Мед для фигуры: Вреден ли мед для фигуры?

Что будет, если есть мед каждый день?

Мед – продукт универсальный. О рецептах с ним написаны увесистые тома поваренных книг. А сколько хвалебных строк посвящено его полезным свойствам, и не сосчитать! А что будет, если есть мед каждый день? Как он повлияет на наше самочувствие и здоровье? Нужна ли медовая терапия нашему мозгу, фигуре, коже? Действительно ли он полезен при похудении? В нашем обзоре 9 позитивных реакций организма на ежедневное употребление меда. 

Мед для кожи

Питательная основа многих рецептов красоты. Природный антиоксидант – защищает от ультрафиолета. Удерживает влагу в клетках кожи, предотвращая высыхание, тем самым «борясь» со старением и появлением морщин. Поддерживает естественный жировой баланс. Очищает поры. Фитонциды меда – природный антисептик.

Противогрибковые свойства меда используют для лечения перхоти, добавляя его в шампунь или втирая в кожу.

Можно ли есть мед каждый день при похудении?

Если вы худеете, то все сладости рекомендуют исключить. Но… худеть можно сладко! Янтарный десерт кушать можно, так как он на 40–45% состоит из фруктозы, на 30–35% из глюкозы, на 13–20% – из воды. И это совсем не тот «сладкий» состав, который откладывается в жирок. С медом быстрее и проще, чем с сахаром, справляются почки. Усваивается легко, отдает все свои биологически активные вещества, почти сразу же после приема. Фруктоза ускоряет метаболизм и нормализует работу ЖКТ, активизируя выброс желчи, помогая сжигать калории.

Углеводы меда снижают сахарозависимость и тягу к сладкому.

Диетологи рекомендуют суточную норму меда для худеющих не более 50 г. Но это сугубо индивидуально.

Мед и холестерин

Мед не содержит растительных жиров, и в нем нет «плохого» холестерина. Но в 300-х его компонентах присутствуют ферменты и аминокислоты, которые нормализуют уровень холестерина. Именно этим «занимаются» флавониды меда.

Мед для желудка

Мед – достаточно сильный антисептик. Проходя через желудок, продукт заживляет раны его слизистой оболочки. Нормализует кислотность. Избавляет от отрыжки, тошноты, изжоги. Ложка меда на голодный желудок – хороший природный способ «лечения» ЖКТ.

Мед для сердца

Многие исследования показывают, что антиоксиданты меда устраняют артериальные сужения, нормализуя кровоток. Выпивайте ежедневно стакан воды с ложкой меда, и сердце станет здоровее.

Луговой мед поможет при проблемах с желудком, липовый – при простудах, каштановый хорош для сердечников, акациевый – для деток и людей с ослабленным иммунитетом.

Мед каждый день на сон грядущий

Интересная цепочка: сахароза меда повышает инсулин в крови. Инсулин – высвобождает серотонин, который в организме трансформируется в мелатонин – гормон скорейшего засыпания.

Мед и память

Антиоксидантную защиту организма восстанавливают антистрессовые свойства меда. Как следствие – улучшение памяти. Кальций, которого в меде содержится 6 мг на 100 г, благоприятно влияет на мозговую деятельность. Никотиновая кислота в составе меда расширяет сосуды.

Мед против стресса и нервного напряжения

Глюкоза меда – вещество легкоусвояемое. Быстро всасывается в кровь, способствует расслаблению сосудов, «отдыху» нейронов. Как следствие – снижение судорог. Мед обладает седативными свойствами.

«Мед укрепит слабое сердце, слабый живот и слабый мозг» (индийская поговорка).

Мед для иммунитета

Мед повышает сопротивляемость вирусам. Еще Авиценна считал его эликсиром долголетия. Предпочтительнее употреблять натуральный мед. Добавлять его нужно в теплое питье непосредственно перед приемом. В горячий чай мед не кладут, так как при температуре свыше +40^оС все его полезные свойства «испаряются».

Несколько фактов о меде:

• В 1 ч.л меда с горкой – 19 г продукта, в 1 ст.л с горкой – 33 г.
• Соответственно КБЖУ продукта в чайной и столовой ложках с горкой: 61,6 / 0,2/ 0 / 15,3 и 106,9 / 0,3 / 0/ 26,5.
• Гликемический индекс меда в среднем – 60. Бывает и 80, и 90. Все дело во времени и месте сбора. Зависит ГИ и от сорта меда.
• В России растений-медоносов около 150 видов.
• От солнечного света вкус не изменится, но химический состав обязательно «поломается».

При разумном употреблении и отсутствии противопоказаний можно есть мед каждый день – и для красоты и для здоровья. В кулинарии его используют не только как добавку к десерту, но и как компонент соусов, маринадов, выпечки, напитков.

Автор: Елена Чуйко

 

вреден ли мед для фигуры — 25 рекомендаций на Babyblog.ru

Принципы ПП это:
 Отказ от жирного/жареного/вредного/калорийного.
 Фаст фуд, сладкая газировка, майонез, маргарин, чипсы, колбасы/сосиски и прочие искуственные продукты, кондитерские изделия и сдобная выпечка - это НЕ еда! Это пустые вредные калории и трансжиры!!! Исключить также жирные консервы, жирные сорта сыра, творога и молочных продуктов, сало, сливочное масло; ограничить сахар и соль.
 Сладкое можно только на завтрак и только натуральное
(Мед, сухофрукты, варенье или джем; допустимы: зефир, мармелад, нежирное молочное мороженое)
 Фрукты и углеводы - до 17:00!
Вечером обменные процессы организма значительно замедляются, наша двигательная активность снижается; соответственно, потребность в углеводах исчезает.
 5 приемов пищи в день: завтрак-перекус-обед-перекус-ужин
 
 После еды следует стоять или ходить, но ни в коем случае не сидеть и уж тем более, не лежать!
 Режим питания
Питаться регулярно - перерывы между приемами пищи не более 4 часов. При длительном отсутствии пищи организм начинает испытывать стресс и перестает отдавать жироовые запасы, снижение веса значительно замедляется. Каждый день стараться принимать пищу в одно и то же время.
 Ужин не позднее, чем за 4 часа до сна
 После ужина, если мучает голод - никаких яблочек и грейпфрутиков! Выпейте лучше 1 стакан обезжиренного кефира или молока (не более 1,5%жирн.), чашку зеленого чая или стакан теплой воды.
 Не менее 8 стаканов чистой воды в день
 Овощи в любом виде в любое время в неограниченном количестве (разумеется, не ночью и не на ночь:)
 
 Употреблять как можно больше белковой пищи, особенно на ужин в сочетании с овощами
 Сбалансированное питание
Каждый день обязательно включать в рацион продукты из всех 6 групп: овощи, фрукты, молочные, углеводы, белки, полезные жиры
 Свести к минимуму употребление алкоголя, а лучше совсем исключить (повышает аппетит и содержит огромное количество калорий)
 Увеличить двигательную активность
Даже при 1,5-часовой тренировке 2-3 раза в нед. ваш вес уйдет в 2 раза быстрее, нежели при отсутствии занятий! Если не получаетсся заниматься, делать хотя бы утреннюю зарядку... Если уж и на это нет времени, просто двигаться как можно больше.
 
 Если вес встал, сделать разгруз. день или несколько разгруз. дней
 Никаких голодовок, мучительных диет и изнурительных тренировок! Все делать только в удовольствие, так вероятность срывов и плохого настроения и раздражительности будет сведена к нулю.
 Некоторые запреты - это временное явление!
Не унывайте, что вам придется временно отказаться от некоторых привычных вкусняшек. После того, как ваш вес сдвинется с "мертвой точки", вы сможете пару раз в неделю побаловать себя чем-нибудь вкусненьким без вреда для фигуры, ЕСЛИ, разумеется, это будет в разумных кол-вах и не на ночь :)

Мед против лишнего веса. Медовый массаж для стройного тела

Поскольку целлюлит — это скопившийся жир в подкожной клетчатке, его сложно ликвидировать только физическими упражнениями. Специалисты рекомендуют здесь комплексный подход, и медовый антицеллюлитный массаж считается прекрасным средством, которое способно вывести из организма лишнюю жидкость и жир.

Массаж для похудения с медом обладает поистине уникальным эффектом благодаря целительным свойствам натурального меда:

Мед выводит шлаки и токсины. Проникая в глубокие слои кожи, он способствует распаду вредных веществ на микрочастицы, которые выводятся на поверхность кожи.

Улучшает кровообращение. Интенсивные массажные движения способствуют циркуляции крови и проникновению кислорода в ткани и кровь.

Тонизирует. Медовый массаж — отличное профилактическое средство, которое помогает избежать растяжек и не допустить раннего старения кожи. Прополис, входящий в состав меда, предотвращает дряблость кожи и подтягивает ее.

Смягчает. Мед быстро впитывается в кожу, насыщая ее витаминами и микроэлементами. После его применения в любом виде кожный покров становится мягким и нежным.

Разглаживает. Регулярное проведение процедуры благотворно влияет на общее состояние кожи, убирает мелкие растяжки, позволяя старым клеткам кожи обновляться.

Успокаивает. Во время массажа с медом главный ингредиент, проникая в кожу и ткани, оказывает успокаивающее действие в целом на организм женщины, в том числе и на нервную систему.

Антицеллюлитный медовый массаж

Антицеллюлитный медовый массаж – процедура, которая предназначена для устранения «апельсиновой корки» на теле. Благодаря такому воздействию происходит усиление лимфотока и глубокая чистка кожи. При этом кожа интенсивно обновляется, а участки с целлюлитом постепенно рассасываются. Кожа становится нежной и упругой, заметно повышается мышечный тонус.

Справедливости ради надо отметить, что антицеллюлитный массаж с медом — процедура не из приятных, ведь чтобы добиться успеха, ее нужно проводить довольно интенсивно. После такого массажа вполне могут появиться синяки, особенно это относится к женщинам с чувствительной кожей.

Техника медового массажа против целлюлита

Правильная техника проведения медового массажа – залог его эффективности. Если вы хотите избавиться от лишнего веса и получить здоровую подтянутую кожу, следует особенно тщательно подходить к выбору специалиста.

Опытный мастер обязательно проведет проверку на аллергическую реакцию. Ведь помимо множества полезных свойств, у меда есть одна особенность — это сильный аллерген. Поэтому, прежде чем приступать к любой процедуре с этим продуктом, специалист обязательно нанесет каплю меда на внутреннюю сторону запястья или непосредственно на проблемную зону. Важный момент: для медового массажа нельзя использовать засахаренный мед, поскольку он в большинстве случаев вызывает сильное раздражение.

Прежде чем перейти к процедуре, тело нужно разогреть с помощью зигзагообразных, продольных или круговых движений. Этот этап полезен для улучшения кровообращения и лимфотока. Уже после разогрева можно заметить, что мед приобретает серый оттенок. Это признак того, что кожа начала выводит токсины.

Следующий этап – активные хлопки: мастер приклеивает руки к проблемной зоне и с усилием отрывает их от тела. На этом этапе можно заметить, что на его руках появляется белая пена — такой цвет приобретает мед, который выводит скопившиеся шлаки.

Далее следует очищение и увлажнение. Грязная масса с поверхности тела смывается водой, а после этого на кожу наносится увлажняющий крем.

Записаться на медовый массаж в Киеве (Позняки):

(044) 392-88-89
(044) 392-88-89
0(800) 33 76 79
0(800) 33 76 79

Коррекция фигуры для женщин в Екатеринбурге

Анонимно. Коррекция фигуры посредством психотерапии и диетологии – эффективный и безопасный способ справиться с проблемой лишнего веса. В нашей клинике пациенты худеют под наблюдением врача, который контролирует любые изменения в самочувствии и корректирует диету.

Как быстро похудеть

В центре коррекции фигуры применяются уникальные методики, позволяющие снизить и постоянно контролировать массу тела. Выбор техники похудения зависит от времени, в течение которого пациент желает приобрести идеальные формы.

Программа коррекции фигуры может составляться на срок:

• 2-3 недели. Медик применяет научную схему, основанную на лечебном голодании;

• 3 месяца. Врачи используют схемы специального питания и клинический гипноз. При этом методе коррекции фигуры рацион питания преимущественно состоит из овощей и фруктов;

• 6-12месяцев. Специалисты предлагают пациентам действенные техники гипно- и диетотерапии. Помимо фруктово-овощной диеты в меню включают обезжиренные кисло-молочные продукты, нежирные сорта рыбы и мяса.

Особенности программы

Перед применением методик похудения  рекомендуется провести комплексное обследование больного с лишним весом. Определяется степень ожирения, разрабатывается безопасная тактика потери избыточной массы тела.

Диетолог обсуждает с больным правила рационального осознанного питания, помогает соблюдать сбалансированную диету без постоянного ощущения голода и обеспечивает комфортную коррекцию фигуры с похудением. Добиться закрепления полученного результата помогут сеансы клинического гипноза, которые снимают негативные подсознательные программы.

Врачи нашей клиники придерживаются дифференцированного подхода к проблеме лишнего веса. Специалист разрабатывает для каждого пациента индивидуальный график консультацией и лечебных сеансов с учетом выявленных показаний и противопоказаний.

Где пройти программу по коррекции фигуры

Специалисты клиники «Елизар-мед» помогают пациентам пройти комфортный переход к здоровому питанию. Применяемые методы коррекции фигуры для женщин и мужчин основываются на интегрированном подходе.

Медицинская помощь оказывается с применением проверенных психофизиологических техник воздействия (когнитивная психотерапия, медицинский гипноз, нейро-лингвистические техники).

Расписание приема:  Обязательно уточняйте время приема по тел: 8 908 905 8 335. Если оказалось, что баланс на Вашем телефоне пуст и это препятствует записаться на прием или задать вопрос, просто отправьте Маячок и мы обязательно перезвоним!

Фигуры для шахмат (Chess figures) Аксессуар к настольной игре МЕД S184

Когда-то древние индусы придумали одну из самых популярных игр в мире — название ей шахматы. Эта настольная игра даже признана официальным видом спорта, по ней проводятся международные соревнования, а чемпионов уважают во всем мире. Игра развивает логику, стратегическое мышление, даже психологию, ведь надо предусмотреть дальнейшие действия соперников на несколько ходов вперед. У многих из нас дома найдется набор для игры в шахматы. Очень часто это уже старые, потертые фигурки, не помешало бы обновить. Именно для этого есть набор Фигуры для шахмат (Chess figures).

Как в это играть?

Шахматы одна из самых популярных игр в мире именно благодаря своей простоте в правилах. Каждого своего хода Вам нужно двигать одну из фигур, если ее ход не заблокирован другой Вашей фигурой. Если же на пути движения этой фигуры стоит фигура соперника, то она уничтожается. Уничтожить нужно короля — тогда победа Ваша. Конечно, это было бы слишком легко, если бы каждая фигура не ходила по-разному — кто-то только на одну клетку вперед, кто-то буквой Г, кто-то по диагоналям. В этом и лежит все стратегическое планирование — нужно двигать фигуры так, чтобы в конце концов добраться до короля соперника так, чтобы он не имел возможности его защитить.

Кому подойдет этот набор?

Набор Фигуры для шахмат (Chess figures) нужен именно для тех людей, которые потеряли одну или несколько фигур и нуждаются в новом комплекте или просто хотят обновить старый.

