Клиника автор мед: ООО АВТОР-МЕД ДЕТСКАЯ КЛИНИКА | РБК Компании

от 1100 Р

от 1100 Р

от 1100 Р

Контакты

Москва, Ленинский проспект, 123

Ежедневно

+7 (495) 648-64-80; +7 (495) 438-01-06; +7 (495) 438-10-17

[email protected]

Отзывы

Сообщения не найдены

Обновлено: 25/01/2020, 18:13

Автор-Мед, медицинский центр, Россия, Москва, Ленинский проспект, дом 123

Акушерство, перинатология

Аллергология, иммунология

Анестезиология и реаниматология

Артроскопия и артрология

Ветеринария

Гастроэнтерология

Гематология, трансфузиология

Гемодиализ, нефрология

Генетика

Гинекология, эндоскопическая гинекология

Дезинфекция и стерилизация

Дерматология, венерология

Детская хирургия

Детские болезни: педиатрия, неонатология

Диетология, лечебное питание

Инфекционные болезни, ВИЧ, паразитология

Информационные технологии, телемедицина

Кардиология

Кардиохирургия

Косметология, лечебная косметика

Косметологическая, пластическая хирургия

Лабораторная диагностика, анализы

Лапароскопия (эндоскопическая хирургия)

Логопедия

ЛОР: отолариноларингология, эндоринохирургия

Маммология

Медицинское право

Микробиология, вирусология

Наркология

Народные средства, нетрадиционная медицина

Неврология

Нейрохирургия

Онкология

Офтальмология — глазные болезни

Проктология

Психиатрия

Психология

Психотерапия

Пульмонология

Ревматология

Радиология: рентген, УЗИ, КТ, МРТ

Рефлексотерапия, иглоукалывание, Су Джок

Санитария, гигиена, эпидемиология

Сексология и сексопатология

Сестринское дело, уход за больными

Скорая помощь, медицина катастроф, военная медицина

Сосудистая хирургия, ангиология, флебология

Стоматология

Судебная медицина, патанатомия

Терапия

Торакальная и торакоскопическая хирургия

Травматология и ортопедия

Трансплантология

Туберкулез — фтизиатрия

Урология и андрология, эндоурология

Фармакология, токсикология

Физиотерапия, реабилитация, массаж, ЛФК, курортология

Функциональная диагностика

Хирургия общая и абдоминальная

Челюстно-лицевая хирургия

ЭКО, ИКСИ, ВРТ, репродуктология: лечение бесплодия

Экономика и организация здравоохранения, страхование

Эндокринология, диабет

Эндоскопия

Клиника Автор-Мед — цены, адрес, телефон, отзывы

Что может быть дороже здоровья ребенка? Абсолютно ничего. Именно потому, что от состояния здоровья наших детей зависит будущее нашей страны, основатели Детской клиники восстановительной медицины «Автор-Мед» решили посвятить свои силы, знания, опыт и время целям улучшения здоровья подрастающих поколений и профилактике различных заболеваний. Ребенок, как никто другой, нуждается в поддержке и защите. Профессиональный коллектив нашей клиники помогает каждому своему пациенту. У нас создана максимально комфортная обстановка для пребывания детей и их родителей.

Высококвалифицированные специалисты в разных направлениях медицины вкладывают свою душу и профессионализм в создание атмосферы доверия между маленькими пациентами и врачами. Только так можно убедить ребенка и его родителей в необходимости применения не только классических методик, но и других, не менее действенных методов терапии. К ним относятся: гомеопатия, гирудотерапия, остеопатия, цветотерапия, мануальная терапия, галотерапия, бальнеология, фитотерапия, рефлексотерапия, психотерапия, косметология.

Наши специалисты, имея фундаментальные знания в различных сферах медицины и многолетний опыт терапии самых разных заболеваний в отечественных и зарубежных клиниках, считают, что здоровье человека – это не только отсутствие заболеваний, но и состояние душевного и физического благополучия. При этом мы ни в коей мере не умаляем значение традиционных методов лечения и использования самого современного медицинского оборудования. Стиль нашей деятельности можно описать несколькими словами: индивидуальный (авторский) подход к любому пациенту.

Основные направления медицины нашей клиники: педиатрия, хирургия, ортопедия, неврология, кардиология, аллергология, дерматология, эндокринология, отоларингология, офтальмология, стоматология, логопедия, нефрология, эндокринология, физиотерапия. Для установления правильного диагноза у нас проводятся различные виды лабораторных исследований, УЗИ, диагностика на современном оборудовании. Наши специалисты проводят диспансеризацию и вакцинацию пациентов.

(PDF) Клиническая и экономическая эффективность заправки пчелиным медом при лечении язв диабетической стопы

Эффективность против устойчивых к антибиотикам штаммов бактерий; it

предотвращает рост бактерий, даже если раны сильно инфицированы

[9–11]. Даже когда это было неэффективно, оно никогда не приводило к появлению устойчивых штаммов

[12]. Антимикробная активность пчелиного меда

объясняется несколькими свойствами, в том числе осмотическим эффектом

, естественным низким pH и производством

перекиси водорода [13-15].Поэтому кажется, что

настало время возродить мед в качестве повязки для этих стойких ран.

2. Цель работы

Это исследование было проведено с целью изучить ценность меда как

для местного лечения язв диабетической стопы. Кроме того, был проведен анализ

раневых факторов и критериев пациента, которые влияют на результат

медовой повязки, чтобы оптимизировать ее использование.

3. Пациенты

Тридцать пациентов с жалобами на язвы диабетической стопы, поступившие

в хирургическое отделение университетской больницы Суэцкого канала,

Исмаилия, Египет, в период с марта по сентябрь

2007 были представлены в этом исследовании.

Пациенты всех возрастов и обоих полов были включены в это исследование

. В настоящую работу

были включены все пациенты с язвами диабетической стопы, независимо от их глубины

, площади или наличия инфекции. Отбор пациентов производился путем случайного распределения

пациентов, поступающих в хирургическое отделение, либо через

амбулаторных пациентов, либо через консультации стационарных пациентов до достижения размера выборки

(30 пациентов). Это было достигнуто через 6 месяцев.

Критериями исключения были ожидающие ампутации (из-за

серьезного сосудистого нарушения и / или токсемии) и

пациентов с ослабленным иммунитетом (например, химиотерапия или стероидная терапия).

Так как все пациенты, которые посещают хирургическую клинику, в основном

с резистентным типом раны, то есть с как минимум 3-месячным анамнезом

прекращение прогрессирования или ухудшения раны, было

не было необходимости иметь контрольную группу, так как Сами пациенты были

считались контрольными до начала медовой заправки.Кроме того,

тот же режим, который применялся в предыдущем периоде

был таким же, как и в исследовании, за исключением использования меда в качестве местной повязки

для стандартизации всех факторов, реализованных в лечении ран

в оба периода.

4. Методы

Площадь поверхности всех ран была использована для оценки исходного размера

и оценки прогресса. Для ран неправильной формы площадь поверхности

рассчитывалась путем умножения двух наибольших размеров.Если рана

была примерно круглой, четырехугольной или треугольной, площадь поверхности

рассчитывалась в соответствии с геометрическими правилами.

Кроме того, для глубоких ран (достигающих подкожной ткани

) для оценки степени и стадии язв использовалась Классификация диабетических ран Техасского университета [16]

.

При первом посещении пациентка была оценена на основе

детального анамнеза и тщательного клинического обследования.Периферическая нейропатия

и сосудистая недостаточность оценивались клинически

по сенсорным, моторным и трофическим изменениям. После лечения диабетической стопы

из раны был взят бактериальный мазок

для культивирования и определения чувствительности. Если рана была

, первоначально показывала признаки инвазивной инфекции, комбинацию

ципрофлоксацина и митронидазола начинали в течение 5 дней. Если во время исследования должна была появиться инфекция

, антибактериальная терапия

должна была проводиться в соответствии с результатом последнего посева.

Поскольку мы убеждены, что обработка меда может изменить

его эффективность (изменяя соотношение его компонентов), в этой работе использовался чистый сырой необработанный коммерческий мед

(без добавок, пастеризации или манипуляций

). Чтобы обеспечить высочайшее качество и чистоту меда

, он был поставлен фирмой

факультета сельского хозяйства Александрийского университета. Мед был

применен в виде пропитанной марли.

4.1. Приготовление пропитанной медом марли

В данном исследовании использовалась нестерильная марля со средними порами.

По площади поверхности раны определялась длина кусочка марли

(она должна покрывать всю рану

и свисать с краев в два слоя для одного куска). Количество частей

зависело от глубины раны

(марля должна заполнять всю глубину раны до уровня выше

окружающей кожи).

