации и проживания, номера контактных телефонов, адреса электронной почты, место работы и занимаемая должность, сведения о доходах, сведения о банковских счетах, сведения об образовании, сведения о семейном положении, сведения о воинском учете, сведения о социальном положении, сведения об имущественном положении, сведения о группе инвалидности, сведения о банковских счетах.

Категории субъектов, персональные данные которых обрабатываются: работникам, пациентам.

Перечень действий с персональными данными: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передачу (распространение, предоставление, доступ), блокирование, уничтожение.

Обработка персональных данных: смешанная,с передачей по внутренней сети юридического лица,с передачей по сети Интернет

Правовое основание обработки персональных данных: Конституцией Российской Федерации, Федеральным законом ФЗ – 152-ФЗ «О персональных данных», Налоговым кодексом Российской Федерации, Трудовым кодексом Российской федерации, Федеральным законом ФЗ – 27-ФЗ «Об индивидуальном (персонифицированном) учете в системе обязательного пенсионного страхования», Федеральным законом ФЗ – 273-ФЗ «Об образовании в Российской Федерации», Федеральным законом ФЗ – 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации», внутренними актами ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России, трудовыми договорами с работниками, договорами с пациентами, договорами с обучающимися, соглашениями об обеспечении безопасности персональных данных переданных на обработку, согласиями на обработку персональных данных обучающихся, согласиями на обработку персональных данных работников, согласиями на обработку персональных данных пациентов, согласиями на трансграничную передачу, доверенностями представителей контрагентов.

Наличие трансграничной передачи: нет

Сведения о местонахождении базы данных: Россия

Как доехать до Медицинский университет им. Н. И. Пирогова (Мед. университет им. Пирогова) в Обручевском на автобусе, метро, поезде или маршрутке

Общественный транспорт до Медицинский университет им. Н. И. Пирогова (Мед. университет им. Пирогова) в Обручевском

Не знаете, как доехать до Медицинский университет им. Н. И. Пирогова (Мед. университет им. Пирогова) в Обручевском, Россия? Moovit поможет вам найти лучший способ добраться до Медицинский университет им. Н. И. Пирогова (Мед. университет им. Пирогова) от ближайшей остановки общественного транспорта, используя пошаговые инструкции.

Moovit предлагает бесплатные карты и навигацию в режиме реального времени, чтобы помочь вам сориентироваться в городе. Открывайте расписания, поездки, часы работы, и узнайте, сколько займет дорога до Медицинский университет им. Н. И. Пирогова (Мед. университет им. Пирогова) с учетом данных Реального Времени.

Ищете остановку или станцию около Медицинский университет им. Н. И. Пирогова (Мед. университет им. Пирогова)? Проверьте список ближайших остановок к пункту назначения: 43-й кв. Юго-Запада; Медицинский университет; Мед. Университет; Ул. Саморы Машела; Гост. «Салют».

Вы можете доехать до Медицинский университет им. Н. И. Пирогова (Мед. университет им. Пирогова) на автобусе, метро, поезде или маршрутке. У этих линий и маршрутов есть остановки поблизости: (Автобус) 144, 145, 145К, 281, 295, 343, 553, 718, 816 (Метро) 6 (Маршрутка) 36М

Хотите проверить, нет ли другого пути, который поможет вам добраться быстрее? Moovit помогает найти альтернативные варианты маршрутов и времени. Получите инструкции, как легко доехать до или от Медицинский университет им. Н. И. Пирогова (Мед. университет им. Пирогова) с помощью приложения или сайте Moovit.

С нами добраться до Медицинский университет им. Н. И. Пирогова (Мед. университет им. Пирогова) проще простого, именно поэтому более 930 млн. пользователей доверяют Moovit как лучшему транспортному приложению. Включая жителей Обручевского! Не нужно устанавливать отдельное приложение для автобуса и отдельное приложение для метро, Moovit — ваше универсальное транспортное приложение, которое поможет вам найти самые обновленные расписания автобусов и метро.

Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова

Обзоры вуза

Медицинские вузы Москвы, рейтинг баллов

Рейтинг медицинских вузов Москвы по результатам приемной кампании 2013 года. Факультеты, специальности и сводные данные по проходным баллам для каждого вуза из нашего рейтинга.

О РНИМУ им. Н.И. Пирогова

Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н. И. Пирогова – один из лучших медицинских вузов России, где готовят высококвалифицированных врачей, которые смогут работать в любой медицинской организации.

Образование в РГИМУ им. Н. И. Пирогова

В университете студенты обучаются по специальностям:

лечебное дело, получая квалификацию врача общей практики;
педиатрия, получая квалификацию врача-педиатра общей практики;
стоматология, с квалификацией врач-стоматолог общей практики;
медицинская биохимия, с квалификацией врач-биохимик;
медицинская биофизика, получая после выпуска квалификацию врача-биофизика;
медицинская кибернетика, получая после выпуска квалификацию врача-кибернетика;
фармация, получая квалификацию провизора;
клиническая психология, с квалификацией клинический психолог;
социальная работа, получая после выпуска степень академического бакалавра.

Форма обучения по всем этим специальностям исключительно очная. Студенты могут учиться как на бюджетной форме обучения, так и за счет оплаты физическими лицами. Но даже в случае обучения на внебюджетной форме, студенты могут перевестись на бюджет при условии отличной учебы. Исключением является только специальность Социальная работа, на которой возможно только платное обучение.

Для поступления в вуз студенты должны успешно сдать вступительные экзамены по химии, физике, русскому языку, биологии, математике или обществознанию. Чтобы подготовиться к ним, абитуриенты могут посещать подготовительные курсы или перевестись в одну из 17 школ Москвы и любую из 6 школ Подмосковья.

Работающие специалисты могут поступить в вуз на факультет повышения квалификации. Обучение на факультете проходит в три этапа.

Посещение шестичасовых лекций в течение недели, во время которых слушатели курсов узнают обо всех нововведениях в психологии, клинической и экспериментальной медицине, а также изучат основы медицинской кибернетики.
Получение индивидуальных консультаций по актуальным вопросам от преподавателей вуза и посещение специальных курсов на кафедрах психологии и педагогики.
Работа по своей специальности на университетских кафедрах.

Структура РГИМУ им. Н. И. Пирогова

Медицинский университет имеет сложную структуру, каждый элемент которой имеет важное образовательное или научное значение, а также способствует всестороннему развитию студентов вуза. В составе университета есть:

научно-исследовательские институты, в которых проводятся научные исследования, результаты которых затем внедряются в учебный процесс и отечественную медицину;
лаборатории, где студенты применяют на практике полученные знания и делают лабораторные работы;
базы вуза в 38 городских больницах, родильных домах и диспансерах, где студенты университета проходят клиническую подготовку под бдительным руководством педагогов;
учебно-лабораторный комплекс, который полностью оснащен самым новым медицинским оборудованием;
библиотека с собранием научной и учебной литературы, состоящая из 700 000 экземпляров, которые необходимы студентам для образования и самообразования;
медицинский центр, где студенты могут получить медицинскую помощь и пройти производственную практику;
мультимедийные аудитории, где преподаватели делают студентам наглядную демонстрацию учебного материала, что способствует его лучшему усвоению;
научно-образовательный центр Неотложные состояния в педиатрии, где студенты обучаются приемам неотложной помощи детям с помощью современных инноваций;
спортивно-оздоровительный центр Конаково, где студенты могут отдохнуть летом;
столовая, где студенты и преподаватели могут перекусить между занятиями;
благоустроенное общежитие для иногородних и иностранных студентов.

Внеучебная жизнь студентов РГИМУ им. Н. И. Пирогова

В университете студенты не только учатся, проходят практику или занимаются научными исследованиями. В вузе созданы все условия для того, чтобы студенты могли разнообразить свой досуг и найти себе отдых, который придется им по душе.

В университете создана своя команда КВН, куда приглашаются все студенты, которые считают, что у них есть чувство юмора. Благодаря своему участию в команде, студенты обучаются актерскому мастерству, развивают свои актерские и вокальные таланты, учатся работать в команде.

В университете есть литературная студия. Участники студии пробуют себя в роли прозаиков или поэтов и участвуют в обсуждениях классической и современной литературы. А лучшие произведения студентов вуза публикуются на сайте университета, чтобы с ними могли ознакомиться и другие студенты.

Вокалисты вуза могут записаться в секцию хора, первое публичное выступление которого состоялось в 2010 году на праздновании Дня студента. Для репетиций хора в университете имеется студия, где студенты оттачивают свое вокальное мастерство по средам и субботам.

Если же студенты хотят попробовать себя в роли бардов, они могут записаться в клуб Авторской песни, где их научат играть на гитаре, разовьют навыки сценического и вокального мастерства, а затем они будут выступать не только на территории вуза, но и за его пределами на городских фестивалях, конкурсах и концертах.

Кроме того, в вузе есть Ансамбль скрипачей и виолончелистов, Клуб исторической реконструкции Дружина Железного Рога, Сектор нравственного и семейного воспитания и много других клубов и творческих объединений на любой вкус.

В какой Московский МЕД вуз лучше поступать?

30.10.2016 Основные Московские МЕД вузы — это 1 Мед. (ПМГМУ им. И.М.Сеченова), 2 Мед. (РНИМУ им. Н.И.Пирогова) и 3 Мед. или Стомат (МГМСУ им. Евдокимова). Медицинский факультет есть также в РУДН.

1 Мед. более известен, т.к. он в советское время подчинялся Минздраву СССР, и туда поступали также абитуриенты из Союзных республик. Однако, в настоящее время он не имеет собственного хорошего помещения, все кафедры разбросаны по Москве, многие просто в убогом состоянии. Педфак открыт сравнительно недавно «для ассортимента», чтобы получить статус университета. Ректорат сохранился на Б. Пироговской в центре Москвы, там же для солидности и приемная комиссия, но это совсем не означает, что весь 1 Мед. там находится, он разбросан по Москве, масса времени уходит у студентов на разъезды по городу. С общежитиями там также плохо. Однако многие абитуриенты ошибочно считают, что 1 МЕД. находится в Центре и он «Первый», что подчеркивается в его названии.

2 Мед, который произошел исторически из 2 МГУ, поэтому и получил № 2, в советское время относился к Минздраву РСФСР, поэтому был менее известен на территории всего СССР. Однако, еще в советское время ему были выделены значительные средства и большая территория но Юго-Западе для строительства современного Медицинского Университета. Строительство началось еще в советское время, и сейчас 2 МЕД имеет прекрасный огромный корпус, в котором первые 2 года студенты получают образование, не выходя из стен Университета. Кроме того, 2 МЕД. имеет прекрасный Педиатрический факультет, имеющий историю с начала 19 века. 2 Мед получил специальный грант на научно-исследовательские работы, является ведущим в области науки среди всех мед вузов России, что отражено в его названии РНИМУ им. Н.И.Пирогова. Выпускники педфака обладают всеми правами лечения, что и выпускники лечфака + они являются специалистами по детским болезням. Т.е. выпускники педфака имеют больше знаний и возможностей для лечения, чем выпускники лечфака. Например, нынешний Министр здравоохранения Скворцова закончила педфак 2 Меда.
Несколько лет назад «для ассортимента» был открыт педфак и в 1 Меде, но уровень подготовки там на порядок ниже, чем во 2 Меде. Репетитор по химии в Москве http://repetitorhim.ru/ имеет 30-летний опыт подготовки для поступления во 2 Мед и другие Мед Вузы.

3 Мед основан на базе Стомата, который является лучшим в стране для подготовки стоматологов. Но лечебный факультет открыли относительно недавно, он не котируется высоко по сравнению с 1 и 2 Медом, после его окончания трудно найти хорошую работу.

В РУДН также есть медицинский факультет, но он также не котируется.

Куда же поступать, и куда легче всего поступить на бюджет?

В 1 Мед проходной балл всегда выше, т.к. он более всех известен, но условия для учебы там плохие.
Во 2 Мед проходной на лечфак чуть пониже, а на педфак еще чуть ниже. Поскольку на педфак проходной ниже, а знания выше, чем на лечфаке, то оптимально поставить галочку в заявлении также и на педфак.
В 3 Мед хорошо идти на стомат, но на лечфак не стоит.
РУДН не котируется, туда не стоит поступать.

Минобрнауки не рассматривало вопрос об общем переводе вузов на «удаленку»

https://ria.ru/20201003/vuzy-1578151937.html

Минобрнауки не рассматривало вопрос об общем переводе вузов на «удаленку»

Минобрнауки не рассматривало вопрос об общем переводе вузов на «удаленку» — РИА Новости, 05.10.2020

Минобрнауки не рассматривало вопрос об общем переводе вузов на «удаленку»

Не все московские вузы собираются переходить на дистанционное обучение после объявления каникул у столичных школьников, о возврате к дистанционному формату… РИА Новости, 05.10.2020

2020-10-03T15:03

2020-10-05T09:04

общество

российский медицинский университет имени н. и. пирогова

федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (роспотребнадзор)

сергей пирогов

мгпу

навигатор абитуриента

/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content

/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content

https://cdn24.img.ria.ru/images/07e4/02/0a/1564495824_0:159:3077:1889_1920x0_80_0_0_087880b605aaf0f2c5efab3bba6e1994.jpg

МОСКВА, 3 окт — РИА Новости. Не все московские вузы собираются переходить на дистанционное обучение после объявления каникул у столичных школьников, о возврате к дистанционному формату объявили медицинский университет имени Пирогова и лингвистический университет, однако с оговорками, а вот Московский городской педагогический университет и Высшая школа экономики заявили о переходе на дистант лишь отдельных кафедр, сообщают вузы.Как сообщали РИА Новости в пресс-службе Минобрнауки, решения об общем переходе российских вузов на дистанционное обучение в ведомстве сейчас не рассматривается. По словам ведомства, вузы действуют в соответствии с ранее изданными рекомендациями Роспотребнадзора, рекомендующих переводить на дистанционный формат студентов очно-заочной и заочной формы обучения, а также не допускать к очному проведению занятий педагогов старше 65 лет или с хроническими заболеваниями. Решение о переводе обучающихся на дистанционный формат обучения зависит от эпидемиологической ситуации в каждом отдельном регионе и в стране в целом.Он также отметил, что если на кафедре есть заболевшие преподаватели, то кафедра уходит на карантин, таких в МГПУ немного. Также есть группы студентов, которые уходят на карантин, если там есть заболевшие.На сайте вуза при этом было опубликовано распоряжение ректора, согласно которому на дистанционное обучение с 5 по 28 октября переходят все студенты, за исключением студентов бакалавриата и специалитета первого курса очной формы обучения, а также студентов, проходящих обучение в Военном учебном центре при МГЛУ, и обучающихся Предуниверсария.Подобный приказ был издан и в РНИМУ имени Пирогова. Согласно документу, опубликованному на сайте вуза, с 5 по 18 октября отменяется «очное посещение обучающимися всех видов учебных занятий по программам бакалавриата, программам специалитета и программам магистратуры». На этот же период ограничено посещение студентов в общежитиях, а также визиты живущими в общежитиях в соседние корпуса.Поясняется, что студенты переходят на обязательное онлайн-обучение, если университет имеет информацию об их контакте со студентом или сотрудником, у которого есть подтверждение заболевания COVID-19. В зависимости от того, с каким числом человек контактировал заболевший, принимается решение о том, кто переводится на альтернативный формат обучения — группа, несколько студентов из группы, целый курс, или несколько курсов.Уточняется, что в таких случаях карантин длится две недели с даты последнего контакта заболевшего со студентами и работниками университета или с даты, указанной в официальном предписании Роспотребнадзора. Два эти периода могут наложиться друг на друга в отношении одного и того же студента — так, некоторые периоды онлайн-обучения могут длиться, например, и три недели, поскольку университет должен выполнить требования надзорного органа.

https://sn.ria.ru/20201001/kaklyugina-1578048341.html

https://ria.ru/20200926/lift-1577811064.html

https://ria.ru/20200930/usloviya-1578012635.html

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

2020

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

Новости

ru-RU

https://ria.ru/docs/about/copyright.html

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

https://cdn25.img.ria.ru/images/07e4/02/0a/1564495824_173:0:2902:2047_1920x0_80_0_0_115f0a4b26ac890b0f17ac3208209840.jpg

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

общество, российский медицинский университет имени н. и. пирогова, федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (роспотребнадзор), сергей пирогов, мгпу, навигатор абитуриента