Комплектация Фигуры для шахмат (Chess figures) (Что в коробке?):
16 белых и 16 черных фигур

Вы можете купить настольную игру Фигуры для шахмат (Chess figures) в интернет-магазине Lelekan(Лелекан).
Оформить заказ можно у нас на сайте, добавишы товар в «Корзину» или позвонив по телефону (097) 82 47 182, (093) 82 47 182 .
Бесплатная доставка по всей Украине при заказе от 1000 грн.
Отправляем в день заказа по всей Украине при оформлении заказа до 16оо
Купить Фигуры для шахмат (Chess figures) в городе Львов, Киев, Харьков, Днепр, Одесса, Луцк, Ужгород, Мукачево.
Также Вашему вниманию клуб и игротека настольных игр. Аренда (Прокат) настольной игры в городе Львов

ДЛЯ ФИГУРЫ, Сашера-Мед, АЛТАЙ

ВАМ ТРЕБУЕТСЯ ИНДИВИДУАЛЬНАЯ КОНСУЛЬТАЦИЯ? КОНСУЛЬТИРУЕТ руководитель нашего проекта «КЛУБ ЭФЛЕР» независимый провизор, оператор биолокации,  специалист в области натуропатии, фитотерапии, гомеопатии, многомерной полярной медицины 1979 г.р., Санкт-Петербург, высшее фармацевтическо..

2 000.00 р.

Специально разработанная органическая формула на основе природного зольного комплекса мицелл сока лардизабалы, концентратов активных структур растений и природных источников докозагексаеновой и эйкозапентаеновой кислот, оказывающих комплексное действие на причины патологичного образования адипоци..

440.00 р.

Биоактивная формула комплекса разработана специально для людей от 18 до 30 лет, контролирующих массу тела, с учётом особенностей функций и состояния органов эндокринной, пищеварительной, иммунной, репродуктивной систем данной возрастной группы. Комплементарный биодоступный комплекс на основе..

545.00 р.

Природная формула комплекса разработана специально для людей от 30 до 40 лет, контролирующих массу тела, с учётом особенностей функций биохимических процессов в организме людей данной возрастной группы. Комплементарный биодоступный комплекс на основе активных структур концентратов и сока рас..

545.00 р.

Природная формула комплекса разработана специально для людей в возрасте от 40 лет, контролирующих массу тела, с учётом особенностей функций биохимических процессов в организме, гормональных изменений и сопутствующих дисфункциональных симптомов людей данной возрастной группы. Комплементарный ..

545.00 р.

Комплексная биогенная липосома структурированного зелёного кофе, направленная на преобразование запасов липидов жировой ткани в энергию в ночное время. Липосома зелёного кофе структурирована концентратами растений и источниками аминокислот, являющихся прекурсорами синтеза лептина – пептида..

550.00 р.

BodyCof mepresso ДЕНЬ – биогенная липосома с бустер-комплексом нативного зелёного кофе, концентратами центеллы азиатской (готу кола), артишока, семян подорожника и мицеллами сока растений, обладающих доказанным протекторным действием на метаболические процессы липидов, жиров и углеводов, пос..

560.00 р.

BodyCof supresso УТРО – биогенная липосома зелёного кофе, обогащённая бустер-формулой мицелл сока, концентратов активных структур растений, источников эйкозапентаеновой кислоты и гуггулстеронов, обладающих доказанной эффективностью в отношении формирования естественных индивидуальных процессов ко..

550.00 р.

DieTonus, ДИЕТОНУС, DIETONUS, Обмен Веществ, ФИГУРА, ОЧИЩЕНИЕ, ТОНУС, 30 капсул по 500 мг, ПРЯМАЯ ПОСТАВКА, Сашера-Мед, Алтай

Препарат показан людям с разной степенью ожирения, и тем, кто хочет достичь оптимального веса. БАД применяют в следующих случаях: — при неконтролируемых приступах аппетита, особенно в ночное время; — для закрепления полученного результата после курса похудения – средство нормализует липидн..

340.00 р.

MinuSize — эффективное снижение веса тела без диет и физических нагрузок MinuSize – натуральная органическая формула в биодоступной быстрорастворимой форме на основе концентратов активных частей растений, направленных на нормализацию гипоталамических процессов контроля массы тела и выработки..

340.00 р.

Средство при нарушении жирового обмена на основе мицеллярного комплекса гуггулстеронов Специально разработанная мицеллярная система в монодозах на основе природного изотонического комплекса мицелл сока лардизабалы, рамбутана, омега-кислот, концентратов активных структур растений и природного ис..

440.00 р.

нативные пищевые волокна на основе оболочки пшеничного, овсяного, амарантового зёрен, обогащённые биогенной формулой пребиотиков растительного происхождения и морским структурированным полиактивным комплексом, направленные на регуляцию процессов пищеварения, липидного, углеводного, белкового..

360.00 р.

оригинальная биогенная сферическая бустер-формула на основе нативных источников эйкозапентаеновой, докозагексаеновой кислот и синефрина, усиленная мицеллами активных структур растений и природных компонентов, направленных на формирование индивидуальных процессов контроля массы тела, регул..

380.00 р.

«ГоджИмбирь» – концентрат-батончик на основе комплекса нативных природных компонентов, способствующих мобилизации жировых клеток из депо, их расщеплению и высвобождению энергии. Нативный комплекс способствует уменьшению популяции жировых клеток в скелетной мускулатуре, улучшает усвоение пищи в те..

120.00 р.

«ГоджиИмбирь» с бобами – нативная комплекс-программа для эффективного растворения адипоцитов (жировых клеток) в течение дня и регуляции липидного и углеводного обмена при повышенном образовании подкожной жировой ткани и жировых клеток скелетной мускулатуры В СОСТАВЕ КОМПЛЕСА: капсулы на ку..

475.00 р.

концентрат-батончик на основе нативного комплекса природных компонентов, направленных на индивидуальные нарушения липидного обмена. Нативный природный комплекс усиливает активность ферментов печени, отвечающих за переработку жиров и углеводов, поступающих с пищей, и способствует очищению пищевари..

120.00 р.

«ГоджИмбирь» с сафлором – нативная комплекс-программа для регуляции липидного и углеводного обмена при повышенном образовании подкожной жировой ткани и липидных клеток скелетной мускулатуры, предупреждения нарушения пищеварительных и обменных процессов и образования новых жировых клеток в результ..

475.00 р.

концентрат-батончик на основе нативного природного комплекса, способствующего расщеплению и утилизации жировых клеток подкожного слоя и скелетной мускулатуры во время сна. Нативный экстракт семян чиа в комплексе с биологически активными клетками растений оказывает действие на функции гипофиза, ре..

120.00 р.

«ГоджИмбирь» с семенами чиа – нативная комплекс-программа для растворения жировых клеток подкожной клетчатки и скелетной мускулатуры во время сна. В СОСТАВЕ КОМПЛЕСА: капсулы на курс 10 дней + 15гр сушёного имбиря + 30 гр сушёных ягод годжи «ГоджИмбирь» с семенами чиа – нативный приро..

475.00 р.

инновационная органическая формула на основе концентрата нативных жиров природного происхождения,направленная на липолиз жира в адипоцитах, снижение массы тела. Форма выпуска: 7 монодоз по 3 мл Кето-формула обладает анорексигенным действием – уменьшает аппетит, в комплексе с активизацией р..

450.00 р.

Мед польза или вред фигуре

Мёд – уникальный продукт пчеловодства, активно применяемый в домашней медицине и косметологи. Обладающий широким спектром полезных свойств, он укрепляет иммунную систему, помогает побороть разнообразные вирусные и инфекционные заболевания, а также активизирует обмен веществ, обеспечивая плавное и здоровое избавление от лишних килограммов. Из представленной ниже информации вы узнаете, как похудеть с помощью мёда и кому показаны медовые диеты.

Польза мёда, как средства для похудения

Человечеству издавна известно о целебных свойствах вязкого сладкого нектара, вырабатываемого пчелами. Обладающий рекордным количеством витаминов и микроэлементов, он оказывает общеукрепляющее и оздоравливающее воздействие, активизирует обменные и регенерационные процессы в организме.

Небольшое видео наглядно показывает как изменится ваше тело всего за 30 дней употребления натурального мёда.

Согласно данным исследования, проведенного Национальным институтом здоровья США, мёд особенно эффективен в лечении ран и ссадин, ожогов первой и второй степени, сахарного диабета и легких форм ожирения. Особый интерес у ученых вызывает именно возможность использования продукта в качестве средства для снижения веса.

Мёд – весьма калорийное лакомство, отличающееся повышенной концентрацией углеводов. В частности, в его состав входят:

— фруктоза – около 35-38%;

— сахароза – 1-3%;

— глюкоза – 30-35%.

Однако упомянутые особенности не провоцируют набор веса, напротив, становятся причиной легкого и здорового похудения. Дело в том, что в нектар входят исключительно сложные углеводы, на переваривание которых организм тратит больше калорий, нежели потребляет. Кроме того, в его состав включены особые пептидные соединения, блокирующие чувство голода. Таким образом, съев всего пару чайных ложек медового лакомства, вы получите необходимое количество питательных компонентов, ощутите насыщение.

Как действует мёд при похудении?

Пчелиный нектар – неиссякаемый источник быстро усваиваемых сахаров: глюкозы, фруктозы, сахарозы. Питая и насыщая головной мозг полезными витаминами и микроэлементами, он утоляет чувство голода. Даже пара ложек лакомства способна заменить полноценный прием пищи.

Используемый в качестве средства для похудения мёд:

— запускает обменные процессы;

— ускоряет метаболизм;

— хорошо усваивается, заряжая человека бодростью и энергией на весь день;

— очищает организм, выводя шлаки и токсины;

— оказывает легкое послабляющее действие.

Комплексно влияя на работу пищеварительной системы, мёд налаживает процесс сброса лишних килограммов, позволяет быстро и легко потерять в весе.

Мёд на ночь при похудении

Оптимальным временем для употребления медового лакомства было признано утро. Именно прием 2-3 чайных ложек натощак сразу после пробуждения активизирует обменные процессы, запускает метаболические механизмы. При этом актуальным остается вопрос: «Можно ли есть мёд на ночь?».

Будучи довольно калорийным и тяжело перевариваемым продуктом, он не рекомендован к употреблению перед сном. Если отказаться от лакомства сложно, диетологи советуют съесть пару ложек за 3-4 часа до сна. Также, допускается замещение последнего приема пищи диетическим медовым десертом.

Медовый массаж

Медовые обертывания и массажи уже давно призваны эффективными эстетическими салонными процедурами, способными не только улучшить эмоциональное состояние, но и вернуть коже упругость, запустить процессы похудения.

Польза медового массажа:

— прорабатывает проблемные области, разбивая жировые отложения, способствуя ликвидации целлюлита;

— тонизирует и освежает, повышая пластичность и эластичность кожи;

— борется с хронической усталость, благотворно влияя на психоэмоциональное состояние;

— препятствует развития остеохондроза, артрита, артроза, разнообразных патологий позвоночника.

Массажные процедуры с использованием мёда – довольно дорогостоящее удовольствие, которое не каждому по карману. Однако вы можете отказаться от салонных услуг в пользу домашних обертываний.

Пошаговая инструкция, как выполнить обертывание дома:

— Подготовьте 10-15 ложек мёда.

— Добавьте к сладкой массе две столовые ложки натурального молотого кофе.

— Тщательно перемещайте все ингредиенты.

— Обработайте проблемные области приготовленной смесью.

— Оберните двумя слоями пищевой пленки.

— Наденьте что-нибудь теплое или завернитесь в термоодеяло.

Продержать смесь на теле необходимо 2-3 часа. Затем она смывается теплой водой, на распаренную кожу наносится увлажняющий крем или питательное молочко.

Медовые ванны

В последнее время все большую популярность приобретают медовые ванны. Отличающиеся ярко выраженным расслабляющим эффектом, они положительно воздействуют на психологическое состояние человека, снимая стресс, борясь с хронической усталостью. Помимо этого они:

— ускоряют кровообращение;

— стимулирует ток лимфы;

— пробуждают обменные процессы;

— способствуют выводу липидных компонентов;

— борются с отечностью.

Все это обеспечивает здоровое и постепенное похудение. Чтобы сделать медовую ванну достаточно добавить три-четыре столовые ложки лакомства в теплую воду. По желанию можно влить немного молоко – оно сделает кожу более мягкой и бархатистой.

Мёд при диете

Большинство диет направлено на ограничение потребляемого числа калорий, за счет чего и происходит похудение. Как правило, они исключают из рациона все сахаросодержащие и сладкие продукты, углеводные блюда. Это негативно отражает на работоспособности человека, его мозговой активности. Получить заряд бодрости и энергии поможет натуральный майский или липовый мёд. Не провоцирующий набор веса, он существенно обогатит и разнообразит ежедневное меню, сделает диету более щадящей.

Рецепты медовых напитков

Среди худеющих особенно распространены диетические медовые коктейли, призванные ускорить метаболизм, обеспечить более быстрые темпы сброса килограммов.

Ниже приведены рецепты наиболее эффективных напитков:

— Вода + мёд + корица. Две чайные ложки пчелиного нектара разведите литром воды, добавьте 10-15 граммов корицы.

— Вода + лимонный сок + жидкий мёд. Литр жидкости разводится с тремя медовыми ложками, дополняется соком, выжатым из одной половинки лимона.

— Мёд + имбирный отвар. Приготовьте специальный отвар, проварив корень имбиря в течение часа. К полученной жидкости добавьте пару ложек сладкого лакомства.

Напитки выпиваются натощак, также могут заменять один прием пищи – второй завтрак, ланч или полдник.

Медовая диета

Принцип медовой диеты довольно прост – из рациона следует исключить лишь те продукты, что плохо сочетаются с пчелиным нектаром. К ним относят:

— Крахмалосодержащие овощи – картофель, кукурузу, топинамбур и т.д.

— Жирные молочные продукты.

— Мучное и шоколад.

Вместо них в ежедневное меню следует ввести овощи и фрукты, отличающиеся отрицательной калорийностью – капусту, грейпфрут, сельдерей и т.д. Также, рекомендуется употребление квашеной капусты.

Противопоказания

Несмотря на всю полезность пчелиного нектара, он имеет ряд ограничений и противопоказаний. В частности использовать мёд в качестве средства для похудения запрещается:

— при наличии аллергических реакций или индивидуальной непереносимости;

— при сахарном диабете;

— женщинам в период беременности или лактации.

Также, употреблять натуральное лакомство не рекомендуется детям, не достигшим 3-летнего возраста.

Внимание!

При использовании любых рецептов народной медицины предварительная консультация со своим лечащим врачом обязательна!

Европейская медоносная пчела Apis mellifera Linnaeus и подвиды (Insecta: Hymenoptera: Apidae)

Эшли Н. Мортенсен, Дэниел Р. Шмель и Джейми Эллис

Коллекция Featured Creatures содержит подробные профили насекомых, нематод, паукообразных и других организмов, имеющих отношение к Флориде. Эти профили предназначены для использования заинтересованными непрофессионалами с некоторыми знаниями биологии, а также академической аудиторией.

Введение

Западная медоносная пчела, Apis mellifera Linnaeus, в природе встречается в Европе, на Ближнем Востоке и в Африке.Этот вид подразделяется как минимум на 20 признанных подвидов (или рас), ни один из которых не является коренным для Америки. Однако подвиды западной медоносной пчелы широко распространились за пределы своего естественного ареала из-за экономических выгод, связанных с опылением и производством меда.

В США «европейские» медоносные пчелы (рис. 1) представляют собой комплекс нескольких скрещивающихся европейских подвидов, в том числе: Apis mellifera ligustica Spinola , Apis mellifera carnica Pollmann , Apis mellifera mellifera Linnaeus mellifera , causcasia Pollmann , и Apis mellifera iberiensis Engel.Появление этого подвида восходит к ранним американским поселенцам в 1622 году. Совсем недавно (конец 1950-х годов) в Америку был завезен подвид африканской медоносной пчелы, Apis mellifera scutellata Lepeletier, который может скрещиваться с европейскими подвидами.

Рис. 1. Европейские медоносные пчелы, Apis mellifera Linnaeus, на сотах в колонии.
Кредит: Эшли Н. Мортенсен, УФ / МФСА

Общественный интерес и участие в управлении медоносными пчелами (пчеловодством) возросли с 2006 года, когда резкое исчезновение рабочих пчел из колонии было описано как расстройство распада колонии (CCD).С тех пор всемирные исследовательские усилия были сосредоточены на улучшении здоровья колоний и методов управления ими, а также на выявлении возможных причин расстройства коллапса колоний.