Перед перевязкой кусок марли был отрезан (

примерно на 10 см больше, чем желаемый размер) и погружен в контейнер глубиной

, который должен быть плавно сложен на себя несколькими слоями

. Другой край остался свисать с края контейнера

. Марлю оставляли пропитывать медом

во время подготовки ложа раны. Избыток меда был удален

, особенно в сильно сочащихся ранах, путем пропускания

марли между твердо противоположными средним и кольцевым пальцами.

Пациенты и их родственники обучались методу

подготовки и наложения пропитанной медом марли во время первого посещения

или во время госпитализации.

4.2. Техника перевязки

Пациенты лечились в амбулаторных условиях, за исключением случаев, когда

было показанием к госпитализации (плохой контроль уровня глюкозы, необходимость

хирургической обработки раны, недостаточность сосудов и т. Д.). Как только

были преодолены, пациенты

были направлены в поликлинику для последующего наблюдения.

Рана была тщательно обработана (иногда под наркозом

) и тщательно промыта физиологическим раствором (антисептик №

). Сильно инфицированные раны после обработки промывали теплой водопроводной водой

. После просушивания раны накладывали марлю пропитанную медом

. Марля удерживалась с непропитанной части

(снималась после наложения ножницами).

Пушистая повязка была наложена поверх марли и удерживалась повязкой

.

Частота перевязок зависела от количества

экссудатов; всякий раз, когда повязка намокает, ее следует заменить

тем же способом. После того, как однократная ежедневная перевязка

была достигнута, при условии принятия всех остальных параметров,

пациент был выписан и еженедельно наблюдался в амбулаторной клинике

.

Все пациенты получали комплекс витаминов группы В на всю жизнь. Здоровье

Обучение прошли все пациенты.В образовательной программе

подчеркивалась важность: последующего наблюдения в клинике, гигиены стопы

, ухода за ногтями, правильной обуви, режима питания и лечения

недавно зажившей язвы стопы.

исследования диабета и клиническая практика 89 (2010) 276–281 277

Антибиотики | Бесплатный полнотекстовый | Клиническое значение мануки и меда медицинского качества для лечения устойчивых к антибиотикам инфекций: систематический обзор

3.1. Мед Манука

3.2. Мед медицинского класса

3.3. Клиническое применение меда

Антибактериальная и антивирулентная активность меда манука против генетически разнообразных штаммов Staphylococcus pseudintermedius

ВВЕДЕНИЕ

Staphylococcus pseudintermedius — комменсальная бактерия кожи и слизистых оболочек, вызываемая у 80% популяций собак и часто ассоциированная с оппортунистическими инфекциями (1). такие как послеоперационные инфекции и пиодермия (2, 3). От этих инфекций все чаще выделяется метициллин-резистентный S. pseudintermedius (MRSP), и теперь отчеты показывают, что S.pseudintermedius демонстрируют устойчивость к ряду антибиотиков, включая эритромицин, клиндамицин, ципрофлоксацин и гентамицин (4). Эта устойчивость к нескольким классам антибиотиков сделала S. pseudintermedius глобальной клинической проблемой в ветеринарии, поскольку лечение инфекций становится все более проблематичным. Распространенность S. pseudintermedius имеет последствия, выходящие за рамки ветеринарии, поскольку исследования показали, что S. pseudintermedius может вызывать зоонозные инфекции у людей, что делает его серьезной проблемой для здоровья (5, 6).

Зоонозный потенциал этого организма был признан только недавно, поскольку инфекции S. pseudintermedius у людей ранее ошибочно определялись как Staphylococcus aureus из-за их фенотипического сходства и положительности коагулазы (7). Эти виды имеют общие черты, такие как приобретенная устойчивость к метициллину, способность образовывать биопленки, модуляция иммунной системы хозяина и выработка протеолитических ферментов и токсинов (8). Недавние достижения в диагностике позволили более четко разделить эти два вида и показали, что, будучи зоонозным агентом, S.pseudintermedius способен колонизировать носовые ходы человека. Эта колонизация является резервуаром для повторного заражения как животных, так и людей, а также потенциальным резервуаром для переноса гена устойчивости к противомикробным препаратам (9). Поскольку S. pseudintermedius демонстрирует снижающийся уровень чувствительности к антибиотикам и может вызывать тяжелую инфекцию как у животных, так и у людей, есть основания для оценки того, можно ли использовать новые стратегии или новые противомикробные препараты для улучшения вариантов лечения (10).

Мед манука используется в качестве местного противомикробного агента при инфекциях как у людей, так и у животных, проявляя активность против широкого спектра патогенов (11). Антимикробная активность обусловлена ​​наличием в меде множества противомикробных соединений, наиболее изученным из которых является метилглиоксаль, вместе с высоким осмотическим потенциалом (обзор активности меда манука см. В ссылке 12). Мед манука использовался для успешного искоренения инфекций S. aureus в клинике и может подавлять рост устойчивых к метициллину S.aureus (MRSA) и Pseudomonas aeruginosa в низких концентрациях in vitro (13, 14). Механизм действия меда манука против MRSA был частично выяснен, и из-за фенотипического сходства между S. aureus и S. pseudintermedius весьма вероятно, что он будет столь же эффективен в ингибировании S. pseudintermedius и MRSP (15). Более поздние исследования также подчеркнули способность меда манука повышать эффективность некоторых клинически значимых антибиотиков против MRSA, что также может быть полезно в случае трудноизлечимых устойчивых к антибиотикам S.pseudintermedius инфекции (15). Параллельно мед манука используется ветеринарами, в частности, для лечения ран у лошадей (16). Предыдущая работа продемонстрировала активность in vitro против широкого ряда бактериальных изолятов лошадей (17), а также недавно сообщалось о активности in vivo (18).

Здесь мы стремились установить, может ли мед манука подавлять рост ряда генетически разнообразных штаммов S. pseudintermedius, повышать чувствительность клинических S.pseudintermedius изолирует ряд антибиотиков и снижает экспрессию ключевых факторов вирулентности. Активность в этих областях указывает на потенциал меда манука для лечения трудноизлечимых инфекций, вызванных S. pseudintermedius.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Секвенирование генома показало, что изоляты были генетически разнообразны и содержали новые последовательности MLST. Поскольку об этих изолятах ранее не сообщалось, они были секвенированы, чтобы исследовать их профили мультилокусного типирования последовательностей (MLST) и устойчивости к противомикробным препаратам (AMR), а также определить, насколько близки изоляты были генетически.Чтения секвенирования и сборки генома из этого исследования доступны в NCBI через запись BioProject PRJNA561036. Последовательности аллелей MLST были получены из сборок и отправлены в базу данных Staphylococcus pseudintermedius PubMLST. Новые аллельные последовательности были обнаружены для локуса pta изолята C и локуса ack изолята G. Всего в этом наборе данных было идентифицировано 10 новых типов последовательностей (ST), при этом идентифицировано еще 8 ST, 4 из которые принадлежали ST71 (информацию о сборке и MLST можно найти в таблице S1 в дополнительном материале).Сводка различных генов устойчивости к антибиотикам, присутствующих в каждом изоляте, представлена ​​в таблице 1.

Сводка генов устойчивости к антибиотикам, обнаруженных путем секвенирования каждого изолята

Филогения SNP ядра генома, учитывающая удаление обнаруженной рекомбинации и состоящий из изолятов, задокументированных в рамках этого исследования, наряду с геномными сборками Staphylococcus pseudintermedius, показал очень мало очевидной кластеризации изолятов на основе географического положения или состояния здоровья человека, от которого они были изолированы (рис.1).

Филогения максимальной вероятности 156 изолятов Staphylococcus pseudintermedius, реконструированных из основных SNP, с удалением обнаруженных сайтов рекомбинации. Образцы, упорядоченные в этом исследовании, распределены по дереву, как отмечено внешними черными треугольниками. Цветные полосы указывают географическое расположение источников изоляции. Изоляты с метаданными, относящимися к здоровью хоста, имеют оконечные узлы, окрашенные в зеленый цвет для исправности или в красный для подтвержденной инфекции.

Тестирование минимальной ингибирующей / бактерицидной концентрации меда и антибиотиков показало универсальную активность меда против S.pseudintermedius протестированы. Предыдущая работа нашей группы показывает, что мед манука обладает антибактериальной активностью в отношении Staphylococcus sp., включая изоляты, устойчивые к антибиотикам (AR) (11, 13). В этом исследовании все 18 изолятов S. pseudintermedius продемонстрировали чувствительность к низким концентрациям меда манука (≤12% [вес / объем]), при этом 9/18 ингибировалось при 12% (вес / объем) и 9/18 ингибировалось при 10%. % (вес / объем) мед манука. Противомикробная активность не была обнаружена при концентрациях менее 8% (вес / объем) меда манука.Минимальная бактерицидная концентрация была ≤12% (вес / объем) меда манука для всех изолятов.