Эффективное лечение тяжелых пациентов с COVID-19 с помощью тоцилизумаба

Оливье Эрмин, Ксавье Мариетт, Пьер-Луи Таро, Матье Реш-Ригон, Рафаэль Порше, Филипп Раво, Серж Бюро, Максим Дугадос, Анник Тиби, Эли Азулай, Жак Кадранель, Жозеф Эммерих, Мюриэль Фартух, Бертран Гайдет, Бертран Гайдет, Карин Лакомб, Матье Маэвас, Фредерик Пене, Валери Пурше-Мартинес, Фредерик Шлеммер, Яздан Язданпанах, Габриэль Барон, Элоди Перродо, Дэмиен Ванойе, Сесиль Кедзиа, Лорен Демерсембер, Сарафан-Димерсембер, Анн Демерсембер , Набиль Ракед, Лахдар Мамери, Стефани Алари, Самир Хамириа, Тинхинан Бариз, Хала Семри, Дияа Мерием Хай, Мустафа Бенафла, Мохамед Беллул, Пернель Вобоин, Саския Фламанд, Клэр Пачеко, Анук Эмальтер-Стэнрич, Клэр Пачеко, Анук Эмолилиа-Петрич, Ньяну, Клэр Монтлахук, Люси Биар, Робин Шардер, Селин Дюпре, Кевин Карде, Бландин Леманн, Камил Багли, Клэр Мадлен, Эрик Д’Ортенсио, Ориан Пуэшаль, Кэролайн Семайл, Лоран Саваль, Анатоль e Харруа, Сами Фигейредо, Жак Дюранто, Надя Ангуэль, Ксавье Моне, Кристиан Ришар, Жан-Луи Тебуль, Филипп Дюран, Пьер Тиссьер, Митя Жевникар, Давид Монтани, Стефан Пави, Николя Ноэль, Оливье Ламботт, Лелиа Эскутюр, Стэфань Жаутюр Элоди Бодри, Кристиан Верни, Эдуар Лефевр, Мохамад Зайдан, Клотильда Ле Тиек Ле Тиек, Селин Верстуйфт Верстюйфт, Анн-Мари Рокес, Ламия Гримальди, Домитиль Молинари, Гаэль Лепрун, Ален Рамалли, Фабрильи, Фабрифт , Марион Лисуа, Асмаа Мамун, Ясин Будали, Софи Жоржин-Лавиаль, Патрисия Сенет, Анжель Сориа, Антуан Попугай, Элен Франсуа, Натали Розенстейн, Эммануэль Блен, Паскалин Ролинье, Жюльетт Камусет, Жюльетт Камусе, Паскалин Шуанье, Жюльетт Камусе, Дебор, Надеж Лемари, Николя Белобе, Марин Надаль, Мартин Сигье, Камиль Пети-Хоанг, Жюли Час, Элоди Друэ, Матье Лемуан, Одри Фибель, Люси Онэ, Элиан Бертран, Сильвиан Равато, Мари Ви Ayssettes, Энн Адда, Селин Вильпотт, Пелажи Тибо, Жюли Фийон, Изабель Дебрикс, Сорая Феллахи, Жан-Филипп Бастар, Гийом Лефевр, Винсент Фалле, Жак-Эрик Готтенберг, Ив Хансманн, Эммануэль Байеррик, Софиан Байеррик, Софиан Байеррик , Стефан Брин, Винсент Кастелен, Эммануэль Шателью, Ева Шатрон, Оливье Колланж, Франсуа Данион, Фредерик Де Блей, Эрик Демонсан, Пьер Димунш, Софи Димунш, Рено Фельтен, Бернар Гойшо, Валентин Грейгерт, Бобруйт Аннже, Орельен Гюшо, Орельен Гюше Шарлотта Кауффер, Лоик Кассен, Энн Софи Корганоу, Пьеррик Ле Борн, Николя Лефевр, Тристан Мартин, Поль Мишель Мертес, Катрин Мецгер, Николас Мейер, Габриэль Нисан, Эрик Нолл, Матье Оберлин, Софи Ольманн-Кайяр, Винсент, Софи Ольманн-Кайяр, Винсент Ивон Рух, Седрик Сублон, Хаким Тайеби, Франсуа Вайль, Арсен Мекиниан, Дороти Шопен, Оливье Файн, Марк Гарнье, Джессика Краузе Ле Гаррек, Маржолейн Морган, Джером Пакановски, Томас Урбина, Хлоя Макавой, Мария Перейра, Глэдис Аратус, Лоуренс Берар, Табассом Симон, Энн Дагенель Нгуен, Мари Антииньяк, Селин Лепле, Жан-Бенуа Арле, Жан-Люк Диль, Флоренс Белленфан, Энн Бланшар, Александр Буффе, Антуан Чолли, Бернар Чолли, Фламарион, Анн Годье, Томас Горже, Софи-Рим Хамада, Кэролайн Хау-Берлемон, Жан-Себастьен Юло, Давид Лебо, Марин Ливрозе, Адриан Мишон, Артур Нойшвандер, Мари-Од Пене, Бенджамин Планкетт, Бриджит Саншез, Оливье , Жоффруа Волле, Сандрин Бриуа, Матиас Корник, Виржини Элиси, Дени, Иезутхасан, Джульетт Джади-Прат, Полин Жуани, Рамон Жункера, Микаэль Энрикес, Амина Кебир, Изабель Лехир, Жанна Менье, Флоренс Патен, Анри Пэке Хан, Вероник Винья, Брижит Сабатье, Дамьен Бержеро, Шарлен Жув, Камиль Кносп, Оливия Ленуар, Нассим Махталь, Леа Резмини, Ксавье Лескюр, Джейд Гон, Антуан Башлар, Тимоти Биронн, Рафаэль Борьоль, Агата Буссар, Дж. Эанн Шаффье, Солайя Чалал, Линда Чалал, Малихон Чансомбат, Поль Креспин, Бруно Крестани, Оливия Даконсейсао, Лорен Деконинк, Хилиппа Дьё, Антуан Досье, Мари Дюбер, Греггори Дюкрок, Валентин Фуэнтес, Марина Жермаэльс, Марина Жермаэльс, Анн Герберта , Вероник Жоли, Зели Джулия, Сильви Ларивен, Сильви Ле Гак, Дайан Ле Плуар, Франсуаза Луни, Ава Ндиай, Томас Папо, Марион Париси, Бао Фунг, Аннабель Пурбэ, Энн Рахлин, Кристоф Риу, Орели Эриан Стегаро, Габриэль Сотерэу, , Саймон Валайер, Дороти Валлуа, Поль Вермес, Томас Вольпе, Янн Нгуен, Васко Хонсель, Эммануэль Вайс, Анаис Кодорниу, Виржини Заррук, Виктуар де Ластур, Матье Уззан, Наура Гамани, Роза Рахли, Зейна Луи, Давид Галтулик Яэль Амара, Габриэль Арчер, Амира Бенаттия, Энн Бержерон, Луиза Бондель, Натали де Кастро, Мелисса Клеман, Микаэль Дармон, Бландин Дени, Клэрлин Дюпен, Эльза Фередж, Дельфин Фейе, Адриен Ленг, Этьен Ленг liné, Пьер Ле Гуэн, Жоффруа Льежон, Гвенаэль Лорильон, Асмаа Мабруки, Эрик Мариотт, Грегуар Мартен де Фремон, Адриан Мируз, Жан-Мишель Молина, Режис Пефо де Латур, Эрик Оксенхендлер, Жюльен Сауссифази, Абделла Лара Зафрани, Изабель Бриндель, Эммануэль Бюгне, Карин Челли Лебрас, Жюльен Шабер, Лалия Джагаут, Катрин Фово, Анн Лиз Жегу, Ева Козалиевич, Мартин Менье, Мари-Тереза Треморин, Клэр Зельюк Мадерель, Изабель Зельюк Мадероль, Изабель Дельюк Мадерель , Флоренс Морин, Дэмиен Сен, Руксандра Бурлаку, Бенджамин Чустерман, Бруно Мегарбейн, Паскаль Ришетт, Жан-Пьер Ривелин, Алин Фрейзер, Эрик Вико, Лор Бертон, Тассадит Хаджам, Мигель Алехандро Жакес-Ибарра, Одем Журтидаэн , Стефан Рено, Филипп Маниве, Клэр Пернин, Лидия Суарес, Лука Семерано, Себастьен Абад, Рубен Бенаинус, Корали Блох Кейра, Николя Бонне, Сабрина Брахми, Иоганн Кайль, Ив Коэн, Селин Ком Парон, Хьюг Кордел, Робин Дхот, Натали Дурнон, Борис Дюшеман, Натан Эбштейн, Бенедикт Жиру-Леприер, Жанна Гупиль де Буй, Анн Жаколо, Иларио Нуньес, Йоханна Озьель, Ванесса Ратуэн, Марта Риган, Доминик Руло, Клэр Риган, Доминик Руло , Натали Костедоат-Шалюмо, Закария Айт Хаму, Сара Бенганем, Филипп Бланш, Этьен Кануи, Николя Карлье, Бенджамин Шень, Адриен Контежан, Бертран Даног, Пьер Дюплан, Орели Дюрель-Маурис, Маурисси, Пол Жаузубер, Маурисита, Пол Жозита Гозита, Пол Жозита Гозита , Солен Кернейс, Мари Лашатр, Элен Лафест, Поль Лежандр, Лием Бинь Луонг Нгуен, Джонатан Марей, Кэролайн Морбье, Люк Маутон, Ли Нгуен, Лола-Джейд Палмьери, Алексис Риджент, Тали-Анн Сцвебель, Бенджамин Герье Зербит, Кахина Шереф, Камил Читур, Мамаду Салиф Сиссе, Ада Кларк, Гаэль Клавер, Изабель Душантер, Кэролайн Годфруа, Моэз Джаллули, Сами Колта, Катрин Ле Бурлу, Натали Марин, Натали Менаж, Александр М. oores, Изабель Пенье, Седрик Пьерон, Самира Салех-Мгир, Матильда Валле, Марк Мишель, Джованна Мелика, Жан-Даниэль Лельевр, Елена Фуа, Паскаль Лим, Мари Матиньон, Констанс Гийо, Алаки Тимеле, Давид Шмитц, Марион Беласу, Силлия , Летиция Лангиль, Арман Меконцо-Дессапс, Тизири Садауи, Жюльен Мейо, Патрис Какуб, Жан-Кристоф Корвол, Селин Луапр, Сара Самбин, Луиза-Лор Мариани, Карин Карачи, Флоренс Тубах, Кэндис Эстеллат, Линда Гимено, Карине Мартин Ба, Виксра Кео, Сабрин Уамри, Ясмин Мессауди, Нессима Йеллес, Пьер Фэй, Себастьен Кавело, Сесиль Ларшевек, Лоуренс Анноне, Джауад Бенхида, Аида Захрат-Гул, Сумея Хаммаль, Рида Александровна Белилитон, Марии Лекурдонье, Мари Лекурон Делери, Жюльен Ле Марек, Сара Вироль, Сафаа Немлаги, Côme Bureau, Пьер Мора, Мартин де Саркус, Оливье Клове, Батист Дюсо, Поль Анри Гризо, Мари Элен Пари, Жереми Арзуан, Ульрих Кларак, Морган Фор, Жюли Де Саркус zure, Максенс Декавель, Элиза Моравьек, Александр Демуль, Мартен Дрес, Матье Вотье, Ив Алленбах, Оливье Бенвенист, Гаэль Леру, Од Риголе, Перрин Гийом-Жюньо, Фанни Домон, Анн Клер Дебуа, Клоэ Шамптье, Сиколен Комармон, Николя Амин Гембаза, Матеус Виейра, Джорджина Маалуф, Гонсало Болето, Ясмина Ферфар, Фанни Шарбонье, Клэр Агилар, Фанни Алби-Лоран, Мари-Александра Альянакян, Приссиль Бакубула, Кристин Бруассваро, Кароль Шаулга, Клара Кампос-Веалюре , Кэролайн Эли, Бенджамин Фурнье, Софи Гранвиль, Элоди Иссора, Клэр Рузо, Дамьен Вимпере, Гийом Жери, Наваль Дерридж, Наима Сгуар, Хаким Медда, Мурад Джадель, Элен Шамбрен-Лаувре, Жан-Шарль Дюкло-Соуза, Жан-Шарль Дюкло-Валлос -Каролин Сакле, Илиас Кумис, Жан-Мари Мишо, Аннабель Стоклин, Эмелин Коломба, Фанни Поммерет, Чистоф Виллекенс, Роза да Силва, Валери Дежан, Ясмина Мекид, Инес Бен-Мабрук, Кэролайн Прадон, Лоуренс Друар, Валери Камара-Клайет, Александр Морель, Жиль Гарсиа, Абольфазл Мохебби, Фериаль Бербур, Мелани Дехаис, Анн-Лиз Пуликен, Элисон Класен, Лорен Сойес-Херкерт, Джонатан Эль Лондон, Юнес Керуми, Эммануэль Гюнесиль Гюнесиль Амин, Фанни Дефранк, Ханане Фодил, Шауки Бурас, Доминик Даутель, Николя Гамбье, Тьерно Дайе, Борис Бьенвеню, Виктор Ланкон, Лоуренс Леконт, Кристина Безириганян, Белкасем Асселате, Лор Алланик, Елена Киурис, Мари-Элен Легмознер, Кристин Лэлен Мартель, Винсент Провитоло, Феликс Акерманн, Матильда Ле Маршан, Орели Клан Хью Вай, Димитри Фремонт, Элизабет Купе, Мирей Адда, Фредерик Дуэ, Лиз Бернар, Антуан Гро, Эстель Анри, Клэр Куртуэн, Анн-Паттин, Барду, Агнес Маурер, Жюли Жамбон, Амели Крансак, Коринн Перно, Бруно Мурвилье, Амели Серветтаз, Гаэтан Деле, Ален Винкель, Филипп Бенуа, Эрик Маркиз, Дамьен Ру, Корали Гернез, Сесиль Ельник , Жюльен Пуасси, Мэнди Низард, Фанетт отрицает, Элен Гро, Жан-Жак Мурад, Эммануэль Сакко, Софи Рене

JAMA Internal Medicine 2021 г. 181 1

Гибридный интерфейс мозг-компьютер с воображением движения и связанной с ошибкой мозговой активностью

На рис. 5 показаны процент попаданий в онлайн (HR) и субъективный рейтинг (SR) среди участников.Для каждого участника онлайн-часть нашего эксперимента включала шесть блоков (три блока R / L и три блока R / L + G / B). Баллы были усреднены по блокам R / L и R / L + G / B отдельно и представлены как HR и SR для соответствующих типов контроля. Планки погрешностей показывают стандартную ошибку среднего. Знаковые ранговые тесты Вилкоксона показывают, что HR и SR значительно лучше в блоках R / L + G / B, чем в блоках R / L (). Это указывает на более точный контроль в предлагаемом ИМК как объективно, так и субъективно.

Приблизить Уменьшить Сбросить размер изображения

Рис. 5. Высота столбцов представляет собой средние онлайн-баллы блоков R / L и R / L + G / B для каждого участника, а AVR указывает средние значения по участникам. Планки погрешностей показывают стандартную ошибку среднего. Знаковые ранговые тесты Уилкоксона показывают, что у всех участников средние показатели онлайн-попаданий (HR) и субъективные оценки (SR) в блоках R / L + G / B значительно лучше, чем в блоках R / L ().

Загрузить рисунок:

Стандартный образ Изображение высокого разрешения

Таблица 1 представляет чувствительность правой (R) и левой (L) скорости попадания в блоки R / L и R / L + G / B. Несмотря на то, что для некоторых участников (например, B4, B8 и B9) имеется либо незначительное смещение, либо смещение вправо, в среднем по участникам наблюдается небольшой смещение влево как в блоках R / L, так и R / L + G / B. . Позже в разделе 3.3.1 мы покажем, что это смещение, скорее всего, вызвано смещением в классификаторе R / L на уровне каждого движения курсора.

Таблица 1. Чувствительность правой (R) и левой (L) скорости попадания в цель для блоков R / L и R / L + G / B. Обратите внимание, что в столбцах 4 и 7 указывается процент совпадений в режиме онлайн (HR) блоков R / L и R / L + G / B, и они показаны на рисунке 5 (a) в виде столбчатых диаграмм. Первое число в каждой записи — это средний процент совпадений по трем блокам с контролем R / L или R / L + G / B для соответствующего участника, а второе число указывает стандартную ошибку среднего.

ID	R / L (R)	R / L (L)	R / L (HR)	R / L + G / B (R)	R / L + G / B (L)	П / П + Г / Б (HR)
В1	0.43 / 0,30	0,67 / 0,19	0,55 / 0,08	0,67 / 0,03	0,90 / 0,10	0,78 / 0,04
B2	0,57 / 0,28	0,60 / 0,23	0,58 / 0,08	0,63 / 0,12	0,77 / 0,12	0.70 / 0,03
B3	0,23 / 0,12	1,00 / 0,00	0,62 / 0,06	0,23 / 0,09	1,00 / 0,00	0,62 / 0,04
B4	0,97 / 0,03	0,73 / 0,07	0,85 / 0,03	0.90 / 0,10	0,83 / 0,12	0,87 / 0,04
B5	0,90 / 0,10	0,66 / 0,09	0,78 / 0,03	0,93 / 0,07	1,00 / 0,00	0,96 / 0,04
B6	0,27 / 0,12	0,52 / 0,23	0.40 / 0,06	0,57 / 0,15	0,70 / 0,15	0,63 / 0,03
B7	0,33 / 0,19	0,83 / 0,17	0,58 / 0,02	0,63 / 0,12	0,93 / 0,03	0,78 / 0,07
B8	0.77 / 0,13	0,53 / 0,09	0,65 / 0,03	0,90 / 0,06	0,87 / 0,03	0,88 / 0,03
B9	1,00 / 0,00	0,57 / 0,12	0,78 / 0,06	0,90 / 0,06	0,90 / 0,00	0.90 / 0,03
B10	0,40 / 0,12	0,50 / 0,17	0,45 / 0,13	0,53 / 0,13	0,77 / 0,09	0,65 / 0,09
B11	0,33 / 0,28	1,00 / 0,00	0,67 / 0,14	0.40 / 0,31	0,90 / 0,10	0,65 / 0,10
B12	0,33 / 0,20	0,67 / 0,23	0,50 / 0,05	0,47 / 0,03	0,77 / 0,09	0,62 / 0,03

Как упоминалось ранее, испытания могут закончиться, когда количество перемещений курсора достигнет своего максимума (т.е.е. 12 частей). На рисунке 6 показано среднее количество попыток тайм-аута для блоков R / L и R / L + G / B до попадания в цель или соответствующее место на другой стороне. Знаковый ранговый тест Уилкоксона не показывает значимой разницы между участниками в количестве испытаний с ограниченным временем ожидания между блоками R / L и R / L + G / B ( p = 0,86).

Приблизить Уменьшить Сбросить размер изображения

Рис. 6. Высота столбцов представляет собой среднее количество испытаний с истекшим временем ожидания для каждого блока в блоках R / L и R / L + G / B для каждого участника, а AVR показывает средние значения по участникам.Планки погрешностей показывают стандартную ошибку среднего. Знаковый ранговый тест Уилкоксона не показывает значимой разницы между участниками в количестве испытаний с ограниченным временем ожидания между блоками R / L и R / L + G / B ( p = 0,86). Обратите внимание, что в каждом блоке было 20 попыток.

Загрузить рисунок:

Стандартный образ Изображение высокого разрешения

AST и ITR для блоков R / L и R / L + G / B указаны в таблице 2. Обратите внимание, что 1 бит информации был передан, когда курсор попал в цель. Поскольку цель находилась в 3 шагах от курсора, наилучшее достижимое ITR было 1 / T, когда AST = 3, т.е.е. 0,11 628 бит / с как T = 1,2 × AST + 5 также включал 5-секундный интервал между испытаниями. Это объясняет низкие значения ITR, представленные в таблице 2. Тем не менее ITR в блоках R / L + G / B значительно выше для участников, чем ITR в блоках R / L (знаковый ранговый критерий Вилкоксона, p = 0,007 ).

Таблица 2. AST и ITR для каждого участника в блоках R / L и R / L + G / B. AST (который включает в себя испытания с тайм-аутом) не отличается для участников в блоках R / L и R / L + G / B (знаковый ранговый критерий Вилкоксона, p = 0.97). Однако ITR в блоках R / L + G / B значительно выше среди участников, чем ITR в блоках R / L (знаковый ранговый критерий Вилкоксона, p = 0,007).

ID	AST-R / L	AST-R / L + G / B	ITR-R / L (бит / сек)	ITR-R / L + G / B (бит / сек)
B1	5,23	4,98	0,00 292	0,03 045
B2	4.92	4,88	0,00 234	0,01 537
B3	4,00	3,88	0,01 304	0,01 373
B4	5,78	4,62	0,05 638	0,05
B5	4,43	3,67	0,02 901	0,08 672
B6	6,38	5,92	0,00 017	0,00 938
B7	5.02	5,67	0,00 830	0,03 993
B8	5,75	4,35	0,01 735	0,05 213
B9	4,02	4,95	0,03 905
0,03
B10	5,43	6,17	0,00 001	0,015 6
B11	3,43	4,62	0,02093	0,01 131
B12	5.18	6,47	0,00 016	0,01 672
AVR	4,96	5,01	0,01 580	0,03 458

Точность классификации ступенчатых классификаторов представлена на рисунках 7, 8 и 9. Красные столбцы представляют «точность калибровки с перекрестной проверкой» (TRcal-TEcal), то есть точность классификатора, обученного и протестированного на этапах калибровки. С другой стороны, синие полосы представляют «перекрестно подтвержденную онлайн-точность» (TRon-TEon), то есть точность классификатора, обученного и протестированного на онлайн-этапах.Высота синей и красной полос показывает среднюю точность 10 случаев 5-кратной перекрестной проверки по сбалансированным шагам. Высота столбцов представляет собой среднее значение, а столбцы ошибок указывают стандартное отклонение для отдельных участников и стандартную ошибку среднего значения для среднего столбца (AVR), которое имеет место для всех участников.

Приблизить Уменьшить Сбросить размер изображения

Рис. 7. Возможность переноса классификатора R / L от калибровки к онлайн-данным.Красные и синие полосы на каждом графике показывают точность калибровки, прошедшую перекрестную проверку (TRcal-TEcal, т.е. обученную и протестированную на данных калибровки), и точность перекрестной проверки онлайн (TRon-TEon, т.е. обученную и протестированную на данных онлайн) , соответственно. Зеленые полосы, с другой стороны, представляют переданную онлайн-точность (TRcal-TEon, т.е. обучен на данных калибровки и протестирован на онлайн-данных). AVR показывает среднее значение по участникам. Высота столбцов представляет собой среднее значение, а столбцы ошибок указывают стандартное отклонение для отдельных участников и стандартную ошибку среднего для среднего для всех участников (AVR).Для всех участников TRcal-TEon (зеленые столбцы) значительно хуже, чем TRcal-TEcal (красные столбцы) — знаковый ранговый критерий Вилкоксона, p <0,001.

Загрузить рисунок:

Стандартный образ Изображение высокого разрешения

Приблизить Уменьшить Сбросить размер изображения

Рис. 8. Возможность переноса классификаторов G / B-csp и G / B-wm из калибровки в онлайн-данные. Красные и синие полосы на каждом графике показывают точность калибровки с перекрестной проверкой (TRcal-TEcal, т.е.е. обучен и протестирован на данных калибровки) и перекрестно подтвержденной онлайн-точности (TRon-TEon, т.е. обучен и протестирован на онлайн-данных), соответственно. Зеленые полосы, с другой стороны, представляют переданную онлайн-точность (TRcal-TEon, т.е. обучен на данных калибровки и протестирован на онлайн-данных). AVR показывает среднее значение по участникам. Высота столбцов представляет собой среднее значение, а столбцы ошибок указывают стандартное отклонение для отдельных участников и стандартную ошибку среднего для среднего для всех участников (AVR).Для всех участников разница между TRcal-TEcal (красные столбцы) и TRcal-TEon (зеленые столбцы) не является статистически значимой для классификаторов G / B-csp и G / B-wm – рангового критерия Вилкоксона со знаком, p> 0,60.

Загрузить рисунок:

Стандартный образ Изображение высокого разрешения

Приблизить Уменьшить Сбросить размер изображения

Рис. 9. Возможность переноса классификатора R / L + G / B из калибровки в онлайн-данные.Красные и синие полосы на каждом графике показывают точность калибровки, прошедшую перекрестную проверку (TRcal-TEcal, т.е. обученную и протестированную на данных калибровки), и точность перекрестной проверки онлайн (TRon-TEon, т.е. обученную и протестированную на данных онлайн) , соответственно. Зеленые полосы, с другой стороны, представляют переданную онлайн-точность (TRcal-TEon, т.е. обучен на данных калибровки и протестирован на онлайн-данных). AVR показывает средние значения по участникам. Высота столбцов представляет собой среднее значение, а столбцы ошибок указывают стандартное отклонение для отдельных участников и стандартную ошибку среднего для среднего для всех участников (AVR).

Загрузить рисунок:

Стандартный образ Изображение высокого разрешения

Зеленые полосы, с другой стороны, представляют «переданную онлайн-точность» (TRcal-TEon), то есть точность классификации классификатора, обученного на этапах калибровки и протестированного на интерактивных этапах, опять же по сбалансированным классам. Высота столбцов представляет собой среднее значение, а столбцы ошибок указывают стандартное отклонение для отдельных участников и стандартную ошибку среднего значения для среднего столбца (AVR), которое имеет место для всех участников.Обратите внимание, что мы не отделяли шаги от блоков R / L и R / L + G / B в этих анализах.

Поскольку шаги калибровки были одинаковыми для всех участников, верхний предел уровня вероятности (при p = 0,05) [50] указывает 0,58 для красных столбцов. Однако количество доступных шагов в онлайн-блоках варьировалось для разных участников, и верхний предел уровня вероятности (при p = 0,05) для каждого участника указан в таблице 3.

Таблица 3. Верхний предел вероятности уровень шанса (при p = 0.05) для каждого участника для перекрестной проверки онлайн и переданной онлайн точности, указанной на рисунках 7, 8 и 9, т.е. синие и зеленые полосы.

B1	B2	B3	B4	B5	B6	B7	B8	B9	B10	B11	B12
0.57	0,55	0,61	0,56	0,58	0,54	0,56	0,56	0,57	0,54	0,58	0,55

Как видно из рисунков 7, 8 и 9 Несмотря на то, что в среднем точность калибровки с перекрестной проверкой (TRcal-TEon) ниже как для G / B-csp, так и для G / B-wm по сравнению с классификатором R / L, потери от переноса классификатора в онлайн-данные составляют намного больше для классификатора R / L.Мы использовали знаковые ранговые тесты Вилкоксона для сравнения точности классификации TRcal-TEcal (красные столбцы) и TRcal-TEon (зеленые столбцы) для каждого классификатора среди участников. Для G / B-csp и G / B-wm разница между участниками не является статистически значимой (знаковый ранговый критерий Вилкоксона, p > 0,6). Однако для классификатора R / L TRcal-TEon хуже, чем TRcal-TEcal, и эта разница статистически значима для всех участников (знаковый ранговый критерий Вилкоксона).

Мы также сравнили точность калибровки с перекрестной проверкой (TRcal-TEcal) и точность перекрестной проверки онлайн (TRon-TEon) для каждого классификатора.Это связано с тем, что можно утверждать, что различная производительность, представленная более низкой точностью передачи R / L в режиме онлайн, главным образом объясняется тем, что качество данных отличается и менее поддается классификации в данных онлайн. Однако знаковый ранговый тест Вилкоксона показывает, что разница между TRcal-TEcal (красные столбцы) и TRon-TEon (синие столбцы) для классификатора R / L среди участников не является статистически значимой ( p = 0,42), что позволяет предположить что качество данных изображений движения R / L не является основной причиной падения передаваемой онлайн-точности.

Для всех участников переданная онлайн-точность (TRcal-TEon) классификатора R / L + G / B, как показано зелеными полосами на рисунке 9, значительно лучше, чем переданная онлайн-точность (TRcal-TEon) для R / L-классификатор, изображенный зелеными полосами на рисунке 7 (знаковый ранговый критерий Уилкоксона). Это указывает на более высокую точность при каждом перемещении курсора, что привело к более высокому проценту попаданий в блоки RL / + G / B во время онлайн-управления.

Чувствительность TRcal-TEcal и TRcal-TEon для классификаторов R / L, G / B-csp, G / B-wm и R / L + G / B представлена в таблицах 4, 5, 6 и 7. .TRcal-TEon для классификатора R / L, по-видимому, имеет смещение в левую сторону для более чем половины участников, что, по нашему мнению, может быть причиной смещения показателя успешности в таблице 1. Однако, поскольку это не относится к все 12 участников, скорее всего, это не связано с дизайном эксперимента. Для более подробного исследования чувствительности необходимы данные от большего числа участников. Также важно отметить, что это смещение немного смягчается в классификаторе R / L + G / B, что снова указывает на превосходство контроля R / L + G / B.

Таблица 4. Чувствительность классификатора калибровки с перекрестной проверкой (TRcal-TEcal) при прогнозировании правого (R) и левого (L) классификаторов R / L и R / L + G / B. Первое число в каждой записи — это средняя точность по 10 экземплярам данных, а второе число указывает стандартное отклонение.