Распределение

Европейские расы Apis mellifera широко распространились за пределы своего естественного ареала. В настоящее время европейские медоносные пчелы натурализованы на всех континентах, кроме Антарктиды.

Описание

Как и все перепончатокрылые, медоносные пчелы имеют гапло-диплоидное определение пола.Неоплодотворенные яйца (без отцовского генетического вклада) развиваются в трутней (самцов), а оплодотворенные яйца (как материнский, так и отцовский генетический вклад) развиваются в самок. Личинки-самки, которых кормят стандартной диетой, состоящей из пыльцы, нектара и корма для расплода, становятся взрослыми рабочими. Личинки-самки, которых кормят богатым рационом из маточного молочка, пыльцы и нектара, превращаются в маток.

Рабочие медоносные пчелы — непродуктивные самки. Они самые маленькие по размеру из трех каст, а их тела предназначены для сбора пыльцы и нектара.На обеих задних лапах рабочей медоносной пчелы есть корбикула (корзина для пыльцы; рис. 2), специально предназначенная для переноса большого количества пыльцы обратно в колонию. Рабочие медоносные пчелы оставляют восковые чешуйки на нижней стороне живота. Весы используются для создания воскового гребня в колонии (рис. 3). У рабочих есть зазубренное жало, которое вместе с ядовитым мешком разрывают на конце живота, когда они направляют жало в толстокожую жертву. Это приводит к гибели рабочей пчелы.

Фигура 2.Рабочая медоносная пчела, Apis mellifera Linnaeus, пыльца которой хранится в корбикулах обеих задних ног.
Кредит: Сьюзен Э. Эллис, littleladiesofthehive.com (используется с разрешения).

Рис. 3. Восковая чешуя, полученная из нижней части брюшка европейской медоносной пчелы, Apis mellifera Linnaeus.
Кредит: Сьюзен Э. Эллис, littleladiesofthehive.com (используется с разрешения).

Медоносная матка (рис. 4) — единственная репродуктивная самка в колонии при нормальных обстоятельствах (некоторые рабочие могут откладывать неоплодотворенные мужские яйца в отсутствие матки).Ее голова и грудь по размеру похожи на ту, что у рабочего. Однако у королевы более длинный и пухлый живот, чем у рабочих. У королевы тоже есть жало, но его зазубрины уменьшены. Следовательно, она не умирает, когда использует его.

Рис. 4. Европейская пчелиная матка без опознавательных знаков, Apis mellifera, Linnaeus (слева) и матка, отмеченная небольшим мазком краски (справа) на соте.
Кредит: Сьюзен Э. Эллис, littleladiesofthehive.com (используется с разрешения).

Дроны — это мужская каста медоносных пчел.Голова и грудная клетка трутня больше, чем у представителей женской касты, а их большие глаза кажутся более похожими на мухи, касаясь верхней части головы. Их брюшко толстое и тупое на конце, скорее пулевидное, чем заостренное, как у женских каст (рис. 5).

Рисунок 5. Трутень (самец) Европейская медоносная пчела, Apis mellifera Linnaeus слева и рабочая европейская медоносная пчела справа.
Кредит: Сьюзен Э. Эллис, маленькие хозяйки улья.com (используется с разрешения)

Все медоносные пчелы претерпевают полную метаморфозу. Это означает, что они имеют разные стадии развития (яйцо, личинка, куколка и взрослая особь; рис. 6). Типичное время развития от яйца до взрослой особи зависит от касты. У трутней самое продолжительное развитие (24 дня), у рабочих — среднее (21 день), а у маток — самое быстрое (15–16 дней).

Рисунок 6. Стадии жизни медоносной пчелы: взрослая особь (слева), куколка (в центре), личинка (справа).
Кредит: Джейсон Грэм и Эшли Н.Мортенсен, УФ / МФСА

Яйца: Яйца медоносных пчел имеют длину от 1 до 1,5 мм и выглядят как крошечные рисовые зерна. Матка откладывает яйца в отдельные шестиугольные восковые ячейки в области расплода сот (Рис. 7). Через 3 дня из яиц вылупляются личинки. Яйца медоносных пчел трудно увидеть, но их присутствие указывает на присутствие в колонии матки-несушки (очень полезный инструмент при осмотре управляемой колонии медоносных пчел).

Личинки: В колонии медоносных пчел личинок называют «открытым выводком», потому что клетки не закрыты (рисунки , 6 и 7).Количество дней, которые медоносная пчела проводит в качестве личинок, варьируется в зависимости от касты (рабочий: 6 дней, трутень: 6,5 дней, матка: 5,5 дней). Личинки белого цвета и лежат в форме буквы «С» на дне восковой ячейки. Когда зрелые личинки готовы к линьке в куколок, они вытягивают свои тела в вертикальное положение в камере, а взрослые рабочие, ухаживающие за расплодом, покрывают предкуколочных личинок восковым покровом.

Куколки: Под восковым покровом личинки предкуколки медоносной пчелы линяют в куколок (рис. 6).Куколки остаются под восковым покровом, пока не превратятся во взрослую особь и не вырвутся из клетки. Куколки называют «закрытым расплодом», потому что клетки закрыты (рис. 7). Как и на стадии личинки, время развития куколки варьируется в зависимости от касты (рабочий: 12 дней, трутень: 14,5 дней, матка: 8 дней).

Взрослые: Взрослые пчелы (рис. 6) покрыты ветвистыми волосками и могут быть разделены на три части тела: голову, грудную клетку и брюшную полость (рис. 8).Основные черты головы — сложные глаза и усики. К грудной клетке прикрепляются две пары крыльев и три пары ног. Тонкая «талия» создается за счет сужения второго сегмента живота. Самая заметная внешняя особенность брюшка — жало. Жало есть только у самок медоносных пчел, так как оно происходит от модифицированного яйцеклада.

Рис. 7. Каркас соты из управляемой семьи европейских медоносных пчел, содержащий все стадии жизни европейских медоносных пчел, Apis mellifera, Linnaeus и рабочих пчел, ухаживающих за развивающимся выводком.Королеву можно увидеть в правом нижнем углу.
Кредит: Джеффри В. Лотц, Департамент сельского хозяйства и бытовых услуг Флориды — Отдел растениеводства.

Рис. 8. Европейская медоносная пчела, Apis mellifera Linnaeus, кормится на цветке.Обратите внимание на волосы, покрывающие тело, и «талию», образованную сужением второго сегмента брюшной полости.
Кредит: Сьюзен Э. Эллис, littleladiesofthehive.com (используется с разрешения).

Европейских медоносных пчел нелегко отличить от расы африканских медоносных пчел, обитающих в Америке. Однако европейские медоносные пчелы немного крупнее африканских медоносных пчел. Персонал лаборатории использует морфометрический анализ структуры жилкования крыльев и размера различных частей тела, чтобы отличить европейских медоносных пчел от африканских / африканизированных медоносных пчел.Кроме того, генетический анализ может различать и идентифицировать межпородное скрещивание между подвидами.

Биология

В пчелиной семье труд распределяется между людьми в зависимости от касты и возраста. Единственное предназначение дрона — спариваться с девственной королевой из другой колонии. Королева является единственным несушкой в ​​колонии и отвечает за производство всего потомства колонии (до 1500 яиц в день). Рабочие медоносные пчелы названы так потому, что они выполняют все задачи по содержанию колонии.Каждый работник будет выполнять разные задачи исключительно в предсказуемом порядке в зависимости от своего возраста. Это называется возрастным полиэтиизмом. Самые молодые рабочие ухаживают за расплодом (яйцами, личинками и куколками), в то время как старшие строят восковые соты, обрабатывают продовольственные склады в колонии (рис. 9) и охраняют вход в колонию. Самые старые рабочие — собиратели; это медоносные пчелы, с которыми люди сталкиваются чаще всего.

Рис. 9. Мед (слева) и пыльца (справа), хранящиеся в восковых сотах внутри колонии.
Фото: Джеффри В. Лотц, Департамент сельского хозяйства и бытовых услуг Флориды — Отдел растениеводства.

Сплоченность пчелиной семьи зависит от эффективного общения. Медоносные пчелы в основном общаются внутри колонии с помощью химических сигналов, называемых феромонами. У рабочих, трутней и королев есть разные железы, вырабатывающие феромоны. Эти феромоны включают нижнечелюстной феромон матки, который позволяет колонии обнаруживать присутствие своей матки, феромоны выводка, которые сигнализируют о типе ухода, который требуется незрелым пчелам в колонии, и феромон Насанова (Рисунок 10), который сообщает местоположение колонии рабочим, которые могли быть перемещены в результате беспорядков в колонии.

Рис. 10. Рабочая медоносная пчела, Apis mellifera Linnaeus, обнажает железу Насанова на конце брюшка и распахивает крылья, чтобы высвободить феромон Насанова, когда колония была потревожена путем снятия крышки.
Кредит: Эшли Н. Мортенсен, УФ / МФСА

Одно из самых заметных проявлений поведения медоносных пчел — это укус. Жало — это защитное поведение, которое пчелы используют для защиты колонии. При обнаружении вторжения в колонию пчелы-охранники выпускают феромон тревоги, который вызывает защитную реакцию колонии.Более того, когда медоносная пчела ужаливает, она выделяет феромон тревоги, чтобы привлечь больше пчел, чтобы ужалить то место, которое было ужалено. Все рабочие медоносные пчелы умирают после ужаливания, а европейские медоносные пчелы редко кусают без провокации.

Жизненный цикл

Из-за высокой социальной истории жизни пчелиные семьи могут считаться суперорганизмами. Это означает, что вся колония, а не пчелы по отдельности, рассматривается как биологическая единица. Имея это в виду, медоносные пчелы размножаются не путем производства большего количества отдельных пчел, а, скорее, путем производства большего количества семей.Репродуктивный процесс создания новой колонии называется роением.

Европейские медоносные пчелы обычно роятся весной и в начале лета, когда много пыльцы и нектара. Чтобы инициировать процесс роения, колония производит от 10 до 20 дочерних маток. Когда дочерние королевы находятся на поздней стадии куколки, королева-мать и около двух третей взрослых рабочих покидают колонию и отправляются в место, где они объединятся (рис. основать новую колонию (обычно в замкнутой полости, например дупле дерева).

Рис. 11. Репродуктивный рой европейских медоносных пчел Apis mellifera Linnaeus собрался на ветке дерева, пока разведчики ищут место для основания новой колонии.
Кредит: Сьюзен Э. Эллис, littleladiesofthehive.com (используется с разрешения).

Дочерние королевы в исходной колонии затем появляются взрослыми и сражаются, пока одна королева не останется в живых, если одна королева не появится раньше, чем ее сестры, и в этом случае она будет охотиться и убивать своих нерожденных братьев и сестер.После короткого периода дальнейшего созревания оставшаяся дочерняя королева покидает колонию, чтобы спариться примерно с 15 трутнями. Все спаривания происходят в первые 2 недели жизни королевы, вне улья и в воздухе в местах скопления трутней. Затем королева хранит собранную сперму в своей сперматеке до конца своей жизни. После успешного спаривания дочерняя матка начинает откладывать яйца, завершая обе половины процесса роения.

Европейские медоносные пчелы адаптированы к умеренному климату, где есть только короткий сезон, когда доступно большое количество пыльцы и нектара.По этой причине они обычно роятся только раз в год. Остаток весны / лета посвящен сбору и хранению достаточного количества нектара и пыльцы для создания запасов пищи, необходимых для выживания осенью и зимой.

Такое поведение запаса ресурсов делает европейских медоносных пчел отличными производителями меда. Нектар собирается с цветов и превращается в мед посредством ферментативных процессов и обезвоживания в колонии. В это время мед покрывают восковой сотой, где он может оставаться свежим почти бесконечно, в зависимости от исходного источника нектара.После этого пчеловоды и охотники за медом могут собрать эти соты для употребления в пищу человеком.

Экономическое значение

Европейские медоносные пчелы являются постоянным компонентом сельскохозяйственной системы США. Фактически, опыление медоносными пчелами вносит значительный вклад в мировое производство продуктов питания. Пчелы опыляют более 30% пищи, которую мы едим, а в Соединенных Штатах, по оценкам, пчелы ежегодно опыляют урожай на сумму до 15 миллиардов долларов. Помимо услуг по опылению, медоносные пчелы также производят другие продукты, которые люди используют, в том числе мед, пыльцу, воск, маточное молочко и прополис.

Менеджмент

Управление пчеловодством популярно во всем мире и сильно различается по стилю и масштабу. Коммерческие пчеловоды могут содержать 2000 и более семей, тогда как пчеловоды-любители могут иметь их до 1. Оборудование, используемое для содержания семей медоносных пчел, также очень разнообразно. Некоторые из наиболее популярных стилей оборудования включают скипы, верхнюю планку, бревенчатую резинку и ульи Лангстрота, причем улей Лангстрота является наиболее широко используемым в Соединенных Штатах (рис. 12). Улей Лангстрота оснащен сменными коробками (надстройками) со съемными рамками (сотами), которые позволяют проводить осмотр колонии, обработку вредителей / болезней и сбор меда без разрушения колонии.

Рис. 12. Пасека выращиваемых европейских медоносных пчел, Apis mellifera Linnaeus, колонии в ульях Лангстрота.
Кредит: Мэри Кей Вайгель, UF / IFAS

Патогены и вредители медоносных пчел распространились по всему миру вместе с перемещением европейских медоносных пчел. В Соединенных Штатах европейские медоносные пчелы восприимчивы к широкому спектру вирусных, грибковых и бактериальных инфекций, включая, помимо прочего, вирус деформированного крыла, меловой выводок, Nosema , европейский гнилец и американский гнилец.Европейские пчелы также являются хозяевами естественных вредителей, таких как трахейный клещ (https://edis.ifas.ufl.edu/in329) и восковая моль (https://edis.ifas.ufl.edu/aa141), а также интродуцированные, такие как маленькие жуки-ульи (http://entnemdept.ufl.edu/creatures/misc/bees/small_hive_beetle.htm) (вредители медоносных пчел из Африки) и клещи Varroa (http://entnemdept.ufl.edu/ creatures / misc / bees / varroa_mite.htm) (паразит медоносной пчелы из Азии).

Пчеловоды используют комплексные стратегии борьбы с вредителями, чтобы поддерживать воздействие многочисленных проблем, связанных с вредителями и патогенами, ниже приемлемого порога.Некоторые из этих методов борьбы включают выбор подходящего места на пасеке, дополнительное кормление, отлов вредителей в колониях, замену маток, профилактические обработки и химический контроль.

Сами пчелиные семьи также могут считаться вредителями, когда рой диких пчел создает новую колонию в нежелательном месте, таком как стена дома, почтовый ящик или другое место, где они будут часто контактировать с людьми ( Рисунок 13). В этом случае обученный специалист (https: // edis.ifas.ufl.edu/in771) или пчеловоду, чтобы удалить мешающую колонию.

Рис. 13. Беспокоящие колонии европейских медоносных пчел, Apis mellifera Linnaeus. Слева: рабочие медоносные пчелы у входа в колонию у внешней стены дома. Справа: нижняя часть крыши навеса для машины срезана, чтобы обнажить восковые гребни колонии.
Кредит: Энтони Ваудо, UF / IFAS

Избранные источники

Аткинс ЭЛ. 1975. Улей и пчела .Гамильтон, Иллинойс: Дадант и сыновья.

Деберри С., Кроули Дж., Эллис Дж. Д. (2012). Управление роем для управляемых ульев . Гейнсвилл: Институт пищевых и сельскохозяйственных наук Университета Флориды. https://edis.ifas.ufl.edu/in970 (19 июля 2013 г.)

Delaplane KS. 2007. Первые уроки пчеловодства . Гамильтон, Иллинойс: Дадант и сыновья.