Также определялась чувствительность изолятов S. pseudintermedius к тетрациклину, пенициллину, хлорамфениколу, гентамицину и оксациллину. Что касается тетрациклина, пенициллина и гентамицина, более половины протестированных изолятов (9, 16 и 11 изолятов соответственно) имели контрольные точки, которые указывали на устойчивость в соответствии с руководящими принципами Европейского комитета по тестированию чувствительности к противомикробным препаратам (EUCAST).Только хлорамфеникол и оксациллин оставались эффективными против большинства изолятов, при этом 10 и 14 изолятов, соответственно, оставались чувствительными.

Оценка взаимодействий с антибиотиками показала, что мед способен повышать активность большинства протестированных антибиотиков. В последнее время наблюдается значительный интерес к комбинированной терапии, т. Е. Комбинациям антибиотиков с другими антибиотиками, пептидами и экстрактами растений для увеличения количества антибиотиков. эффективность (19, 20). Поскольку изоляты в протестированной здесь коллекции демонстрируют высокий уровень устойчивости к обычно используемым антибиотикам, было высказано предположение, что эффективность антибиотиков может быть улучшена, если их использовать в сочетании с сублетальными концентрациями меда манука.

Мед манука увеличивал чувствительность ряда изолятов к различным антибиотикам, с небольшим, но статистически значимым увеличением размера зоны, наблюдаемым для большинства изолятов (рис. 2, рис. S1). Точное повышение чувствительности было специфичным как для штамма, так и для антибиотика. Полная информация об ингибировании каждого изолята пятью антибиотиками с медом и без него показана на рис. S1. Количество изолятов, у которых обнаружены значительно большие зоны ингибирования ( P ≤ 0.05) при лечении сублетальными концентрациями меда (5% [вес / объем]) в сочетании с антибиотиком по сравнению с одним антибиотиком были следующие: тетрациклин 89% (16/18), пенициллин 56% (10/18), хлорамфеникол 83%. (15/18) и гентамицин 67% (12/18). В некоторых случаях (изоляты C, D, E, K, M и X для тетрациклина и изоляты O и X для хлорамфеникола) изоляты проявляли полную устойчивость к антибиотику в стандартной среде; однако в присутствии субингибиторного меда зона ингибирования присутствовала.Когда мед манука использовался в сочетании с оксациллином, ни один из изолятов не показал повышенной чувствительности, а 33% (6/18) изолятов показали значительно сниженную чувствительность (рис. 2, данные для отдельных изолятов на рис. S1).

Диаметр зоны ингибирования. На панелях от А до Е показаны диаметры зон (в мм) с хлорамфениколом, гентамицином, оксациллином, пенициллином и тетрациклином, соответственно, против 18 изолятов S. pseudintermedius в MHB (контроль) по сравнению с сублетальной концентрацией меда манука, 5% (вес / vol) (лечится).Изоляты, показывающие значительные изменения чувствительности, отмечены звездочками (**, P ≤ 0,01; ***, P ≤ 0,001; ****, P ≤ 0,0001). Точки данных показывают средние значения, а полосы ошибок представляют 95% доверительный интервал.

Как правило, наблюдалась хорошая корреляция между фенотипом AMR, наблюдаемым в диско-диффузионных анализах, и генотипом каждого изолята. Было несколько случаев, когда были обнаружены расхождения между генотипом и фенотипом, но только два из них заслуживают внимания.Во-первых, в изоляте G не было обнаружено генов, ингибирующих бета-лактам, несмотря на явную фенотипическую устойчивость к пенициллину, но не к оксациллину. Аналогичное наблюдение было сделано для изолята X, который был фенотипически устойчивым к хлорамфениколу, несмотря на отсутствие идентифицированного гена устойчивости, кодирующего ферменты инактивации хлорамфеникола (приобретенные гены) (таблица S1). Таким образом, в этом случае мутационные эффекты 50S рибосомной субъединицы являются вероятным источником устойчивости.

Характеристика активности фактора вирулентности показала, что мед манука способен снижать активность нескольких ключевых факторов вирулентности.Ранее было показано, что наряду с антимикробной активностью мед манука влияет на экспрессию белков и генов у близкородственных видов S. aureus (21). Поэтому было интересно определить, может ли мед манука вызывать фенотипические изменения в профиле вирулентности изолятов S. pseudintermedius. Первоначально гемолитическая, протеазная, липазная и ДНКазная активность изолятов оценивалась без меда манука, наряду со способностью изолята к агрегации (свойство, связанное с образованием биопленок).

Все 18 изолятов показали гемолитическую, протеолитическую, ДНКазную и агрегационную активность. Ни один из изолятов не продемонстрировал способности липазы или лецитиназы (данные не показаны). Затем активность повторно оценивали с использованием сублетальной концентрации (5% [вес / объем]) меда манука. Как и в случае с антибиотической активностью (рис. 2), присутствие субингибирующих концентраций меда могло вызвать изменения в вирулентной активности изолятов S. pseudintermedius. Как и в случае с изменениями чувствительности к антибиотикам, изменения вирулентной активности оказались в высокой степени специфичными для изолята.В большинстве изолятов наблюдаемые эффекты были незначительными, хотя и статистически значимыми. Однако четыре штамма показали полное снижение активности гемолиза (штаммы G и H) или протеолиза (штаммы B и C). Еще два штамма (D и F) показали полное снижение как гемолиза, так и протеолиза. Количество изолятов, которые значительно изменили ( P ≤ 0,05) гемолиз, протеолиз и активность ДНКазы при выращивании в сублетальной концентрации меда (5% [вес / объем]) по сравнению с контрольными клетками, было гемолитическим 56% (10 / 18), протеаза 50% (9/18) и ДНКаза 72% (13/18) (рис.3, рис. S2).

Мед манука способен подавлять выработку фактора вирулентности S. pseudintermedius. ДНКаза (A), гемолитическая (B) и протеолитическая (C) активности 18 изолятов S. pseudintermedius в отсутствие (контроль) или присутствие (лечение) сублетальной (5% [вес / объем]) концентрации меда манука. . Изоляты, показывающие значительные изменения чувствительности, отмечены звездочками (**, P ≤ 0,01; ****, P ≤ 0,0001). Точки данных показывают средние значения, а полосы ошибок представляют 95% доверительный интервал.

Субингибирующие концентрации меда манука подавляли агрегацию и снижали биомассу зрелой биопленки суспензий S. pseudintermedius. Все 18 изолятов проявляли способность к агглютинированию. После 24 часов инкубации контрольные изоляты имели среднюю оптическую плотность при 600 нм (OD ₆₀₀ ), равную 25% от значения 0 часов, что указывает на то, что бактериальные клетки агглютинировали, что привело к снижению OD ₆₀₀ (рис. 4А). Напротив, 15 изолятов показали значительное снижение ( P ≤ 0.001) способность к агглютинированию после инкубации с сублетальной (5% [вес / объем]) концентрацией меда со средней оптической плотностью 65% от значения 0-h (фиг. 4A). Общее количество жизнеспособных клеток через 24 часа инкубации с медом манука и без него показало, что повышенная оптическая плотность не была связана с увеличением числа клеток, при этом общее количество жизнеспособных клеток показало, что ∼4 × 10 ⁷ КОЕ / мл жизнеспособных клеток оставалось в каждый сосуд после инкубации. За исключением изолятов B и H, которые были умеренными биопленкообразователями, и изолята O, который был слабым биопленкообразователем, все изоляты были сильными биопленкообразователями, как определено Stepanovic et al.(22).

Способность изолятов S. pseudintermedius к агрегации снижается в присутствии субингибиторного 5% (мас. / Об.) Меда манука. (А) Влияние сублетального (5% [вес / объем]) меда манука на 18 изолятов S. pseudintermedius. Изоляты показали значительное снижение ( P ≤ 0,001) их способности к агрегации при обработке 5% (масс. / Об.) Медом манука. (B) Влияние увеличения концентрации меда манука на предварительно сформированные 24-часовые биопленки со значительным (**, P ≤ 0.01; ***, P = 0,001) уменьшение биопленки наблюдается при концентрациях ≥30% (вес / объем). Точки данных указывают на средние значения, а полосы ошибок представляют 95% доверительный интервал.

Как и ожидалось, концентрации меда манука, необходимые для разрушения сформировавшейся (24 часа) биопленки, были выше, чем МПК (рис. 4В). Было отмечено снижение биомассы при концентрациях ≥20% (вес / объем) меда манука, причем снижение становилось значительным ( P ≤ 0,01) при концентрациях ≥30%.