ID	R / L (R)	R / L (L)	R / L	R / L + G / B (R)	R / L + G / B (L)	R / Л + Г / Б
В1	0.74 / 0,03	0,72 / 0,04	0,73 / 0,02	0,68 / 0,05	0,74 / 0,07	0,72 / 0,04
B2	0,76 / 0,02	0,73 / 0,05	0,74 / 0,02	0,68 / 0,05	0,61 / 0,06	0,65 / 0,04
B3	0,76 / 0,04	0,73 / 0,03	0,75 / 0,02	0,81 / 0,04	0,80 / 0,03	0,81 / 0,03
В4	0.87 / 0,04	0,88 / 0,04	0,87 / 0,03	0,88 / 0,04	0,85 / 0,04	0,86 / 0,03
B5	0,85 / 0,03	0,73 / 0,09	0,79 / 0,05	0,85 / 0,05	0,84 / 0,07	0,84 / 0,05
B6	0,54 / 0,06	0,65 / 0,05	0,60 / 0,05	0,55 / 0,04	0,69 / 0,05	0,61 / 0,03
B7	0.63 / 0,08	0,63 / 0,06	0,63 / 0,06	0,62 / 0,10	0,64 / 0,05	0,63 / 0,06
B8	0,69 / 0,06	0,65 / 0,04	0,67 / 0,04	0,76 / 0,05	0,75 / 0,05	0,75 / 0,03
B9	0,82 / 0,05	0,79 / 0,05	0,81 / 0,04	0,76 / 0,04	0,74 / 0,03	0,75 / 0,04
B10	0.78 / 0,03	0,68 / 0,06	0,73 / 0,04	0,77 / 0,05	0,74 / 0,04	0,74 / 0,02
B11	0,80 / 0,03	0,82 / 0,06	0,81 / 0,03	0,82 / 0,03	0,81 / 0,06	0,82 / 0,03
B12	0,65 / 0,05	0,69 / 0,04	0,67 / 0,04	0,72 / 0,04	0,77 / 0,05	0,75 / 0,04

Таблица 5. Чувствительность классификатора калибровки с перекрестной проверкой (TRcal-TEcal) при прогнозировании хорошего (G) и плохого (B) для классификаторов G / B-csp и G / B-wm. Первое число в каждой записи — это средняя точность по 10 экземплярам данных, а второе число указывает стандартное отклонение.

ID	G / B-csp (G)	G / B-csp (B)	G / B-csp	G / B-wm (G)	G / B-wm (B)	Г / Б-ВМ
В1	0.62 / 0,05	0,66 / 0,06	0,64 / 0,05	0,50 / 0,03	0,53 / 0,05	0,50 / 0,03
B2	0,47 / 0,03	0,55 / 0,05	0,51 / 0,03	0,53 / 0,05	0,51 / 0,06	0,53 / 0,05
B3	0,68 / 0,06	0,70 / 0,04	0,69 / 0,05	0,67 / 0,05	0,69 / 0,02	0,68 / 0,03
В4	0.61 / 0,05	0,63 / 0,05	0,62 / 0,04	0,64 / 0,05	0,62 / 0,04	0,63 / 0,03
B5	0,73 / 0,08	0,70 / 0,08	0,71 / 0,08	0,74 / 0,05	0,70 / 0,04	0,71 / 0,03
B6	0,58 / 0,06	0,55 / 0,07	0,56 / 0,04	0,62 / 0,04	0,59 / 0,05	0,59 / 0,03
B7	0.56 / 0,07	0,49 / 0,04	0,53 / 0,04	0,55 / 0,08	0,54 / 0,05	0,53 / 0,04
B8	0,66 / 0,03	0,67 / 0,06	0,66 / 0,04	0,76 / 0,04	0,71 / 0,03	0,72 / 0,04
B9	0,57 / 0,05	0,59 / 0,05	0,58 / 0,04	0,64 / 0,06	0,63 / 0,04	0,62 / 0,03
B10	0.51 / 0,08	0,53 / 0,04	0,52 / 0,04	0,68 / 0,03	0,65 / 0,04	0,65 / 0,04
B11	0,67 / 0,05	0,50 / 0,04	0,59 / 0,02	0,68 / 0,04	0,63 / 0,03	0,65 / 0,03
B12	0,62 / 0,09	0,51 / 0,06	0,57 / 0,07	0,76 / 0,04	0,69 / 0,04	0,71 / 0,03

Таблица 6. Чувствительность переданного онлайн-классификатора (TRcal-TEon) при прогнозировании правого (R) и левого (L) классификаторов R / L и R / L + G / B. Первое число в каждой записи — это средняя точность по 10 экземплярам данных, а второе число указывает стандартное отклонение.

ID	R / L (R)	R / L (L)	R / L	R / L + G / B (R)	R / L + G / B (L)	R / Л + Г / Б
В1	0.44 / 0,04	0,59 / 0,02	0,51 / 0,02	0,58 / 0,04	0,67 / 0,03	0,62 / 0,02
B2	0,53 / 0,02	0,57 / 0,01	0,55 / 0,01	0,61 / 0,02	0,53 / 0,01	0,57 / 0,01
B3	0,37 / 0,05	0,91 / 0,03	0,64 / 0,03	0,46 / 0,06	0,93 / 0,02	0,70 / 0,03
В4	0.77 / 0,01	0,66 / 0,03	0,72 / 0,02	0,77 / 0,02	0,69 / 0,02	0,73 / 0,02
B5	0,61 / 0,02	0,59 / 0,04	0,60 / 0,02	0,82 / 0,01	0,79 / 0,04	0,80 / 0,02
B6	0,43 / 0,01	0,58 / 0,01	0,50 / 0,01	0,59 / 0,02	0,64 / 0,01	0,62 / 0,01
B7	0.52 / 0,02	0,69 / 0,02	0,60 / 0,01	0,53 / 0,03	0,74 / 0,02	0,64 / 0,01
B8	0,59 / 0,02	0,53 / 0,03	0,56 / 0,02	0,73 / 0,02	0,71 / 0,02	0,72 / 0,01
B9	0,65 / 0,03	0,66 / 0,02	0,66 / 0,01	0,81 / 0,03	0,71 / 0,03	0,76 / 0,01
B10	0.39 / 0,01	0,56 / 0,01	0,48 / 0,01	0,54 / 0,01	0,68 / 0,01	0,61 / 0,01
B11	0,42 / 0,03	0,81 / 0,02	0,62 / 0,02	0,49 / 0,04	0,73 / 0,03	0,61 / 0,02
B12	0,40 / 0,02	0,51 / 0,02	0,45 / 0,01	0,60 / 0,04	0,68 / 0,01	0,64 / 0,02

Таблица 7. Чувствительность переданного онлайн-классификатора (TRcal-TEon) при прогнозировании хорошего (G) и плохого (B) для классификаторов G / B-csp и G / B-wm. Первое число в каждой записи — это средняя точность по 10 экземплярам данных, а второе число указывает стандартное отклонение.

ID	G / B-csp (G)	G / B-csp (B)	G / B-csp	G / B-wm (G)	G / B-wm (B)	Г / Б-ВМ
В1	0.71 / 0,03	0,50 / 0,02	0,60 / 0,02	0,62 / 0,04	0,56 / 0,02	0,59 / 0,02
B2	0,72 / 0,01	0,32 / 0,01	0,52 / 0,01	0,59 / 0,02	0,48 / 0,01	0,50 / 0,02
B3	0,74 / 0,07	0,65 / 0,05	0,69 / 0,05	0,72 / 0,06	0,65 / 0,06	0,67 / 0,04
В4	0.61 / 0,02	0,51 / 0,01	0,56 / 0,02	0,73 / 0,04	0,43 / 0,02	0,58 / 0,02
B5	0,87 / 0,04	0,70 / 0,02	0,78 / 0,03	0,84 / 0,06	0,58 / 0,02	0,72 / 0,03
B6	0,58 / 0,01	0,62 / 0,01	0,60 / 0,01	0,61 / 0,02	0,65 / 0,01	0,63 / 0,01
B7	0.43 / 0,03	0,66 / 0,01	0,55 / 0,02	0,55 / 0,03	0,67 / 0,03	0,61 / 0,02
B8	0,76 / 0,03	0,55 / 0,01	0,65 / 0,02	0,80 / 0,03	0,65 / 0,02	0,67 / 0,02
B9	0,74 / 0,03	0,63 / 0,01	0,69 / 0,01	0,63 / 0,03	0,73 / 0,02	0,64 / 0,02
B10	0.27 / 0,01	0,80 / 0,01	0,53 / 0,01	0,71 / 0,01	0,64 / 0,01	0,66 / 0,01
B11	0,47 / 0,06	0,62 / 0,03	0,55 / 0,03	0,71 / 0,05	0,68 / 0,03	0,68 / 0,03
B12	0,48 / 0,01	0,62 / 0,02	0,55 / 0,02	0,81 / 0,02	0,59 / 0,01	0,68 / 0,01

3.3.1.Сравнение переданной производительности онлайн (TRcal-TEon)

Мы сравнили производительность TRcal-TEon для классификаторов R / L, G / B-csp, G / B-wm и R / L + G / B в таблице 8 Обратите внимание, что эти значения также представлены в виде зеленых полос на рисунках 7, 8 и 9. Знаковый ранговый критерий Вилкоксона показывает, что разница между TRcal-TEon в классификаторах R / L и R / L + G / B значительна (), что указывает на что предлагаемый элемент управления R / L + G / B обеспечивает более точное и надежное управление каждым движением курсора.

Таблица 8. Переданная точность онлайн (TRcal-TEon) для классификаторов R / L, G / B-csp, G / B-wm и R / L + G / B. Для B1-B12 первое число в каждой записи — это средняя точность по 10 экземплярам данных, а второе число указывает стандартное отклонение. В последней строке каждая запись указывает среднее значение по участникам для соответствующего столбца, а второе число указывает стандартную ошибку среднего.

ID	R / L	G / B-csp	G / B-wm	R / L + G / B
В1	0.51 / 0,02	0,60 / 0,02	0,59 / 0,02	0,62 / 0,02
B2	0,55 / 0,01	0,52 / 0,01	0,50 / 0,02	0,57 / 0,01
B3	0,64 / 0,03	0,69 / 0,05	0,67 / 0,04	0,70 / 0,03
B4	0,72 / 0,02	0,56 / 0,02	0,58 / 0,02	0,73 / 0,02
B5	0,60 / 0,02	0.78 / 0,03	0,72 / 0,03	0,80 / 0,02
B6	0,50 / 0,01	0,60 / 0,01	0,63 / 0,01	0,62 / 0,01
B7	0,60 / 0,01	0,55 / 0,02	0,61 / 0,02	0,64 / 0,01
B8	0,56 / 0,02	0,65 / 0,02	0,67 / 0,02	0,72 / 0,01
B9	0,66 / 0,01	0,69 / 0,02	0.64 / 0,02	0,76 / 0,01
B10	0,48 / 0,01	0,53 / 0,01	0,66 / 0,01	0,61 / 0,01
B11	0,62 / 0,02	0,55 / 0,03	0,68 / 0,03	0,61 / 0,02
B12	0,45 / 0,01	0,55 / 0,02	0,68 / 0,01	0,64 / 0,02
AVR	0,57 / 0,02	0,61 / 0,02	0,63 / 0,02	0.67 / 0,02

Разница в TRcal-TEon между участниками для классификаторов G / B-csp и R / L + G / B также значима (знаковый ранговый критерий Вилкоксона). Однако разница между G / B-wm и R / L + G / B не является значимой для разных участников (знаковый ранговый критерий Вилкоксона, p = 0,2). Знаковый ранговый тест Вилкоксона для каждого участника показывает, что классификатор R / L + G / B значительно отличается от классификатора G / B-wm для B1, B2, B4, B5, B8, B9, B10 и B11 ( p = 0.02, Бонферрони скорректировал количество сравнений, т. Е. 12). Фактически, для B10 и B11 классификатор G / B-wm обеспечивает значительно более высокую точность, чем классификатор R / L + G / B для классификации каждого шага.

3.3.2. Сравнение точности классификации в блоках R / L и R / L + G / B

Мы разделили этапы в блоках R / L и R / L + G / B и переделали анализ на рисунках 7, 8 и 9. для исследования, есть ли разница в результатах автономного анализа относительно того, из какого типа блока случайным образом были выбраны шаги в наборах обучающих тестов.Тем не менее, мы обнаружили, что у разных участников передаваемая онлайн-точность (TRcal-TEon) в классификаторах R / L, G / B-csp, G / B-wm и R / L + G / B не различалась между классификаторами R / Блоки L и R / L + G / B (знаковый ранговый критерий Вилкоксона, p > 0,11, Бонферрони скорректирован на количество выполненных тестов, т.е. 4). Более того, у разных участников перекрестная проверенная онлайн-точность (TRon-TEon) в классификаторах R / L, G / B-csp, G / B-wm и R / L + G / B также не различалась между классификаторами R / Блоки L и R / L + G / B (знаковый ранговый критерий Вилкоксона, p > 0.61, Бонферрони скорректировал количество выполненных тестов, т. Е. 4).

Мембранные эффекты мелиттина при раке желудка и колоректального рака

Abstract

Цитотоксическое действие мелиттина, пептида пчелиного яда, широко изучалось в отношении раковых клеток. Как правило, в этих исследованиях изучали влияние мелиттина в течение продолжительных курсов (6–24 часа), а это означает, что непосредственные клеточные взаимодействия не учитывались. В этой работе мы демонстрируем быстрое воздействие мелиттина на рак желудка и колоректального рака, в частности на клеточные линии AGS, COLO205 и HCT-15, в течение 15 минут.Мелиттин проявлял дозозависимый эффект через 4 часа лечения, при этом полная гибель клеток происходила при максимальной дозе 20 мкг / мл. Интересно, что при наблюдении в более короткие моменты времени мелиттин индуцировал клеточные изменения в течение секунд; Повреждение мембраны наблюдалось как набухание, разрыв или образование пузырей. Визуализация с высоким разрешением показала, что обработанные клетки подвергаются опасности, показывая четкие изменения клеточной морфологии. Через 1 минуту обработки мелиттином наблюдались мембранные изменения, и можно было видеть, как внутриклеточный материал изгнан из клеток.В целом, эти результаты улучшают наше понимание быстродействующих противораковых эффектов мелиттина.

Образец цитирования: Soliman C, Eastwood S, Truong VK, Ramsland PA, Elbourne A (2019) Мембранные эффекты мелиттина на рак желудка и колоректального рака. PLoS ONE 14 (10): e0224028. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0224028

Редактор: Ференц Галляс-младший, Медицинская школа Университета PECS, ВЕНГРИЯ

Поступила: 15 августа 2019 г .; Принята к печати: 3 октября 2019 г .; Опубликован: 17 октября 2019 г.

Авторские права: © 2019 Soliman et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в рукописи и ее файлах с вспомогательной информацией.

Финансирование: CS получил стипендиальную стипендию (RSS) от правительства Австралии, выделенную Министерством образования и профессиональной подготовки в рамках программы обучения исследователей (RTP).PAR был поддержан старшим научным сотрудником вице-канцлера Университета RMIT.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Сокращения: AFM, атомно-силовая микроскопия; CLSM, конфокальная лазерная сканирующая микроскопия; Дил, 1,1′-диоктадецил-3,3,3 ‘, 3’-тетраметилиндокарбоцианин перхлорат; ДМСО, диметилсульфоксид; DPPC, дипальмитоилфосфатидилхолин; ЭтД-1, гомодимер этидия; FBS, фетальная бычья сыворотка; ФЭ-СЭМ, автоэмиссионный растровый электронный микроскоп; PBS, забуференный фосфатом физиологический раствор; ПИ, йодид пропидия; SEM, сканирующая электронная микроскопия; ВОЗ, Всемирная организация здравоохранения

Введение

Рак является ведущей причиной смертности во всем мире, в настоящее время на его долю приходится примерно 1 из 6 смертей [1].Согласно недавнему отчету Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), в 2018 году было диагностировано 18 миллионов случаев рака и произошло 9,6 миллиона смертей, связанных с раком. Колоректальный рак и рак желудка являются третьим и пятым наиболее часто диагностируемыми видами рака, на них приходится 10% и 6% диагнозов рака, соответственно. Поэтому неудивительно, что эти типы рака ответственны за высокие показатели смертности, в основном из-за их плохого прогноза [1]. В настоящее время лечение рака состоит в основном из хирургического вмешательства, химио- или лучевой терапии, а также генной или гормональной терапии.К сожалению, до сих пор явно не хватает доступных целевых методов лечения, несмотря на недавние разработки, включая терапевтические препараты с использованием антител, пептиды и другие низкомолекулярные терапевтические средства [2–4].

Мелиттин — широко изученный цитолитический пептид, полученный из пчелиного яда, и считается моделью как для катионных, так и для других цитолитических пептидов. Интересно, что он демонстрирует эффективность широкого спектра в качестве противовирусного, антибактериального, противогрибкового, противопаразитарного и противоопухолевого агента [2, 5-7]. Это связано с тем, что цитолитическое действие мелиттина неселективно, влияя как на передачу сигнала, так и на регуляторные пути.Как таковой, мелиттин вызывает множественные механизмы гибели клеток, включая апоптоз, ингибирование пролиферации или ангиогенеза, остановку клеточного цикла и ингибирование подвижности, миграции, метастазирования и инвазии рака. Для лечения рака цитолитическая активность мелиттина в последние годы изучалась на различных типах клеток [8–15]. Во время апоптоза лизис клеток индуцируется за счет разрушения фосфолипидного бислоя, образования пор и увеличения проницаемости [6]. Для клеток рака желудка было показано, что мелиттин индуцирует дозозависимый и зависящий от времени апоптоз и некроз, ингибируя пролиферацию клеток AGS.Эти эффекты визуализировались как сокращение клеток, неправильная форма клеток, отслоение клеток и повреждение мембран [11]. Более того, клеточные линии рака толстой кишки (HCT-116, CT26 и LS174T) тестировались только с конъюгатами мелиттина [6]. Мелиттин также индуцировал апоптоз через митохондриальные пути в клетках рака желудка SGC-7901 [10]. Кроме того, при сравнении чувствительности раковых клеток к мелиттину и нормальных клеток, одно исследование показало, что мелиттин был значительно более цитотоксичным для клеток рака легких человека, чем для контрольных клеток фибробластов легких человека [16].

Хотя известно, что мелиттин убивает раковые клетки, вызывая апоптоз, исследования по визуализации были несколько ограничены. Недавние исследования с помощью атомно-силовой микроскопии (АСМ), выполненные на липидных монослоях, выявили отчетливые морфологические изменения и четкое образование пор после добавления мелиттина [17]. Однако в исследованиях на целых клетках преимущественно изучалось влияние мелиттина в длительные периоды времени (6–24 часа), а это означает, что немедленные эффекты описаны плохо. Несмотря на обширные исследования, разработка мелиттина в качестве терапевтического средства для лечения рака остается сложной задачей, в основном из-за его неспецифической клеточной литической активности, а также его короткого времени жизни в крови и способности вызывать тяжелые токсические реакции при внутривенной инъекции [6].Наиболее серьезный побочный эффект мелиттина связан с его гемолитической активностью, то есть его способностью лизировать эритроциты [18]. Исследования показали, что мелиттин прочно связывается с эритроцитами человека, что приводит к образованию каналов, достаточно больших для утечки гемоглобина и, в конечном итоге, лизиса клеток, причем 50% лизис происходит только при 10% занятости сайтов связывания мелиттина [18, 19]. Однако более поздние исследования были сосредоточены на конъюгатах и производных мелиттина в качестве альтернатив для использования в комбинированной и таргетной терапии рака.Кроме того, иммуно-конъюгация, нанотехнологии и генная терапия используются для разработки методов лечения на основе мелиттина с повышенной специфичностью и селективностью, пониженной токсичностью и ограничением нецелевого цитолиза [5, 20-25].

В этом исследовании мы изучаем быстрое воздействие лечения мелиттином на клетки рака желудка и толстой кишки. В частности, линии раковых клеток AGS, COLO205 и HCT-15 были исследованы в качестве модельных систем для наблюдения за эффектами мелиттина в короткие промежутки времени. Во-первых, дозовая зависимость мелиттина от гибели раковых клеток была исследована в диапазоне концентраций 0.5–20 мкг / мл. Для всех исследованных типов рака диапазон эффективных концентраций составлял 5–10 мкг / мл. При низких концентрациях (0,5–5 мкг / мл) мелиттина не наблюдалось значительного влияния на жизнеспособность. При более высоких концентрациях все образцы проявляли значительную степень цитотоксичности, вызванной мелиттином, с почти полной клеточной инактивацией при дозах 20 мкг / мл. После этого в короткие промежутки времени проводилась визуализация с высоким разрешением в дозе 10–20 мкг / мл для наблюдения клеточных изменений, которые происходят при немедленном добавлении мелиттина.Комбинация сканирующей электронной микроскопии (SEM), AFM и замедленной конфокальной лазерной сканирующей микроскопии (CLSM) была использована для более полного понимания мембранных изменений, которые происходят, когда мелиттин оказывает цитотоксическое действие на раковые клетки. Знание быстрой кинетики цитолиза является важным шагом в разработке направленной терапии рака на основе мелиттина.

Методы

Клеточная культура

Клеточные линии аденокарциномы человека AGS, COLO205 и HCT-15 были получены из Cell Bank Australia.Клеточные линии были аутентифицированы с использованием профилей коротких тандемных повторов и контроля качества с использованием набора для обнаружения микоплазм Biotool-QuickTest. Клетки культивировали в колбах для тканевых культур размером 25 см ² и 75 см ² в стерильных условиях с использованием полной среды RPMI 1640 с L-глутамином (содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) и 1% пенициллин-стрептомицин) при 37 ^o C с 5% CO ₂. Клетки разделяли при 70% конфлюэнтности с использованием 0,25% трипсина-ЭДТА и культивировали максимум до 15 пассажей.Клетки периодически собирали в замораживающей среде (FBS с 10% ДМСО) для хранения при -80 ^o ° C и для длительного хранения в жидком азоте.

Проточная цитометрия (FACS)

Клетки высевали из расчета 1 × 10 ⁵ клеток на лунку в 96-луночный планшет и обрабатывали мелиттином в концентрации 0,5–20 мкг / мл в полной среде RPMI в течение 4 часов при 37 ^o ° C с 5% CO ₂. Положительный контроль обрабатывали 0,1% Triton X-100 в PBS в течение 15 минут. Клетки промывали, а затем ресуспендировали в 1 мкг / мл раствора йодида пропидия (PI) в PBS в течение до 5 минут перед анализом в FACS Canto (10000 клеток на образец).Полученные данные были проанализированы с помощью программного обеспечения FlowJo, где популяции клеток были определены по размеру и сложности клеток для исключения дублетов, после чего были отобраны популяции с положительным PI (выброс PE> 10 ³). Двусторонние тесты ANOVA использовали для оценки статистической значимости гибели клеток между концентрациями мелиттина для каждой клеточной линии. Данные представлены в виде среднего значения ± стандартное отклонение с n = 4.

Оптическая микроскопия

Стеклянные покровные стекла покрывали поли-D-лизином в концентрации 1 мг / мл, и клетки засевали в течение ночи в полной среде RPMI.Клетки исследовали с помощью оптической микроскопии (микроскоп Nikon Eclipse TS100) для визуализации изменений, которые происходят при добавлении 10 мкг / мл или 20 мкг / мл мелиттина, разведенного в PBS, в течение 15-минутного периода времени.