Дания HA, Cromroy HL, Sanford MT. (2006). Трахеальный клещ медоносной пчелы, Acarapis woodi (Rennie) (Arachnida: Acari: Tarsonemidae) .Гейнсвилл: Институт пищевых и сельскохозяйственных наук Университета Флориды. https://edis.ifas.ufl.edu/in329 (19 июля 2013 г.)

Эллис А., Эллис Дж. Д., О’Мэлли М.К., Зеттл Нален С.М. (2012). Польза пыльцы для медоносных пчел . Гейнсвилл: Институт пищевых и сельскохозяйственных наук Университета Флориды. https://edis.ifas.ufl.edu/in868 (19 июля 2013 г.)

Ellis JD. (2010). Расстройство коллапса колонии (CCD) у медоносных пчел. Гейнсвилл: Институт пищевых и сельскохозяйственных наук Университета Флориды.https://edis.ifas.ufl.edu/pdffiles/IN/IN72000.pdf (19 июля 2013 г.)

Эллис Дж. Д., Эллис А. (2012). « Apis mellifera scutellata Lepeletier (Насекомое: Hymenoptera: Apis)». Избранные существа. http://entnemdept.ufl.edu/creatures/misc/bees/ahb.htm (19 июля 2013 г.)

Эллис Дж. Д., Эллис А. (2013). « Aethina tumida Murray (Insecta: Coleoptera: Nitidulidae)». Избранные существа. http://entnemdept.ufl.edu/creatures/misc/bees/small_hive_beetle.htm (19 июля 2013 г.)

Эллис Дж. Д., Зеттель Нален CM.(2013) « Varroa destructor Андерсон и Труман (Arachnida: Acari: Varroidae)». Избранные существа. http://entnemdept.ufl.edu/creatures/misc/bees/varroa_mite.htm (19 июля 2013 г.)

Ходжес А., Малки Д., Филиппакос Е., Фэйрчайлд Г., Сэнфорд М. (2012). «Экономическое влияние пчеловодства Флориды, 1999 г.» Гейнсвилл: Институт пищевых и сельскохозяйственных наук Университета Флориды.

Юрген Т. 2008. Шумиха о пчелах: биология суперорганизма. Берлин-Хайдерберг, Германия: Springer-Verlag.

Мориц RFA, Саутвик EE. 1992. «Пчелы как суперорганизмы: эволюционная реальность». Нью-Йорк: Springer-Verlag.

O’Malley MK, Ellis JD. (2012). Выбор подходящего оператора по борьбе с вредителями для удаления медоносных пчел: руководство для потребителей . Гейнсвилл: Институт пищевых и сельскохозяйственных наук Университета Флориды. https://edis.ifas.ufl.edu/in771 (19 июля 2013 г.)

Корневой AI. 1975. «Азбука и XYZ пчеловодства». Медина ОХ: A. I. Root Company.

Шеппард WS.1989a. «История введения медоносных пчел в Соединенных Штатах: Часть I.» Американский пчелиный журнал 129: 617-619.

Шеппард WS. 1989b. «История введения медоносных пчел в Соединенных Штатах: Часть II». Американский пчелиный журнал 129: 664-667.

Winston ML. 1987. «Биология медоносной пчелы». Кембридж, Массачусетс: Издательство Гарвардского университета, Кембридж.

Sanford MT. (2011). Борьба с восковой моли . Гейнсвилл: Институт пищевых и сельскохозяйственных наук Университета Флориды.https://edis.ifas.ufl.edu/aa141 (19 июля 2012 г.)

Исключение суперинфекции и долгосрочное выживание медоносных пчел в колониях, зараженных варроа

Использование комбинации RT-qPCR, HRM (Martin et al., 2012) и Illumina (2 × 100 п.н.) Hi-seq-секвенирования (рисунок 1), мы исследовали вирусную нагрузку DWV и разнообразие в этой небольшой популяции медоносных пчел в Суиндоне и связанных с ними клещах Varroa . Три улья были выбраны случайным образом, и образцы из 30 бессимптомных рабочих пчел были взяты из колонии 10 раз с примерно ежемесячными интервалами в период с октября 2012 года по октябрь 2013 года.RT-qPCR на фрагменте гена РНК-зависимой РНК-полимеразы ( RdRp ) для всех 30 собранных образцов подтвердила сохранение высоких нагрузок DWV (от 10 ⁷ до 10 ⁸ копий на пчелу) в течение всего периода исследования. три улья (дополнительная таблица S2). И нагрузка DWV, и распространенность, обнаруженные в этом исследовании, позволяют предположить, что наличие DWV само по себе не может объяснить потери колоний, как предполагалось в предыдущих исследованиях на Гавайях (Martin et al., 2012) и Devon, UK (Highfield et al., 2009).

Чтобы изучить другие факторы, которые могут способствовать этому открытию, мы использовали известные нуклеотидные полиморфизмы во фрагменте гена RdRp среди известных основных вариантов DWV (A, B и C) (Martin et al., 2012; Mordecai et al. ., 2015). HRM указывает на преобладание основного варианта типа B или C (рис. 2a), поскольку они имеют сходные температуры плавления (Martin et al., 2012; Mordecai et al., 2015). Только один образец медоносной пчелы из 30 протестированных содержал как DWV типа A, так и B / C, что свидетельствует о том, что, хотя колония может подвергаться воздействию типа A, она не может прижиться и не сохраняется и не накапливается.В отличие от образцов пчел, образцы Varroa содержали большее сочетание DWV типа A и B / C (рис. 2b), хотя тип B / C оставался наиболее распространенным. Это преобладание типа B / C над A контрастирует с тем, что было показано в предыдущем исследовании на Гавайях, где доминировал основной вариант типа A (Martin et al., 2012), и предполагает, что тип B / C может быть авирулентной формой DWV. Однако, учитывая, что HRM-анализ обнаруживает только ограниченное геномное изменение (внутри фрагмента гена RdRp ), нельзя исключать возможность рекомбинации за пределами области RdRp.Оба Мордехай и др. (2015) и Рябов и др. (2014) показали, что некоторые рекомбинанты мастер-вариантов A – C и A – B, соответственно, могут быть более летальными, чем мастер-вариант типа A.

Рисунок 2 Анализ кривой

HRM для области DWV RdRp RT-qPCR для трех ульев в колониях Великобритании (улей 6 — синий, улей 17 — голубой, улей 19 — зеленый). ( a ) Медоносные пчелы и ( b ) клещи Варроа, различающие варианты DWV типа A и B / C. Деформированные крылатые пчелы с симптомами были использованы в качестве положительного контроля (розовая линия).Также использовали отрицательный контроль без матрицы (черная линия).

Доминирование основного варианта DWV типа B было, однако, подтверждено секвенированием Illumina (рисунки 3,4,5). В процентах от общего количества секвенированных считываний Illumina совпадения DWV составили в среднем 46,3% считываний в образцах Varroa и 9,7% считываний у медоносных пчел. Средний охват генома DWV для образцов медоносной пчелы составил 22 484X, в то время как образец Varroa имел среднее покрытие DWV 599 558X.Сборка VICUNA произвела 6410 контигов в 18 образцах (дополнительная таблица S1). Образец «Улей 6 января 2013» был использован для сборки варианта DWV типа B «Swindon» (дополнительная таблица S3), который оказался на 99,5% идентичным эталонному геному типа B (VDV-1) (дополнительный рисунок S1). Рисунок 4 также показывает, что охват DWV типа B был высоким: более 15 миллионов считываний образцов медоносных пчел по сравнению с 241 000 считываний, сопоставленных с эталоном типа A. Аналогично, в образцах Varroa 71.5 миллионов считываний сопоставлены с типом B по сравнению с чуть более 1 млн считываний для типа A. Считывания типа B выровнены по всему геному, тогда как полный охват генома типа A был ограничен образцами Varroa . Никаких считываний, уникальных для генома Devon DWV типа C, найти не удалось ни в образцах медоносной пчелы, ни в образцах Varroa . В целом, виром, ассоциированный с медоносной пчелой и Varroa , в изолированных британских исследуемых колониях был преимущественно DWV типа B (рис. 5), что указывает на то, что возможны альтернативные конкурентные исходы основного варианта DWV.

Рисунок 3

Пропорции подгрупп DWV в колониях, секвенированные с использованием Illumina Hi-seq. ( a ) Образцы Swindon рухнули в соответствующие ульи 6, 17 и 19. ( b ) Гавайские образцы с Оаху и Биг-Айлендс. Был использован алгоритм BLASTn для пользовательской базы данных квазивидов DWV, и числа указывают совпадения для каждого варианта DWV.

Рис. 4

Покрытие генома по данным Hi-seq Illumina для колоний Суиндона. ( a ) Карта генома DWV адаптирована из Lanzi et al (2006).( b ) Геномы DWV типа A и B (выделены красным и синим соответственно), собранные на основе данных Illumina NGS медоносных пчел и клещей с пасеки Суиндон (ульи 6, 17 и 19). De novo собранных контига VICUNA, которые составляют эти геномы для каждого улья, были депонированы в Европейском нуклеотидном архиве (ENA) под номерами доступа от ERS636096 до ERS636117.

Рисунок 5

Виром пасеки Суиндон. Считывания Illumina были проанализированы по вирусной базе данных (рис. 1) с использованием BLASTn, и была подсчитана доля самых популярных вирусов, связанных с вирусами медоносных пчел.DWV типа B доминировал в ежемесячных пробах как в пробах медоносных пчел (H6, h27, h29), так и в пробах Варроа (V6, V17, V19).

De novo и эталонная сборка геномов вариантов DWV предполагают, что произошла рекомбинация с возможным рекомбинацией типа A, о чем свидетельствует присутствие рекомбинантов DWV в образцах медоносных пчел (рисунки 4, 6 и 7). Полногеномные каркасы каждого рекомбинанта получали с использованием контигов VICUNA. Они были сопоставлены с геномами типа A и B, и Simplot (рис. 7) показал, что рекомбинационные соединения в образцах Swindon отличались от ранее описанных.Мур и др. (2011) показали, что рекомбинационное соединение происходит в 5′-нетранслируемой области генома, тогда как обнаруженное здесь рекомбинантное соединение Swindon DWV типа A-B встречается в структурной области открытой рамки считывания (Рисунки 4 и 7). Хотя полный охват генома не был достигнут как в образцах медоносной пчелы, так и в образцах Varroa при сборке de novo для типа A, интересно, что эталонное выравнивание считываний DWV от клещей Swindon Varroa показывает, что присутствует весь геном типа A. на низких уровнях (рис. 4), хотя анализ HRM показал, что тип A (мастер или любые его рекомбинанты) быстро удаляется в течение следующих 5 месяцев (см. рис. 2, улей 17).Низкое количество считываний типа A (1,68% согласно анализу BLAST), присутствующее в исследуемой популяции Великобритании (рисунок 3), было однозначно связано с новыми рекомбинантами (рисунки 4, 6 и 7, дополнительная таблица S4), в которых большая часть генома были типом B, но содержали область последовательности типа A на 5′-конце генома (UTR и лидерный белок, рис. 4). Количество считываний в области рекомбинации для каждого из ульев было подсчитано для сравнения глубины покрытия между двумя вариантами (дополнительная таблица S4).Поскольку это прямое сравнение одной и той же области генома, то есть 3′-конца, которое вызвано смещением при прайминге олиго dT обратной транскрипции (рис. 4), смещение 3’не имеет значения. Во всех ульях количество считываний типа B превышало количество считываний типа A (рекомбинантные) на порядок от 4,5 (улей 19) до 36,4 (улей 17). Таким образом, преобладание основного варианта типа B в исследуемой популяции в Великобритании, по-видимому, коррелирует с уровнем защиты колоний, поскольку он исключает тип A или C (и любые их вирулентные рекомбинанты).

Рисунок 6

Множественное выравнивание последовательностей считываний, охватывающих рекомбинационное соединение в рекомбинанте DWV из h29, апрель 2013 г. Выходные данные анализа VICUNA были преобразованы в подходящий формат и импортированы в Geneious для визуализации считываний по типу A– Точка рекомбинации B. Эталонные последовательности DWV типа A и B показаны вверху и выделены красным и синим цветом соответственно. Замены пар оснований, общие для вариантов DWV типа A и B, выделены в каждом считывании Illumina размером 100 п.н.В этом примере показано 52 из 2464 операций чтения, которые покрывают предложенную область рекомбинации.

Рис. 7

Анализ Simplot различных геномов, присутствующих в образцах Swindon. Сходство нуклеотидов различных вариантов сравнивается с эталонным геномом типа B (VDV) (AY251269.2). Эталонный геном типа A (DWV) (NC004830.2) показан красным. Показан выбор каркасов генома DWV, содержащих рекомбинацию на 5′-конце генома; неоновый и темно-зеленый (рекомбинантный тип BAB из ульев 17 и 6 января 2013 г. соответственно), голубой (геном Swindon типа B из улья 6 января 2013 г.), темно-синий (геном Swindon типа B из улья 17 января 2013 г.) и розовый (тип A — B-рекомбинант, 27 апреля 2013 г.).Использовалось скользящее окно 200 нт с шагом 20 нт.

Для сравнения этого открытия доминирования типа B в этом исследовании с предыдущим гавайским исследованием (Martin et al., 2012) также были использованы образцы медоносной пчелы и гавайские образцы Варроа с известной историей Варроа . при условии Hi-seq секвенирования Illumina (2 × 100 пар оснований). Тот же аналитический трубопровод VICUNA, который использовался для образцов в Великобритании (рис. 1), привел к сборке 212 контигов (дополнительная таблица S1).На Оаху, где Варроа установился и вызвал массовую гибель колоний, колония, проанализированная с помощью Hi-seq (охват 173 567X), показала, что преобладает тип A (рис. 3b), подтверждая данные HRM из других 28 колоний из Оаху, которые также имели преимущественно тип А (Martin et al., 2012). Однако в колонии с Биг-Айленда, где Varroa присутствовал менее 2 лет и широкомасштабный коллапс колонии еще не произошел, тип B доминировал в считываниях последовательности (охват 195 760X).Напротив, образец Varroa из той же колонии на Биг-Айленде содержал почти равное сочетание типов A и B (93 014X), тогда как Varroa из Оаху (314 713X) преобладал тип A (Рисунок 3b). ). Переключение в преобладание между типами A и B у медоносных пчел Биг-Айленда предполагает активную конкуренцию между двумя вариантами DWV в соответствии с предлагаемым временным лагом в 1-3 года для вариантов DWV, адаптированных к передаче клещами для прохождения отбора (Martin et al., 2012).Как и в Суиндоне, ни у одной из медоносных пчел, ни у образцов Varroa ни у одного из островов не было обнаружено значительных совпадений с типом C. Запаздывание перехода от B к A на Большом острове соответствует периоду, когда клещ приживается, но до того, как колонии начинают умирать. Нормальным результатом этого варианта конкуренции является доминирование типа А, о чем свидетельствует его передача по всему миру (Berényi et al., 2007). На пасеке Суиндона, устойчивой к Varroa , авирулентный вариант типа B, по-видимому, препятствует тому, чтобы тип A стал доминирующим.Важно отметить, что в Суиндоне клещи Varroa содержали часть ридов типа A (представляющих весь геном типа A), которые не были обнаружены у медоносных пчел, что позволяет предположить, что эффективная передача типа A от паразита к хозяину была предотвращена (Рисунок 4) .