ОБСУЖДЕНИЕ

Увеличение S.pseudintermedius устойчивость к антибиотикам беспокоит как клиницистов, так и ветеринаров (23, 24). Требуются новые стратегии инфекционного контроля, и во время открытия необходимо использовать подход «Единое здоровье», чтобы гарантировать гармоничное использование терапевтических средств во всех медицинских дисциплинах. Клиницисты и ветеринары ранее подвергались критике за чрезмерное использование антибиотиков (25), а после публикации «Обзора устойчивости к противомикробным препаратам» (под председательством Джима О’Нила) (26) появилось стремление улучшить сотрудничество между медицинскими ветеринарные и сельскохозяйственные дисциплины (27) в решении проблемы УПП.В отчете О’Нила (26) также подчеркивается, что разработка новых терапевтических средств для повышения активности или замены лечения антибиотиками является важной стратегией для сохранения нашей способности эффективно лечить инфекционные заболевания.

Зоонозные патогены вызывают озабоченность, поскольку ненадлежащее лечение и устранение инфекций животных может повысить тяжесть заболевания и повысить сопротивляемость лечению любой последующей инфекции человека. Другие представители рода Staphylococcus , такие как S.aureus и S. epidermidis, являются стойкими колонизаторами человеческого тела, вызывая значительную заболеваемость и смертность, и демонстрируют высокие уровни УПП. Было также показано, что S. pseudintermedius колонизирует здоровых людей (28) и, по-видимому, имеет аналогичные паттерны развития болезни и устойчивости к другим членам этого рода (23, 24, 29).

Штаммы S. pseudintermedius в этом исследовании показали широкий диапазон генетического разнообразия (рис. 1), включая присутствие нескольких новых комбинаций MLST.Генетическое разнообразие этих образцов позволило оценить, насколько эффективным может быть мед манука для лечения инфекций S. pseudintermedius, поскольку несколько штаммов S. pseudintermedius с различными профилями устойчивости к антибиотикам могут совместно колонизировать в очаге инфекции (30). Большинство изолятов также содержат гены, которые, как известно, придают устойчивость к антибиотикам, при этом многие изоляты также демонстрируют фенотипическую устойчивость к одному или нескольким протестированным антибиотикам. Только в нескольких случаях наблюдались расхождения между паттернами фенотипической устойчивости и наличием приобретенных генов AMR.Однако, поскольку геномы, представленные в этой статье, не являются закрытыми, возможно, что гены присутствуют в несобранных областях генома. Кроме того, наличие точечных мутаций, приводящих к устойчивости, не оценивалось и, таким образом, могло предложить альтернативные стратегии устойчивости.

Представленные здесь результаты свидетельствуют о том, что низкие концентрации меда манука могут подавлять рост клинических изолятов S. pseudintermedius с бактерицидным механизмом действия. Все изоляты проявляли чувствительность к меду манука и имели диапазон чувствительности к обычным протестированным антибиотикам.Это согласуется с предыдущими исследованиями, которые продемонстрировали, что мед манука может ингибировать S. aureus, MRSA и промежуточный ванкомицин S. aureus (VISA) в низких концентрациях (31–33). Единственное исследование, изучающее способность меда манука подавлять S. pseudintermedius, было проведено Uri et al. (34), и это исследование показало низкий уровень антибактериальной активности. Однако это, вероятно, было связано с проблемами с однородностью медового раствора, использованного в исследовании, как подчеркнули авторы этой статьи, а не с истинным отражением эффективности меда манука, особенно с учетом многих in vitro и в vivo исследования, показывающие эффективность против других видов бактерий (11, 13, 21).

Представленные здесь результаты тестирования на чувствительность к антибиотикам отражают общую тенденцию повышения устойчивости к противомикробным препаратам, наблюдаемую во всем мире, при этом 88% протестированных изолятов проявляют устойчивость к двум или более антибиотикам (рис. 2). Уровни устойчивости к гентамицину и хлорамфениколу, представленные здесь, в целом аналогичны результатам более ранних исследований, где устойчивость S. pseudintermedius к хлорамфениколу и гентамицину составляла ~ 75 и 55% соответственно, тогда как уровни устойчивости к тетрациклину были ниже в этом исследовании ( на ∼50%), чем сообщалось ранее (94.2%) (35, 36). В нашей коллекции было только четыре изолята MRSP, что является более низкой частотой резистентности, чем сообщалось ранее (35, 36).

В дополнение к получению профилей чувствительности этих бактерий и с учетом растущего интереса к использованию местной и комбинированной терапии стафилококковых инфекций (37), была протестирована способность меда манука усиливать антибиотическую активность. Наши результаты показывают, как сублетальные концентрации меда могут значительно улучшиться ( P <0.05) активность антибиотиков различных классов для большинства протестированных изолятов (рис. 2). Исключением был оксациллин, для которого комбинация с медом не показала улучшения активности против любого из изолятов MRSP. Важно отметить, что в шести изолятов чувствительных к метициллину S. pseudintermedius (MSSP) мед манука был связан со значительным снижением эффективности оксациллина, хотя изоляты оставались чувствительными к оксациллину в соответствии с контрольными точками. Это было неожиданным открытием, поскольку предыдущие исследования выявили синергизм между медом и оксациллином при тестировании против MRSA, а также сообщили о возможном механизме действия этого синергизма через путь MecR1 (32, 38).Интересно отметить, что ранее наблюдалась синергия для MRSA с механизмом устойчивости mecA , и все четыре MRSP здесь обладают резистентностью, опосредованной mecA (Таблица S1), такой же, как и в MRSA, поэтому подобный ответ можно было бы ожидать.

Это различие в ответах может быть исследовано в дальнейшей работе. Тот факт, что изоляты с измененным ответом фенотипически чувствительны к метициллину и, следовательно, вряд ли содержат функционирующий ген mecR1 , подчеркивает, почему ответ отличается от ранее наблюдаемого.Не было показано, что ген mecR1 распространен среди изолятов S. pseudintermedius, при этом недавнее исследование обнаружило его только в 7 из 17 протестированных изолятов (39). Также было замечено, что некоторые изоляты MRSP не содержат mecR1 (40), что снова показывает, что даже там, где изоляты действительно обладают фенотипической устойчивостью к пенициллину, мед может не действовать на них через ранее описанный путь MecR1. Наблюдаемое снижение чувствительности к оксациллину при одновременном воздействии сублетальных концентраций меда манука является важным наблюдением для медицинской практики, где оксациллин является широко используемым лечением, поскольку предполагает, что использование меда манука в сочетании с другими протестированными здесь антибиотиками будет более эффективным. эффективнее, чем оксациллин, как часть потенциальной комбинированной терапии.Наше наблюдение также подчеркивает необходимость, которая ранее подчеркивалась в отчете О’Нила (26), в новых инструментах диагностики у постели больного, чтобы лучше определять подходящие методы лечения пациентов с инфекцией. Если клиницисты могут быстро различать оппортунистические инфекции, вызванные S. aureus и S. pseudintermedius, то можно выбрать подходящие комбинированные методы лечения, улучшающие клинический исход и уменьшающие возможность сохранения микробов. В ветеринарной практике, где С.pseudintermedius инфекция встречается чаще, оксациллин не рассматривается для лечения кожных инфекций первой линии (41), и поэтому наше наблюдение имеет меньшее значение. Следует также отметить, что наши данные не показали снижения чувствительности к пенициллину, что указывает на то, что комбинированная терапия медом манука / оксациллин может не подходить для лечения S. pseudintermedius, хотя это маловероятно для всех пенициллинов. Исследование механизма, с помощью которого мед ингибирует S.инфекция pseudintermedius может пролить свет на то, почему существует это несоответствие между S. pseudintermedius и S. aureus при лечении оксациллином и медом; генетическая вариация между двумя видами может объяснить снижение эффективности комбинации в этом случае. Несмотря на это, а также с учетом того, что все чаще сообщается о высоком уровне устойчивости к антибиотикам, представленные здесь результаты показывают, что существует реальный потенциал для использования меда отдельно или в качестве местного адъюванта при лечении некоторыми антибиотиками для повышения эффективности антибиотиков против S.pseudintermedius инфекции.