Живое / мертвое окрашивание и флуоресцентная микроскопия

Стеклянные покровные стекла покрывали поли-D-лизином в концентрации 1 мг / мл, и клетки засевали в течение ночи в полной среде RPMI. Клетки обрабатывали мелиттином в концентрации 0,5–20 мкг / мл в течение 1 минуты, 15 минут или 4 часов при 37 ^o ° C с 5% CO ₂.Затем образцы инкубировали с раствором 4 мкМ гомодимера этидия (EthD-1) и 2 мкМ кальцеина-AM в PBS в течение 45 минут при комнатной температуре (Invitrogen). Покровные стекла помещали на предметные стекла и исследовали с помощью флуоресцентной микроскопии на наличие красной (мертвой) и зеленой (живой) флуоресценции. Образцы были исследованы с использованием эпифлуоресцентного микроскопа Leica DM2500 с цифровой камерой DFC310, и изображения были получены с использованием программного обеспечения LAS (V4.1; Leica Microsystems).

Окрашивание мембран и конфокальная визуализация

Стеклянные покровные стекла покрывали поли-D-лизином в концентрации 1 мг / мл, и клетки засевали в течение ночи в полной среде RPMI.Образцы инкубировали с 2 мкг / мл мембранного красителя Dil (1,1′-диоктадецил-3,3,3 ‘, 3’-тетраметилиндокарбоцианин перхлорат) в PBS в течение 30 минут в темноте при 37 ^o C с 5% СО ₂. Клетки исследовали с помощью конфокальной микроскопии (микроскоп Olympus FV1200) для визуализации изменений, которые происходят при добавлении 20 мкг / мл мелиттина, разведенного в PBS, в течение 15-минутного периода времени. Показанные изображения представляют клетки в каждом образце.

Подготовка проб для АСМ

Стеклянные покровные стекла покрывали поли-D-лизином в концентрации 1 мг / мл, и клетки засевали в течение ночи в полной среде RPMI.Клетки обрабатывали мелиттином в течение 1 минуты при 20 мкг / мл в PBS, а затем фиксировали либо в 2,5% глутаровом альдегиде, либо в 8% формальдегиде.

АСМ-визуализация

Все клетки были визуализированы в PBS для изучения морфологии. Каждую систему изучали с использованием MFP-3D Bio (Oxford Instruments, Asylum Research, Санта-Барбара, Калифорния, США) при комнатной температуре (25 ° C) с использованием АСМ с амплитудной модуляцией (AM-AFM). Консоли BL-TR400PB (Oxford Instruments, Asylum Research, Санта-Барбара, Калифорния, США, номинальная жесткость пружины kc = 0.09 Н / м). Чтобы минимизировать визуализирующую силу, соотношение уставок (амплитуда изображения (A) / свободная амплитуда (A0)) поддерживалось> 0,7–0,8, что, как было показано, сводит к минимуму любое искажение и повреждение зонд-образец для различных материалов [26 –28]. Каждый кантилевер был откалиброван с использованием метода теплового спектра перед использованием, а чувствительность рычага была определена с помощью силовой спектроскопии; жесткость пружины определялась с помощью обратной чувствительности оптического рычага (InVOLS) с использованием измерений кривой силы на твердой стеклянной поверхности перед погружением в жидкость.

Анализ изображений АСМ

Данные

АСМ обрабатывались с использованием комбинации исследовательского программного обеспечения Asylum, пользовательских кодов MATLAB и программного обеспечения Gwyddion [29]. Фильтрация изображения (деконволюция шума, удаление рубцов или фильтрация с быстрым преобразованием Фурье (БПФ)) не применялась.

SEM

Кремниевые пластины были предварительно покрыты поли-D-лизином в концентрации 1 мг / мл, и клетки засевали в течение ночи в полной среде RPMI перед обработкой мелиттином в течение 1 минуты в PBS. Перед визуализацией SEM все образцы были зафиксированы с использованием 3% глутарового альдегида, обезвожены серией этанола (20%, 50%, 70%, 90%, 100%) и, наконец, покрыты тонкой пленкой золота (10 нм).Сканирующие электронные микрофотографии получали с использованием автоэмиссионного сканирующего электронного микроскопа (FE-SEM). Использовали FEI Verios 460L FEGSEM (компания FEI, Орегон, США) на 5 кВ. Некоторые изображения были модифицированы для яркости и контрастности с помощью Adobe Photoshop.

Результаты

Смерть раковых клеток, вызванная мелиттином, в зависимости от концентрации

Для определения диапазона концентраций, при котором мелиттин вызывает гибель раковых клеток, цитотоксичность измеряли по поглощению пропидия йодида (PI) нежизнеспособными клетками и анализировали с помощью FACS.На рис. 1 показана относительная нежизнеспособность линий раковых клеток AGS, COLO205 и HCT-15 в зависимости от концентрации мелиттина. Изучение данных показывает, что мелиттин подавляет рост как желудочного, так и колоректального рака (желудочная линия AGS и колоректальная линия COLO205 и HCT-15) дозозависимым образом (рис. 1 (i)). Как и ожидалось, количество нежизнеспособных клеток увеличивалось по мере увеличения концентрации мелиттина. Не наблюдалось значительного снижения жизнеспособности в диапазоне концентраций 0.5–5 мкг / мл мелиттина (рис. 1 (i)). Оценка жизнеспособности клеток как функции концентрации мелиттина показала, что эффективный диапазон концентраций для всех типов рака составлял от 5 до 20 мкг / мл, с 24,8 ± 9,4%, 31,2 ± 17% и 43,9 ± 12,4% гибели клеток, наблюдаемой для AGS, HCT-15 и COLO205 соответственно для лечения 10 мкг / мл (P = 0,0009). По сравнению с необработанными контролями все образцы, обработанные 20 мкг / мл мелиттина, показали значительную гибель (P = 0,0009). При концентрации мелиттина 20 мкг / мл AGS показал самую низкую гибель клеток — 80.6 ± 20% гибели клеток, тогда как HCT-15 и COLO205 показали аналогичные проценты — 93,8 ± 9,6% и 99,7 ± 0,17% соответственно. Положительные контрольные образцы показали примерно 95% снижение жизнеспособности клеточных линий, обработанных 0,1% Тритоном Х-100 в PBS. Фазы плато не было достигнуто для 4-часовой обработки (фиг. 1 (i)), и аналогичное снижение жизнеспособности клеток наблюдалось после 12-часовой обработки (данные не показаны). В целом нежизнеспособные клетки в популяциях легко поглощают краситель PI, и визуально видно, что они уменьшаются как по размеру клеток, так и по внутренней сложности, что указывает на цитотоксичность.Для сравнения, жизнеспособные клеточные популяции не окрашиваются ИП и имеют больший размер клеток [30, 31]. Это позволило провести значимое сравнение живых и мертвых клеток.

Рис. 1.

(i) Поглощение йодида пропидия (PI), показывающее гибель клеточных линий желудочного и колоректального рака после 4-часовой обработки мелиттином. Клетки обрабатывали 0,5–20 мкг / мл мелиттина, а положительный контроль обрабатывали 0,1% Triton X-100. Данные показаны как среднее ± стандартное отклонение, где n = 4.*** представляет p = <0,001. Значения EC50 составляют 14 мкг / мл для AGS, 11 мкг / мл для COLO205 и 13 мкг / мл для HCT-15. (ii) Изображения флуоресценции, показывающие окрашивание живых / мертвых клеточных линий желудочного и колоректального рака после 4-часовой обработки мелиттином. A) AGS, B) COLO205 и C) Клетки HCT-15 выращивали на покровных стеклах, покрытых поли-D-лизином, в течение ночи и обрабатывали мелиттином в концентрации 5 мкг / мл, 10 мкг / мл и 20 мкг / мл. на 4 часа. Положительный контроль обрабатывали Тритоном Х-100.Все клетки окрашивали живым красителем кальцеином-AM (зеленый) и мертвым красителем EthD-1 (красным). Средняя жизнеспособность была определена для AGS (78% для 5 мкг / мл, 17% для 10 мкг / мл и 0% для 20 мкг / мл), COLO205 (86% для 5 мкг / мл, 40% для 10 мкг / мл и 0% для 20 мкг / мл) и HCT-15 (73% для 5 мкг / мл, 50% для 10 мкг / мл и 4% для 20 мкг / мл). Жизнеспособность всех отрицательных и положительных контролей составляла 99–100% и 0% соответственно. Масштабные линейки соответствуют 100 микронам.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0224028.g001

Хотя ИП является полезным маркером клеточной гибели, его нельзя использовать для определения точных цитотоксических эффектов, вызванных воздействием мелиттина. Чтобы преодолеть это экспериментальное ограничение, использовался набор для окрашивания живых / мертвых клеток для прямого измерения соотношения живых и мертвых клеток при концентрациях мелиттина 5 мкг / мл, 10 мкг / мл и 20 мкг / мл (рис. 1 (ii). ) после 4 часов воздействия. Микрофотографии CLSM показывают соответствующие изображения флуоресценции, полученные после окрашивания линий раковых клеток AGS, COLO205 и HCT-15, а также соответствующих контролей (рис. 1 (ii) A – 1C).Для всех клеточных линий цитотоксическая активность мелиттина следует за значительным дозозависимым уничтожением, причем доля мертвых клеток (окрашенных красным EthD-1) резко возрастает по сравнению с живыми (окрашенными зеленым кальцеином-AM) по мере увеличения концентрации мелиттина (рис. (ii)). Эффекты мелиттина сравнивали с необработанными образцами, показывающими 100% жизнеспособность, и обработанными Тритоном X-100 образцами, показывающими 100% гибель клеток во всех клеточных линиях.

Интересно, что AGS, обработанный 5 мкг / мл и 10 мкг / мл мелиттина, показал заметный сдвиг в цитотоксичности, при этом более 50% популяции клеток были окрашены в красный цвет при 10 мкг / мл (рис. 1 (ii) A).Для COLO205 было трудно измерить пропорции живых и мертвых клеток из-за полуадгезивной природы этой клеточной линии, хотя резкое снижение количества живых клеток наблюдалось при 10 мкг / мл мелиттина (рис. 1 (ii) B). Высокие уровни гибели клеток наблюдались для HCT-15 при 5 мкг / мл мелиттина, и эта пропорция существенно не различалась при 10 мкг / мл (рис. 1 (ii) C). При концентрации мелиттина 20 мкг / мл AGS и COLO205 показали 100% гибель клеток. Однако из-за природы скопления клеток HCT-15 клетки, расположенные в центре скоплений, демонстрируют некоторую жизнеспособность, в то время как клетки по внешнему краю скоплений были мертвыми, что приводило к гибели примерно 95% клеток (рис. 1 (ii)). C).Вместе эти результаты предполагают, что цитолитические эффекты мелиттина несколько различаются в зависимости от клеточной линии, а также клеточной адгезии и агрегации. Важно отметить, что результаты, полученные при окрашивании живых и мертвых клеток, были соизмеримы с результатами, полученными с помощью FACS (рис. 1).

Мелиттин вызывает быстрые изменения клеточных мембран

Мелиттин (20 мкг / мл) добавляли к каждой линии раковых клеток и наблюдали с помощью оптической микроскопии для выяснения эффектов мелиттина как функции времени.Была выбрана самая высокая доза, чтобы вызвать наблюдаемый ответ. Перед визуализацией клетки рака желудка (AGS) показали нормальную морфологию, о чем свидетельствуют гладкие края мембраны, неповрежденные ядра и правильная веретенообразная форма (рис. 2А). Сходные морфологии наблюдались для всех других линий раковых клеток, COLO205 и HCT-15, однако с добавлением адгезии и агрегации, присущих каждому типу клеток, как описано выше (рис. 2B и 2C, соответственно). Первоначальная морфология каждой клеточной линии служит базой для визуализации клеточных изменений, вызванных введением мелиттина.Интересно, что при добавлении мелиттина наблюдались очень быстрые изменения AGS на клеточной мембране (рис. 2). В течение 30 секунд после добавления мелиттина можно увидеть пузыри, когда на периферии клеток начинают появляться небольшие выпуклости. В течение 15 минут этот процесс продолжается с изменениями, заметными в мембране в каждый момент времени. Кроме того, отслоение клеточной поверхности происходило после изменений мембраны (Рис. 2A, S1 Movie).

Рис. 2. Изображения оптической микроскопии, показывающие набухание мембраны, грануляцию и образование пузырей у клеток рака желудка и толстой кишки после добавления мелиттина.

A) AGS, B) COLO205 и C) Клетки HCT-15 выращивали на покровных стеклах, покрытых поли-D-лизином, в течение ночи и отображали в PBS с использованием светового микроскопа до (T0) и после (T0. 5, 30 секунд; T1, 1 минута; T5, 5 минут; T10, 10 минут; T15, 15 минут) добавление 20 мкг / мл мелиттина. После добавления мелиттина воздействие на клетки можно увидеть почти сразу. Желтая стрелка указывает на изменения мембраны. Масштабные линейки соответствуют 50 микронам.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0224028.g002

На тестируемых линиях клеток колоректального рака наблюдались различные эффекты, при этом клетки COLO205 выглядели как обычные сферические клетки с гладкой поверхностью. Клетки набухали в промежутках времени от 30 секунд до 1 минуты с последующей грануляцией в присутствии мелиттина. Из-за полуслипчивой природы этой клеточной линии клетки начинают двигаться в растворе почти сразу после добавления мелиттина, и очень мало клеток остается прилипшими после 15 минут обработки (рис. 2В, фильм S2).Для сравнения, клетки HCT-15 образовывали большие прилипшие скопления и сохраняли агрегированное поведение во время обработки. В течение 15 минут можно увидеть лишь незначительные изменения, в основном затрагивающие ячейки, расположенные на краях агрегатов; клетки в этих положениях сокращались и становились более грубыми в присутствии мелиттина (Рис. 2C, S3 Movie). Это наблюдение согласуется с флуоресцентными изображениями, полученными во время дифференциального окрашивания живым / мертвым (рис. 1С).

Лечение мелиттином приводит к гибели клеток в течение 15 минут

Чтобы определить, приводят ли изменения мембраны, наблюдаемые под оптической микроскопией, к гибели клеток, было проведено окрашивание живых / мертвых раковых клеток в более короткие сроки лечения.Желудочные (AGS) и колоректальные клетки (COLO205 и HCT-15) обрабатывали мелиттином в концентрации 10 мкг / мл и 20 мкг / мл в течение 1 и 15 минут соответственно (рис. 3). Перед обработкой все клетки имели регулярную гладкую морфологию с> 95% жизнеспособностью, как и ожидалось в естественной популяции (рис. 3). Эти данные обеспечивают основу для анализа после лечения. В целом, по мере увеличения концентрации и времени обработки увеличивалась и гибель клеток, причем полная гибель клеток наблюдалась при более высокой дозе через 15 минут для всех клеточных линий (рис. 3).В этих более коротких временных рамках мелиттин, по-видимому, демонстрировал наивысшую эффективность уничтожения на AGS, при этом более 50% клеток окрашивались в красный цвет (мертвые) при 10 мкг / мл через 1 минуту, а 100% гибель наблюдалась при 20 мкг / мл через 1 минуту. . Полная смерть также наблюдалась для более высокой концентрации через 15 минут (рис. 3А). Для колоректальных линий COLO205 и HCT-15 только небольшой процент клеток был убит с использованием 1-минутной обработки 10 мкг / мл, и это число увеличилось для образца 20 мкг / мл. После 15 минут обработки 10 мкг / мл некоторые живые клетки все еще наблюдаются (<25%) (рис. 3B и 3C).Для HCT-15 следует отметить, что гибель клеток начинается через 1 минуту для клеток, в основном расположенных на окружающих краях скоплений клеток. По прошествии времени эффект киллинга затем наблюдается для клеток, расположенных более центрально в сгустках (рис. 3C), что, вероятно, демонстрирует механизм лизиса клеток, основанный на диффузии.

Рис. 3. Флуоресцентные изображения, показывающие окрашивание линий клеток желудочного и колоректального рака живыми / мертвыми после короткого лечения мелиттином.

A) AGS, B) COLO205 и C) Клетки HCT-15 выращивали на покровных стеклах, покрытых поли-D-лизином, в течение ночи и обрабатывали мелиттином в концентрации 10 мкг / мл или 20 мкг / мл для 1 минута или 15 минут.Все клетки окрашивали живым красителем кальцеином-AM (зеленый) и мертвым красителем EthD-1 (красным). Средняя жизнеспособность определялась через 1 минуту для AGS (53% для 10 мкг / мл и 1% для 20 мкг / мл), COLO205 (59% для 10 мкг / мл и 12% для 20 мкг / мл) и HCT-15. (62% для 10 мкг / мл и 51% для 20 мкг / мл) и через 15 минут для AGS (3% для 10 мкг / мл и 0% для 20 мкг / мл), COLO205 (38% для 10 мкг / мл). мл и 3% для 20 мкг / мл) и HCT-15 (34% для 10 мкг / мл и 0% для 20 мкг / мл). Жизнеспособность всех отрицательных контролей составляла 96–99%. Масштабные линейки соответствуют 100 микронам.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0224028.g003

Мембранные изменения

Чтобы подтвердить мембранный эффект, наблюдаемый до сих пор, мембранный краситель (1,1′-диоктадецил-3,3,3 ‘, 3’-тетраметилиндокарбоцианин перхлорат-Dil) был использован для изучения изменений, происходящих после введения мелиттина. Клетки окрашивали, а затем наблюдали с помощью конфокальной лазерной сканирующей микроскопии (CLSM) при введении высоких доз мелиттина (20 мкг / мл). На рис. 4 показаны типичные покадровые изображения in situ CLSM трех клеточных линий до и после обработки (рис. 4, видеоролики S4 – S6).Важно отметить, что для всех клеточных линий наблюдались разные эффекты. Для AGS клетка имела удлиненную морфологию с длинным прикреплением клеток, типичную для их клеточного типа [32]. После добавления мелиттина клетка начала немного набухать, после чего образовался большой мембранный пузырек (см. Желтую стрелку, фиг. 4A), который продолжал расти с течением времени. Морфология самого прикрепления также изменилась из-за набухания с последующей усадкой и возможным отрывом от поверхности. Кроме того, поверхность самой клетки AGS, по-видимому, стала более гранулированной к 15-минутной временной точке (Рис. 4A, S4 Movie), соизмеримым с данными оптической микроскопии (Рис. 2) и изображениями живой / мертвой флуоресценции (Рис. 3).

Рис. 4.

Изменения мембран до и после обработки мелиттином в разные моменты времени для A) AGS, B) COLO205 и C) HCT-15. После добавления мелиттина клетки подвергаются набуханию мембраны с последующим образованием пузырей на мембране. Клетки выращивали на покровных стеклах, покрытых поли-D-лизином, в течение ночи и окрашивали мембранным красителем DIL (красный) и отображали с помощью конфокальной микроскопии до (T0) и после (T0,5, 30 секунд; T1, 1 минута; T5, 5 минут; Т10, 10 минут; Т15, 15 минут) добавление 20 мкг / мл мелиттина.Желтая стрелка указывает на изменения мембраны. Масштабные линейки соответствуют 10 микронам.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0224028.g004

Аналогичные эффекты наблюдались для COLO205, где видно набухание клеток, после чего начинают появляться множественные маленькие мембранные пузырьки (рис. 4B, фильм S5) . По сравнению с AGS (рис. 4A) эти пузырьки составляют лишь небольшую часть размера, но, по-видимому, покрывают большую часть клеточной мембраны COLO205 (рис. 4B). Для HCT-15 эффекты мелиттина более тонкие; агрегат клеток сначала набухал через 30 секунд, а затем начал сокращаться через 15 минут.Это можно увидеть по истончению окрашенной области по периферии, что указывает на сжатие цитоплазмы, хотя на уровне отдельных клеток наблюдаются только намеки на повреждение клеточной мембраны (Рис. 4C, S6 Movie).

Визуализация с высоким разрешением мембран и повреждений клеток, вызванных обработкой мелиттином

Хотя использованные методы широко продемонстрировали, что гибель клеток происходит из-за изменений мембран, в основном мембранных пузырей, для детальной оценки этих эффектов потребовались методы визуализации с высоким разрешением.АСМ выполняли на клетках AGS, чтобы лучше охарактеризовать наблюдаемые морфологические изменения. Во-первых, необработанные клетки AGS были визуализированы в качестве исходного уровня, где наблюдались множественные морфологии клеток (рис. 5). Все клетки были интактными и имели четкие ядерные области либо сферической, либо удлиненной формы, также наблюдались различные клеточные прикрепления. После кратковременной обработки мелиттином высокой дозой (20 мкг / мл) клеточная мембрана AGS стала «липкой» (синие стрелки), на что указывает полосатый характер соответствующих изображений АСМ.Это «липкое» качество, скорее всего, соответствует потере целостности мембраны, описанной до сих пор, и подтверждает, что повреждение клеток происходит почти сразу после обработки (рис. 5). Определение характеристик АСМ не проводилось на линиях колоректальных клеток COLO205 и HCT-15 из-за их соответствующей полуслипчивой и слипающейся природы, что затрудняло их отображение с помощью этого метода. Однако для подтверждения быстрых мембранных изменений была проведена сканирующая электронная микроскопия.

Рис. 5.

АСМ-изображения, показывающие морфологию клеток AGS A) при нормальных условиях (без обработки) и B) после обработки мелиттином 20 мкг / мл.Клетки AGS выращивали на покровных стеклах, покрытых поли-D-лизином, в течение ночи, обрабатывали обработкой мелиттином 20 мкг / мл в течение 1 минуты и затем фиксировали в 2,5% глютеральдегиде или 8% формальдегиде. Клетки были визуализированы в PBS на Asylum MFP-3D. Синие стрелки указывают на повреждение клеток. Масштабные полосы указаны на соответствующих изображениях.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0224028.g005

СЭМ-визуализацию проводили на всех клеточных линиях для визуализации морфологии раковых клеток без / с обработкой мелиттином.Перед лечением изображения SEM показали типичную морфологию клеток AGS, COLO205 и HCT-15 с видимыми ядерными областями и без явного повреждения мембраны (контроль на рис. 6). После обработки мелиттином морфология клеток AGS изменилась из-за потери целостности мембраны. При концентрации мелиттина 10 мкг / мл внутриклеточное вещество просачивалось из клетки AGS (рис. 6А). При концентрации мелиттина 20 мкг / мл наблюдается большой выступ в мембране, а верхняя часть клеточной мембраны, по-видимому, разорвана, чтобы высвободить внутриклеточное вещество через поверхность (рис. 6А).Для сравнения, высвобождение внутриклеточного вещества для COLO205 происходит по-другому. Как при обработке мелиттином 10 мкг / мл, так и при 20 мкг / мл ядерная область больше не видна четко, а клеточная мембрана выглядит более зернистой и изгибается нерегулярным образом. На поверхности мембраны наблюдались небольшие видимые поры, указывающие на потерю целостности клеточной мембраны (рис. 6В). Для HCT-15 клеточное повреждение не так четко видно при более низкой концентрации, но есть заметное клеточное повреждение при более высокой концентрации.На исходном уровне скопления клеток имеют неправильную форму и формирование. После обработки мелиттином на поверхности виден дополнительный клеточный материал, что указывает на потерю целостности мембраны с некоторым видимым повреждением мембраны (рис. 6С). К 15 минутам лечения мелиттином клетки колоректального рака были полностью повреждены, на поверхности остались поврежденные клетки и мелкие гранулы.