SIE хорошо документирован для вирусов, связанных с DWV, например, Tscherne et al. (2007) использовали клеточные линии, чтобы показать, что заражение одним генотипом вируса гепатита С предотвращает заражение другими. SIE лучше всего объясняет феномен того, почему, несмотря на высокую нагрузку DWV и заражение Varroa , изолированные британские колонии не разрушаются.Мы предполагаем, что совместная эволюция системы медоносная пчела- Варроа клещ-DWV выбрана для нового стабильного равновесия, при котором как Varroa , так и авирулентный вариант DWV типа B защищают медоносную пчелу и, следовательно, колонию от вирулентный тип А (рис. 8). Необходима дальнейшая работа для подтверждения этого и определения механизма исключения вирусов. Например, чтобы продемонстрировать, может ли тип B защищать от типа A или C на клеточном и индивидуальном уровне медоносной пчелы, с помощью анализов, подобных тем, которые описаны Рябовым и соавт.(2014). Если это правда, это будет первый отчет о воздействии SIE на возбудителей пчел Iflavirus . По иронии судьбы, это может быть наличие популяции клещей, которая защищает колонию, поскольку Varroa может обеспечивать возможность постоянного повторного введения типа B в популяцию посредством горизонтальной передачи. Кроме того, хотя рекомбинанты присутствовали как в образцах медоносной пчелы, так и в образцах Varroa , неясно, происходят ли они от медоносных пчел, Varroa или обоих.

Рисунок 8

Новый баланс медоносной пчелы, клеща Варроа и DWV. DWV типа A отображается красным цветом, а тип B — синим. В ульях, свободных от Варроа, DWV существует в виде облака вариантов, присутствующих на низких уровнях. В больных крапивницей, таких как Оаху, тип А присутствует в цикле передачи, опосредованном Варроа. В то время как в Суиндоне передача типа B между пчелами и Варроа предотвращает вторжение варианта типа A в медоносных пчел, и, следовательно, улей выживает.

Также остается неясным, при каких условиях может преобладать тип B и действуют ли аналогичные механизмы защиты у населения Бразилии, США и Франции.Хотя механизм исключения, наблюдаемый на пасеке Swindon, неясен, был обнаружен уникальный рекомбинант между типами A и B (рисунок 6), что позволяет предположить, что полноразмерный геном типа A (рисунок 4) активно подавляется. Это аналог рекомбинации, вызывающей острые инфекции, как описано Moore et al. (2011) и Рябов и др. (2014). Другие механизмы-кандидаты были ранее идентифицированы у различных вирусов на различных этапах жизненного цикла вируса, включая блокирование входа вируса в клетку на уровне взаимодействия рецепторов или занятия сайтов для репликации РНК (Lee et al., 2005). Альтернативно, преобладание типа B в образцах Swindon могло быть из-за индукции дифференциального иммунного ответа со стороны хозяина, такого как RNAi (Hunter et al., 2010).

Исследования патогенов медоносных пчел показали, что естественный отбор способствует выживанию и передаче DWV по сравнению с вирусами комплекса острого пчелиного паралича (ABPV, KBV и IAPV), которые обладают более высокой вирулентностью (de Miranda and Genersch, 2010; Schroeder and Мартин, 2012). В этом сценарии для выживания вируса необходимо, чтобы куколки жили достаточно долго, чтобы обеспечить созревание Varroa и дальнейшую передачу вируса.Например, острая вирулентность ABPV быстро убивает и взрослых особей, и куколок, завершая цикл передачи, поскольку клещи, связанные с куколками, не выживают (Schroeder and Martin, 2012). Те же рассуждения могут быть применены к квазивидам DWV, где конкретная динамика варианта хозяина диктует стабильную передачу или распространенность. Следовательно, рассматриваемая популяция Swindon UK, о которой идет речь, могла развиться в пользу устойчивости DWV типа B в результате хозяйственной практики, которая была выбрана для нового стабильного непатогенного равновесия.Однако это явление не свойственно Суиндону, поскольку недавнее исследование в Южной Африке обнаружило только DWV типа B на четырех исследуемых пасеках, при этом тип A не был обнаружен ни у клещей, ни у медоносных пчел (Strauss et al., 2013). Это повышает вероятность того, что SIE может работать в более широком масштабе в некоторых географических регионах.

На основании нашего исследования мы выдвинули гипотезу, что в пределах роя DWV, благодаря SIE, различные вирусные варианты конкурируют с двумя заметными исходами. Либо доминируют варианты, вызывающие болезнь, что может привести к коллапсу колонии (Martin et al., 2012), или авирулентный вариант может преобладать, достигая высоких вирусных нагрузок, что исключает вирулентные варианты. На пасеке Суиндона достигнуто эволюционно стабильное состояние, при котором симптомы болезни минимальны, а колонии выживают. Данные показывают, что доминирование типа B на этой изолированной пасеке в Великобритании было стабильным только в течение года после отбора проб, но неофициальные данные свидетельствуют о том, что вирусный состав пчел в Swindon Honey Bee Conservation Trust оставался стабильным в течение некоторого времени.

Обнаружение потенциального механизма SIE у медоносных пчел дает тем, кто желает ограничить или искоренить источники колонии медоносных пчел, отказаться от возможности активного вмешательства. Например, в цитрусовой промышленности, где SIE используется для снижения потерь урожая путем инокуляции растений доброкачественным вариантом вируса Citrus tristeza для защиты от заражения более патогенной формой (Lee and Keremane, 2013). Соответственно, прямое введение DWV типа B могло бы обеспечить форму биологического контроля против дальнейшего разрушения семей европейских медоносных пчел перед лицом заражения Varroa .

Язык танцев медоносных пчел

Не может быть никаких аргументов в пользу того, что наиболее известным аспектом биологии медоносных пчел является их метод вербовки, широко известный как язык танцев медоносных пчел. Он послужил модельным примером общения животных на курсах биологии на всех уровнях и является одним из самых увлекательных видов поведения, которые можно наблюдать в природе.

Танцевальный язык используется отдельным работником для передачи как минимум двух элементов информации одному или нескольким другим работникам: расстояние и направление до места (обычно это источник пищи, например, участок цветов).Чаще всего его используют, когда опытный собиратель возвращается в свою колонию с грузом еды, будь то нектар или пыльца. Если качество корма достаточно высокое, она часто будет «танцевать» на поверхности воскового гребня, чтобы привлечь новых собирателей к ресурсу. Танцевальный язык также используется для вербовки пчел-разведчиков в новое гнездо в процессе репродуктивного деления или роения. Новобранцы следуют за танцующей пчелой, чтобы получить содержащуюся в ней информацию, а затем выходят из улья к интересующему месту.Информация о расстоянии и направлении, содержащаяся в танце, является репрезентацией местоположения источника (см. «Компоненты языка танца») и, таким образом, является единственным известным абстрактным «языком» в природе, отличным от человеческого.

Язык танца неразрывно связан с доктором Карлом фон Фришем, который широко признан в интерпретации его значения. Он и его ученики тщательно описали различные компоненты языка в ходе десятилетий исследований. В их экспериментах обычно использовались наблюдательные ульи со стеклянными стенами, обучение помеченных фуражиров к источникам пищи, находящимся на известном расстоянии от колонии, и тщательное измерение угла и продолжительности танцев, когда собиратели возвращались.Его работа в конечном итоге принесла ему Нобелевскую премию (по медицине) в 1973 году.

Однако концепция языка медоносных пчел не лишена скептицизма.

Некоторые ученые, такие как доктор Адриан Веннер, утверждали, что тот факт, что танец существует, не обязательно означает, что он передает информацию о местонахождении источника пищи. Эти критики утверждали, что цветочные запахи на теле собирателя являются основными сигналами, которые новобранцы используют для поиска новых источников пищи.Многие эксперименты напрямую проверяли эту альтернативную гипотезу и продемонстрировали важность цветочных запахов в расположении пищи. Фактически, фон Фриш придерживался того же мнения, прежде чем передумал в пользу абстрактного танцевального языка.

Однако биологическая реальность находится где-то между этими двумя крайностями. Наиболее общепринятая точка зрения состоит в том, что новобранцы идут в область, изображенную в танце, но затем «возвращаются домой» к цветочному клумбу, используя запаховые сигналы. Действительно, исследователи создали роботизированную медоносную пчелу, которая может исполнять танцевальный язык и набирать начинающих собирателей в определенные места.Робот, однако, не может должным образом вербовать собирателей к источнику пищи, если на его поверхности нет запаха. Тем не менее очевидно, что медоносные пчелы используют информацию о расстоянии и направлении, передаваемую языком танца, который представляет собой один из самых интригующих примеров общения животных.

Чтобы напрямую перейти к нашему интерактивному интерактивному руководству, щелкните здесь.

Рисунок 1.Пчела.

По сути, в танце передаются две вещи: расстояние и направление. Эти две части информации переводятся в отдельные составляющие танца.

Расстояние

Когда источник пищи находится очень близко к улью (то есть на расстоянии менее 50 метров), собиратель исполняет хоровод (рис. 2). Она делает это, бегая узкими кругами, внезапно меняя направление на свой первоначальный курс. Она может повторить танец несколько раз в одном и том же месте или перейти в другое место, чтобы повторить танец. После окончания хоровода она часто раздает еду идущим за ней пчелам. Таким образом, хоровод передает расстояние («близко к улью»), но не направление.

Источники пищи, находящиеся на промежуточном расстоянии, от 50 до 150 метров от улья, привлекаются к серповому танцу. Форма этого танца — полумесяц, переходный танец между хороводом и покачиванием в форме восьмерки (рис. 2).

Танец виляния, или танец виляния хвостом, исполняется пчелами, ищущими пищу в источниках пищи, находящихся на расстоянии более 150 метров от улья. Этот танец, в отличие от танцев с кругом и серпом, сообщает потенциальным новобранцам расстояние и направление.Пчела, исполняющая танец виляния, бежит прямо вперед на короткое расстояние, возвращается полукругом к исходной точке, снова бежит по прямому курсу, затем делает полукруг в противоположном направлении, чтобы завершить полный круг в форме восьмерки. Во время танца по прямой линии тело пчелы, особенно живот, энергично покачивается в стороны (рис. 3). Эта вибрация тела дает виляние хвостом. В то же время пчела издает серию гудящих звуков, производимых взмахами крыльев, с низкой частотой 250-300 Гц (циклов в секунду) с длительностью импульса около 20 миллисекунд и частотой повторения около 30 секунд.

Хотя некоторые переменные в танце виляния коррелируют с информацией о расстоянии (например, «темп» танца, продолжительность жужжащих звуков), продолжительность прямой части танца, измеряемая в секундах, является самым простым и надежным показателем расстояние. По мере того, как расстояние до источника пищи увеличивается, продолжительность виляющей части танца («виляющий бег») также увеличивается. Отношение примерно линейное (Рисунок 4). Например, собиратель, выполняющий покачивание, длится 2.5 секунд — это набор для источника еды, расположенного примерно в 2625 метрах.

Направление

В то время как представление расстояния в танце виляния относительно прямолинейно, метод передачи направления является более сложным и абстрактным. Ориентация танцующей пчелы во время прямой части ее танца виляния указывает на расположение источника пищи относительно солнца. Угол, который принимает пчела относительно вертикали, представляет собой угол к цветкам относительно направления солнца за пределами улья.Другими словами, танцующая пчела переводит солнечный угол в гравитационный. На рисунке ниже приведены три примера. Фуражир, вербующийся к источнику пищи в том же направлении, что и солнце, будет танцевать, виляя бегущей частью прямо на гребне.

И наоборот, если бы источник пищи был расположен прямо от солнца, прямой путь был бы направлен вертикально вниз. Если бы источник пищи находился на 60 градусов влево от солнца, покачивание было бы на 60 градусов влево от вертикали.

Поскольку информация о направлении зависит от положения солнца, а не от направления по компасу, танец собирателя для определенного ресурса будет меняться со временем. Это потому, что положение солнца меняется в течение дня. Например, для источника пищи, расположенного прямо на востоке, собиратели будут танцевать примерно прямо утром (потому что солнце встает на востоке), но будут танцевать собиратели примерно прямо вниз ближе к вечеру (потому что солнце садится на западе). .Таким образом, время дня (или, что более важно, положение солнца) является важной переменной для интерпретации информации о направлении в танце.

Положение солнца также зависит от географического положения и времени года. Солнце всегда будет двигаться с востока на запад в течение дня. Однако выше тропика Рака солнце всегда будет на юге, тогда как ниже тропика Козерога солнце всегда будет на севере. В тропиках солнце может переходить на юг или север, в зависимости от времени года.

Таким образом, чтобы перевести информацию о направлении, содержащуюся в танце медоносной пчелы, нужно знать угол покачивания (относительно силы тяжести) и направление солнца по компасу (которое зависит от местоположения, даты и времени. дня).

Рис. 2. Хоровод и виляющий танец.

Рисунок 3.Диаграмма качания.

Рисунок 4. Соотношение между расстоянием и продолжительностью.

Фриш, Карл фон.1967. Язык танцев и ориентация пчел . The Belknap Press of Harvard University Press, Кембридж, Массачусетс, стр. 566.

Фриш, Карл фон. 1976. Пчелы: их зрение, химические чувства и язык . Cornell University Press, Revised Edition, Ithaca, N.Y., pp. 157.

Сили, Томас Д. 1995. Мудрость улья: социальная физиология колоний медоносных пчел . Издательство Гарвардского университета, стр. 295.

Веннер, Адриан М.и Патрик Х. Уэллс. 1990. Анатомия спора: вопрос о «языке» пчел . Columbia University Press, Нью-Йорк, стр. 399.

Фигуры

Танцевальные диаграммы: от фон Фриша, 1976, стр. 70.

Направляющий рисунок: от Барта, Ф. Г. 1982. Насекомые и цветы: биология партнерства . Издательство Принстонского университета, Принстон, стр 221.

Дополнительная информация

Для получения дополнительной информации о пчеловодстве посетите веб-сайт Beekeeping Notes.

Дэвид Р. Тарпи Профессор и специалист по пчеловодству Отделение энтомологии, Кампус 7613 Государственный университет Северной Каролины Роли, Северная Каролина 27695-7613 ТЕЛ: (919) 515-1660 ФАКС: (919) 515-7746 ЭЛЕКТРОННАЯ ПОЧТА: [email protected]

Дженнифер Дж. Келлер Техник по пчеловодству Отделение энтомологии, Кампус 7613 Государственный университет Северной Каролины Роли, Северная Каролина 27695-7613 ТЕЛ: (919) 513-7702 ФАКС: (919) 515-7746 ПОЧТА: jennifer_keller @ ncsu.edu

Дэвид Тарпи

Профессор и специалист по пчеловодству
Энтомология и патология растений

Дополнительную информацию можно найти на следующих веб-сайтах NC State Extension:

Дата публикации: фев.23 августа 2016 г.
AG-646

N.C. Cooperative Extension запрещает дискриминацию и домогательства независимо от возраста, цвета кожи, инвалидности, семейного и семейного положения, гендерной идентичности, национального происхождения, политических убеждений, расы, религии, пола (включая беременность), сексуальной ориентации и статуса ветерана.

Манука Мед индуцирует апоптоз эпителиальных раковых клеток посредством сигналов аквапорина-3 и кальция

Abstract

Мед — это натуральный продукт, который давно используется в традиционной медицине и, как известно, регулирует различные биологические процессы.Это важный источник различных биологических или фармакологических молекул, поэтому изучение их свойств вызывает большой интерес. Растет количество доказательств того, что мед может быть противораковым средством, действующим через несколько механизмов. Здесь мы впервые наблюдали на линии раковых клеток возможный механизм, посредством которого мед может вызывать изменение внутриклеточных активных форм кислорода и гомеостатический баланс внутриклеточной концентрации кальция, что приводит к гибели клеток в результате апоптоза.Этот механизм, по-видимому, усиливается способностью меда манука поддерживать высокую проницаемость для H ₂ O ₂ через аквапорин-3.

Ключевые слова: AQP3, Ca ²⁺ сигнализация, мед, манука, ROS

1. Введение

Мед, полученный из нектара, собранного медоносными пчелами, представляет собой комбинацию углеводов, белков, жирных кислот, минералов и витамины, содержащие несколько классов фитохимических веществ с высоким содержанием флавоноидов и присутствием фенольных соединений [1].

Мед давно используется как традиционное лекарство, и одно из древних известных применений — это заживление ран. Антибактериальная активность меда хорошо описана в литературе, и некоторые внутренние характеристики меда, такие как кислотность и высокая осмолярность, а также наличие флавоноидов и фенольных кислот признаны важными для этой активности [1].