Наряду с исследованием синергизма, антивирулентные соединения представляют большой интерес, поскольку они снижают патогенность, не влияя на рост бактерий и не нанося вреда желаемым микробам-хозяевам (42). Поскольку известно, что штаммы S. pseudintermedius продуцируют ряд факторов вирулентности, которые повышают их способность вызывать тяжелые заболевания как у животных, так и у людей (23, 43), влияние сублетальных концентраций меда манука на активность факторов вирулентности у S.pseudintermedius. Изучение влияния сублетальных концентраций меда на вирулентность предоставило новые доказательства того, что мед может значительно снизить активность фактора вирулентности у некоторых изолятов S. pseudintermedius (рис. 3). При инфекции способность продуцировать широкий спектр факторов вирулентности позволяет бактериям разрушать ткань хозяина, уклоняться от иммунной системы и приобретать питательные вещества хозяина (5, 44). Все изоляты в этом исследовании проявляли различные уровни β-гемолитической, протеазной и ДНКазной активности, а также способность к аутоагглютинированию.Все они были отрицательными по активности липазы и лецитиназы, что хорошо коррелировало с предыдущими результатами, отображающими профили вирулентности изолятов S. pseudintermedius от людей и собак (45). Представленные здесь данные подтверждают, что сублетальные концентрации меда значительно снижают активность гемолизина в половине протестированных изолятов S. pseudintermedius, что указывает на штамм-специфический механизм действия. Поскольку наблюдалось значительное увеличение гемолитической активности одного изолята, потребовалась бы дополнительная работа, прежде чем это можно было бы рассматривать как представляющее интерес в клинических условиях.На сегодняшний день имеется мало доказательств роли β-гемолизина в патогенности S. pseudintermedius. У S. aureus продукция β-гемолизина способствует эффективной колонизации кожи (46). Также считается, что он вызывает цитотоксичность клетки-хозяина, действует как лигаза биопленок и дает селективное преимущество тем штаммам, которые его продуцируют (47). Таким образом, логично предположить, что способность меда снижать β-гемолитическую активность могла бы, таким образом, снизить способность S. pseudintermedius колонизировать клетки-хозяева и вызывать цитотоксичность и снижать зоонозную передачу.

Аналогичным образом, представленные здесь результаты показывают, что сублетальные дозы меда манука значительно снижают способность половины штаммов S. pseudintermedius продуцировать протеазу и не повышают активность протеазы ни в одном из других штаммов. Поскольку способность стафилококков продуцировать протеазы связана с их способностью уклоняться от иммунитета хозяина, а также расщеплять белки хозяина и вносить вклад в распространение бактерий внутри хозяина (48, 49), снижение этой активности может иметь клиническое значение.Ранее опубликованные работы показали, что мутанты S. aureus с нулевой протеазой обладают сниженной вирулентностью и уменьшением диссеминации и инвазии in vivo (50). S. pseudintermedius продуцирует аналогичный спектр протеаз, и, если они будут выполнять роль, аналогичную тем, которые наблюдаются в S. aureus, тогда мед может иметь важную функцию в снижении тяжести локализованной инфекции и сокращении распространения S. pseudintermedius в организме хозяина. .

С продолжительностью инфекции и толерантностью к антибиотикам связана активность ДНКазы, которая, как сообщается, способствует образованию агрегатов бактерий, поддержанию биопленки (51) и разложению внеклеточных ловушек нейтрофилов (52).Все эти действия помогают бактериям уклоняться от иммунной системы. Снижение активности ДНКазы, наблюдаемое более чем у половины протестированных S. pseudintermedius (13/18), снова предполагает роль меда манука в снижении бактериальной вирулентности и поддержке функции хозяина при инфекции. Возможно, что значительное снижение активности ДНКазы после обработки медом с суб-МПК в этом исследовании могло быть связано с наблюдаемым значительным снижением агрегации. Способность агглютинировать была связана со способностью изолятов образовывать биопленки, что является важным механизмом устойчивости (53).

Агрегация, как известно, частично зависит от компонентов, отображаемых на поверхности клетки (54), но роль ДНКазы в агрегации Staphylococcus менее изучена. В некоторых исследованиях наблюдали повышенную экспрессию ДНКазы в планктонных клетках (55), в то время как другие описывали повышенную экспрессию ДНКазы в сидячих клетках (56). Было показано, что присутствие внеклеточной ДНК (еДНК) улучшает способность бактерий к агрегации и прилипанию к поверхностям (57), поэтому можно ожидать, что снижение экспрессии ДНКазы приведет к усилению агрегации.Поскольку воздействие сублетальных концентраций меда манука привело к снижению как активности ДНКазы, так и агрегации бактерий, здесь вполне могли действовать дополнительные факторы. Необходима дальнейшая работа по выяснению механизмов, вызывающих эти эффекты.

Способность образовывать и сохраняться внутри биопленок — это известный признак вирулентности Staphylococcus , который снижает восприимчивость популяций in vivo к противомикробной терапии и является резервуаром для системной инфекции (58).Значительные усилия были направлены на удаление и инактивацию биопленок S. aureus и S. epidermidis, при этом мед мануки показал значительные перспективы для обоих видов (11, 59, 60). Представленные здесь данные свидетельствуют о том, что изоляты S. pseudintermedius, вероятно, не являются исключением из этой тенденции, поскольку все изоляты в нашей коллекции показывают статистически значимое снижение биомассы зрелой биопленки при концентрациях меда манука ≥30% (вес / объем). Это говорит о том, что мед манука способен диспергировать предварительно сформированные биопленки, и что отдельные индивидуумы, выделившиеся из биопленок, быстро поддаются антимикробным эффектам, которые мед манука продемонстрировал против планктонных популяций.

Представленные данные показывают, что in vitro мед манука способен снижать активность тестируемых факторов вирулентности; однако следует проявлять осторожность при интерпретации данных, поскольку наблюдаемые изменения in vitro могут не воспроизводиться in vivo . Хотя анализы активности, используемые в этом исследовании, позволяют исследователям измерять различия в активности супернатанта, этот метод имеет ограничения, поскольку он не делает различий между изменением активности из-за изменений эффективности белка и эффектами, вызванными изменениями в экспрессии генов и / или производство белка.Чтобы предоставить больше информации о точном механизме модуляции фактора вирулентности манука медом, методы, используемые здесь, должны быть объединены с анализом присутствия генов (полногеномное секвенирование [WGS]), экспрессии генов (количественная ПЦР [qPCR] и RNAseq) и экспрессия белков (2D-гель-электрофорез и масс-спектрометрия). Эти дополнительные анализы, хотя и выходящие за рамки данной работы, будут представлять значительный интерес для выяснения механизма действия манука меда против S.pseudintermedius. Дальнейшее тестирование in vivo необходимо, чтобы убедиться, что значительное снижение активности, выделенное здесь, приводит к биологическому различию вирулентности бактерий у животных и людей.

Из представленных здесь результатов ясно, что один мед манука может эффективно подавлять чувствительный к антибиотикам и устойчивый S. pseudintermedius в низких концентрациях и, в сочетании с некоторыми антибиотиками, может повысить их эффективность. Также очевидно, что добавление сублетальных доз меда манука к S.pseudintermedius оказывает множественное влияние на вирулентную активность этих изолятов, причем более чем у половины из них наблюдается значительное снижение вирулентной активности in vitro . S. pseudintermedius признан основной причиной послеоперационных инфекций у мелких животных, а в последнее время — колонизатором и условно-патогенным микроорганизмом человека (6). Наши данные показывают, что использование меда манука в клиническом лечении против инфекций, вызываемых S. pseudintermedius, возможно, и что мед манука потенциально может использоваться в качестве адъюванта к антибиотикам для трудно поддающихся лечению штаммов с множественной антибиотикорезистентностью.Дальнейшее исследование влияния меда манука на чувствительность к антибиотикам с помощью микроразбавления бульона поможет определить, какие взаимодействия являются антагонистическими, индифферентными или синергическими. Кроме того, есть убедительные доказательства того, что мед манука может действовать как местное антивирулентное средство, помогающее снизить тяжесть инфекций, вызываемых S. pseudintermedius, и ограничить дальнейшую колонизацию. Необходимо провести исследования механизмов, с помощью которых мед манука вызывает эти эффекты, чтобы определить наблюдаемые механистические процессы и штамм-специфические эффекты.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Штаммы и условия культивирования. На протяжении всего исследования использовали восемнадцать изолятов S. pseudintermedius от собак. Все были предоставлены Ветеринарной школой Ноттингема, Великобритания (18 изолятов). Эти культуры хранили при -80 ° C на криогенных гранулах и перед тестированием выращивали на агаре Мюллера-Хинтона (MHA) (Oxoid, UK) при 37 ° C. На протяжении экспериментов использовали бульон Мюллера-Хинтона (MHB) там, где требовалась жидкая среда.

Противомикробные агенты. Стерильный мед манука медицинского качества (Derma Sciences, Medihoney) использовался повсюду и был подарком от Derma Sciences, Европа.Диски для определения чувствительности к противомикробным препаратам пенициллина (1 единица), тетрациклина (30 мкг), хлорамфеникола (30 мкг), гентамицина (10 мкг) и оксациллина (1 мкг) были приобретены в Oxoid (Гэмпшир, Великобритания). Эти концентрации были выбраны, чтобы соответствовать точкам разрыва в таблицах точек разрыва EUCAST.