Рис. 6.

СЭМ-изображения раковых клеток, показывающие различия в клеточной морфологии до и после обработки мелиттином (10 мкг / мл и 20 мкг / мл) для A) AGS, B) COLO205 и C) HCT -15.Клетки выращивали на силиконовых чипах, покрытых поли-D-лизином, в течение ночи и обрабатывали мелиттином в течение 1 или 15 минут. Желтые стрелки указывают на повреждение клеток и мембран. Масштабные полосы указаны на соответствующих изображениях.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0224028.g006

Обсуждение

В обширной литературе показано, что мелиттин вызывает гибель клеток посредством неспецифического литического механизма, что побудило его изучить как потенциальное противовирусное, антибактериальное, противогрибковое, противопаразитарное и антибактериальное средство. лечение опухолей.Кроме того, известно, что мелиттин является катионным порообразующим пептидом [6, 33]. Что касается рака, влияние мелиттина на раковые клетки и липидные (би) -слои было исследовано множеством методов в течение продолжительных периодов времени (например, от 6 до 24 часов) в диапазонах концентраций от 0,5 до 10 мкг / мл [ 8–15, 17, 34]. Однако цитолитические эффекты в более короткие сроки в значительной степени игнорировались.

Здесь было обнаружено, что мелиттин вызывает дозозависимый эффект лизиса клеток в отношении клеточных линий AGS, COLO205 и HCT-15, что сопоставимо с результатами нескольких исследований в этой области.Некоторые из этих исследований были выполнены на раковых клетках с использованием мелиттина или конъюгатов мелиттина [8-15], в то время как другие изучали мелиттин на липидных слоях [17, 34]. Однако в нашем исследовании доза, необходимая для инактивации всех клеток, была несколько выше, в частности более чем в два раза, чем доза, необходимая против других линий раковых клеток [9–11, 14, 15]. Кроме того, на каждой исследованной клеточной линии наблюдались различные эффекты, хотя доза мелиттина в 20 мкг / мл приводила к полной гибели клеток для всех исследованных систем.Вместе эти результаты могут указывать на то, что предыдущие исследования не являются общим показателем эффекта мелиттина против всех линий раковых клеток, а это означает, что активность мелиттина может быть специфичной для линии клеток.

Важно отметить, что наши результаты демонстрируют быстрое действие мелиттина на клетки рака желудка и толстой кишки. Мелиттин вызывает повреждение клеточной мембраны в течение 1 минуты после обработки, при этом наблюдались грануляция, образование пузырей и набухание клеток с последующим уменьшением (рис. 2–6), при этом полная гибель клеток наступала в течение 15 минут (рис. 3).Ранее в исследовании с самой короткой продолжительностью наблюдался мелиттин на монослоях DPPC в течение 4 часов [17], в то время как в исследованиях с самой короткой временной точкой рассматривалось лечение мелиттином клеток рака желудка и лимфобластоидных клеток человека после 1 часа инкубации [10, 35]. Что касается рака желудка, то предыдущее исследование выявило менее 15% жизнеспособности клеток AGS, обработанных 8 мкг / мл мелиттина, экстрагированного из иранских пчел после 6–24 часов лечения [11]. Насколько нам известно, на тестируемых здесь линиях колоректальных клеток не проводилось никаких исследований, хотя в некоторых исследованиях изучались эффекты конъюгатов мелиттина на другие колоректальные клетки [6].Понимание непосредственного повреждения мембраны, вызванного мелиттином, дает важную информацию для разработки целевых терапевтических препаратов с мелиттином.

Мембранные эффекты хорошо изучены при раке с использованием раковых клеток и липидных слоев различными методами и при более длительном лечении, часто с учетом формирования пор, а также мембранных изменений, включая возмущения и разрушение мембран [11, 14, 25, 34, 36– 38]. В ряде исследований также изучали механистические эффекты мелиттина, рассматривая пути, ведущие к апоптозу и гибели клеток, включая индукцию рецепторов смерти [5, 6, 9, 10, 37, 39, 40].В целом считается, что мелиттин разрушает липидные мембраны посредством тороидального и детергентного механизмов, в зависимости от соотношения липидов к пептидам в мембране [41]. При более низких концентрациях мелиттин вызывает небольшие или временные поры, в результате чего клеточное содержимое не просачивается из клетки, а трансмембранные ионы переориентируются, изменяя заряд мембраны [38, 42]. Временные поры возникают после того, как мономеры α-спирального пептида мелиттина взаимодействуют с поверхностью клетки, димеризуются и неглубоко проникают через мембрану [43, 44].При агрегации мелиттина образуются более крупные и стабильные поры, и трансмембранная утечка происходит при концентрациях в микромолярном диапазоне [43–45]. При концентрациях пептида, превышающих липидное соотношение, мелиттин может разрушать мембраны [46]. Эти результаты соизмеримы с результатами этого исследования, в котором некоторый уровень гибели клеток отмечается от 5 мкг / мл, предполагая, что временные поры возникают при более низких концентрациях мелиттина. В то время как полный лизис клеток наблюдался при максимальной дозе мелиттина для всех клеточных линий (рис. 1).Кроме того, переменный размер пор, вызванный мелиттином, можно объяснить структурными изменениями при взаимодействии с бислоями или взаимодействиями между пептидными мономерами. В то время как порообразование здесь не наблюдалось в более короткие сроки, наблюдались несколько других повреждающих мембранных эффектов почти сразу после введения мелиттина (рис. 2–4). СЭМ-изображение показало образование пор на поверхности мембран некоторых клеток после обработки (рис. 6). В соответствии с нашими выводами, предыдущее исследование также продемонстрировало образование везикул и потерю целостности мембраны с помощью электронной микроскопии после кратковременной обработки очень высокими дозами мелиттина (2 минуты 200 мкг / мл) [35].Однако это исследование проводилось на лимфобластоидных клетках человека, а на солидных опухолях была проведена ограниченная работа.

Интересно, что эффекты мелиттина, по-видимому, изменяются на исследуемую линию агрегированных клеток. Клетки AGS и COLO205 кажутся намного более чувствительными к мелиттину по сравнению с HCT-15, с очень заметными мембранными изменениями, затрагивающими все обработанные клетки в образцах (рис. 2–5). Однако для HCT-15, который образует скопления клеток, мелиттин сначала убивает клетки, расположенные на периферии, а затем медленно диффундирует в центр скоплений, что в конечном итоге приводит к гибели клеток в зависимости от дозы и времени.В этом отношении скопления клеток HCT-15 действуют как солидные опухоли. Было продемонстрировано, что проникновение лекарств и антител в солидные опухоли проблематично по ряду причин, связанных с микросредой опухоли, включая повышенное давление и крупные сосудистые системы, а также механизмы, которые могут привести к устойчивости, такие как насосы экспорта лекарств и изменения. в метаболических путях [47, 48]. Эти результаты дают некоторое представление о влиянии мелиттина на солидные опухоли и могут частично влиять на разработку методов доставки мелиттина или подобных цитолитических пептидов в опухоли для лечения рака.

Несмотря на обширные исследования, разработка мелиттина в качестве терапевтического средства для лечения рака остается сложной задачей, в основном из-за его неспецифической клеточной литической активности. Это включает его способность лизировать эритроциты [6, 18]. В попытке преодолеть это, исследования мелиттина были сосредоточены на разработке конъюгатов и производных мелиттина. Примеры включают мелиттин, присоединенный расщепляемыми линкерами [23], чувствительные к окружающей среде системы доставки пептидов [20] и ряд слитых белков на основе мелиттина [5, 21, 22, 24, 25].Кроме того, благодаря разработке новых линкерных стратегий, наночастицы и наноносители, нагруженные мелиттином, также были изучены для доставки мелиттина в микроокружение опухоли [49–51]. Несмотря на эти предостережения относительно реализации, понимание основного механизма действия является обязательным для разработки методов лечения на основе мелиттина следующего поколения. Важно отметить, что мелиттин оказался токсичным для раковых клеток и может вызвать смерть опухоли. Разработка альтернативных методов доставки пептидов позволит разработать новые лекарственные средства против рака с повышенной специфичностью и селективностью и значительно сниженной токсичностью за счет ограничения цитолиза вне мишени.Знание быстрой кинетики цитолиза является важным шагом на пути к достижению цели таргетной терапии рака на основе мелиттина.

Заключение

В то время как обширные цитотоксические эффекты мелиттина были хорошо задокументированы, его мгновенное воздействие на раковые клетки в прошлом не исследовалось. Здесь мы продемонстрировали явные мембранные эффекты мелиттина в высоких дозах на клетки желудочного и колоректального рака в течение 15-минутного периода времени с клеточными изменениями, происходящими в течение нескольких секунд в виде набухания клеток, пузырей и разрывов мембран.Все наблюдаемые эффекты зависели от дозы и времени, при этом требовалась более высокая дозировка по сравнению с предыдущими исследованиями. Кроме того, между разными линиями клеток наблюдались вариации в повреждении мембраны, при этом линия агрегированных клеток демонстрировала явный эффект диффузии, имитирующий эффект солидной опухоли. Результаты этого исследования расширяют наши знания о противораковых пептидах, давая представление о быстром воздействии модельного пептида мелиттина на раковые клетки.

Благодарности

Эта работа была частично выполнена в исследовательском центре микронано-исследований RMIT (MNRF) в викторианском узле Австралийского национального производственного предприятия (ANFF).Авторы выражают признательность за возможности и научную и техническую помощь RMIT Microscopy & Microanalysis Facility (RMMF), связанной лаборатории Microscopy Australia.

Список литературы

1. Последние глобальные данные по раку: бремя рака вырастает до 18,1 миллиона новых случаев и 9,6 миллиона смертей от рака в 2018 году [пресс-релиз]. 12 сентября 2018 2018.
2. Ван С., Цзя М. Терапия антителами при раке. В: Чжан С., редактор. Прогресс в иммунотерапии рака.Дордрехт: Шпрингер Нидерланды; 2016. с. 1–67.
3. Явари Б., Махджуб Р., Саидиджам М., Райгани М., Сулеймани М. Возможное использование пептидов в лечении рака. Curr Protein Peptide Sci. 2018; 19 (8): 759–70.
4. Маркус С., Пирогова Е., Пива Т.Дж. Оценка использования терапевтических пептидов для лечения рака. J Biomed Sci. 2017; 24 (1): 21–36. pmid: 28320393
5. Лю Ц-ц, Хао Д-джи, Чжан Ц., Ан Дж, Чжао Ц., Чен Б. и др. Применение пчелиного яда и его основного компонента мелиттина для лечения рака.Cancer Chemother Pharmacol. 2016; 78 (6): 1113–30. pmid: 27677623
6. Rady I, Siddiqui I, Rady M, Mukhtar H. Мелиттин, главный пептидный компонент пчелиного яда, и его конъюгаты в терапии рака. Cancer Lett. 2017; 402: 16–31. pmid: 28536009
7. Премратаначай П., Чанчао С. Обзор противораковой активности продуктов пчеловодства. Азиатско-Тихоокеанский журнал тропической биомедицины. 2014. 4 (5): 337–44. pmid: 25182716
8. Чой Дж. Х., Джанг А. Ю., Лин С., Лим С., Ким Д., Пак К. и др.Мелиттин, антимикробный пептид, полученный из пчелиного яда, может воздействовать на устойчивый к метициллину Staphylococcus aureus. Отчет Мол Мед. 2015; 12 (5): 6483–90.
9. Джо М., Пак М.Х., Коллипара П.С., Ан Би Джей, Сон Х.С., Хан С.Б. и др. Противораковое действие токсина пчелиного яда и мелиттина на раковые клетки яичников за счет индукции рецепторов смерти и ингибирования пути JAK2 / STAT3. Toxicol Appl Pharmacol. 2012. 258 (1): 72–81. pmid: 22027265
10. Kong G-M, Tao W-H, Diao Y-L, Fang P-H, Wang J-J, Bo P и др.Мелиттин вызывает апоптоз клеток рака желудка человека за счет активации митохондриального пути. Мир Дж. Гастроэнтерол. 2016; 22 (11): 3186–95. pmid: 27003995
11. Махмудзаде А., Зарриннахад Х., Багери К.П., Морадия А., Шахбаззаде Д. Первый отчет о выделении мелиттина из яда иранской медоносной пчелы и оценке его токсичности для клеток AGS рака желудка. J Chin Med Assoc. 2015; 78 (10): 574–83. pmid: 26316200
12. Муларски А., Вилкш Дж. Дж., Ван Х, Хоссейн М. А., Уэйд Дж. Д., Сепарович Ф. и др.Атомно-силовая микроскопия раскрывает механобиологию литического действия пептидов на бактерии. Ленгмюра: журнал ACS поверхностей и коллоидов. 2015; 31 (22): 6164–71.
13. Раджабнеджад С.Х., Мохтарзаде А., Абноус К., Тагдиси С.М., Рамезани М., Разави Б.М. Направленная доставка мелиттина к раковым клеткам с помощью аптамера против нуклеолина AS1411. Препарат Дев Инд Фарм. 2018; 44 (6): 982–7. pmid: 29325460
14. Зарриннахад Х., Махмудзаде А., Хамиди М., Махдави М., Моради А., Багери К. и др.Апоптотический эффект мелиттина, очищенного из яда иранской медоносной пчелы, на линию клеток рака шейки матки человека HeLa. Int J Pept Res Ther. 2018; 24 (4): 563–70. pmid: 30416405
15. Zhang S-F, Chen Z. Мелиттин оказывает противоопухолевое действие на клетки немелкоклеточного рака легкого. Отчет Мол Мед. 2017; 16 (3): 3581–6.
16. Типгомут С., Вонгпроммун А., Такео Е., Иттиудомрак Т., Путонг С., Чанчао С. Мелиттин индуцировал остановку цикла клеток G1 и апоптоз в клетках бронхогенной карциномы человека Chago-K1 и ингибировал дифференцировку клеток ТНР-1 в связанные с опухолью макрофаги.Азиатский Pac J Cancer Prev. 2018; 19 (12): 3427–34. pmid: 30583665
17. Хименес Д., Санчес-Муньос О.Л., Сальгадо Дж. Прямое наблюдение нанометровых пор мелиттина в поддерживаемых липидных монослоях. Ленгмюра: журнал ACS поверхностей и коллоидов. 2015; 31 (10): 3146–58.
18. Тостесон М., Холмс С., Разин М., Тостесон Д. Мелиттин-лизис эритроцитов. Международный журнал исследований структуры, функции и генезиса биомембран. 1985. 87 (1): 35–44.
19. DeGrado WF, Musso GF, Lieber M, Kaiser ET, Kezdy FJ. Кинетика и механизм гемолиза, вызванного мелиттином и синтетическим аналогом мелиттина. Biophys J. 1982; 37 (1): 329–38. pmid: 7055625
20. Bei C, Bindu T, Remant KC, Peisheng X. Двойной защищенный наномелиттин для безопасного и эффективного уничтожения раковых клеток. J Mater Chem B. 2014; 3 (1): 25–9. pmid: 25734006
21. Ling CQ, Li B, Zhang C, Zhu DZ, Huang XQ, Gu W и др.Ингибирующее действие рекомбинантного аденовируса, несущего ген мелиттина, на гепатоцеллюлярную карциному. Энн Онкол. 2005. 16 (1): 109–15. pmid: 15598947
22. Цянь Си-И, Ван К-Л, Фанг Ф-Ф, Гу В, Хуанг Ф, Ван Ф-З и др. Онколитический аденовирус с тройным контролем, экспрессирующий мелиттин, оказывает ингибирующее действие на гепатоцеллюлярную карциному. Int J Clin Exp Pathol. 2015; 8 (9): 10403. pmid: 26617748
23. Sun D, Sun M, Zhu W, Wang Z, Li Y, Ma J. Противораковая сила и механизм нового слитого токсина, активируемого опухолью, DLM.Токсины (Базель). 2015; 7 (2): 423. pmid: 25658509
24. Ван Д., Ху Л., Су М., Ван Дж., Сюй Т. Получение и функциональная характеристика слитого белка фактор роста эндотелия сосудов человека-мелиттин с анализом противоопухолевой активности in vitro и in vivo. Int J Oncol. 2015; 47 (3): 1160. pmid: 26166416
25. Чжао Х., Фэн Х, Хань В., Дяо Й., Хань Д., Тиан Х и др. Повышенное связывание и уничтожение клеток гепатоцеллюлярной карциномы in vitro под действием мелиттина при связывании с новым нацеливающим пептидом, скринингом на фаговом дисплее.Журнал пептидной науки. 2013. 19 (10): 639–50. pmid: 24014474
26. Дюфрен Ю.Ф., Андо Т., Гарсия Р., Альстенс Д., Мартинес-Мартин Д., Энгель А. и др. Режимы визуализации атомно-силовой микроскопии для применения в молекулярной и клеточной биологии. Природа Нанотехнологии. 2017; 12 (4): 295–307. pmid: 28383040
27. Мюллер DJ, Дюфрен Ю.Ф. Атомно-силовая микроскопия: наноскопическое окно на поверхности клетки. Trends Cell Biol. 2011; 21 (8): 461–9. pmid: 21664134
28.Parot P, Dufrêne YF, Hinterdorfer P, Le Grimellec C, Navajas D, Pellequer J-L, et al. Прошлое, настоящее и будущее атомно-силовой микроскопии в науках о жизни и медицине. J Mol Recognit. 2007. 20 (6): 418–31. pmid: 18080995
29. Nečas D, Klapetek P. Gwyddion: программное обеспечение с открытым исходным кодом для анализа данных SPM. Центральноевропейский физический журнал. 2012; 10 (1): 181–8.
30. Элмор С. Апоптоз: обзор запрограммированной гибели клеток. Toxicol Pathol. 2007. 35 (4): 495–516.pmid: 17562483
31. Wlodkowic D, Skommer J, Darzynkiewicz Z. Обнаружение апоптоза на основе проточной цитометрии. Методы Мол биол. 2009; 559: 19–32. pmid: 19609746
32. Barranco SC, Townsend CM Jr., Casartelli C, Macik BG, Burger NL, Boerwinkle WR и др. Создание и характеристика модельной системы in vitro для аденокарциномы желудка человека. Cancer Res. 1983; 43 (4): 1703–1709. pmid: 6831414
33. Уолш Э.Г., Махер С., Девочелл М., О’Брайен П.Дж., Бэрд А.В., Брейден Д.Дж.Анализ высокого содержания для определения цитотоксичности антимикробного пептида, мелиттина и некоторых структурных аналогов. Пептиды. 2011; 32 (8): 1764–73. pmid: 21703316
34. Ли М-Т, Сун Т-Л, Хунг W-C, Хуан Х. Процесс создания пор в мембранах мелиттином. Proc Natl Acad Sci USA. 2013; 110 (35): 14243. pmid: 23940362
35. Уэстон К.М., Алсалами М., Раисон Р.Л. Изменения клеточной мембраны, вызванные цитолитическим пептидом, мелиттином, обнаруживаются с помощью лазерного рассеяния 90 градусов.Цитометрия. 1994. 15 (2): 141–147. pmid: 8168400
36. Демпси CE. Действие мелиттина на мембраны. BBA — Обзоры биомембран. 1990; 1031 (2): 143–61. pmid: 2187536
37. Оршолич Н. Пчелиный яд в лечении рака. Раковые метастазы Ред. 2012; 31 (1): 173–94.
38. Tosteson MT, Tosteson DC. Жало. Мелиттин образует каналы в липидных бислоях. Biophys J. 1981; 36 (1): 109–16. pmid: 6269667
39. Гайски Г, Гарай-Врховач В.Мелиттин: литический пептид с противораковыми свойствами. Environ Toxicol Pharmacol. 2013. 36 (2): 697–705. pmid: 238
40. Сын DJ, Lee JW, Lee YH, Song HS, Lee CK, Hong JT. Терапевтическое применение пчелиного яда и входящих в его состав соединений, обладающих противоартритным, болеутоляющим и противораковым действием. Pharmacol Ther. 2007. 115 (2): 246–70. pmid: 17555825
41. Михайлович М., Лазаридис Т. Противомикробные пептиды в тороидальных и цилиндрических порах. BBA — биомембраны.2010; 1798 (8): 1485–93. pmid: 20403332
42. Hanke W., Methfessel C, Wilmsen H-U, Katz E, Jung G, Boheim G. Мелиттин и химически модифицированный трихотоксин образуют поры с множеством состояний аламетицинового типа. BBA — биомембраны. 1983; 727 (1): 108–14. pmid: 6824646
43. Лю Дж., Сяо С., Ли Дж., Юань Б., Ян К., Ма Ю. Молекулярные детали промежуточных состояний действия мелиттина на клеточной мембране. BBA — биомембраны. 2018; 1860 (11): 2234–41. pmid: 30409519
44. Рамирес Л., Шехтман А., Панде Дж.Структурная характеристика и динамика позвоночника рекомбинантного пчелиного яда мелиттина на основе ядерно-магнитного резонанса. Биохимия. 2018; 57 (19): 2775. pmid: 29668274
45. Сан Д., Форсман Дж., Вудворд К.Э. Многоступенчатое моделирование молекулярной динамики определяет высокую кооперативную активность мелиттина в распознавании и стабилизации пор мембраны. Ленгмюра: журнал ACS поверхностей и коллоидов. 2015; 31 (34): 9388–401.
46. Ладохин А.С., Селстед М.Э., Белый Ш.Определение размера пор мембран в липидных везикулах путем утечки совместно инкапсулированных маркеров: формирование пор мелиттином. Biophys J. 1997; 72 (4): 1762–6. pmid:80
47. Хавар И.А., Ким Дж. Х., Кух Х. Дж. Улучшение доставки лекарств к солидным опухолям: прайминг микросреды опухоли. J Контролируемое высвобождение. 2015; 201: 78–89.
48. Таннок И.Ф., Ли К.М., Тунггал Дж. К., Коуэн Д.С., Егорин М.Дж. Ограниченное проникновение противоопухолевых препаратов через опухолевую ткань. Clin Cancer Res. 2002. 8 (3): 878–84.pmid: 11895922
49. Hou KK, Pan H, Ratner L, Schlesinger PH, Wickline SA. Механизмы опосредованной наночастицами трансфекции миРНК с помощью пептидов, полученных из мелиттина. САУ Нано. 2013. 7 (10): 8605–15. pmid: 24053333
50. Пан Х., Зоман Н.Р., Шлезингер PH, Ланца Г.М., Виклайн С.А. Цитолитические пептидные наночастицы («NanoBees») для лечения рака. Междисциплинарные обзоры Wiley: наномедицина и нанобиотехнология. 2011; 3 (3): 318–27. pmid: 21225660
51. Зоман Н.Р., Болдуин С.Л., Ху Г., Марш Дж. Н., Ланза Г.М., Хойзер Дж. Э. и др.Наноносители с молекулярной направленностью доставляют цитолитический пептид мелиттин специфически к опухолевым клеткам мышей, уменьшая рост опухоли. Журнал клинических исследований. 2009. 119 (9): 2830–42. pmid: 19726870

Мембранные эффекты мелиттина при раке желудка и толстой кишки

PLoS One. 2019; 14 (10): e0224028.