Более того, растет число широко распространенных научных и клинических показаний, предлагающих использовать мед для заживления ран и восстановления тканей [1,2,3].

В дополнение к его антибактериальным и способствующим ранению способностям, недавние данные подчеркнули множественную роль меда в высвобождении воспалительных цитокинов макрофагами [4], стимуляции миграции нейтрофилов [5], ингибировании пролиферации клеток и индукции апоптоза, а также в остановке клеток. цикл [6] и ингибирование окисления липопротеинов [7].

Совсем недавно исследования показали, что мед, богатый флавоноидами и полифенолами, проявляет антипролиферативные свойства против линий опухолевых клеток [6,7,8].

Тем не менее, его противоопухолевые механизмы еще не полностью объяснены. Было предложено несколько путей, посредством которых натуральный мед может производить свои противоопухолевые свойства, такие как проницаемость внешней мембраны митохондрий, остановка клеточного цикла, индукция апоптоза и модуляция окислительного стресса [9].

Аквапорины — это трансмембранные белки, изначально распознаваемые как водные каналы у всех организмов, а затем, как было обнаружено, проявляют множественную субстратную специфичность, такую ​​как перекись водорода (H ₂ O ₂ ) [10,11].

Мы уже продемонстрировали, что мед способен производить H ₂ O ₂ [2], а в кератиноцитах особый аквапорин (например, аквапорин-3) помогает пассивной диффузии H ₂ O ₂ через биологические мембраны [2]. Опосредованный H ₂ O ₂ транспорт через аквапорин-3 (AQP3) имеет физиологическое значение для нижестоящих клеточных сигнальных путей, таких как начало внутриклеточных сигналов Ca ²⁺ [12,13].

Здесь мы описываем механизм, посредством которого мед манука вызывает изменение внутриклеточных АФК и гомеостатического баланса [Ca ²⁺ ] _i , что приводит к гибели клеток в результате апоптоза в линии раковых клеток.Этот механизм усиливается способностью манука меда поддерживать высокую проницаемость для H ₂ O ₂ через AQP3.

Эти результаты расширяют наши знания и могут быть полезны для применения меда в качестве терапевтического кандидата для нацеливания на опухолевые клетки.

2. Материалы и методы

2.1. Образец меда

Образцы меда различного цветочного происхождения, например, гречиха манука (UMF, Unique Manuka Factor, 15+, 250 мг / кг метилглиоксаля, 250+ MGO) и акация возрастом менее 12 месяцев были получены из Центра пчеловодства Ямада, Inc. .(Tomata-gun, Окаяма, Япония). Сырой мед выдерживали при комнатной температуре в темноте. Исходный раствор меда готовили путем растворения в нагретой среде DMEM (среда Игла, модифицированная Дульбекко) или загрузочном буфере и стерилизовали 0,22 мкм. Перед каждым экспериментом готовили свежеприготовленный мед.

2.2. Культура клеток и реагенты

Все реагенты, если не указано иное, были приобретены у Mercks / Sigma-Aldrich.

Клетки A431 (полученные из эпидермальной карциномы вульвы, взятой у 85-летней женщины) поддерживали при 5% CO ₂ , 37 ° C, в 4.DMEM 5 г / л (с высоким содержанием глюкозы), дополненная стрептомицином (100 мг / мл), 10% FBS, пенициллином (100 Ед / мл) и L-глутамином (200 мМ) (FBS, Euroclone, Милан, Италия) [14] .

2.3. Анализ Calcein-Am

Анализ жизнеспособности клеток выполняли с использованием кальцеин-ацетоксиметилового эфира (Calcein-AM), нефлуоресцентного липофильного красителя. Кальцеин-АМ проникает в клетки и превращается в гидрофильный флуоресцентный краситель в цитоплазме внутриклеточными эстеразами. Клетки A431, посеянные в 96-луночные планшеты, подвергали воздействию меда в течение 24 часов, как указано, затем промывали PBS и выдерживали при 37 ° C в течение получаса с помощью зонда (Calcein-Am, приготовленный в PBS, 2.5 мкМ). Затем были получены значения флуоресценции с помощью многомодового ридера (Infinite 200 Pro, Tecan, Wien, Австрия) с использованием фильтра возбуждения 485 нм и фильтра излучения 535 нм.

2.4. Анализ апоптоза

Индукцию апоптоза медом в клетках A431 оценивали с помощью набора для многопараметрического анализа апоптоза (каталог № 600330, Cayman Chemicals Company, Ann Arbor, MI, USA). Клетки, посеянные в 96-луночные планшеты, подвергали воздействию меда в течение 3 часов, как указано, и анализировали с использованием многомодового ридера (Infinite 200 Pro, Tecan).

2,5. Свободный цитозольный Ca

²⁺ Концентрация ([Ca ²⁺ ] _i ) Измерения

Клетки, засеянные и оседающие в течение ночи на стеклянных чашках (Iwaki Glass, Inc., Токио, Япония), загружали в темноте при 37 ° C в течение 30 минут с 20 мМ Fluo-3 / AM, флуоресцентным, проницаемым для клеток кальциевым зондом. Использовали загрузочный буфер, состоящий из (мМ) 1 MgCl ₂ , 5 KCl, 10 глюкозы, 2 CaCl ₂ , 140 NaCl и 10 ph 7,4 HEPES. Чтобы провести эксперименты, избегая присутствия Ca ²⁺ (0 Ca ²⁺ условие), ион отсутствовал в конфокальном буфере [14,15,16,17].Затем клетки анализировали в режиме покадровой съемки, используя конфокальный аппарат (система Zeiss LSM 510), оборудованный инвертированным микроскопом (Carl Zeiss Microscopy GmbH, Йена, Германия).

Возбуждение производилось источником аргона (488 нм), а излучение собиралось широкополосным фильтром. Чтобы уменьшить обесцвечивание Fluo-3, мощность лазера была уменьшена до 1%. Клетки наблюдали с помощью объектива Цейсса 20x (0,5 NA). Флуоресценцию Fluo-3 измеряли с использованием инструмента ROI-mean программы Zeiss.

Калибровка датчика Fluo-3 была реализована с использованием этого подхода [18]:

Ca ²⁺ = Kd (F — Fmin) / (Fmax — F)

где Kd составляет 400 нмоль / л.

Fmax и Fmin представляют собой соответственно максимальный и минимальный уровни флуоресценции, достигнутые Fluo-3 после воздействия 500 мкМ A23187 (ионофор кальция) с последующим добавлением 20 мМ EDTA.

2.6. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

После воздействия на клетки заданных условий эксперимента использовали коммерческий набор для сбора и очистки общей РНК (набор NucleoSpin RNAII от Macherey-Nagel, Düren, Германия).кДНК была создана с помощью специального набора кДНК (от Roche Diagnostics, Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit). Количественная ПЦР с обратной транскриптазой (qRT-PCR) была проведена с использованием мастер-смеси Sybr green (Ambion Inc, Остин, Техас, США) и панели праймеров (KiCqStart ^® SYBR ^® Green Primers;) с помощью машины для ПЦР. (Машина CFX384 Real-Time от Bio-Rad Laboratories, Геркулес, Калифорния, США). Для расчета экспрессии гена использовали метод ∆∆Ct.

Таблица 1

Последовательности праймеров, используемые для количественной ПЦР с обратной транскриптазой (qRT-PCR).

гена-мишени	Вперед Последовательность	Обратной Последовательность
аквапорин 9	5′-ATTGGGATCCACTTCACTG-3′	5′-AGTGGACTGTGAACTTCC-3′
аквапорин 5	5′-GCTGGCACTCTGCATCTTCGC-3′	5′-AGGTAGAAGTAAAGGATGGCAGC-3′
AQP4	5′-GCTGTGATTCCAAACGGACTGATC-3′	5′-CTGACTCCTGTTGTCCTCCACCTC-3′
AQP3	5′-CTGTGTATGTGTATGTCTGC-3′	5′-TTATGACCTGACTTCACTCC-3′
AQP1	5′-TAAGGAGAGGAAAGTTCCAG-3′	5′-AAAGGCAGACATACACATAC-3′
β-актина	5′-TCCCTGGAGAAGAGCTACGA-3′	5′-AGCACTGTGTTGGCGTACAG-3′
GADPH	5′-AATCCCATCACCATCTTCCA-3′	5′-TGGACTCCACGACGTACTCA -3ʹ

2.7. Иммуноблоттинг.

культур клеток A431 гомогенизировали с использованием буфера RIPA с добавлением смеси для ингибирования фосфатазы и протеазы. Гомогенаты обрабатывали при 80 ° C в течение 10 мин в буфере Лэммли [19]. В общей сложности 30 мкг белков электрофоризовали на готовом полиакриламидном геле (4-20% Mini-PROTEAN TGX Stain-Free Gels, Bio-Rad Laboratories) и PVDF мембрану подвергали блоттингу с использованием Trans-Blot Turbo Transfer Pack (Bio- Rad Laboratories) со специальной системой переноса (Bio-Rad Laboratories).

Для предотвращения неспецифического связывания белков PVDF-мембраны были заблокированы с помощью блокирующего раствора, состоящего из трис-буферного солевого раствора (TBS), приготовленного из 5% обезжиренного молока и 0,1% твина.

Мембраны

затем зондировали в течение одного часа или в течение ночи кроличьим антителом против AQP3 (SAB5200111 с разведением 1: 1000) и антителом RabMAb против бета-2-микроглобулина (EP2978Y) Abcam, номер продукта: ab75853 с разведение 1: 10 000), разведенного в TBS и 0,1% твине. После промывки мембраны экспонировали в течение не менее 1 ч вторичным козьим антителом против кролика, конъюгированным с пероксидазой (AP132P; Millipore, с разведением 1: 100 000), приготовленным в блокирующем растворе.Полосы визуализировали путем инкубации на аппарате для выявления вестерн-блоттинга (CYANAGEN, Италия). Для аппроксимации молекулярных масс полос использовали предварительно окрашенные маркеры молекулярной массы (ab116028, Abcam). Блоты сканировали с помощью системы сканирования Expression 1680 Pro (Epson Corp., Лонг-Бич, Калифорния, США). Полосы количественно оценивали с помощью денситометрии (Amersham), и результаты указывали как денситометрическое соотношение AQP3 / B2M.

2,8. РНК-интерференция

Подход N-тер наночастиц был использован для трансфекции клеток 5 мкМ миРНК олигонуклеотидов или эквимолярной скремблированной миРНК.Мы использовали коммерческие последовательности siRNA, специфичные для AQP3 человека (см.). Коммерчески не нацеливающая миРНК (универсальный отрицательный контроль миРНК) была использована для экспериментов со скремблированной миРНК. Трансфицированные клетки собирали через 24 часа и использовали для указанных тестов.

Таблица 2

олигонуклеотидных последовательностей миРНК.