Экстракция / секвенирование ДНК. ДНК экстрагировали из культур с использованием набора Qiagen DNAeasy в соответствии с инструкциями производителя перед количественным определением выхода и качества с помощью спектрофотометрических и флуорометрических методов.Библиотеки ДНК для секвенирования были сконструированы с использованием набора Illumina Nextera XT и секвенированы на платформе Illumina MiSeq с использованием набора реагентов V3 и считываний 2 × 300 п.н.

Сборка и анализ генома. Чтения необработанных последовательностей пропускались через cutadapt (v2.0) (61) для удаления адаптеров последовательности nextera только перед сборкой генома с помощью SPAdes (v3.12.0) в осторожном режиме с исправлением ошибок чтения и автоматическим обнаружение k-мер (62). Quast (v5.0.0) (63) использовался для оценки качества сборки генома.Последовательности аллелей MLST, идентификаторы и ST изолятов были опрошены относительно геномных сборок с использованием инструмента MLST (v2.16) (в настоящее время не опубликовано, T. Seemann, mlst [Github, https://github.com/tseemann/mlst]). Основная филогения SNP была реконструирована с использованием изолятов из этого исследования вместе с 137 геномными сборками S. pseudintermedius, полученными из NCBI и с использованием вариантных сайтов, называемых SNIPPY (v4.3.2) (в настоящее время не опубликовано, T. Seemann, SNIPPY [Github, https: / /github.com/tseemann/SNIPPY]). Рекомбинация учитывалась с использованием габбинов (v 2.3.1) (64) перед выводом филогенетического дерева максимального правдоподобия с использованием FastTree (v 2.1.10), применяя обобщенную модель с обратимой во времени (гтп) (65). Окончательное дерево было аннотировано с использованием iTOL (66). Наличие генов устойчивости к противомикробным препаратам определяли с помощью ABRICATE (v0.8.11) (T. Seemann, Abricate [Github, https://github.com/tseemann/abricate]). Порог идентичности последовательностей> 90% был использован для определения хорошего совпадения между генами базы данных и совпадениями в последовательностях генома.

Тестирование минимальной ингибирующей / бактерицидной концентрации. МИК антимикробной чувствительности меда манука оценивали с использованием адаптированной методологии тестирования чувствительности к противомикробным препаратам Европейского комитета. Вкратце, клетки средней логарифмической фазы разводили до 0,5 стандарта МакФарланда, разведенного 1: 100, перед тем, как его смешали 1: 1 с MHB до конечного объема 200 мкл (создавая плотность клеток ∼5 × 10 ⁵ КОЕ / мл. ) с добавлением меда манука с шагом 2% (вес / объем), разбавленного MHB. Затем изоляты выращивали в течение периода от 16 до 20 ч при 37 ° C перед измерением оптической плотности на длине волны 600 нм (OD ₆₀₀ ).МИК считалась самой низкой концентрацией, которая ингибировала рост клеток (определяемая как измерения OD ₆₀₀ с поправкой на холостой пробы, равные ≤0). Минимальную бактерицидную концентрацию (МБК) определяли путем высевания 10 мкл клеток на MHA из всех лунок, показывающих отсутствие роста через 18 часов, и инкубации еще 18 часов при 37 ° C. МБК определяли как самую низкую концентрацию, которая снижала жизнеспособность исходного бактериального инокулята на ≥99,9%. Лунки с положительным контролем содержали среду роста и бактериальные клетки без антибиотика или меда, лунки с отрицательным контролем (используемые для коррекции холостого опыта) содержали среду роста и не содержали клеток.

Дисковая чувствительность к антибиотикам. Чувствительность изолятов к антибиотикам отдельно и в комбинации с сублетальными концентрациями меда манука определяли с помощью дисковой диффузии на MHA. Вкратце, клетки разводили до 0,5 стандарта МакФарланда, а затем с помощью стерильного ватного тампона создавали газонную пластину и немедленно накладывали диски с антибиотиками с помощью стерильных пинцетов. Планшеты инкубировали от 16 до 20 ч при 37 ° C перед измерением диаметра зон ингибирования.Размеры зон интерпретировали с использованием таблиц клинических точек останова EUCAST v. 9.0; там, где точки останова S. pseudintermedius были недоступны, использовались точки останова для S. aureus. Для скрининга потенциального синергизма между антибиотиками и медом, диско-диффузионный анализ был повторен с постстерилизацией с добавлением MHA сублетальной дозой 5% (вес / объем) меда манука.

Тестирование вирулентности. Все изоляты были проверены на их способность продуцировать факторы вирулентности гемолизин, протеазу, липазу, лецитиназу и ДНКазу.Чашки с агаром готовили путем добавления 5% (об. / Об.) Овечьей крови, 5% (об. / Об.) Сухого обезжиренного молока или 5% (об. / Об.) Яичного желтка (Sigma, UK). Добавки добавляли после автоклавирования среды и перемешивали перед разливом в чашки. ДНКазный агар был приобретен непосредственно у Sigma и приготовлен в соответствии с инструкциями производителя. Перед использованием планшеты уравновешивали до комнатной температуры и на поверхности агара вырезали лунки диаметром 5 мм с использованием стерильного пробкового сверла. Ночные культуры разбавляли до плотности OD ₆₀₀ 0.От 8 до 1,0 (эквивалент плотности клеток ∼1 × 10 ⁸ КОЕ / мл) и гранулировали перед ресуспендированием в 0,4% ГАМ с 5% (масс. / Об.) Медом или без него. Объем 100 мкл этой скорректированной клеточной суспензии добавляли в лунки планшета, и планшеты быстро охлаждали, чтобы мягкий агар быстро схватился и образовал пробку внутри лунки. Затем планшеты инкубировали в течение 24 часов при 37 ° C, и зону активности вокруг роста бактерий регистрировали как положительный результат для каждого фактора вирулентности.

Автоагрегация.Для оценки агрегации ночные культуры доводили до OD ₆₀₀ 0,9, а затем 1 мл переносили в 1,5-мл пробирку Эппендорфа, центрифугировали при 14000 × g в течение 5 минут и осадок ресуспендировали в 1 мл забуференного фосфатом раствора. физиологический раствор (PBS) (Oxoid, UK) или PBS + мед (5% [вес / объем]). Затем посевной материал переносили в микрокюветы и измеряли OD ₆₀₀ через 0 и 24 часа при статической инкубации при комнатной температуре между измерениями. Бактериальные клетки, которые сильно агглютинируют, не остаются в водной фазе, что приводит к снижению OD ₆₀₀ , тогда как клетки, у которых предотвращена агглютинация, показывают OD ₆₀₀ , который остается относительно стабильным.Процентное изменение OD ₆₀₀ было рассчитано через 24 часа. Подсчет жизнеспособных клеток производился с использованием метода Майлза Мисры до и после инкубации, чтобы подтвердить, что любые различия в аутоагрегации не были вызваны гибелью или пролиферацией клеток.

Оценка биопленки. Чтобы определить влияние меда манука на зрелую биопленку, штаммы S. pseudintermedius разводили, как описано для тестирования МИК, и разбавляли 1: 1 MHB до конечного объема 200 мкл перед инкубацией в течение 24 часов при 37 ° C. чтобы позволить образование биопленки.После инкубации супернатант осторожно удаляли из лунок, чтобы не повредить биопленку, и один раз промывали стерильным PBS. Мед манука разбавляли до концентраций от 10% до 50% (вес / объем) (с шагом 10%) в MHB. Объем 200 мкл этих растворов добавляли к биопленкам перед инкубацией в течение следующих 24 ч при 37 ° C. После инкубации супернатант удаляли, а лунки дважды осторожно промывали PBS перед фиксацией оставшихся биопленок метанолом в течение 15 минут и окрашиванием кристаллическим фиолетовым (1% [об. / Об.], Разведенном в дистиллированной воде) в течение 15 минут.Излишки красителя смывали до тех пор, пока вода не становилась прозрачной, а лунки сушили перед добавлением 7% уксусной кислоты (разведенной в дистиллированной воде) в течение 15 минут для растворения связанного кристаллического фиолетового. Поглощение измеряли на длине волны 590 нм.

Способность штаммов S. pseudintermedius прикрепляться к поверхностям и образовывать биопленку определяли в соответствии с методом и классификацией, предложенными Stepanovic et al. (22). Культуры биопленок были созданы, зафиксированы и окрашены, как описано выше, а затем классифицированы как слабо, умеренно или сильно прилипшие, на основании следующей формулы: OD _C C = слабая адгезия; 2 × OD _C C = умеренное прилипание; и 4 × OD _C C определяли как три стандартных отклонения выше среднего значения OD отрицательного (только среда) контроля.