, Концептуализация, Курирование данных, Формальный анализ, Исследование, Методология, Написание — первоначальный проект, ¹, Курирование данных, Формальный анализ, ¹, Концептуализация, Курирование данных, Формальный анализ, Написание — обзор и редактирование, ^1, ², Концептуализация, Формальный анализ, Исследование, Методология, Управление проектом, Ресурсы, Надзор, Проверка, Написание — первоначальный черновик, Написание — просмотр и редактирование, ^1, ^3, ^4, ^* и , Концептуализация, курирование данных, формальный анализ, расследование, методология, администрирование проекта, ресурсы, надзор, проверка, написание — первоначальный черновик, написание — просмотр и редактирование ^1, ^2, ^*

Кэролайн Солиман

¹ Школа естественных наук, Университет RMIT, Западный кампус Бандура, Бандура, Виктория, Австралия

Сара Иствуд

¹ Школа естественных наук, Университет RMIT, Западный кампус Бандура, Бандура, Виктория, Австралия

Ви Кхан Чыонг

¹ Школа естественных наук, Университет RMIT, Западный кампус Бундура в Бундура, Виктория, Австралия

² Лаборатория нанобиотехнологий, Университет RMIT, кампус Мельбурн-Сити, Мельбурн, Виктория, Австралия

Paul A.Рамсленд

¹ Школа естественных наук, Университет RMIT, Западный кампус Бандура в Бундура, Виктория, Австралия

³ Отделение иммунологии, Центральная клиническая школа (Университет Монаша), Отдел медицинских исследований и образования Альфреда, Мельбурн, Виктория, Австралия

⁴ Департамент хирургии Austin Health (Университет Мельбурна), Austin Health, Гейдельберг, Виктория, Австралия

Аарон Элбурн

¹ Школа естественных наук, Университет RMIT, Западный кампус Бундура в Бундура, Виктория, Австралия

² Лаборатория нанобиотехнологий, Университет RMIT, кампус Мельбурн-Сити, Мельбурн, Виктория, Австралия

Ференц Галлиас-младший., Редактор

¹ Школа естественных наук, Университет RMIT, Западный кампус Бундура в Бундура, Виктория, Австралия

² Лаборатория нанобиотехнологий, Университет RMIT, кампус Мельбурн-Сити, Мельбурн, Виктория, Австралия

⁴ Департамент хирургии Austin Health (Университет Мельбурна), Austin Health, Гейдельберг, Виктория, Австралия

Медицинская школа Университета PECS, ВЕНГРИЯ

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что конкурирующих интересов не существует.

Поступило 15.08.2019 г .; Принято 3 октября 2019 г.

Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника. другими статьями в PMC.

Дополнительные материалы

S1 Movie: Видео с оптического микроскопа, показывающее изменения, вызванные мелиттином для клеток AGS, как функцию времени.(MP4)

GUID: 947E3ED4-9C17-47E3-9A5A-104A72C868BE

S2 Фильм: Оптический микроскопический фильм, показывающий изменения, вызванные мелиттином для клеток COLO205 как функцию времени. (MP4)

GUID: D0AB6E3C-30F6-484E-8860-A324CCC8A569

S3 Movie: Видео с оптического микроскопа, показывающее изменения, вызванные мелиттином для клеток HCT-15 в зависимости от времени. (MP4)

GUID: 3D50B0EF-09DB-4CBC-97C3-DD2827695D64

Фильм S4: Видео с покадровыми изображениями CLSM, показывающими изменение мембраны клеток AGS.(MP4)

GUID: 9E3F6969-E5FA-41E8-BAB4-B04039B67071

S5 Movie: Видео с покадровыми изображениями CLSM, показывающими изменение мембраны клеток COLO205. (MP4)

GUID: 38BD50B7-A49D-4B69-9635-405B0A77686D

Фильм S6: Видео с покадровыми изображениями CLSM, показывающими изменение мембраны клеток HCT-15. (MP4)

GUID: E2BEE944-0C62-4350-B9B5-81A518186194

Заявление о доступности данных: Все соответствующие данные находятся в рукописи и ее вспомогательных информационных файлах.

Abstract

Цитотоксическое действие мелиттина, пептида пчелиного яда, широко изучалось в отношении раковых клеток. Как правило, в этих исследованиях изучали влияние мелиттина в течение продолжительных курсов (6–24 часа), а это означает, что непосредственные клеточные взаимодействия не учитывались. В этой работе мы демонстрируем быстрое воздействие мелиттина на рак желудка и колоректального рака, в частности на клеточные линии AGS, COLO205 и HCT-15, в течение 15 минут. Мелиттин проявлял дозозависимый эффект через 4 часа лечения, при этом полная гибель клеток происходила при максимальной дозе 20 мкг / мл.Интересно, что при наблюдении в более короткие моменты времени мелиттин индуцировал клеточные изменения в течение секунд; Повреждение мембраны наблюдалось как набухание, разрыв или образование пузырей. Визуализация с высоким разрешением показала, что обработанные клетки подвергаются опасности, показывая четкие изменения клеточной морфологии. Через 1 минуту обработки мелиттином наблюдались мембранные изменения, и можно было видеть, как внутриклеточный материал изгнан из клеток. В целом, эти результаты улучшают наше понимание быстродействующих противораковых эффектов мелиттина.

Введение

Рак является ведущей причиной смертности во всем мире, в настоящее время на него приходится примерно 1 из 6 смертей [1]. Согласно недавнему отчету Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), в 2018 году было диагностировано 18 миллионов случаев рака и произошло 9,6 миллиона смертей, связанных с раком. Колоректальный рак и рак желудка являются третьим и пятым наиболее часто диагностируемыми видами рака, на них приходится 10% и 6% диагнозов рака, соответственно. Поэтому неудивительно, что эти типы рака ответственны за высокие показатели смертности, в основном из-за их плохого прогноза [1].В настоящее время лечение рака состоит в основном из хирургического вмешательства, химио- или лучевой терапии, а также генной или гормональной терапии. К сожалению, до сих пор явно не хватает доступных целевых методов лечения, несмотря на недавние разработки, включая терапевтические препараты с использованием антител, пептиды и другие низкомолекулярные терапевтические средства [2–4].

Мелиттин — широко изученный цитолитический пептид, полученный из пчелиного яда, и считается моделью как для катионных, так и для других цитолитических пептидов. Интересно, что он демонстрирует эффективность широкого спектра в качестве противовирусного, антибактериального, противогрибкового, противопаразитарного и противоопухолевого агента [2, 5-7].Это связано с тем, что цитолитическое действие мелиттина неселективно, влияя как на передачу сигнала, так и на регуляторные пути. Как таковой, мелиттин вызывает множественные механизмы гибели клеток, включая апоптоз, ингибирование пролиферации или ангиогенеза, остановку клеточного цикла и ингибирование подвижности, миграции, метастазирования и инвазии рака. Для лечения рака цитолитическая активность мелиттина в последние годы изучалась на различных типах клеток [8–15]. Во время апоптоза лизис клеток индуцируется за счет разрушения фосфолипидного бислоя, образования пор и увеличения проницаемости [6].Для клеток рака желудка было показано, что мелиттин индуцирует дозозависимый и зависящий от времени апоптоз и некроз, ингибируя пролиферацию клеток AGS. Эти эффекты визуализировались как сокращение клеток, неправильная форма клеток, отслоение клеток и повреждение мембран [11]. Более того, клеточные линии рака толстой кишки (HCT-116, CT26 и LS174T) тестировались только с конъюгатами мелиттина [6]. Мелиттин также индуцировал апоптоз через митохондриальные пути в клетках рака желудка SGC-7901 [10]. Кроме того, при сравнении чувствительности раковых клеток к мелиттину и нормальных клеток, одно исследование показало, что мелиттин был значительно более цитотоксичным для клеток рака легких человека, чем для контрольных клеток фибробластов легких человека [16].

Методы

Культура клеток

Проточная цитометрия (FACS)

Клетки высевали из расчета 1 × 10 ⁵ клеток на лунку в 96-луночный планшет и обрабатывали мелиттином в концентрации 0,5–20 мкг / мл в полной среде RPMI в течение 4 часов при 37 ^{° С.} C с 5% CO ₂. Положительный контроль обрабатывали 0,1% Triton X-100 в PBS в течение 15 минут. Клетки промывали, а затем ресуспендировали в 1 мкг / мл раствора йодида пропидия (PI) в PBS в течение до 5 минут перед анализом в FACS Canto (10000 клеток на образец).Полученные данные были проанализированы с помощью программного обеспечения FlowJo, где популяции клеток были определены по размеру и сложности клеток для исключения дублетов, после чего были отобраны популяции с положительным PI (выброс PE> 10 ³). Двусторонние тесты ANOVA использовали для оценки статистической значимости гибели клеток между концентрациями мелиттина для каждой клеточной линии. Данные представлены в виде графика как среднее значение ± стандартное отклонение с n = 4.

Оптическая микроскопия

Живое / мертвое окрашивание и флуоресцентная микроскопия

Окрашивание мембран и конфокальная визуализация

Подготовка образца AFM

Покровные стекла покрывали поли-D-лизином в концентрации 1 мг / мл, и клетки засевали в течение ночи в полной среде RPMI.Клетки обрабатывали мелиттином в течение 1 минуты при 20 мкг / мл в PBS, а затем фиксировали либо в 2,5% глутаровом альдегиде, либо в 8% формальдегиде.

AFM-визуализация

Анализ изображения АСМ

Данные АСМ были обработаны с использованием комбинации программного обеспечения Asylum research, пользовательских кодов MATLAB и программного обеспечения Gwyddion [29]. Фильтрация изображения (деконволюция шума, удаление рубцов или фильтрация с быстрым преобразованием Фурье (БПФ)) не применялась.

SEM

Результаты

Смерть раковых клеток, вызванная мелиттином, как функция концентрации

Для определения диапазона концентраций, при котором мелиттин вызывает гибель раковых клеток, цитотоксичность измеряли по поглощению пропидия йодида (PI) нежизнеспособными клетками и анализировали с помощью FACS .показывает относительную нежизнеспособность линий раковых клеток AGS, COLO205 и HCT-15 как функцию концентрации мелиттина. Изучение данных показывает, что мелиттин дозозависимо подавляет рост как желудочного, так и колоректального рака (желудочный линия AGS и колоректальная линия COLO205 и HCT-15). Как и ожидалось, количество нежизнеспособных клеток увеличивалось по мере увеличения концентрации мелиттина. Не наблюдалось значительного снижения жизнеспособности в диапазоне концентраций мелиттина 0,5–5 мкг / мл ().Оценка жизнеспособности клеток как функции концентрации мелиттина показала, что эффективный диапазон концентраций для всех типов рака составлял от 5 до 20 мкг / мл, с 24,8 ± 9,4%, 31,2 ± 17% и 43,9 ± 12,4% гибели клеток, наблюдаемой для AGS, HCT-15 и COLO205 соответственно для лечения 10 мкг / мл (P = 0,0009). По сравнению с необработанными контролями все образцы, обработанные 20 мкг / мл мелиттина, показали значительную гибель (P = 0,0009). При концентрации мелиттина 20 мкг / мл AGS показал самую низкую гибель клеток — 80.6 ± 20% гибели клеток, тогда как HCT-15 и COLO205 показали аналогичные проценты — 93,8 ± 9,6% и 99,7 ± 0,17% соответственно. Положительные контрольные образцы показали примерно 95% снижение жизнеспособности клеточных линий, обработанных 0,1% Тритоном Х-100 в PBS. Для 4-часовой обработки не было достигнуто фазы плато (), и аналогичное снижение жизнеспособности клеток наблюдалось после 12-часовой обработки (данные не показаны). В целом нежизнеспособные клетки в популяциях легко поглощают краситель PI, и визуально видно, что они уменьшаются как по размеру клеток, так и по внутренней сложности, что указывает на цитотоксичность.Для сравнения, жизнеспособные клеточные популяции не окрашиваются ИП и имеют больший размер клеток [30, 31]. Это позволило провести значимое сравнение живых и мертвых клеток.

(i) Поглощение йодида пропидия (PI) свидетельствует о гибели клеточных линий желудочного и колоректального рака после 4-часовой обработки мелиттином. Клетки обрабатывали 0,5–20 мкг / мл мелиттина, а положительный контроль обрабатывали 0,1% Triton X-100. Данные показаны как среднее ± стандартное отклонение, где n = 4. *** представляет p = <0.001. Значения EC50 составляют 14 мкг / мл для AGS, 11 мкг / мл для COLO205 и 13 мкг / мл для HCT-15. (ii) Изображения флуоресценции, показывающие окрашивание живых / мертвых клеточных линий желудочного и колоректального рака после 4-часовой обработки мелиттином. A) AGS, B) COLO205 и C) Клетки HCT-15 выращивали на покровных стеклах, покрытых поли-D-лизином, в течение ночи и обрабатывали мелиттином в концентрации 5 мкг / мл, 10 мкг / мл и 20 мкг / мл. на 4 часа. Положительный контроль обрабатывали Тритоном Х-100. Все клетки окрашивали живым красителем кальцеином-AM (зеленый) и мертвым красителем EthD-1 (красным).Средняя жизнеспособность была определена для AGS (78% для 5 мкг / мл, 17% для 10 мкг / мл и 0% для 20 мкг / мл), COLO205 (86% для 5 мкг / мл, 40% для 10 мкг / мл и 0% для 20 мкг / мл) и HCT-15 (73% для 5 мкг / мл, 50% для 10 мкг / мл и 4% для 20 мкг / мл). Жизнеспособность всех отрицательных и положительных контролей составляла 99–100% и 0% соответственно. Масштабные линейки соответствуют 100 микронам.

Хотя ИП является полезным маркером клеточной гибели, его нельзя использовать для точного определения цитотоксических эффектов, вызванных воздействием мелиттина. Чтобы преодолеть это экспериментальное ограничение, использовали набор для окрашивания живых / мертвых клеток для прямого измерения соотношения живых и мертвых клеток.мертвые клетки при концентрациях мелиттина 5 мкг / мл, 10 мкг / мл и 20 мкг / мл () после 4 часов воздействия. Микрофотографии CLSM показывают соответствующие изображения флуоресценции, полученные после окрашивания линий раковых клеток AGS, COLO205 и HCT-15, а также соответствующих контролей (). Для всех клеточных линий цитотоксическая активность мелиттина следует за значительным дозозависимым уничтожением, при этом доля мертвых клеток (окрашенных красным EthD-1) резко возрастает по сравнению с живыми (окрашенными зеленым кальцеином-AM) по мере увеличения концентрации мелиттина ().Эффекты мелиттина сравнивали с необработанными образцами, показывающими 100% жизнеспособность, и обработанными Тритоном X-100 образцами, показывающими 100% гибель клеток во всех клеточных линиях.

Интересно, что AGS, обработанный 5 мкг / мл и 10 мкг / мл мелиттина, показал заметный сдвиг в цитотоксичности, при этом более 50% популяции клеток были окрашены в красный цвет при 10 мкг / мл (). Для COLO205 было трудно измерить пропорции живых и мертвых клеток из-за полуадгезивной природы этой клеточной линии, хотя при концентрации мелиттина 10 мкг / мл наблюдалось резкое снижение количества живых клеток ().Высокие уровни гибели клеток наблюдались для HCT-15 при 5 мкг / мл мелиттина, и эта пропорция существенно не различалась при 10 мкг / мл (). При концентрации мелиттина 20 мкг / мл AGS и COLO205 показали 100% гибель клеток. Однако из-за природы скопления клеток HCT-15 клетки, расположенные в центре скоплений, демонстрируют некоторую жизнеспособность, в то время как клетки по внешнему краю скоплений были мертвыми, что приводило к гибели примерно 95% клеток (). Вместе эти результаты предполагают, что цитолитические эффекты мелиттина несколько различаются в зависимости от клеточной линии, а также клеточной адгезии и агрегации.Важно отметить, что результаты, полученные при окрашивании живых и мертвых клеток, были соизмеримы с результатами, полученными с помощью FACS ().

Мелиттин вызывает быстрые изменения клеточных мембран

Мелиттин (20 мкг / мл) добавляли к каждой линии раковых клеток и наблюдали с помощью оптической микроскопии, чтобы выяснить влияние мелиттина в зависимости от времени. Была выбрана самая высокая доза, чтобы вызвать наблюдаемый ответ. Перед визуализацией клетки рака желудка (AGS) показали нормальную морфологию, о чем свидетельствуют гладкие края мембраны, неповрежденные ядра и правильная веретенообразная форма ().Сходные морфологии наблюдались для всех других линий раковых клеток, COLO205 и HCT-15, однако с добавлением адгезии и агрегации, присущих каждому типу клеток, как описано выше (соответственно). Первоначальная морфология каждой клеточной линии служит базой для визуализации клеточных изменений, вызванных введением мелиттина. Интересно, что при добавлении мелиттина наблюдались очень быстрые изменения AGS на клеточной мембране (). В течение 30 секунд после добавления мелиттина можно увидеть пузыри, когда на периферии клеток начинают появляться небольшие выпуклости.В течение 15 минут этот процесс продолжается с изменениями, заметными в мембране в каждый момент времени. Кроме того, отслоение клеточной поверхности происходило после изменений мембраны (, S1 Movie).

Изображения, полученные с помощью оптической микроскопии, демонстрирующие набухание мембран, грануляцию и образование пузырей у клеток рака желудка и толстой кишки после добавления мелиттина.

A) AGS, B) COLO205 и C) Клетки HCT-15 выращивали на покровных стеклах, покрытых поли-D-лизином, в течение ночи и отображали в PBS с использованием светового микроскопа до (T0) и после (T0.5, 30 секунд; Т1, 1 минута; Т5, 5 минут; Т10, 10 минут; T15, 15 минут) добавление 20 мкг / мл мелиттина. После добавления мелиттина воздействие на клетки можно увидеть почти сразу. Желтая стрелка указывает на изменения мембраны. Масштабные линейки соответствуют 50 микронам.

На тестируемых линиях клеток колоректального рака наблюдались различные эффекты, при этом клетки COLO205 выглядели как правильные сферические клетки с гладкой поверхностью. Клетки набухали в промежутках времени от 30 секунд до 1 минуты с последующей грануляцией в присутствии мелиттина.Из-за полуслипчивой природы этой клеточной линии клетки начинают двигаться в растворе почти сразу после добавления мелиттина, и очень мало клеток остается прикрепленными после 15 минут обработки (S2 Movie). Для сравнения, клетки HCT-15 образовывали большие прилипшие скопления и сохраняли агрегированное поведение во время обработки. В течение 15 минут можно увидеть лишь незначительные изменения, в основном затрагивающие ячейки, расположенные на краях агрегатов; клетки в этих положениях сокращались и становились более грубыми в присутствии мелиттина (, S3 Movie).Это наблюдение согласуется с флуоресцентными изображениями, полученными во время дифференциального окрашивания Live / Dead ().

Обработка мелиттином приводит к гибели клеток в течение 15 минут

Чтобы определить, привели ли изменения мембран, наблюдаемые под оптической микроскопией, к гибели клеток, окрашивание живых / мертвых клеток выполняли на раковых клетках в более короткие сроки лечения. Желудочные (AGS) и колоректальные клетки (COLO205 и HCT-15) обрабатывали мелиттином в концентрации 10 мкг / мл и 20 мкг / мл в течение 1 и 15 минут соответственно ().До обработки все клетки имели регулярную гладкую морфологию с> 95% жизнеспособностью, как и ожидалось в естественной популяции (). Эти данные обеспечивают основу для анализа после лечения. В целом, по мере увеличения концентрации и времени обработки увеличивалась и гибель клеток, причем полная гибель клеток наблюдалась при более высокой дозе через 15 минут для всех клеточных линий (). В этих более коротких временных рамках мелиттин, по-видимому, демонстрировал наивысшую эффективность уничтожения на AGS, при этом более 50% клеток окрашивались в красный цвет (мертвые) при 10 мкг / мл через 1 минуту, а 100% гибель наблюдалась при 20 мкг / мл через 1 минуту. .Полная смерть также наблюдалась при более высокой концентрации через 15 минут (). Для колоректальных линий COLO205 и HCT-15 только небольшой процент клеток был убит с использованием 1-минутной обработки 10 мкг / мл, и это число увеличилось для образца 20 мкг / мл. После 15 минут обработки 10 мкг / мл некоторые живые клетки все еще наблюдаются (<25%) (). Для HCT-15 следует отметить, что гибель клеток начинается через 1 минуту для клеток, в основном расположенных на окружающих краях скоплений клеток. С течением времени эффект киллинга наблюдается для клеток, расположенных более центрально в сгустках (), что, вероятно, демонстрирует механизм лизиса клеток, основанный на диффузии.

Флуоресцентные изображения, демонстрирующие окрашивание линий клеток желудочного и колоректального рака в живом / мертвом состоянии после короткого курса лечения мелиттином.

A) AGS, B) COLO205 и C) Клетки HCT-15 выращивали на покровных стеклах, покрытых поли-D-лизином, в течение ночи и обрабатывали мелиттином в концентрации 10 мкг / мл или 20 мкг / мл для 1 минута или 15 минут. Все клетки окрашивали живым красителем кальцеином-AM (зеленый) и мертвым красителем EthD-1 (красным). Средняя жизнеспособность определялась через 1 минуту для AGS (53% для 10 мкг / мл и 1% для 20 мкг / мл), COLO205 (59% для 10 мкг / мл и 12% для 20 мкг / мл) и HCT-15. (62% для 10 мкг / мл и 51% для 20 мкг / мл) и через 15 минут для AGS (3% для 10 мкг / мл и 0% для 20 мкг / мл), COLO205 (38% для 10 мкг / мл). мл и 3% для 20 мкг / мл) и HCT-15 (34% для 10 мкг / мл и 0% для 20 мкг / мл).Жизнеспособность всех отрицательных контролей составляла 96–99%. Масштабные линейки соответствуют 100 микронам.

Изменения мембран

Чтобы подтвердить мембранный эффект, наблюдаемый до сих пор, мембранный краситель (1,1′-диоктадецил-3,3,3 ‘, 3’-тетраметилиндокарбоцианин перхлорат-Dil) был использован для изучения изменений, происходящих после введение мелиттина. Клетки окрашивали, а затем наблюдали с помощью конфокальной лазерной сканирующей микроскопии (CLSM) при введении высоких доз мелиттина (20 мкг / мл). показывает типичное покадровое изображение in situ CLSM трех клеточных линий до и после обработки (, S4 – S6 Movies).Важно отметить, что для всех клеточных линий наблюдались разные эффекты. Для AGS клетка имела удлиненную морфологию с длинным прикреплением клеток, типичную для их клеточного типа [32]. После добавления мелиттина клетка начала немного набухать, после чего образовался большой мембранный пузырек (см. Желтую стрелку), который продолжал расти с течением времени. Морфология самого прикрепления также изменилась из-за набухания с последующей усадкой и возможным отрывом от поверхности. Кроме того, поверхность самой клетки AGS, по-видимому, стала более гранулированной к 15-минутной точке времени (, S4 Movie), соизмеримым с данными оптической микроскопии () и изображениями живой / мертвой флуоресценции ().