2 906GCC 60CAC-3ʹ2

Белок-мишень	Прямая последовательность	Обратная последовательность
AQP3	5ʹ-GAGCAGAUCUGAGUGGGCA-3ʹ-GAGCAGAUCUGAGUGGGCA-3ʹ	5ʹ9. Измерение внутриклеточных ROS Уровень ROS, присутствующих в клетках, оценивали с использованием дигидрородамина (DHR) -123, предшественника флуоресцентного красителя, трансформированного в флуоресцентный родамин 123 при взаимодействии с ROS. Клетки, засеянные в 96-луночные планшеты, загружали при комнатной температуре в темноте в течение получаса с DHR-123 (30 мкМ) в загрузочном буфере, как описано для эксперимента конфокальной микроскопии. После инкубации клетки промывали загрузочным буфером и флуоресценцию измеряли с помощью многомодового ридера (Infinite 200 Pro, Tecan) с использованием фильтра возбуждения 485 нм и фильтра эмиссии 530 нм.Наблюдения за продукцией АФК обозначались как произвольные единицы флуоресценции [20]. 2.10. Измерения водопроницаемости Осмотическая водопроницаемость клеток A431 оценивалась методом рассеяния света с остановленным потоком, как уже определено [21]. Водный транспорт оценивали в (а) контрольных, необработанных клетках, (б) клетках, подвергнутых воздействию 50 мкМ H 2 O 2 в течение 45 минут и (в) клетках, обработанных 4% медом манука в течение 45 минут. Изоосмолярность контрольных и обработанных H 2 O 2 клеток была получена путем добавления 4% искусственного меда [2] (3 г сахарозы, 11.17 г глюкозы, 13,5 г фруктозы и 5,7 мл воды) в среду для инкубации. 2.11. Статистический анализ Статистические данные были выполнены с помощью GraphPad Prism 8 (GraphPad Software Inc, Сан-Диего, Калифорния, США). На основании полученных данных были использованы одно- или двухфакторные дисперсионные анализы, а затем были применены необходимые поправки (критерий Тьюки, поправка Бонферрони, пост-тест Даннета и Q-критерий Ньюмана-Кеулса). Статистические детали каждого эксперимента (использованный тест, значение n, количество повторов, значение p и т. Д.) Можно найти в подписях к рисункам. 3. Результаты 3.1. Жизнеспособность клеток Мы оценили цитотоксичность меда, используя конечную точку Calcein-Am на клетках A431, клеточной линии эпидермоидной карциномы. Мы использовали три вида меда, такие как акация, гречка и манука, как показано на. Таблица 3 Значения эффективных концентраций, EC 05 и EC 50 (% об. / Об.), Полученные из кривых доза-ответ для трех медов на клетках A431 через 24 часа. Мед EC05 EC50 Акация 2.36% (1,68–3,32%) 5,84% (5,33–6,39%) Гречка 1,05% (0,67–1,69%) 3,78% (3,41–4,19%) Манука 0,66% (0,48–0,92%) 2,59% (2,36–2,85%) По результатам анализа жизнеспособности клеток, мы проводили последующие эксперименты только с медом манука, который оказался наиболее цитотоксичным. 3.2. Внутриклеточный Ca 2+ Варианты Мы начали исследовать, способен ли мед манука вызывать изменения в [Ca 2+ ] i .Соответственно, мы измерили изменения внутриклеточного Ca 2+ , индуцированные после обработки медом, с помощью покадровой конфокальной микроскопии изображений клеток A431, предварительно загруженных Fluo-3 / AM, флуоресцентным датчиком Ca 2+ . Мы наблюдали, что [Ca 2+ ] i , отобранные с интервалами 5 с (A) и с интервалами 0,5 с (A), не испытывали в контрольных условиях каких-либо спонтанных колебаний. Манука мед определил увеличение внутриклеточной концентрации Ca 2+ в клетках A431 дозозависимым образом.( A ) [Ca 2+ ] – вариации, оцениваемые с 5-секундными интервалами, не демонстрирующие изменений в контрольных условиях и дозозависимых конфигурациях передачи сигналов Ca 2+ после обработки различными концентрациями меда манука, т. Е. 1 , 2, 3, 4 и 5% об. / Об. Стрелка показывает добавление меда через 60 с. Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего для следов [Ca 2+ ] и , оцененных в различных клетках. Объем выборки: на каждую концентрацию по 40 клеток из 3 опытных. ( B ) [Ca 2+ ] – вариаций, выраженных как среднее ± SEM пика или плато ответов Ca 2+ , стимулированных обработкой различными концентрациями.Количество ячеек, как указано ранее. Звездочки на столбиках указывают на статистические различия между CTRL и другими условиями, определенными двухфакторным дисперсионным анализом с последующим пост-тестом Тьюки (**** p <0,0001, *** p <0,001, ** p < 0,01, * p <0,05). ( C ) Сравнение вариаций [Ca 2+ ] и , выраженных как среднее ± SEM пика и плато ответов Ca 2+ , стимулированных обработкой 4 или 5% об. / Об.Размер выборки, как указано ранее. Статистические данные получены с помощью двустороннего дисперсионного анализа с последующей поправкой Бонферрони. Характеристика меда манука индуцировала повышение Ca 2+ в клетках A431. ( A ) [Ca 2+ ] – изменений, зарегистрированных с интервалами 0,5 с, вызванных 4% медом манука. Данные представляют собой среднее значение [Ca 2+ ] и следов, записанных в 40 различных клетках. ( B ) Чтобы контролировать роль меда в индукции увеличения [Ca 2+ ] и , клетки A431 стимулировали 4% медом манука (черная стрелка), а затем лечение медом было прекращено (серая стрелка) .Когда мед был удален из среды, наблюдалось уменьшение [Ca 2+ ] i . Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего для [Ca 2+ ] и следов, записанных в 40 различных клетках из 3 эксп. Мы проанализировали вариации [Ca 2+ ] и клеток A431, подвергшихся воздействию диапазона возрастающих концентраций (1, 2, 3, 4 и 5% об. / Об.) Меда манука, наблюдая дозозависимое увеличение в [Ca 2+ ] i, (). Записанные следы показали, что от 1 до 3% мед манука вызывал незначительный пик, который возвращался в фазу плато, сравнимую с контрольными условиями (A, B).Напротив, 4 и 5% меда манука определяли постоянный пик [Ca 2+ ] — , который не мог вернуться в фазу гомеостатического плато (A, B). В частности, как показано на C, в этих условиях фазы пика и плато существенно не различались, что указывает на измененный гомеостаз кальция. Учитывая несовместимость с выживаемостью клеток обработки 5% медом манука, несмотря на короткое время наблюдения, мы решили выполнить следующую регистрацию сигналов Ca 2+ только с 4% меда манука. Кроме того, чтобы подчеркнуть важность присутствия меда для поддержания измененной фазы плато, мы выполнили наблюдение, обрабатывая клетки медом манука через 60 с, как и в других экспериментах. Сразу после достижения фазы пика мы удалили обработку медом, заменив ее только загрузочным буфером. Мы наблюдали, что отсутствие меда в среде определяло значительное снижение [Ca 2+ ] i , которое достигало контрольных значений сразу после удаления меда (B). 3.3. Происхождение Ca 2+ и Ca 2+ Вовлечение инструментария Мы повторили предыдущий эксперимент в состоянии 0 Ca 2+ (то есть при отсутствии Ca 2+ во внеклеточном пространстве) и результат показали исчезновение пика Ca 2+ после воздействия 4% меда манука, но небольшое увеличение в фазе плато. (А). Чтобы отметить необходимость наличия кальция во внеклеточном пространстве, мы провели наблюдение, обрабатывая клетки медом манука.Сразу после фазы пика мы продолжали лечение медом, но в состоянии 0 Ca 2+ . Мы заметили, что отсутствие внеклеточного кальция определяет постепенное снижение [Ca 2+ ] i , достигая контрольных значений (B). Ответ Ca 2+ на мед включал внеклеточное проникновение Ca 2+ . ( A ) Передача сигналов Ca 2+ из-за воздействия 4% меда манука была устранена в условиях 0 Ca 2+ .Стрелка показывает добавление меда через 60 с. Данные выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего для следов [Ca 2+ ] и , зарегистрированных в различных клетках. Количество ячеек: мед манука 0 Ca 2+ : 30 ячеек из 3 эксп; мед манука: 40 ячеек из 3 опыта; Вставка. Среднее значение ± стандартная ошибка среднего отклика пика Ca 2+ , измеренного при выбранных обработках. Количество ячеек, как в ( A ) Звездочки на столбцах указывают статистические различия, определенные с помощью двухфакторного дисперсионного анализа с последующей поправкой Бонферрони (**** p <0.0001). ( B ) Клетки A431 стимулировали 4% медом манука в присутствии, а затем в отсутствие внешнего Ca 2+ (0 Ca 2+ ). Когда Ca 2+ был удален из среды, наблюдалось уменьшение [Ca 2+ ] i . Черная стрелка указывает на добавление меда через 60 с; серая стрелка — удаление внеклеточного Ca 2+ . Данные выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего [Ca 2+ ] и следов, зарегистрированных в 40 различных клетках из 3 опытов. Эти результаты подчеркнули, что внеклеточное проникновение Ca 2+ показало решающую роль в повышении [Ca 2+ ] i в клетках A431, обработанных медом манука. Чтобы дополнительно оценить участие Ca 2+ в проникновении из внеклеточного пространства, мы провели эксперимент в присутствии 4% меда манука и эконазола, ингибитора TRPM2 (10 мкМ, предварительная инкубация 30 минут). Конфокальная визуализация показала, что присутствие ингибитора способно аннулировать пик Ca 2+ после воздействия 4% меда манука, но мы зарегистрировали во второй части наблюдения последующее небольшое повышение кальция, как ранее было обнаружено в 0 Ca 2+ условие (А). Ca 2+ Вовлечение инструментария. ( A ) Сигнальный ответ Ca 2+ за счет 4% меда манука был значительно снижен в присутствии эконазола (10 мкМ, предварительная инкубация в течение 30 минут). Стрелка показывает добавление меда через 60 с. Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего для следов [Ca 2+ ] и , оцененных в различных клетках. Размер образца: мед манука + эконазол: 40 клеток из 3 опытов; манука мед: 40 ячеек из 3 эксп. Вставка. Среднее значение ± стандартная ошибка среднего отклика пика Ca 2+ , измеренного при выбранных обработках.Количество ячеек, как в A. Звездочки на столбиках указывают на статистические различия, определенные двусторонним дисперсионным анализом с последующей поправкой Бонферрони (**** p <0,0001, * p <0,05). ( B ) Реакция Ca 2+ на 4% мед манука снижалась в присутствии U73122 (10 мкМ, 30 мин предварительной инкубации) и кофеина (10 мМ, предварительная инкубация 30 мин). Стрелка указывает добавление меда через 60 с. Данные представляют собой среднее значение ± SEM [Ca 2+ ] и следов, измеренных в клетках.Количество ячеек: мед манука: 40 ячеек из 3 опыта; манука мед + U73122: 40 ячеек из 3 опыта; манука мед + кофеин: 40 ячеек из 3 эксп. Вставка. Среднее значение ± стандартная ошибка среднего отклика пика Ca 2+ , измеренного при указанных обработках. Размер выборки как в B. Звездочки как во вставке A (**** p <0,0001, ** p <0,01). Кроме того, мы использовали два ингибитора сигнального пути IP 3 , то есть U73122, ингибитор PLC [14] (10 мкМ, 30 мин до инкубации) и кофеин, блокатор IP 3 R [15 ] (10 мМ, предварительная инкубация 30 мин).В обоих условиях мы наблюдали уменьшение примерно в 2,5 раза пика Ca 2+ (B). 3.4. Индукция апоптоза На основании результатов жизнеспособности клеток и наблюдений за изменением кальциевого гомеостаза мы оценили индукцию апоптоза, оценивая с помощью зонда TMRE потенциал митохондриальной мембраны (ΔψM). После обработки медом манука мы наблюдали значительное снижение ΔψM, подчеркивая сильную дозозависимую индукцию гибели клеток (A). Этот результат также был подтвержден оценкой положительности аннексина V (B).Поскольку известно, что уменьшение ΔψM вызывает повышение уровня АФК в цитозольной среде, мы также оценили с помощью зонда DHR-123 изменение внутриклеточных АФК после обработки 4% медом манука. Как и в случае C, после 45 мин воздействия мы обнаружили удвоение значения флуоресценции. Мед вызывает гибель клеток A431. ( A ) Флуоресценция TMRE оценивалась в клетках A431, обработанных в течение 3 часов различными концентрациями меда манука. Данные выражены в виде среднего значения ± стандартное отклонение от 10 независимых обработок и указаны как% флуоресценции.Звездочки на столбиках указывают на статистически значимые различия, оцененные с помощью однофакторного дисперсионного анализа с последующим пост-тестом Даннета (** p <0,01, **** p <0,0001). ( B ) Флуоресценция аннексина V-FITC в клетках A431, обработанных медом, как указано выше. Данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение, полученные для 10 независимых обработок, и выражены в% флуоресценции. Статистика как в A (*** p <0,001, **** p <0,0001). ( С ). Значения флуоресценции зарегистрированы после 45 мин инкубации с 4% меда манука.Данные указаны как среднее ± стандартное отклонение флуоресценции DHR-123, измеренной в произвольных единицах; n = 16 лунок микропланшета из двух экспериментов. Различные звездочки на столбцах указывают статистические различия, определенные с помощью теста t (**** p <0,0001). 3.5. Участие АФК в механизме действия меда манука Известно, что мед индуцирует выработку H 2 O 2 во внеклеточной среде [1] и что внеклеточное присутствие этого вида является фундаментальным для биологического меда. механизм действия [2].Кроме того, мы повторили конфокальное наблюдение клеток A431 под 4% меда манука в присутствии каталазы (CAT, 500U). Мы заметили, что CAT действует как «поглотитель» свободных радикалов, продуцируемых медом, и, следовательно, резко подавляет повышение [Ca 2+ ] i (A). Соответственно, H 2 O 2 является наиболее подходящим кандидатом для индукции передачи сигнала Ca 2+ после воздействия меда манука. АФК участвует в механизме действия меда манука.( A ) Передача сигнала Ca 2+ за счет 4% меда манука была полностью отменена обработкой каталазой (CAT 500U, предварительная инкубация в течение 30 минут). Данные указаны как среднее значение ± стандартная ошибка среднего для следов [Ca 2+ ] и , измеренных в различных клетках. Стрелка показывает добавление меда манука через 60 с. Размер выборки: манука мед + CAT: 40 ячеек из 3 опыта; манука мед: 40 ячеек из 3 эксп. Вставка . Среднее значение ± SEM пикового отклика Ca 2+ , измеренного при указанных воздействиях меда.Размер выборки, как в A. Звездочки на столбцах указывают статистические изменения, определенные с помощью двустороннего дисперсионного анализа с последующей поправкой Бонферрони (**** p <0,0001, * p <0,05). ( B ) Флуоресценция TMRE (левая панель) и флуоресценция аннексина V-FITC (правая панель) измерены в клетках A431, обработанных 4% медом манука плюс или без 500U CAT. Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение, полученное в 10 независимых экспериментах, и выражены как% флуоресценции. Звездочки на столбцах показывают статистически значимые изменения, оцененные с помощью однофакторного дисперсионного анализа с последующей поправкой Бонферрони (**** p <0.0001). Исходя из этого результата, мы снова провели анализ цитотоксичности, обрабатывая клетки с увеличивающимся диапазоном концентраций меда манука после предварительной обработки CAT. Значение EC 50 составило 10,23% (доверительный интервал (ДИ) 8,84–11,83%). Более того, чтобы понять, является ли внеклеточный H 2 O 2 фундаментальным в индукции апоптоза, мы снова оценили изменение ΔψM после обработки медом манука в присутствии или без CAT. Мы наблюдали значительное снижение ΔψM только в отсутствие CAT, в то время как мед плюс CAT не выявляли каких-либо значительных изменений по сравнению с необработанными клетками, подчеркивая ключевую роль, которую играют ROS в индукции апоптоза.Этот результат также был подтвержден при оценке положительности по аннексину V (B). 3.6. Роль аквапоринов (AQP) в токсичности меда Мы уже продемонстрировали, что аквапорины (AQP) способны опосредовать переход H 2 O 2 из внеклеточного пространства в цитозоль во время воздействия меда и прополиса [2,22] . В частности, мы продемонстрировали роль AQP3 в повышении уровня внутриклеточных АФК. С этой целью мы количественно определили базальную экспрессию некоторых AQP в клетках A431 и их вариации при воздействии меда манука ().Для этих экспериментов мы использовали концентрацию меда 2%, что привело к максимальной нетоксичной концентрации на основе конфокальных записей кальция. После обработки медом улучшилась только экспрессия AQP3. Экспрессия аквапоринов (AQP) в клетках A431. ( A ) Экспрессия генов AQP в клетках A431, обработанных 2% медом манука. Уровень мРНК AQP оценивали с помощью qRT-PCR и выражали как среднее относительное выражение ± стандартное отклонение (n = 3). Звездочка над полосой указывает статистические изменения, оцененные двухфакторным дисперсионным анализом с последующей поправкой Бонферрони (* p <0.05). ( B , C ) Экспрессия белка аквапорина-3 (AQP3) в клетках A431 после обработки медом манука (0,5 и 2%). CTRL — это условие управления. Были представлены кляксы, иллюстрирующие три. Дорожки были загружены 30 мкг белков, зондированных кроличьими антителами против AQP3, как определено в разделе «Материалы и методы». Те же блоты удаляли и повторно инкубировали с антителом против бета-2-микроглобулина (B2M) в качестве домашнего хозяйства. Основная полоса около 28 кДа была показана для AQP3. Чтобы оценить механизм, поддерживаемый AQP3 при токсичности, вызванной медом манука, мы выполнили анализ Calcein-Am после подавления AQP3 с помощью РНКи (A, B).Результаты показали, что ЕС 50 для скремблированных клеток составлял 3,56% (ДИ 2,58–4,37%), в то время как для клеток AQP3-siRNA он составлял 9,19% (ДИ 7,16–11,8%), подтверждая ключевую роль AQP3 в опосредовании цитотоксичности в A431. клетки. Основная роль AQP3 в опосредовании цитотоксичности меда манука в клетках A431. ( A , B ) Уровни белка AQP3 в клетках A431 в контрольных условиях (CTRL) или после обработки AQP3 RNAi (siRNA). Были представлены кляксы, иллюстрирующие три. 30 мкг белков загружали на каждую дорожку, затем зондировали антителом против AQP3 и обрабатывали, как указано в разделе «Материалы и методы».Затем те же блоты удаляли и инкубировали с антителом против бета-2-микроглобулина (B2M) в качестве домашнего хозяйства (* p <0,001, t -тест). ( C , D ) Влияние H 2 O 2 и 4% Manuka на осмотическую проницаемость для воды клеток A431 дикого типа и AQP3-KO. Клетки подвергали воздействию осмотического градиента 150 мОсм в трех различных условиях: необработанные клетки (Ctr), клетки, обработанные 50 мМ H 2 O 2 в течение 45 минут и обработанные 4% медом манука в течение 45 минут.Столбцы указывают на осмотическую проницаемость для воды клеток A431, выраженную как относительное значение k. Значения выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего для 4–15 одиночных выстрелов для каждого из четырех различных экспериментов. p <0,05 по сравнению с Ctr и Manuka 4% (ANOVA с последующим Q-критерием Ньюмана – Кеулса). ( E ) Значения флуоресценции оценивали через 10 минут в молчащих (RNAi AQP3) клетках, инкубированных с возрастающими концентрациями меда манука (1, 2 и 4%). Данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение флуоресценции родамина 123, выраженное в произвольных единицах; n = 16 лунок микропланшета из двух разных экспериментов.Статистика определяется односторонним дисперсионным анализом с последующим пост-тестом Даннета. ( F ) Ответ Ca 2+ на 4% об. / Об. Меда мануки ингибировался в клетках A431, трансфицированных РНКи, селективно нацеленных на AQP3. Стрелка указывает на добавление меда через 60 с. Данные указаны как среднее значение ± стандартная ошибка среднего для [Ca 2+ ] и следов, записанных в разных клетках. Количество клеток: мед манука + siRNA: 40 клеток из 3 эксп; манука мед: 40 ячеек из 3 эксп. Вставка .Среднее значение ± стандартная ошибка среднего отклика пика Ca 2+ , зарегистрированного при назначенных обработках. Количество ячеек, как в D. Звездочки на столбиках указывают на статистически разные изменения, оцененные с помощью двухфакторного дисперсионного анализа с последующей поправкой Бонферрони (**** p <0,0001, * p <0,05). Кроме того, мы оценили, был ли AQP3 медиатором входа H 2 O 2 , способного увеличивать внутриклеточные ROS. Используя метод светорассеяния с остановленным потоком, мы определили осмотическую проницаемость для воды клеток A431, которая является показателем проницаемости H 2 O 2 .Результаты показывают, что присутствие 50 M H 2 O 2 (концентрация, аналогичная концентрации, полученной при обработке медом) значительно снижает проницаемость AQP, в то время как для меда манука проницаемость не изменяется по сравнению с контрольным условием. Эти данные подтверждают участие AQP3 в проникновении H 2 O 2 в клетки и что одно или несколько веществ, присутствующих в меде манука, были способны поддерживать поры полностью открытыми даже при высоких концентрациях H 2 О 2 (С, Д).Кроме того, мы оценили с помощью зонда DHR-123 генерацию внутриклеточных АФК после добавления 4% меда манука, который был отменен в присутствии РНКи AQP3 (Е). Аналогичным образом, после воздействия меда быстрое увеличение [Ca 2+ ] i было полностью стерто при замалчивании РНКи AQP3 (F). 4. Обсуждение Опухоль — одна из наиболее частых причин смерти и серьезное бремя для здоровья [20], и количество новых случаев опухоли ежегодно растет.Неопластическое состояние по-прежнему остается проблемой даже при растущем количестве исследований по его профилактике и лечению. Классические методы лечения рака в последние годы показали серьезные негативные эффекты. Поэтому исследователи были очарованы менее токсичными подходами и новыми процедурами. Таким образом, растет осведомленность о практике дополнительной и альтернативной медицины для огромного количества состояний, от острых до хронических и смертельных [23]. Более того, большее внимание уделяется химиопрофилактическим и химиотерапевтическим средствам, полученным из пищевых или натуральных продуктов [24].Относительная безопасность пищевых добавок [25] делает их очень интересным и альтернативным подходом по сравнению с классическими методами лечения опухолей. Мед среди натуральных продуктов является наиболее изученным из-за его возможных противоопухолевых свойств [23]. Несколько авторов подчеркнули, что мед может служить основой для роста новых терапевтических средств для пациентов с опухолями и состояниями, связанными с опухолями. Мед джунглей показал индукцию хемотаксиса для нейтрофилов и продукции АФК, демонстрируя его противораковую активность [5].Недавние работы с некоторыми опухолевыми клетками человека, такими как шейка матки, груди, оральная саркома и остеосаркома [26,27,28], с использованием меда из джунглей Малайзии показали значительную противоопухолевую активность. Мед также показал, что обладает противораковыми свойствами in vivo и in vitro на экспериментальной модели мочевого пузыря [28]. Мед содержит огромное количество фитохимических веществ, таких как высокое содержание флавоноидов и фенолов, которые способствуют его действию [1]. Мед содержит сахар, белки, органические кислоты, витамины, фенольные и летучие соединения.Химический летучий состав меда имеет большое значение для влияния на его органолептические свойства. Среди этих летучих соединений мы можем рассматривать альдегиды, спирты, сложные эфиры, кетоны, производные бензола, азотсодержащие соединения и карбоновые кислоты. В настоящее время в медах различного ботанического происхождения обнаружено более нескольких сотен летучих молекул [23,25]. Некоторые различия в эффективности меда обусловлены его различными цветочными источниками, а также цветочными источниками могут быть разные активные молекулы.Мед манука недавно привлек внимание благодаря своей биологической активности, в частности, своим антиоксидантным и антибактериальным свойствам. Несколько наблюдений подтверждают использование меда манука в регенеративной медицине кожи [1,2,29]. Еще один интересный компонент меда манука — метилглиоксаль (MGO). Это соединение, обычно образующееся во время реакции Майяра, было признано важным фактором непероксидной антибактериальной активности меда манука [1]. Гречишный мед имеет характерный темный цвет, и его антиоксидантная способность хорошо известна [1].Гречишный мед по содержанию MGO намного ниже, чем в меде манука. Резкий запах гречишного меда и его темный цвет в основном объясняются его высоким содержанием минералов. Однако гречишный мед содержит больше фенольных соединений, чем мед манука [30]. Механизм того, как мед может способствовать противораковому эффекту, представляет большой интерес. С этой целью мы протестировали на A431, линии раковых клеток, цитотоксичность трех типов меда, характеризующихся различными концентрациями полифенольных соединений.Мы наблюдали растущий цитотоксический эффект также от меда из акации, гречихи и меда манука, поэтому мы решили использовать только мед манука для экспериментов и исследований. Мы уже тестировали цитотоксичность меда на эпидермальной незлокачественной клеточной линии, то есть клеточной линии HaCaT [2,29], которая показала более низкую токсичность, чем наблюдаемая с клеточной линией A431, особенно отмеченная EC 05 ценностей. На клетках HaCaT 24-часовая обработка медом манука стимулировала клетки, что позволило быстрее закрыть раневое ложе [29].Напротив, в клетках A431 мед манука определял индукцию апоптоза только после 3-часовой обработки. Перейдя к раскрытию механизма действия меда на опухолевые клетки, мы начали оценивать внутриклеточный гомеостаз Ca 2+ с помощью покадровой конфокальной визуализации. В контрольных условиях мы не наблюдали каких-либо изменений, но после обработки медом мы зафиксировали дозозависимое увеличение [Ca 2+ ] i с последующим устойчивым трендом плато только в случае более высоких концентраций мануки. лечение медом.В этих условиях, в отличие от того, что произошло после воздействия более низкой концентрации, гомеостатический [Ca 2+ ] i снова не был достигнут, что свидетельствует о поведении, несовместимом с выживаемостью клеток. Чтобы лучше охарактеризовать передачу сигналов Ca 2+ , возникающую после обработки медом манука, мы решили провести серию последующих экспериментов только с концентрацией 4% об. / Об., Которая была наиболее эффективной концентрацией, совместимой с временем сбора данных. Ca 2+ передача сигналов в невозбудимых клетках включает высвобождение Ca 2+ из внутриклеточных хранилищ и через плазматическую мембрану.Активация входа Ca 2+ , а также активация насосов Ca 2+ и ингибирование пассивных путей Ca 2+ поддерживают гомеостатические свободные цитозольные концентрации Ca 2+ . Известно, что в этих типах клеток активация сигнальных путей, опосредованных PLC, определяет высвобождение Ca 2+ из внутриклеточных хранилищ [31]. Как указывалось выше, действие меда на клетки осуществлялось за счет действия H 2 O 2 , продуцируемого во внеклеточном пространстве [2].Предварительная обработка 500 ед. Каталазы (CAT) полностью устраняет повышение Ca 2+ , что позволяет предположить ключевую роль видов ROS в запуске ответа Ca 2+ . Чтобы раскрыть причину увеличения [Ca 2+ ] i после воздействия меда, мы снова провели конфокальные наблюдения, обработанные 4% медом манука, но в условиях 0 Ca 2+ . Результаты показали, что вход из внеклеточного пространства был фундаментальным для наблюдаемого пика Ca 2+ ; однако во второй части записи мы заметили небольшое увеличение [Ca 2+ ] i по сравнению с базальным. Уже было описано, что начальное повышение Ca 2+ может быть вызвано некоторыми ROS-чувствительными каналами Ca 2+ , такими как TRPM2, TRPC5, TRPV1 и TRPA1 [32]; Итак, используя эконазол, мы наблюдали поведение, подобное тому, которое было зарегистрировано в 0 Ca 2+ , указывая на то, что канал TRPM2 участвовал в начальном входе Ca 2+ из внеклеточного пространства. Во многих типах клеток H 2 O 2 может также стимулировать мобилизацию Ca 2+ , изменяя из ER высвобождение Ca 2+ , действующее на рианодиновые рецепторы [21] и инозитол 1,4. , 5-трифосфат (IP 3 ) -зависимые Ca 2+ каналов [33].Кроме того, известно, что H 2 O 2 активирует PLC в некоторых типах клеток [34], поэтому мы исследовали, была ли активирована ось PLC / IP 3 после обработки медом. Мы охарактеризовали участие передачи сигналов IP 3 с помощью ингибитора PLC, U73122, и ингибитора IP 3 R, кофеина, наблюдая значительное, но не полное снижение [Ca 2+ ] i уровень. AQP3 был признан посредником захвата и накопления H 2 O 2 в цитозоле, что может изменять закрытие соседних H 2 O 2 -чувствительных каналов [13].Функциональные эксперименты по водопроницаемости продемонстрировали, что присутствие 50 M H 2 O 2 значительно снижает проницаемость AQP, тем самым ограничивая его проникновение в клетку, как ранее было продемонстрировано на других клеточных моделях [12,35,36]. Концентрация H 2 O 2 была аналогична концентрации, полученной при обработке медом манука [2], но, что удивительно, обработка медом манука не уменьшала водопроницаемость. Этот результат может свидетельствовать о том, что один или несколько компонентов меда манука поддерживали поры полностью открытыми, даже позволяя проникать в клетки высоким концентрациям H 2 O 2 и, таким образом, приводя к гибели клеток даже при высоких концентрациях H 2. O 2, , что обычно снижает его проницаемость. Мы наблюдали, что цитотоксический эффект меда манука осуществляется апоптозом, как уже было предложено [37], через действие H 2 O 2 , со значительным снижением ΔψM и увеличением внутриклеточных форм АФК. в то время как после предварительной обработки CAT жизнеспособность клеток сохранялась. Мы также недавно обнаружили на незлокачественных клетках [2], что мед вызывает сверхэкспрессию AQP3 и действует через этот белок, что приводит к увеличению внутриклеточных АФК и запускает изменение передачи сигналов Ca 2+ .Мы продемонстрировали, что также в клеточной линии A431 мед определил повышенную экспрессию AQP3, которая сыграла ключевую роль в выполнении этого механизма, даже если нельзя исключить, что мед манука может также действовать на другие AQP, кроме AQP3 [ 35,36]. Следовательно, AQP3 облегчает проникновение H 2 O 2 в цитоплазму, где он может запускать TRPM2-опосредованный вход Ca 2+ из внеклеточного пространства, действуя с цитозольной стороны. Более того, как ранее описано Huber и соавт. [38], окислительный стресс, вызванный проникновением H 2 O 2 через AQP3, а также исходным H 2 O 2 -опосредованным [Ca 2+ ] –, вызвало также высвобождение Ca 2+ из ER. Wang и др. [39] продемонстрировали сигнальную петлю TRPM2 – Ca 2+ –CaMKII – ROS, которая может определять сдвиг между выживанием и гибелью клеток. Они также указали, что продуцируемые или введенные в цитоплазму АФК определяют активацию TRPM2 и последующий приток Са 2+ , что, в свою очередь, приводит к дальнейшей внутриклеточной продукции АФК. Принимая во внимание, что внутриклеточное присутствие АФК и / или потребление антиоксидантных белков обычно увеличивается в опухолевых клетках, чем в нормальных клетках, что делает опухолевые клетки более чувствительными к окислительному стрессу [40], предлагаемый механизм можно рассматривать как петлю положительной обратной связи. Растет количество доказательств того, что мед может обладать противораковым действием через несколько механизмов. Здесь мы впервые описали на линии раковых клеток возможный механизм, с помощью которого мед может вызывать изменение внутриклеточных АФК и гомеостатического баланса [Ca 2+ ] и , что приводит к гибели клеток в результате апоптоза. Этот механизм, по-видимому, усиливается способностью меда манука поддерживать высокую проницаемость для H 2 O 2 . Таким образом, потенциальная противораковая активность меда манука может представлять собой новый тандемный механизм блокировки канала (AQP3), связанный с апоптозом, опосредованным H 2 O 2 .Более того, мы также подтвердили, как нарушение, вызванное окислительным стрессом, проходит через изменение внутриклеточного Ca 2+ . Визуальная рабочая память при принятии решений медоносными пчелами Чжан и др. . 10.1073 / pnas.0501440102. Вспомогательная информация Файлы в этом дополнении к данным: Вспомогательный фильм 1 Вспомогательная таблица 1 Вспомогательная таблица 2 Вспомогательная таблица 3 Вспомогательный фильм 1 Фильм 1. Эксперименты проводились во всепогодном помещении для полетов пчел в Исследовательской школе биологических наук Австралийского национального университета. На видео показан аппарат, использованный в экспериментах серии I, который состоял из туннеля длиной 7,2 м и решающей камеры, прикрепленной к дальнему концу. Образец образца представлял собой голубую решетку, ориентированную под углом 45º в середине туннеля. Пчелы летят в туннель через образец образца и попадают в камеру принятия решений. Дрессированная пчела должна будет выбрать один из двух шаблонов сравнения, который соответствует образцу, встреченному ранее в туннеле. Таблица 1. Дисперсионный анализ для серии I Расстояние, см Источник Сумма квадратов df Среднеквадратическое Коэффициент F P 25 ПЧЕЛ 0.499 15 0,033 0,731 0,740 Ошибка 2,001 44 0,045 75 ПЧЕЛ 2,033 15 0.136 1,146 0,352 Ошибка 4,492 38 0,118 125 ПЧЕЛ 0,455 9 0,051 1,065 0.434 Ошибка 0,806 17 0,047 175 ПЧЕЛ 0,621 8 0,078 1.040 0,433 Ошибка 1.940 26 0,075 275 ПЧЕЛ 0,277 8 0,035 0,465 0,867 Ошибка 1,565 21 0.075 375 ПЧЕЛ 1,299 9 0,144 1,816 0,090 Ошибка 3,737 47 0,080 475 ПЧЕЛ 0.422 7 0,060 1,077 0,410 Ошибка 1,231 22 0,056 575 ПЧЕЛ 0,559 5 0.112 1.401 0,280 Ошибка 1,197 15 0,080 Расстояние, расстояния между образцом стимула и входом в камеру принятия решения, в которой пчелы тестировались; df — степени свободы для заданных условий; ПЧЕЛЫ, вариация, присущая оценке производительности, плюс вариация, относящаяся к вариации отдельной пчелы; Ошибка, вариативность, присущая оценке производительности. F отношение, среднеквадратическое значение для ПЧЕЛ, деленное на среднеквадратическое значение ошибки. P , вероятность превышения отношения F , когда средние группы равны. Таблица 2. Дисперсионный анализ для серии II Exp. тип Источник Сумма квадратов df Среднеквадратичное F передаточное отношение п Обучение 1 ПЧЕЛ 0.275 8 0,034 1,176 0,338 Ошибка 1,142 39 0,029 Тест 1 ПЧЕЛ 0,140 6 0.023 2,163 0,088 Ошибка 0,227 21 0,011 Тест 2 ПЧЕЛ 0,123 6 0,020 2.659 0,050 Ошибка 0,139 18 0,008 Обучение 2 ПЧЕЛ 0,161 6 0,027 1.462 0.237 Ошибка 0,404 22 0,018 Тест 3 ПЧЕЛ 0,180 5 0,036 3,044 0,079 Ошибка 0.094 8 0,012 Exp. type перечисляет различные типы тестов. Другие подробности приведены в таблице 1. Таблица 3. Дисперсионный анализ для серии III Exp. тип Источник Сумма квадратов df Среднеквадратичное F передаточное отношение п Обучение 1 ПЧЕЛ 1.265 22 0,057 1,548 0,078 Ошибка 3,342 90 0,037 Тест 1 (S&R) ПЧЕЛ 0,616 17 0.036 0,995 0,510 Ошибка 0,510 14 0,036 Тест 1 (H&V) ПЧЕЛ 0,279 18 0,016 0.403 0,982 Ошибка 2,193 57 0,038 Обучение 2 ПЧЕЛ 0,389 14 0,028 0,871 0.593 Ошибка 1,402 44 0,032 Тест 2 (S&R) ПЧЕЛ 0,272 10 0,027 2,154 0,075 Ошибка 0.228 18 0,013 Тест 2 (H&V) ПЧЕЛ 0,193 9 0,021 1,930 0,092 Ошибка 0,289 26 0. Добавить комментарий Отменить ответ Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены * Комментарий * Имя * Email * Сайт Рубрики Мед Разное Советы ↑