Статистический анализ. Все тесты были выполнены в трех экземплярах; поскольку данные были непараметрическими (определялись с помощью теста Шапиро-Уилка), они были проанализированы с использованием метода Манна-Уитни (для автоагрегации) и метода Краскала Уоллиса (для всех других экспериментов) (GraphPad Prism 8). Если не указано иное, все столбцы на рисунках показывают средние значения, а столбцы ошибок представляют 95% доверительный интервал.

Доступность данных. Чтения секвенирования и сборки генома из этого исследования доступны в NCBI через запись BioProject PRJNA561036.

Доступные номера следующие: изолят A (SAMN12347716, SRR9998529), изолят B (SAMN12347717, SRR9998521, SRR9998530), изолят C (SAMN12347718, SRR9998528, SRR9998519), изолят D (SRR1298528, SRR9998519), изолят D. ), изолят F (SAMN12347721, SRR9998525), изолят G (SAMN12347722, SRR9998517), изолят H (SAMN12347723, SRR9998524), изолят I (SAMN12347724, SRR9998523), изолят J (SAMN12347725, SRR9998520) изолят M (SAMN12347727, SRR9998534), изолят N (SAMN12347728, SRR9998535), изолят O (SAMN12347729, SRR9998536), изолят P (SAMN12347730, SRR9998526, SRR9998527), изолят Q (SRR9998526, SRR9998527), изолят Q (SRR9998526, SRR9998577), изолят Q (SRR12987731, SAMN12981699, SAMN1298532) изолировать X (SAMN12347733, SRR9998532).

Преимущества медового чая | Livestrong.com

Может ли горячий чай с медом облегчить ваши симптомы?

Перед тем, как пойти к врачу, посмотрите, что чай может вам помочь. Хотя горячий чай с медом не является альтернативой лекарствам, отпускаемым по рецепту, он может временно уменьшить симптомы простуды и гриппа и помочь уменьшить менструальные спазмы. Если симптомы длятся дольше недели, обратитесь к врачу за дополнительным лечением.

Уменьшить менструальные спазмы

Горячий чай может помочь уменьшить боль и чувство стеснения в животе, связанные с менструальными спазмами, говорит Пенни Уайз Будофф, M.Д., автор книги «Больше никаких менструальных спазмов и других хороших новостей». Заварите чашку травяного чая, добавьте мед по вкусу и выпейте, чтобы усилить кровоток в организме и уменьшить менструальные спазмы. Поставьте теплую чашку на колени, чтобы использовать теплую жидкость для увеличения кровотока в области живота. Не пейте чай, содержащий кофеин, так как это может усугубить менструальные спазмы и еще больше усугубить их.

Успокойте кашель

Мед может быть эффективным средством от кашля, говорят в клинике Майо.Налейте в кружку горячую воду, затем добавьте пакетик с травами и 2 ч. меда. Выпейте чай, вдыхая пар из чашки, это поможет ослабить заложенность и стеснение в груди. Мед покрывает горло, предотвращая раздражение, которое может вызвать кашель. Пейте смесь по мере необходимости, чтобы уменьшить кашель. Это средство может быть особенно полезно для подавления кашля перед сном.

Успокаивает ларингит

Пейте горячий травяной чай с медом, чтобы вылечить ларингит и успокоить симптомы, говорит отоларинголог Роберт Федер, M.D. Сохранение гидратации с помощью травяного чая, сока или воды поможет увлажнить и увлажнить голосовые связки. Кроме того, мед покрывает горло, снимая раздражение. Вдыхайте пар, поднимающийся из кружки чая, медленно потягивая его. Вдыхание пара поможет увлажнить голосовые связки, что ускорит заживление и поможет временно уменьшить симптомы ларингита.

Влияние вагинального продукта Flixweed-Honey на цервицит: клиническое испытание

[1] Марраццо Дж.М., Мартин Д.Х.Ведение женщин с цервицитом. Clin Infect Dis. 2007; 44 (S3): 102-110.

[2] Ласк М.Дж., Конечны П.Цервицит: обзор. Curr Opin Infect Dis. 2008; 21 (1): 49-55.

[3] Ворковски К.А., Болан Г.А. Рекомендации по лечению заболеваний, передающихся половым путем. Морб Смертельный Недельный Реп . 2015; 64 (33): 1-137.

[4] Вудс Дж. Л., Бейли С. Л., Хенсель Д. Д., Скарлок А. М. Цервицит у подростков: понимают ли врачи диагностику и лечение? J Pediatr Adolesc Gynecol. 2011; 24 (6): 359-364.

[5] Паавонен Дж., Кричлоу К.В., ДеРоуэн Т., Стивенс К.Э., Кивиат Н., Брунхэм Р.К., Стамм В.Е., Куо С.-С., Хайд К.Э., Кори Л.Этиология воспаления шейки матки. Am J Obstet Gynecol. 1986; 154 (3): 556-564.

[6] Тейлор С.Н., Ленсинг С., Швебке Дж., Лиллис Р., Мена Л.А., Нельсон А.Л., Ринальди А., Сэйлор Л., Макнил Л., Ли Дж.Й. Распространенность и исход лечения цервицита неустановленной этиологии. Sex Transm Dis. 2013; 40 (5): 379-385.

[7] Tehranian N, Ghavi F, Faghihzadeh S . A Контролируемая однократная пероральная доза азитромицина по сравнению с семидневным доксициклином при лечении Clamydia cervicitis . Данешвар . 2009; 16 (78): 11-18.

[8] Hocking JS, Vodstrcil LA, Huston WM, Timms P, Chen MY, Worthington K, McIver R, Tabrizi SN. Когортное исследование неэффективного лечения Chlamydia trachomatis у женщин: протокол исследования. BMC Infect Dis. 2013; 13 (1): 379-387.

[9] Джернберг Э., Могхаддам А., Мой Х. Азитромицин и моксифлоксацин для микробиологического лечения инфекции Mycoplasma genitalium : открытое исследование. Int J Std Aids . 2008; 19 (10): 676-679.

[10] Швебке Дж., Ромпало А., Тейлор С., Сена А., Мартин Д., Лопес Л., Ленсинг С., Ли Дж.Переоценка лечения негонококкового уретрита: выделение новых патогенов — рандомизированное клиническое исследование. Clin Infect Dis. 2011; 52 (2): 163-170.

[11] Брэдшоу С.С., Чен М.Ю., Фэрли С.К. Сохранение Mycoplasma genitalium после терапии азитромицином. PLoS One . 2008; Идентификатор статьи e3618.

[12] Брэдшоу С.С., Дженсен Дж. С., Табризи С. Н., Рид Т. Р., Гарланд С. М., Хопкинс, Калифорния, Мосс Л. М., Фэрли К. К..Недостаточность азитромицина при уретрите Mycoplasma genitalium . Emerging Infect Dis. 2006; 12 (7): 1149-1152.

[13] Твин Дж., Дженсен Дж. С., Брэдшоу С. С., Гарланд С. М., Фэрли К. К., Мин Л. Ю., Тебризи С. Н.. Передача и отбор устойчивых к макролидам инфекций Mycoplasma genitalium , обнаруженных с помощью быстрого анализа расплава с высоким разрешением. PLoS One .2012; Идентификатор статьи e35593.

[14] Schwebke JR, Weiss HL. Взаимосвязь бактериального вагиноза и воспаления шейки матки. Sex Transm Dis. 2002; 29 (1): 59-64.

[15] Айзенберг Д.М., Дэвис Р.Б., Эттнер С.Л., Аппель С., Уилки С., Ван Ромпей М., Кесслер Р.С.Тенденции использования альтернативной медицины в Соединенных Штатах, 1990–1997 годы: результаты последующего национального исследования. ДЖАМА . 1998; 280 (18): 1569-1575.

[16] Заргаран А., Заршенас М.М., Карими А., Ярмохаммади Х., Борхани-Хагиги А. Лечение инсульта, как описано Ибн Синой (Авиценна) в «Каноне медицины». Int J Cardiol. 2013; 169 (4): 233-237.

[17] Фахими С., Насери М.Растения против галитоза в иранской традиционной медицине. Рес Дж Фармакогн . 2015; 2 (2): 61-66.

[18] Сироойе П., Афрахтех М., Биоос С., Мокаберинеджад Р. Объяснение маточной боли с точки зрения иранской традиционной медицины и сравнение с тазовой болью в современной медицине. Iran J Obstet Gynecol Infertil. 2016; 19 (3): 9-25.