Мембранные изменения до и после обработки мелиттином в разные моменты времени для A) AGS, B) COLO205 и C) HCT-15. После добавления мелиттина клетки подвергаются набуханию мембраны с последующим образованием пузырей на мембране. Клетки выращивали на покровных стеклах, покрытых поли-D-лизином, в течение ночи и окрашивали мембранным красителем DIL (красный) и отображали с помощью конфокальной микроскопии до (T0) и после (T0,5, 30 секунд; T1, 1 минута; T5, 5 минут; Т10, 10 минут; Т15, 15 минут) добавление 20 мкг / мл мелиттина.Желтая стрелка указывает на изменения мембраны. Масштабные линейки соответствуют 10 микронам.

Подобные эффекты наблюдались для COLO205, где видно набухание клеток, после чего начинают появляться множественные маленькие мембранные пузырьки (, S5 Movie). По сравнению с AGS () эти пузырьки составляют лишь небольшую часть размера, но, по-видимому, покрывают большую часть клеточной мембраны COLO205 (). Для HCT-15 эффекты мелиттина более тонкие; агрегат клеток сначала набухал через 30 секунд, а затем начал сокращаться через 15 минут.Это можно увидеть по истончению окрашенной области по периферии, что указывает на сжатие цитоплазмы, хотя на уровне отдельных клеток наблюдаются только намеки на повреждение клеточной мембраны (, S6 Movie).

Визуализация с высоким разрешением мембран и повреждений клеток, вызванных обработкой мелиттином

Хотя использованные методы широко продемонстрировали, что гибель клеток происходит из-за изменений мембран, в основном мембранных пузырей, для детальной оценки этих эффектов потребовались методы визуализации с высоким разрешением .АСМ выполняли на клетках AGS, чтобы лучше охарактеризовать наблюдаемые морфологические изменения. Во-первых, необработанные клетки AGS были визуализированы в качестве исходного уровня, где наблюдались множественные морфологии клеток (). Все клетки были интактными и имели четкие ядерные области либо сферической, либо удлиненной формы, также наблюдались различные клеточные прикрепления. После кратковременной обработки мелиттином высокой дозой (20 мкг / мл) клеточная мембрана AGS стала «липкой» (синие стрелки), на что указывает полосатый характер соответствующих изображений АСМ.Это «липкое» качество, скорее всего, соответствует потере целостности мембраны, описанной до сих пор, и подтверждает, что повреждение клеток происходит почти сразу после обработки (). Определение характеристик АСМ не проводилось на линиях колоректальных клеток COLO205 и HCT-15 из-за их соответствующей полуслипчивой и слипающейся природы, что затрудняло их отображение с помощью этого метода. Однако для подтверждения быстрых мембранных изменений была проведена сканирующая электронная микроскопия.

АСМ-изображения, показывающие морфологию клеток AGS A) в нормальных условиях (без обработки) и B) после обработки мелиттином 20 мкг / мл.Клетки AGS выращивали на покровных стеклах, покрытых поли-D-лизином, в течение ночи, обрабатывали обработкой мелиттином 20 мкг / мл в течение 1 минуты и затем фиксировали в 2,5% глютеральдегиде или 8% формальдегиде. Клетки были визуализированы в PBS на Asylum MFP-3D. Синие стрелки указывают на повреждение клеток. Масштабные полосы указаны на соответствующих изображениях.

СЭМ-визуализацию проводили на всех клеточных линиях для визуализации морфологии раковых клеток без / с обработкой мелиттином. Перед лечением изображения SEM показали типичную морфологию клеток AGS, COLO205 и HCT-15 с видимыми ядерными областями и без явного повреждения мембраны (контроль).После обработки мелиттином морфология клеток AGS изменилась из-за потери целостности мембраны. При концентрации мелиттина 10 мкг / мл наблюдалась утечка внутриклеточного вещества из клетки AGS (). При концентрации мелиттина 20 мкг / мл в мембране имеется большой выступ, а верхняя часть клеточной мембраны, по-видимому, разорвана, чтобы высвободить внутриклеточное вещество через поверхность (). Для сравнения, высвобождение внутриклеточного вещества для COLO205 происходит по-другому. Как при обработке мелиттином 10 мкг / мл, так и при 20 мкг / мл ядерная область больше не видна четко, а клеточная мембрана выглядит более зернистой и изгибается нерегулярным образом.На поверхности мембраны наблюдались небольшие видимые поры, указывающие на нарушение целостности клеточной мембраны (). Для HCT-15 клеточное повреждение не так четко видно при более низкой концентрации, но есть заметное клеточное повреждение при более высокой концентрации. На исходном уровне скопления клеток имеют неправильную форму и формирование. После обработки мелиттином на поверхности виден дополнительный клеточный материал, что указывает на потерю целостности мембраны с некоторым видимым повреждением мембраны (). К 15 минутам лечения мелиттином клетки колоректального рака были полностью повреждены, на поверхности остались поврежденные клетки и мелкие гранулы.

СЭМ-изображения раковых клеток, показывающие различия в клеточной морфологии до и после обработки мелиттином (10 мкг / мл и 20 мкг / мл) для A) AGS, B) COLO205 и C) HCT-15. Клетки выращивали на силиконовых чипах, покрытых поли-D-лизином, в течение ночи и обрабатывали мелиттином в течение 1 или 15 минут. Желтые стрелки указывают на повреждение клеток и мембран. Масштабные полосы указаны на соответствующих изображениях.

Обсуждение

Обширная литература показала, что мелиттин вызывает гибель клеток посредством неспецифического литического механизма, что побудило его изучить как потенциальное противовирусное, антибактериальное, противогрибковое, противопаразитарное и противогрибковое средство. -опухолевое лечение.Кроме того, известно, что мелиттин является катионным порообразующим пептидом [6, 33]. Что касается рака, влияние мелиттина на раковые клетки и липидные (би) -слои было исследовано множеством методов в течение продолжительных периодов времени (например, от 6 до 24 часов) в диапазонах концентраций от 0,5 до 10 мкг / мл [ 8–15, 17, 34]. Однако цитолитические эффекты в более короткие сроки в значительной степени игнорировались.

Важно отметить, что наши результаты демонстрируют быстрое действие мелиттина на клетки рака желудка и толстой кишки. Мелиттин вызывает повреждение клеточной мембраны в течение 1 минуты после обработки, при этом наблюдались грануляция, образование пузырей и набухание клеток с последующим сжатием (Рис. -), при этом полная гибель клеток наступала в течение 15 минут ().Ранее в исследовании с самой короткой продолжительностью наблюдался мелиттин на монослоях DPPC в течение 4 часов [17], в то время как в исследованиях с самой короткой временной точкой рассматривалось лечение мелиттином клеток рака желудка и лимфобластоидных клеток человека после 1 часа инкубации [10, 35]. Что касается рака желудка, то предыдущее исследование выявило менее 15% жизнеспособности клеток AGS, обработанных 8 мкг / мл мелиттина, экстрагированного из иранских пчел после 6–24 часов лечения [11]. Насколько нам известно, на тестируемых здесь линиях колоректальных клеток не проводилось никаких исследований, хотя в некоторых исследованиях изучались эффекты конъюгатов мелиттина на другие колоректальные клетки [6].Понимание непосредственного повреждения мембраны, вызванного мелиттином, дает важную информацию для разработки целевых терапевтических препаратов с мелиттином.

Мембранные эффекты хорошо изучены при раке с использованием раковых клеток и липидных слоев различными методами и при более длительном лечении, часто с учетом формирования пор, а также изменения мембраны, включая возмущение и разрушение мембраны [11, 14, 25, 34, 36 –38]. В ряде исследований также изучали механистические эффекты мелиттина, рассматривая пути, ведущие к апоптозу и гибели клеток, включая индукцию рецепторов смерти [5, 6, 9, 10, 37, 39, 40].В целом считается, что мелиттин разрушает липидные мембраны посредством тороидального и детергентного механизмов, в зависимости от соотношения липидов к пептидам в мембране [41]. При более низких концентрациях мелиттин вызывает небольшие или временные поры, в результате чего клеточное содержимое не просачивается из клетки, а трансмембранные ионы переориентируются, изменяя заряд мембраны [38, 42]. Временные поры возникают после того, как мономеры α-спирального пептида мелиттина взаимодействуют с поверхностью клетки, димеризуются и неглубоко проникают через мембрану [43, 44].При агрегации мелиттина образуются более крупные и стабильные поры, и трансмембранная утечка происходит при концентрациях в микромолярном диапазоне [43–45]. При концентрациях пептида, превышающих липидное соотношение, мелиттин может разрушать мембраны [46]. Эти результаты соизмеримы с результатами этого исследования, в котором некоторый уровень гибели клеток отмечается от 5 мкг / мл, предполагая, что временные поры возникают при более низких концентрациях мелиттина. При этом полный лизис клеток наблюдался при максимальной дозе мелиттина для всех линий клеток ().Кроме того, переменный размер пор, вызванный мелиттином, можно объяснить структурными изменениями при взаимодействии с бислоями или взаимодействиями между пептидными мономерами. Хотя здесь не наблюдалось порообразования в более короткие сроки, наблюдались несколько других повреждающих мембранных эффектов почти сразу после введения мелиттина (Рис. -). СЭМ-изображение показало образование пор на поверхности мембран некоторых клеток после обработки (). В соответствии с нашими выводами, предыдущее исследование также продемонстрировало образование везикул и потерю целостности мембраны с помощью электронной микроскопии после кратковременной обработки очень высокими дозами мелиттина (2 минуты 200 мкг / мл) [35].Однако это исследование проводилось на лимфобластоидных клетках человека, а на солидных опухолях была проведена ограниченная работа.

Интересно, что эффекты мелиттина, по-видимому, изменяются на исследуемую линию агрегированных клеток. Клетки AGS и COLO205 кажутся намного более чувствительными к мелиттину по сравнению с HCT-15, с очень заметными мембранными изменениями, влияющими на все обработанные клетки в образцах (рис. -). Однако для HCT-15, который образует скопления клеток, мелиттин сначала убивает клетки, расположенные на периферии, а затем медленно диффундирует в центр скоплений, что в конечном итоге приводит к гибели клеток в зависимости от дозы и времени.В этом отношении скопления клеток HCT-15 действуют как солидные опухоли. Было продемонстрировано, что проникновение лекарств и антител в солидные опухоли проблематично по ряду причин, связанных с микросредой опухоли, включая повышенное давление и крупные сосудистые системы, а также механизмы, которые могут привести к устойчивости, такие как насосы экспорта лекарств и изменения. в метаболических путях [47, 48]. Эти результаты дают некоторое представление о влиянии мелиттина на солидные опухоли и могут частично влиять на разработку методов доставки мелиттина или подобных цитолитических пептидов в опухоли для лечения рака.

Заключение

Хотя обширные цитотоксические эффекты мелиттина были хорошо задокументированы, его мгновенное воздействие на раковые клетки в прошлом не исследовалось. Здесь мы продемонстрировали явные мембранные эффекты мелиттина в высоких дозах на клетки желудочного и колоректального рака в течение 15-минутного периода времени с клеточными изменениями, происходящими в течение нескольких секунд в виде набухания клеток, пузырей и разрывов мембран.Все наблюдаемые эффекты зависели от дозы и времени, при этом требовалась более высокая дозировка по сравнению с предыдущими исследованиями. Кроме того, между разными линиями клеток наблюдались вариации в повреждении мембраны, при этом линия агрегированных клеток демонстрировала явный эффект диффузии, имитирующий эффект солидной опухоли. Результаты этого исследования расширяют наши знания о противораковых пептидах, давая представление о быстром воздействии модельного пептида мелиттина на раковые клетки.

Дополнительная информация

S1 Movie

Видео с оптического микроскопа, показывающее изменения, вызванные мелиттином для клеток AGS, как функцию времени.

(MP4)

S2 Movie

Видео с оптического микроскопа, показывающее изменения, вызванные мелиттином для клеток COLO205 в зависимости от времени.

(MP4)

S3 Movie

Видео с оптического микроскопа, показывающее изменения, вызванные мелиттином в клетках HCT-15, как функцию времени.

(MP4)

S4 Movie

Видео с покадровыми изображениями CLSM, показывающими изменение мембраны клеток AGS.

(MP4)

S5 Movie

Видео с покадровыми изображениями CLSM, показывающими изменение мембраны клеток COLO205.

(MP4)

S6 Movie

Видео с покадровыми изображениями CLSM, показывающими изменение мембраны клеток HCT-15.

(MP4)

Благодарности

Эта работа была частично выполнена в Исследовательском центре микронано-нанотехнологий RMIT (MNRF) в Викторианском узле Австралийского национального производственного предприятия (ANFF). Авторы выражают признательность за возможности и научную и техническую помощь RMIT Microscopy & Microanalysis Facility (RMMF), связанной лаборатории Microscopy Australia.

Сокращения

FBS2475 9246 955 955 955 955 FovEm 955 955 955 955 955 955 955 Fov эмиссионный сканирующий электронный микроскоп-7 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 43. Лю Дж., Сяо С., Ли Дж., Юань Б., Ян К., Ма Ю. Молекулярные детали промежуточных состояний действия мелиттина на клеточной мембране. BBA — биомембраны. 2018; 1860 (11): 2234–41. 10.1016 / j.bbamem.2018.09.007 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 44. Рамирес Л., Шехтман А., Панде Дж. Структурная характеристика и динамика позвоночника рекомбинантного пчелиного яда Мелиттина на основе ядерного магнитного резонанса.Биохимия. 2018; 57 (19): 2775 10.1021 / acs.biochem.8b00156 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 45. Сан Д., Форсман Дж., Вудворд К.Э. Многоступенчатое моделирование молекулярной динамики определяет высокую кооперативную активность мелиттина в распознавании и стабилизации пор мембраны. Ленгмюра: журнал ACS поверхностей и коллоидов. 2015; 31 (34): 9388–401. [PubMed] [Google Scholar] 46. Ладохин А.С., Селстед М.Э., Белый Ш. Определение размера пор мембран в липидных везикулах путем утечки совместно инкапсулированных маркеров: формирование пор мелиттином.Biophys J. 1997; 72 (4): 1762–6. 10.1016 / S0006-3495 (97) 78822-2 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 47. Хавар И.А., Ким Дж. Х., Кух Х. Дж. Улучшение доставки лекарств к солидным опухолям: прайминг микросреды опухоли. J Контролируемое высвобождение. 2015; 201: 78–89. [PubMed] [Google Scholar] 48. Таннок И.Ф., Ли К.М., Тунггал Дж. К., Коуэн Д.С., Егорин М.Дж. Ограниченное проникновение противоопухолевых препаратов через опухолевую ткань. Clin Cancer Res. 2002. 8 (3): 878–84. [PubMed] [Google Scholar] 49. Hou KK, Pan H, Ratner L, Schlesinger PH, Wickline SA.Механизмы опосредованной наночастицами трансфекции миРНК с помощью пептидов, полученных из мелиттина. САУ Нано. 2013. 7 (10): 8605–15. 10.1021 / nn403311c [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 50. Пан Х., Зоман Н.Р., Шлезингер PH, Ланца Г.М., Виклайн С.А. Цитолитические пептидные наночастицы («NanoBees») для лечения рака. Междисциплинарные обзоры Wiley: наномедицина и нанобиотехнология. 2011; 3 (3): 318–27. 10.1002 / wnan.126 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 51. Зоман Н.Р., Болдуин С.Л., Ху Г., Марш Дж. Н., Ланза Г.М., Хойзер Дж. Э. и др.Наноносители с молекулярной направленностью доставляют цитолитический пептид мелиттин специфически к опухолевым клеткам мышей, уменьшая рост опухоли. Журнал клинических исследований. 2009. 119 (9): 2830–42. 10.1172 / JCI38842 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

Как писатели украдут вашу жизнь и используют ее для художественной литературы ‹Literary Hub

Во многих случаях плагиат следует избегать и наказывать; в то же время он веками был в центре культурной жизни, принося много добра и много удовольствия.Великие плагиаты не совершали преступлений. И есть аргумент «добавленной стоимости», который многие считают убедительным. Но есть еще один вопрос, который во многих смыслах самый интересный.

Слово «плагиат» происходит от латинского «похищение», буквально «выходить с сетью». Впервые он был использован в современном понимании в 1 году нашей эры римским поэтом Марциалом. Плагиариус , по его мнению, был кем-то, кто украл чужого раба или поработил свободного человека.В эпиграмме № 32 он метафорически применяет этот термин к другому поэту, которого он обвиняет в том, что он заявил об авторстве стихов, написанных Марсьялом. Позже, в эпиграмме № 53, он использует не plagiarius , а слово, обозначающее вор ( мех ), применительно к тому, кого мы бы назвали плагиатором. Как сказал Марсьяль, плагиат не просто крадет тело человека; он похищает свою личность, ее внутреннюю жизнь.

Это перерастает в совершенно иную литературную кражу. И мемуарист, и писатель неизбежно вдохновляются людьми, которых они встречали, и будут использовать их в своих целях.Возможно, это не совсем плагиат, но это похожая территория. «Письмо — это воровство», — признает Халид Хоссейни, автор автобиографического романа «Бегущий за змеем» . «Вы адаптируете опыт и анекдоты в своих целях». Джон Чивер выразился мягче: «Художественная литература — это сила памяти, которую неправильно понимают».

И мемуарист, и писатель неизбежно вдохновляются людьми, которых они встретили, и будут использовать их в своих целях.

Это также может быть вырезано близко к документальной литературе, и границы раздела становятся размытыми. В недавнем эссе Александр Стил, сам мемуарист, написал: «В этом виде работы есть внутренний конфликт. Персонажи мемуаров — не настоящие люди, но неизбежно питаются кровью живых, как вампиры. И поэтому для этих реальных людей совершенно естественно защищать свою личность, как если бы они боролись за свою жизнь ».

Такие «похищения» могут причинить столько боли, если не больше, чем может почувствовать человек, чья работа является плагиатом.В середине 1960-х Майкл Холройд изучал свою двухтомную биографию Литтона Стрейчи, когда он взял тайм-аут, чтобы закончить свой первый и, как оказалось, единственный роман. «Это будет около пятидесяти тысяч слов и охватывать события, происходящие в семье за 24 часа», — писал Холройд много лет спустя. Книга была принята к публикации Хайнеманом в Великобритании и Холтом Райнхартом в США. «Во время долгого ожидания публикации я дал отцу прочитать машинопись — и он был в ужасе.Для него книга была вовсе не романом, а враждебной карикатурой на семью. «Вы изо всех сил стараетесь избегать каких-либо выгодных черт в чьих-либо персонажах», — написал он. . . . «Формула очевидна. Возьмите самую слабую сторону каждого персонажа — скелет в каждом шкафу — и увеличьте их непропорционально, чтобы они стали цельной, а не только частью картины. Пожалуйста, поймите, что вся семья едина в том, что им не нравится эта искаженная картина, которую вы их нарисовали ».

Семья на самом деле не читала книгу, но реакции отца Холройда было достаточно.В специальном введении к роману, переизданному в 2014 году после нескольких лет переиздания, Холройд объясняет, что он, в свою очередь, чувствовал. «Я был озадачен этой ужасной реакцией. Я заимствовал определенные черты характера, жесты, манеры речи и различные манеры у членов семьи, но закрепил их на персонажах с очень разными карьерами и прошлыми жизнями ».

Какими бы ни были мотивы его сына, отец Холройд был полон решимости прекратить публикацию. Возможно, имело место злоупотребление доверием, но никаких авторских прав и, конечно, никакого плагиата, требующего судебного преследования, поэтому вместо этого он пригрозил подать в суд за клевету.В Великобритании, где законы о клевете строги, Хайнеманн был обеспокоен, но Холройд был ошеломлен. «Сила его горя и гнева. . . шокировал меня. Поэтому я забрал роман и вернул аванс ». Однако Холт, посоветовавшись с юристом, пошел дальше, и книга была опубликована в Соединенных Штатах в 1969 году. «Мои копии не дошли до моей семьи, и я смог помочь своему отцу, который постепенно приближался к банкротству, своим авансом».

Что-то совсем другое произошло с публикацией романа Салмана Рушди « Дети полуночи, ».Когда его отец впервые прочитал книгу в 1980 году, он был убежден, что Ахмед Синай, пьяный патриарх романа, был сатирическим портретом, основанным на нем. Он был в ярости. Салман Рушди не отрицал, что этот персонаж был вымышленной версией своего родителя: «В моем юном, взбесившемся образе, — позже он объяснил, — я ответил, что не упомянул все гадости», — но он возражал против оскорбленная реакция его отца, которая, как он думал, выдавала грубое понимание того, как работают романы. «Мой отец изучал литературу в Кембридже, поэтому я ожидал, что у него сложный ответ на книгу.Но в случае с Рушди он никогда не отказывался от своего «похищения».

Мне кажется, что это использование чужой жизни — даже то, что она убегает от нее — похоже на то, что делает plagiarius . Но это просто то, чем занимаются писатели. В примечании к статье The New York Times Book Review писатель и драматург Роджер Розенблатт хорошо выразился:

Для волка писателя семья — это скопище сидящих уток. Там они собираются за столом Дня благодарения, бедняги — болтливые дяди, одурманенные наркотиками братья и сестры, враждующие пары — позируют для картины, хотя и не подозревают об этом.

Объекты пристального внимания писателя могут быть совершенно безупречными, но писатель наполнит свою семью любыми характеристиками, соответствующими его целям, потому что «недостатки делают чтение лучше, чем добродетели».

Литература изобилует рассказами о том, как писатели забирали жизни людей, которых они встречали, и использовали их в своих произведениях. Семья — это всего лишь ближайшие боеприпасы. Друзья и враги, любовники и бывшие возлюбленные — все это зерно на мельнице художника. Знаменитая хозяйка общества леди Оттолайн Моррелл (1873-1938) была источником вдохновения для госпожиБидлэйк в романе Олдоса Хаксли, для Гермионы Роддис в романе Д.Г. Лоуренса « влюбленных женщин», , для леди Кэролайн Бери в фильме Грэма Грина «» «Поле битвы» и для леди Сибиллин Куоррелл в « годах Алана Беннета». (По крайней мере, в первых двух случаях она чувствовала себя преданной авторами, которых считала друзьями.) Зельда Фицджеральд жаловалась на своего мужа, что в The Beautiful and Damned она могла «узнать часть моего старого дневника, который таинственным образом вскоре исчез. после свадьбы, а также обрывки писем, которые звучат смутно знакомо.Похоже, мистер Фитцджеральд считает, что плагиат начинается дома ». Писатель, который я редактировал, написал о главной героине, отец которой убил ее мать — ситуацию, взятую писателем из реальной жизни из беседы на подушке бывшего любовника, чья собственная семья пережила именно ту трагедию. Только когда книга была на пробе, он показал ее ей, и она была возмущена. Наказанный, он переписал роман. Многие писатели ведут себя не так хорошо, а если и поступают, то не так поздно.