[19] Авиценна.Аль-канун фи аль-тибб [Канон медицины]. Бейрут: Дар Эхия аль-Турат аль-Араби, 2005.

[20] Разес М. Альхави. 1 ^st ed. Афшарыпуор С. (Пер.). Тегеран: Академия медицинских наук, 2005.

[21] Tonkaboni MH. Тохфат-ол-моменин (Дар моменов).Тегеран: Тегеранский университет медицинских наук Шахида Бехешти, 2007.

[22] Мозаффарян В. Признание лекарственных и ароматических растений Ирана. 1 ^st ed. Тегеран: Фарханг-э-моазер, 2015.

[23] Заргари А. Лекарственные растения. 8 ^-е изд.Тегеран: Университет Тегеранской прессы, 2011.

[24] Гассеми Дехкорди Н., Саджади С., Ганнади А., Аманзаде Я., Азадбахт М., Асгари Г., Амин Г., Хаджиахунди А., Талеб А . Иранская травяная фармакопея. Тегеран: Министерство здравоохранения и медицинского образования, 2002 г.

[25] Хан М., Ван Н. Descurainia sophia (L.): сорняк, имеющий множество медицинских применений. Пенджабский университет Дж. Зоол . 2012; 27 (1): 45-51.

[26] Шахандех З., Молана З., Фарзинваш Т. Экстракция и исследование экстракта Descurainia sophia на ингибирование роста E. coli и Staphylococcus aureus . J Babol Univ Med Sci. 2006; 8 (5): 26-30.

[27] Sun K, Li X, Liu JM, Wang JH, Li W, Sha Y. Новый гликозид серы из семян Descurainia sophia (L.) Примечание. J Asian Nat Prod Res. 2005; 7 (6): 853-856.

[28] Ли Й.Дж., Ким Н.С., Ким Х., Йи Дж.М., О С.М., Bang OS, Ли Дж.Цитотоксические и противовоспалительные компоненты из семян Descurainia sophia . Арк Фарм Рес . 2013; 36 (5): 536-541.

[29] Kim BY, Lee J, Park SJ, Bang OS, Kim NS. Профиль экспрессии генов линии клеток немелкоклеточной карциномы легкого человека A-549 после обработки семенами Descurainia sophia, потенциально противоопухолевый препарат. Дж. На основе доказательств, Комплемент Альтернативная медицина . 2013; Идентификатор статьи 584604.

[30] Kim HY, Kim J, Thi HTH, Bang OS, Lee WS, Hong S. Оценка противоопухолевой активности BP3B против рака толстой кишки на модели ксенотрансплантата опухоли, полученной от пациента. BMC Complement Altern Med. 2016; 16 (1): 473-481.

[31] Хан М., Сяо Й, Ю Б, Ван Н, Расул А, И Ф, Ян Л., Ян Х, Ма Т.Артаботризид A, составляющий из Descurainia sophia (L.), вызывает гибель клеток в клетках глиомы U87 посредством апоптоза и остановки клеточного цикла в фазе G2 / M. J Med Plants Res . 2012; 6 (21): 3754-3765.

[32] Mohammadinia N, AliRezaei M, Loripour M, Heydari N. Влияние потребления Sisymbrium -seeds в конце беременности на частоту кесарева сечения и оценку по шкале Апгар. Iran J Obstet Gynecol Infertil. 2012; 15 (27): 8-13.

[33] Аль-Вайли Н.С., Салоум, Кентукки. Влияние местного меда на послеоперационные раневые инфекции, вызванные грамположительными и грамотрицательными бактериями после кесарева сечения и гистерэктомии. Eur J Med Res. 1999; 4 (3): 126-130.

[34] Данфорд К., Ханано Р.Приемлемость для пациентов медовой повязки при незаживающих венозных язвах ног. J Уход за ранами . 2004; 13 (5): 193-198.

[35] Биглари Б., В. Д. Линден П., Саймон А., Айтач С., Гернер Х., Могхаддам А. Использование Medihoney в качестве безоперационного метода лечения хронических пролежней у пациентов с травмой спинного мозга. Спинной мозг . 2012; 50 (2): 165-169.

[36] Фазель Н., Хашимиан М., Рамезани М., Акбари А.Сравнительный эффект одного меда и смеси с хлотримазолом при кандидозных вагинитах. Иран J Акушерство Gynecol Infertil . 2012; 14 (8): 48-54.

[37] Tabatabaeechehr M, Mortazavi H, Basirat S, Vatandoost Z. Эффекты вагинального применения меда и воска по сравнению с вагинальным кремом с клотримазолом при лечении вагинального кандидоза у женщин, обращавшихся в поликлиники в 2001 году.Труды Национального конгресса натуральных продуктов и лекарственных растений; 2012 27, 28 сентября; Боджнурд, Иран.

[38] Banaean-Boroujeni S, Rasti-Boroujeni M, Moghim H, Validi M, Mobini G, Kazemian A. In vitro влияние меда на Candida albicans и лактобактерии . J Shahrekord Univ Med Sci . 2010; 11 (4): 52-58.

[39] Агили Хорасани М.Карабадин-е Кабир. Тегеран: Иранский университет медицинских наук, Исследовательский институт исламской и дополнительной медицины, 1999.

[40] Агааббаси К., Дехан Э., Багизаде А., Дашти Х. Сравнение действия этанольных экстрактов семян Descurainia sophia (L.) и корня Althaea officinalis на Streptococcus pyogenes . Захедан Дж. Рес. Мед. Наука .2014; 16 (10): 27-32.

[41] Hollman PCH. Доказательства пользы для здоровья растительных фенолов: местные или системные эффекты? J Sci Food Agric. 2001; 81 (9): 842-852.

[42] Ранджана, доктор медицины, Мисра Д. Оценка эффективности V-геля при вагините и цервиците. Индийский Практик . 2001; 54 (9): 645-649.

[43] Хашми С., Бегум В., Султана А. Эффективность Sphaeranthus indicus и крема Lawsonia inermis при эрозии шейки матки при цервиците. Eur J Integr Med . 2011; 3 (3): 183-188.

[44] Мохите С., Капур Э., Нагаркар Б.Оценка эффективности дашмооляришта при цервиците: экспериментальное исследование. World J Pharmaceut Sci. 2014; 3 (6): 1526-1532.

[45] Латафат Т., Сиддики М., Джафри С. Клиническое исследование Мархама Дахлиона о хронической шейке матки и эрозии шейки матки. Анк Научная Жизнь . 1992; 11 (3-4): 158-162.

Влияние добавок меда на маркеры воспаления у хронических курильщиков: рандомизированное контролируемое исследование | BMC Дополнительная медицина и терапия

Почувствуйте себя лучше | Исцеление для людей, клиника энергетической медицины

Рейки Исцеление

Это назначение исцеления для новых или существующих клиентов. Для новых клиентов он включает в себя некоторую диагностическую оценку, но предназначен для людей, которые хотят меньше говорить и сразу перейти к исцелению. Для новых клиентов, которые предпочли бы получить больше информации перед тем, как перейти на лечебный прием, см. Запись на личную оценку.

Рейки исцеление предназначено для людей с легкими или умеренными симптомами, которым трудно расслабиться естественным путем, которые хотят повысить жизненную силу, восстановить равновесие своего ума, уменьшить легкую боль и беспокойство, улучшить сон и в целом улучшить общее состояние здоровья. Это также отличное решение для людей, которые ищут средства для снятия стресса и профилактики.

Это назначение на 60 минут.

Новые клиенты — 155 долларов, существующие — 125 долларов.

Персональная оценка

Персональная оценка предназначена для новых клиентов с легкими или тяжелыми симптомами, конкретным диагнозом или для тех, кто чувствует себя заблокированным или не знает, как выйти из ситуации.Это в первую очередь разговорная встреча для людей, которые хотят получить дополнительную информацию до того, как они начнут лечение. Для людей, которые хотели бы перейти непосредственно на лечебный прием, см. Записи о Рейки и прикладном потоке энергии.

Мы выслушаем столько информации, сколько вы захотите, например что сработало и что не сработало ранее, ваши приоритеты и гипотезы, а также любые переменные, которые, по вашему мнению, нам необходимо понять.

В конце часа у вас будет четкое представление о том, как мы рассматриваем вашу ситуацию, какие услуги, по нашему мнению, вам необходимо решить, в каком темпе и в каком сочетании и почему.После того, как у вас будет вся информация, вы можете решить, каковы ваши следующие шаги, и предпринять их наиболее подходящим для вас способом.

Эта встреча длится 60 минут и 155 долларов.

Исцеление прикладным потоком энергии

Это лечебное мероприятие, которое обычно используется существующими клиентами. Однако, если новые клиенты захотят начать здесь, мы это сделаем.