В 1872 году сосед Толстого бросил свою любовницу Анну Пирогову.Железную дорогу недавно продлили в провинцию, и в отчаянии Анна бросилась к рельсам и бросилась под поезд. Труп был доставлен в ближайший машинный депо, и Толстой, узнав о трагедии, поехал осмотреть останки, хотя он никогда не знал эту женщину. Мы не возражаем, когда узнаем, что он использовал Анну Пирогову как источник вдохновения для Анны Карениной, или когда анонимная мадам Дельфина Деламар, после многочисленных супружеских измен в качестве жены невнимательного деревенского врача, в 1850 году отравляет себя и становится образцом для Эммы. Бовари.Когда в The Magic Mountain Томас Манн для своего портрета Mynheer Peeperkorn заимствовал некоторые черты Герхарта Гауптмана, крупнейшего драматурга того времени, разразился скандал, и Манн был вынужден обратиться напрямую к Гауптману: « Я согрешил против тебя. Я был в нужде, впал в искушение и уступил ему. Потребность была художественной ». И вот в чем дело. Это всего лишь три примера, когда, по правде говоря, ни один писатель с богатым воображением не заимствует у людей, которых он знает.Даже в этом случае, когда экземпляры приближаются к дому, мы можем обоснованно считать, что нашего человека похитили. *

Большинство писателей признают разрушительный, даже саморазрушительный элемент в выбранной ими профессии. «В молодости, — признался Питер Кэри, — если что-то стоило украсть, я украл бы это». Будь то художественная или документальная литература, большинство писателей воспринимают это «право» как должное. «Писатель разрушает дом своей жизни и использует его камни, чтобы построить дом своего романа», — писал Милан Кундера в книге «Искусство романа », не как извинение, а как описание того, как обстоят дела.†

Большинство писателей признают разрушительный, даже саморазрушительный элемент в выбранной ими профессии.
Джон Апдайк признался, что художественная литература — «грязное дело». У его искусства была «потрепанная сторона». . . . Художник, который работает словами и анекдотами, образами и фактами, хочет поделиться с нами не чем иным, как своей переваренной жизнью ». В своей книге Самосознание он освобождает себя от «нормальной внутрисемейной вежливости», добавляя, что «чем ближе и дороже они, тем безжалостнее их обслуживают.В интервью для телевизионного документального фильма 1982 года он прямо заявляет: «Мой долг как писателя — сделать лучшую запись жизни, которую я могу понять, как я ее понимаю, и этот долг для меня важнее всех других соображений». После того, как Апдайк и его первая жена сказали своим детям, что собираются развестись, он всего две недели спустя сочинил рассказ об этом эпизоде («Расставание»), «способ спрятаться», как он выразился в интервью 1968 года, «слишком. мгновенно превращая боль в мед ».
Норвежский писатель Карл Уве Кнаусгаард, чьи мемуары / роман из шести частей Моя борьба чрезвычайно разоблачают его близких родственников, сказал, что вопрос о том, должен ли писатель использовать свою семью в качестве материала, похож на вопрос: «Вы бы сэкономили? кот или Рембрандт из горящего дома? Он отвечает, что мы должны спасти кошку, предпочтя жизнь искусству, но он изображает свою семью в интимных, болезненных подробностях.
Грэм Грин написал знаменитую статью о «ледяной крошке в сердце», которая позволяет писателям плагиатировать жизни друзей — изображение, которое он взял из книги Ганса Андерсона «Снежная королева », на которой осколок стекла из разбитого волшебного зеркала скрывается в сердце маленького мальчика Кая. Для Грина ледяная крошка — необходимое снаряжение. Почти все писатели должны спросить, есть ли у них такая заноза и в какой степени.
* Это оставляет много места для ошибок.Примерно в 1999 году женщина-библиотекарь возбудила дело против Джо Кляйна и Рэндом Хауса, так как считала себя образцом для персонажа, имеющего роман с кандидатом в президенты Клинтона в фильме Кляйна Primary Colours , и таким образом была опорочена. Было сказано, что женщина привела в качестве доказательства описание стройных ног своего персонажа в романе, которое является точным описанием ее собственного. Фактически, Кляйн использовал в качестве вдохновения ноги своего литературного агента Кэти Роббинс (моей жены).Когда Кэти требовалось дать официальные показания, она удостоверилась, что на ней короткая юбка и высокие каблуки. Претензия была отклонена должным образом, суд Нью-Йорка постановил, что изображение «должно быть настолько близко» к реальному человеку, утверждающему, что его опорочили, что «читателю книги, зная настоящего человека, не составит труда связать эти два изображения».
† В крайнем случае, Дэвид Грэм Филлипс, которого Х.Л. Менкен рано провозгласил «ведущим американским романистом» своего времени, был смертельно ранен в 1911 году человеком, охваченным гневом на то, что, по его мнению, было изображением его семьи на одном снимке. произведений Филлипса.По дороге в больницу автор сказал, что ничего не знал о нападавшем и его семье. См. Питер Даффи, «Убийство персонажа», The New York Times Book Review, 16 января 2011 г., стр. 23.

Из книги Ричарда Коэна «КАК ПИСАТЬ КАК ТОЛСТОЙ ». Печатается с разрешения Random House. Авторские права © 2016 Ричард Коэн.
процессов | Бесплатный полнотекстовый | Магнитные поля в пищевой промышленности Перспективы, применения и модели действий
Основная цель применения МФ к микроорганизмам — снизить содержание видов, которые являются патогенными или портят пищевые продукты, и стимулировать рост полезных штаммов для производства ферментированных продуктов.Для инактивации микроорганизмов в закрытых пищевых продуктах Barbosa-Cánovas et al. [18] предлагают использование условий PMF в диапазоне от 5 до 50 Тл, от 1 до 100 импульсов, от 5 до 500 Гц, от 0 до 50 ° C и времени воздействия от 25 до 100 мкс, что снижает рост микроорганизмов как минимум на 2 log ( КОЕ) (единица образования колоний). Лю и др. [19] утверждают, что МП действует на пассивацию клеток, что тормозит их рост и размножение. Низкочастотные МП оказывают большое влияние на клетки и ткани и низкочастотные; высокоинтенсивные PMF разрушают мембраны и органеллы микробных клеток.Так, Ji et al [20] показали повреждение клеточной мембраны E. coli после применения SMF. Мембранные каналы E. coli подвержены влиянию SMF, как сообщили Strašák et al [21], они пришли к выводу, что SMF обладает бактерицидным эффектом, поскольку образует свободные радикалы, которые атакуют клеточную мембрану. Wu et al. [22] утверждают, что изменения в экспрессии и стабильности внутриклеточных белков могут быть другим способом, с помощью которого штаммы Listeria могут быть инактивированы при воздействии PMF. Кроме того, Байрактар [23] сообщил, что OMF изменяет активность ферментов в Saccharomyces cerevisiae, ограничивая их рост и даже вызывая смерть некоторых людей.Однако после воздействия МП у выживших наблюдается более высокая активность, что также связано с уровнями калия, кальция и магния. Когда SMF применялся к Saccharomyces cerevisiae, производство этанола было [24], что позволяет предположить, что механизмы превращения этанола в глюкозу, вероятно, были изменены. С другой стороны, Masakazu et al [25] сообщили, что при ферментации важно учитывать парамагнитное поведение. молекул кислорода и диамагнитного поведения углекислого газа под МП, что ограничивает массоперенос.У Lactococcus lactis применение МФ привело к отклонению метаболического пути с целью интенсификации или ингибирования продукции низина [26]. Дифференцированные результаты МФ на микроорганизмы привели к гипотезе о том, что они действуют под эффектом окна, что означает, что конкретные параметры могут быть настроены для каждого микроорганизма [27,28,29]. Так, для золотистого стафилококка предлагается PMF 1,5 мТл и 300 Гц [30]. Кроме того, следует учитывать фазу роста, форму и тип клетки, эукариотическую или прокариотическую [31].
Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.
Настройка вашего браузера для приема файлов cookie
Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:
В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.
Почему этому сайту требуются файлы cookie?
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.
Что сохраняется в файле cookie?
Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.
Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.
Навигация по записям
Описание липовый мед: Мёд липовый — описание, состав, калорийность и пищевая ценность
Белый клевер мед: Клеверный мёд, цвет, вкус, свойства, применение
Добавить комментарий Отменить ответ
Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *
Комментарий *
Имя *
Email *
Сайт

Рубрики
Мед
Разное
Советы
2025 © Все права защищены
↑

AFM	атомно-силовая микроскопия
CLSM	конфокальная лазерная сканирующая микроскопия
Dil	1,1′-диоктадецил-3,3,3 ‘, 3’-тетокарметан перхлорат
ДМСО	диметилсульфоксид
DPPC	дипальмитоилфосфатидилхолин
EthD-1	Гомодимер этидия
PBS	фосфатно-солевой буфер
PI	иодид пропидия
SEM	сканирующая электронная микроскопия
ВОЗ	Заявление всемирной организации здравоохранения CS был выпущен Согласно стипендиальной стипендии (RSS) в рамках программы исследовательской подготовки (RTP) Министерства образования и профессиональной подготовки правительства Австралии.PAR был поддержан старшим научным сотрудником вице-канцлера Университета RMIT. Доступность данных Все соответствующие данные находятся в рукописи и ее файлах с вспомогательной информацией. Ссылки 1. Последние глобальные данные по раку: бремя рака вырастает до 18,1 миллиона новых случаев и 9,6 миллиона смертей от рака в 2018 г. [пресс-релиз]. 12 сентября 2018 г., 2018 г. 2. Ван С., Цзя М. Антителотерапия при раке В: Чжан С., редактор. Прогресс в иммунотерапии рака.Дордрехт: Спрингер; Нидерланды; 2016. с. 1–67. [Google Scholar] 3. Явари Б., Махджуб Р., Саидиджам М., Райгани М., Сулеймани М. Возможное использование пептидов в лечении рака. Curr Protein Peptide Sci. 2018; 19 (8): 759–70. [PubMed] [Google Scholar] 5. Лю Ц-ц, Хао Д-джи, Чжан Ц., Ан Дж, Чжао Ц., Чен Б. и др. Применение пчелиного яда и его основного компонента мелиттина для лечения рака. Cancer Chemother Pharmacol. 2016; 78 (6): 1113–30. 10.1007 / s00280-016-3160-1 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6.Rady I, Siddiqui I, Rady M, Mukhtar H. Мелиттин, главный пептидный компонент пчелиного яда, и его конъюгаты в терапии рака. Cancer Lett. 2017; 402: 16–31. 10.1016 / j.canlet.2017.05.010 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 7. Премратаначай П., Чанчао С. Обзор противораковой активности продуктов пчеловодства. Азиатско-Тихоокеанский журнал тропической биомедицины. 2014. 4 (5): 337–44. 10.12980 / APJTB.4.2014C1262 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8. Чой Дж. Х., Джанг А. Ю., Лин С., Лим С., Ким Д., Пак К. и др.Мелиттин, антимикробный пептид, полученный из пчелиного яда, может воздействовать на устойчивый к метициллину Staphylococcus aureus. Отчет Мол Мед. 2015; 12 (5): 6483–90. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 9. Джо М., Пак М.Х., Коллипара П.С., Ан Би Джей, Сон Х.С., Хан С.Б. и др. Противораковое действие токсина пчелиного яда и мелиттина на раковые клетки яичников за счет индукции рецепторов смерти и ингибирования пути JAK2 / STAT3. Toxicol Appl Pharmacol. 2012. 258 (1): 72–81. 10.1016 / j.taap.2011.10.009 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 10.Kong G-M, Tao W-H, Diao Y-L, Fang P-H, Wang J-J, Bo P и др. Мелиттин вызывает апоптоз клеток рака желудка человека за счет активации митохондриального пути. Мир Дж. Гастроэнтерол. 2016; 22 (11): 3186–95. 10.3748 / wjg.v22.i11.3186 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11. Махмудзаде А., Зарриннахад Х., Багери К.П., Морадия А., Шахбаззаде Д. Первый отчет о выделении мелиттина из яда иранской медоносной пчелы и оценке его токсичности для клеток AGS рака желудка. J Chin Med Assoc.2015; 78 (10): 574–83. 10.1016 / j.jcma.2015.06.008 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12. Муларски А., Вилкш Дж. Дж., Ван Х, Хоссейн М. А., Уэйд Дж. Д., Сепарович Ф. и др. Атомно-силовая микроскопия раскрывает механобиологию литического действия пептидов на бактерии. Ленгмюра: журнал ACS поверхностей и коллоидов. 2015; 31 (22): 6164–71. [PubMed] [Google Scholar] 13. Раджабнеджад С.Х., Мохтарзаде А., Абноус К., Тагдиси С.М., Рамезани М., Разави Б.М. Направленная доставка мелиттина к раковым клеткам с помощью аптамера против нуклеолина AS1411.Препарат Дев Инд Фарм. 2018; 44 (6): 982–7. 10.1080 / 03639045.2018.1427760 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Зарриннахад Х., Махмудзаде А., Хамиди М., Махдави М., Моради А., Багери К. и др. Апоптотический эффект мелиттина, очищенного из яда иранской медоносной пчелы, на линию клеток рака шейки матки человека HeLa. Int J Pept Res Ther. 2018; 24 (4): 563–70. 10.1007 / s10989-017-9641-1 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Zhang S-F, Chen Z. Мелиттин оказывает противоопухолевое действие на клетки немелкоклеточного рака легкого.Отчет Мол Мед. 2017; 16 (3): 3581–6. [PubMed] [Google Scholar] 16. Типгомут С., Вонгпроммун А., Такео Е., Иттиудомрак Т., Путонг С., Чанчао С. Мелиттин индуцировал остановку цикла клеток G1 и апоптоз в клетках бронхогенной карциномы человека Chago-K1 и ингибировал дифференцировку клеток ТНР-1 в связанные с опухолью макрофаги. Азиатский Pac J Cancer Prev. 2018; 19 (12): 3427–34. 10.31557 / APJCP.2018.19.12.3427 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Хименес Д., Санчес-Муньос О.Л., Сальгадо Х.Прямое наблюдение нанометровых пор мелиттина в нанесенных липидных монослоях. Ленгмюра: журнал ACS поверхностей и коллоидов. 2015; 31 (10): 3146–58. [PubMed] [Google Scholar] 18. Тостесон М., Холмс С., Разин М., Тостесон Д. Мелиттин-лизис эритроцитов. Международный журнал исследований структуры, функции и генезиса биомембран. 1985. 87 (1): 35–44. [Google Scholar] 19. DeGrado WF, Musso GF, Lieber M, Kaiser ET, Kezdy FJ. Кинетика и механизм гемолиза, вызванного мелиттином и синтетическим аналогом мелиттина.Biophys J. 1982; 37 (1): 329–38. 10.1016 / S0006-3495 (82) 84681-X [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 20. Bei C, Bindu T, Remant KC, Peisheng X. Двойной защищенный наномелиттин для безопасного и эффективного уничтожения раковых клеток. J Mater Chem B. 2014; 3 (1): 25–9. 10.1039 / C4TB01401D [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Ling CQ, Li B, Zhang C, Zhu DZ, Huang XQ, Gu W и др. Ингибирующее действие рекомбинантного аденовируса, несущего ген мелиттина, на гепатоцеллюлярную карциному.Энн Онкол. 2005. 16 (1): 109–15. 10.1093 / annonc / mdi019 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 22. Цянь Си-И, Ван К-Л, Фанг Ф-Ф, Гу В, Хуанг Ф, Ван Ф-З и др. Онколитический аденовирус с тройным контролем, экспрессирующий мелиттин, оказывает ингибирующее действие на гепатоцеллюлярную карциному. Int J Clin Exp Pathol. 2015; 8 (9): 10403 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 23. Sun D, Sun M, Zhu W, Wang Z, Li Y, Ma J. Противораковая сила и механизм нового слитого токсина, активируемого опухолью, DLM. Токсины (Базель). 2015; 7 (2): 423 10.3390 / токсины7020423 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24. Ван Д., Ху Л., Су М., Ван Дж., Сюй Т. Получение и функциональная характеристика слитого белка фактор роста эндотелия сосудов человека-мелиттин с анализом противоопухолевой активности in vitro и in vivo. Int J Oncol. 2015; 47 (3): 1160 10.3892 / ijo.2015.3078 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25. Чжао Х., Фэн Х, Хань В., Дяо Й., Хань Д., Тиан Х и др. Повышенное связывание и уничтожение клеток гепатоцеллюлярной карциномы in vitro под действием мелиттина при связывании с новым нацеливающим пептидом, скринингом на фаговом дисплее.Журнал пептидной науки. 2013. 19 (10): 639–50. 10.1002 / psc.2542 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 26. Дюфрен Ю.Ф., Андо Т., Гарсия Р., Альстенс Д., Мартинес-Мартин Д., Энгель А. и др. Режимы визуализации атомно-силовой микроскопии для применения в молекулярной и клеточной биологии. Природа Нанотехнологии. 2017; 12 (4): 295–307. 10.1038 / nnano.2017.45 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 27. Мюллер DJ, Дюфрен Ю.Ф. Атомно-силовая микроскопия: наноскопическое окно на поверхности клетки. Trends Cell Biol. 2011; 21 (8): 461–9.10.1016 / j.tcb.2011.04.008 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 28. Parot P, Dufrêne YF, Hinterdorfer P, Le Grimellec C, Navajas D, Pellequer J-L, et al. Прошлое, настоящее и будущее атомно-силовой микроскопии в науках о жизни и медицине. J Mol Recognit. 2007. 20 (6): 418–31. 10.1002 / jmr.857 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 29. Nečas D, Klapetek P. Gwyddion: программное обеспечение с открытым исходным кодом для анализа данных SPM. Центральноевропейский физический журнал. 2012; 10 (1): 181–8. [Google Scholar] 32. Barranco SC, Townsend CM Jr., Casartelli C, Macik BG, Burger NL, Boerwinkle WR и др. Создание и характеристика модельной системы in vitro для аденокарциномы желудка человека. Cancer Res. 1983; 43 (4): 1703–1709. [PubMed] [Google Scholar] 33. Уолш Э.Г., Махер С., Девочелл М., О’Брайен П.Дж., Бэрд А.В., Брейден Д.Дж. Анализ высокого содержания для определения цитотоксичности антимикробного пептида, мелиттина и некоторых структурных аналогов. Пептиды. 2011; 32 (8): 1764–73. 10.1016 / j.peptides.2011.06.006 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 35.Уэстон К.М., Алсалами М., Раисон Р.Л. Изменения клеточной мембраны, вызванные цитолитическим пептидом, мелиттином, обнаруживаются с помощью лазерного рассеяния 90 градусов. Цитометрия. 1994. 15 (2): 141–147. 10.1002 / cyto.9207 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 36. Демпси CE. Действие мелиттина на мембраны. BBA — Обзоры биомембран. 1990; 1031 (2): 143–61. 10.1016 / 0304-4157 (90) -х [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 37. Оршолич Н. Пчелиный яд в лечении рака. Раковые метастазы Ред. 2012; 31 (1): 173–94. [PubMed] [Google Scholar] 39.Гайски Г., Гарай-Врховач В. Мелиттин: литический пептид с противораковыми свойствами. Environ Toxicol Pharmacol. 2013. 36 (2): 697–705. 10.1016 / j.etap.2013.06.009 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 40. Сын DJ, Lee JW, Lee YH, Song HS, Lee CK, Hong JT. Терапевтическое применение пчелиного яда и входящих в его состав соединений, обладающих противоартритным, болеутоляющим и противораковым действием. Pharmacol Ther. 2007. 115 (2): 246–70. 10.1016 / j.pharmthera.2007.04.004 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 42. Ханке В., Метфессель К., Вильмсен Х.-Ю, Кац Э., Юнг Г., Бохейм Г.Мелиттин и химически модифицированный трихотоксин образуют поры с множеством состояний аламетицинового типа. BBA — биомембраны. 1983; 727 (1): 108–14. 10.1016 / 0005-2736 (83)

Национальный медико-хирургический центр им. Н.И. Пирогова (Санкт-Петербургский клинический комплекс)

Аспирантура РНИМУ (Российский национальный исследовательский медицинский университет) имени Н. И. Пирогова

ФГАОУ ВО РНИМУ ИМ. Н.И. ПИРОГОВА МИНЗДРАВА РОССИИ, ОКПО 01963278

Как доехать до Медицинский университет им. Н. И. Пирогова (Мед. университет им. Пирогова) в Обручевском на автобусе, метро, поезде или маршрутке

Общественный транспорт до Медицинский университет им. Н. И. Пирогова (Мед. университет им. Пирогова) в Обручевском

Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова

Обзоры вуза

О РНИМУ им. Н.И. Пирогова

Образование в РГИМУ им. Н. И. Пирогова

Структура РГИМУ им. Н. И. Пирогова

Внеучебная жизнь студентов РГИМУ им. Н. И. Пирогова

В какой Московский МЕД вуз лучше поступать?

Минобрнауки не рассматривало вопрос об общем переводе вузов на «удаленку»

Эффективное лечение тяжелых пациентов с COVID-19 с помощью тоцилизумаба

Гибридный интерфейс мозг-компьютер с воображением движения и связанной с ошибкой мозговой активностью

3.3.1.Сравнение переданной производительности онлайн (TRcal-TEon)

3.3.2. Сравнение точности классификации в блоках R / L и R / L + G / B

Мембранные эффекты мелиттина при раке желудка и колоректального рака

Abstract

Введение

Методы

Клеточная культура

Проточная цитометрия (FACS)

Оптическая микроскопия

Живое / мертвое окрашивание и флуоресцентная микроскопия

Окрашивание мембран и конфокальная визуализация

Подготовка проб для АСМ

АСМ-визуализация

Анализ изображений АСМ

SEM

Результаты

Смерть раковых клеток, вызванная мелиттином, в зависимости от концентрации

Мелиттин вызывает быстрые изменения клеточных мембран

Лечение мелиттином приводит к гибели клеток в течение 15 минут

Мембранные изменения

Визуализация с высоким разрешением мембран и повреждений клеток, вызванных обработкой мелиттином

Обсуждение

Заключение

Благодарности

Список литературы

Мембранные эффекты мелиттина при раке желудка и толстой кишки

Кэролайн Солиман

Сара Иствуд

Ви Кхан Чыонг

Paul A.Рамсленд

Аарон Элбурн

Abstract

Введение

Методы

Культура клеток

Проточная цитометрия (FACS)

Оптическая микроскопия

Живое / мертвое окрашивание и флуоресцентная микроскопия

Окрашивание мембран и конфокальная визуализация

Подготовка образца AFM

AFM-визуализация

Анализ изображения АСМ

SEM

Результаты

Смерть раковых клеток, вызванная мелиттином, как функция концентрации

Мелиттин вызывает быстрые изменения клеточных мембран

Обработка мелиттином приводит к гибели клеток в течение 15 минут

Изменения мембран

Визуализация с высоким разрешением мембран и повреждений клеток, вызванных обработкой мелиттином

Обсуждение

Заключение

Дополнительная информация

S1 Movie

S2 Movie

S3 Movie

S4 Movie

S5 Movie

S6 Movie

Благодарности

Сокращения

Доступность данных

Ссылки

Как писатели украдут вашу жизнь и используют ее для художественной литературы ‹Literary Hub

процессов | Бесплатный полнотекстовый | Магнитные поля в пищевой промышленности Перспективы, применения и модели действий

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie