Мед лечение простатита: какой мед при простатите

какой мед при простатите

какой мед при простатите

Интимный Крем-воск Медовый Спас от простатита, поистине спасение для сильной половины человечества. Это Новинка которую рекомендуют все Урологи-андрологи. Благодаря своему натуральному составу, который основан на продукции пчеловодства. Он не только снимет болезненные симптомы, но и окажет полноценное лечение. Помимо этого Вы быстро забудете про жжение, зуд и дискомфорт.

семена для лечения простатита, эффективные средства лечения простатита и аденомы
медовый спас от простатита купит в Ярославле
лечение простатита в израиле форум
guidelines международные стандарты лечения простатита
эффективное средство от хронического простатита

Влияние меда на простатит. Пчелиный мед — эффективное консервирующее и ранозаживляющее средство, которое препятствует нагноению тканей. В народной медицине апитерапия является одним из самых распространенных методов лечения заболеваний мочеполовой системы.. Начинать употребление настойки меда при простатите можно через 10 дней. Принимать 3 раза в день в течение полугода. Регулярное употребление меда в сочетании с какими-то продуктами благотворно влияет на потенцию, повышает выработку сперматозоидов, лечит простатит. Возраст простатита? Простатит у молодых и старых. Хронический простатит. Возможно ли вылечить? Бактериальный и другие виды простатита.. Какие анализы сдаются при простатите? Для диагностики простатита требуется консультация уролога (андролога) с целью сбора жалоб пациента, истории болезни, микроскопия секрета простаты и ультразвуковая диагностика. Для диагностики используется трансректальное ультразвуковое исследование предстательной железы (ТРУЗИ) и секрет предстательной железы, получаемый после массажа простаты, для микроскопического исследования.. Орехи, коренья, петрушка, огурец, мед, пчелы, пиявки и другие народные методы лечения простатита. Часто мужчины интересуются у врача, нужна ли диета при простатите, считая, что питание не влияет на работу предстательной железы. На самом деле здоровье этого органа сильно связано правильным функционированием пищеварительной системы и поступлением достаточного количества питательных веществ. У такого питания несколько задач. На десерт фруктовые пюре, желе, некислые ягоды. Можно есть мед, сухофрукты. Полезны орехи, семечки, отруби, цельнозерновой хлеб. Рекомендуется употреблять морепродукты. Предстательная железа – орган мужской репродуктивной сферы, размером и формой напоминающий грецкий орех. Простата находится в начале мочеиспускательного канала и вырабатывает секрет, направленный на поддержание жизнедеятельности сперматозоидов, поэтому патологический процесс, затрагивающий ее, приводит к нарушению мочеиспускания и половой функции, проблемам с эрекцией и бесплодию. Хронический простатит: что это такое? Наиболее распространенной патологией предстательной железы является простатит, заболевание воспалительного характера, в основе которого могут быть как инфекционные процессы, так и другие причины. Диета при остром и хроническом простатите, обострении простатита. Правильный выбор продуктов и техники приготовления пищи затруднит переход острого воспаления в хроническое, повысит эффект лекарств и специфических процедур.. 16 октября 2020. Диета — компонент комплексного лечения при простатите и аденоме простаты, без которого нельзя обойтись. Правильный выбор продуктов и техники приготовления пищи затруднит переход острого воспаления в хроническое, повысит эффект лекарств и специфических процедур. Принципы диеты при простатите у мужчин. Простата расположена в тазу рядом с прямой кишкой, поэтому процессы, идущие в кишечнике напрямую связаны со здоровьем этого органа. Эректильная дисфункция после 50 лет. Содержание. Свернуть. Какая потенция считается нормой у пятидесятилетних. Причины импотенции у мужчин после 50. Лечение. Упражнения. Как бороться с импотенцией после 50 лет с помощью диеты. Альтернативные методы. Медикаментозная терапия. Как сохранить потенцию до глубокой старости. Цены на лечение эректильной дисфункции после 50 лет в Москве. Стоимость лечения эректильной дисфункции в урологиях Москвы. Тревожит простатит — соблюдайте диету 👍 При простатите правильное питание играет огромную роль ✔ Что можно и нельзя кушать при простатите ➤ Полезные продукты ➤ Меню диеты.. Правильное питание при простатите и соблюдение диеты, прямо влияет на работу вашей предстательной железы! При лечении простатита врач обязательно скорректирует рацион, а также расскажет, что можно и чего нельзя кушать. Стоит отметить, что диета при простатите не имеет ничего общего с диетой, используемой при патологиях пищеварительной системы. Важно знать основные принципы правильного питания, чтобы исключить вероятность развития обострения. Семена тыквы – сильное природное средство при простатите и для восстановления потенции, предотвращает гельминтозы, улучшает работу сердечно-сосудистой и пищеварительной систем, содержит комплекс витаминов и минералов необходимых для сохранения потенции до преклонных лет, оказывает эффективное противовоспалительное действие при простатите, нормализует состояние предстательной железы и яичек. Аденома, простатит. Витамины и укрепляющие для мужского здоровья. Повышение потенции. Нервная система. Витамины для нервной системы. Ноотропы. Рецептурные ЛС.. Бахилы, маски и медицинская одежда. Контейнеры для анализов. Перевязочные материалы. бинты и вата. лейкопластыри. салфетки.

медовый спас от простатита купит в Ярославле какой мед при простатите

семена для лечения простатита эффективные средства лечения простатита и аденомы медовый спас от простатита купит в Ярославле лечение простатита в израиле форум guidelines международные стандарты лечения простатита эффективное средство от хронического простатита лечение простатита противопоказания лечение простатита витафоном

какой мед при простатите лечение простатита в израиле форум

лечение простатита противопоказания
лечение простатита витафоном
лечение простатита у мужчин препараты схема

прополис от простатита отзывы
народное медицина лечение простатита
простатит терапия лечение

Хотите победить простатит навсегда? Хотите вернуть свое мужское здоровье? Наш крем создан специально для того чтобы вернуть Вам уверенность в своих силах. Не ждите когда весь мир рухнет в Ваших глазах, заказывайте уже сегодня и завтра Вы снова будете чувствовать себя настоящим мужиком. В интернет-магазине официального продавца, где можно купить Медовый спас интимный от простатита, продается оригинальный препарат без посредников, поэтому не будет переплаты. Достаточно заполнить в специальной графе номер телефона. Покупателю перезвонит оператор, которому можно задать вопросы, уточнить условия доставки. Предоплата не требуется. Получают заказ в ближайшем отделении связи. Продавец упаковывает товар в пакет, который позволяет сохранить анонимность покупки. Препарат не только эффективный, но и абсолютно безопасный. Он действует местно и не попадает в системный кровоток. Поэтому, чтобы купить Медовый спас интимный от простатита, не нужен рецепт от врача. Оценить результат от терапии можно уже через несколько дней, но для стойкого эффекта препарат рекомендовано использовать курсом. Как пишут в реальных отзывах о Медовом спасе интимном от простатита, для полного выздоровления требуется примерно месяц регулярного использования добавки.

Лечение простатита

Воспаление предстательной железы (простатит) — распространенное заболевание, которое встречается более чем у 80% мужчин после 30 лет. Отсутствие выраженных симптомов и нежелание обращаться к врачу приводит к опасным осложнениям и формированию хронической формы. Регулярные профилактические осмотры позволяют выявить заболевание в начальной стадии. В клиниках IMMA созданы все условия для комфортного обследования и лечения простатита. Грамотные специалисты помогут даже в самых трудных случаях.

В наших клиниках вы можете:

Для уточнения подробностей и по любым вопросам обращайтесь по номеру, указанному на сайте

Особенности строения и расположения предстательной железы обуславливают ее подверженность инфекциям и воспалительным процессам. Стертость признаков и симптомов простатита приводит незаметному прогрессированию, осложнениям, распространению зоны поражения на близлежащие органы. Часто мужчины стараются не замечать проявления недуга, не хотят обращаться за медицинской помощью. Такое поведение способствует развитию патогенных процессов. Процент самоизлечения в этом случае крайне низок.

О предстательной железе

Простата – один из важнейших органов мужчины, во многом определяющий качество жизни.

Он представляет собой одиночную железу, расположенную у дна мочевого пузыря. Состоит она из двух долей, соединенных перешейком. Основные функции простаты:

• выработка жидкости, которая разжижает сперму, способствует созданию благоприятных условий для активности сперматозоидов;
• контролирует мочеиспускание. Простата прилегает к мочеиспускательному каналу и выполняет функции сфинктера;
• защищает мочевой пузырь от восходящей инфекции.

Любые нарушения в работе железы вызовут проблемы в половой сфере, процессах мочеиспускания. Это приводит к резкому снижению качества жизни. Своевременное лечение простатита у мужчин позволит избежать многочисленных осложнений, сохранит половую активность на долгие годы.

Симптоматика заболевания. На что обратить внимание?

Простатит у мужчин может протекать в двух формах: острой и хронической.

Острый простатит характеризуется следующей клинической картиной:

• интоксикация организма, сопровождающаяся повышением температуры более 38 градусов, общая слабость, тошнота;
• сильная боль в паховой области, отдающая в поясницу;
• трудности при мочеиспускании и дефекации.

Состояние больного в этом случае требует срочной госпитализации и стационарного лечения. В большинстве случаев болезнь полностью излечивается.

Симптомы хронического или застойного простатита делятся на группы:

• болевые;
• нарушения в половой жизни;
• проблемы в процессе мочеиспускания.

Болевые проявления на начальном этапе развития заболевания стерты, могут непредсказуемо возникать и исчезать. Локализуются в области нижней части живота, распространяясь на поясничный отдел и половые органы. Интенсивность может быть низкой, поэтому пациент может не обратить внимания на возникшую проблему.

Важно! Боль в нижней части живота может быть признаком не только простатита, но и других заболеваний мочевыделительной, половой систем и кишечника.

Возникшие проблемы в половой жизни являются одним из главных симптомов застойного простатита. Их проявления сводятся к следующему:

• снижение сексуального влечения;
• «стертый» оргазм, отсутствие ярких ощущений;
• сниженная эрекция или ее отсутствие;
• боль во время эякуляции или семяизвержения;
• повышенная необоснованная ночная эрекция.

Усугублению проблем способствует психологическое состояние. Мужчина начинает избегать половых контактов, возникает чувство тревожности, страха, неуверенности. Отрицательный эмоциональный фон усиливает признаки половой дисфункции.

Особенно неприятными являются нарушения в работе мочевыделительной системы. На начальных стадиях наблюдается незначительная задержка мочи при мочеиспускании, затем симптомы усиливаются, появляется боль и резь, чувство наполненности мочевого пузыря, частые позывы. Подобные проявления объясняются тем, что увеличенная простата начинает давить на мочевой пузырь и мочеиспускательный канал.

Следует учитывать особенность проявления данных признаков: нарастание симптомов может остановиться. На время проблема не ощущается пациентом. Это явление объясняется компенсаторной реакцией мышц мочевого пузыря. После непродолжительного перерыва проявления болезни возвращаются, чаще имеют большую интенсивность.

Развитие хронического простатита у мужчин может протекать незаметно на протяжении нескольких месяцев. Позднее выявление грозит осложнениями, требует привлечения не только медикаментозных, но и хирургических методов лечения.

Важно! Застойный простатит часто проходит бессимптомно. Для выявления заболевания на ранних стадиях, когда оно легче поддается лечению, необходимо регулярно проходить профилактические осмотры.

Природа заболевания. Факторы риска

Симптомы и лечение простатита зависят от истинной природы заболевания. Выделяют две основные причины: инфекционное поражение и возникновение воспалительного процесса.

Близость расположения предстательной железы к мочевому пузырю и мочевыделительному каналу, кишечнику приводит к проникновению возбудителей инфекции в ткани железы. Здоровый организм, обладающий сильным иммунитетом, способен успешно противостоять заражению. Простата становится защитным барьером для восходящих инфекций, способных поразить мочевыделительную систему. В результате нездорового образа жизни и застойных процессов в области таза эта функция ослабляется.

Патогенные организмы попадают в простату по восходящему пути из пениса, нисходящим способом от мочевого пузыря, через кровь и лимфу. Основные источники заражения:

• наиболее опасны инфекции, передающиеся половым путем. Обычно они протекают бессимптомно и наносят большой вред организму;
• цистит;
• колит;
• системные инфекции;
• осложнения ОРЗ, например, осложнения при бронхите.

Главные причины простатита связаны с неправильным образом жизни. Наследственность и врожденная предрасположенность являются редкими случаями.

Особенности строения сосудистой системы приводят к застойным явлениям в области таза, кровь начинает плохо циркулировать, ткани не получают необходимого количество кислорода, в результате их сопротивление заболеваниям уменьшается. Кроме того, может скапливаться секрет самой простаты, что вызывает воспалительные процессы. 

Застойный простатит возникает по следующим причинам:

• врожденные особенности, связанные со строением сосудов, недостаточном тонусе, слабых венозных клапанах;
• травмы, в том числе повреждение позвоночника и спинного мозга;
• гиподинамия;
• заболевания позвоночника;
• варикоз, геморрой;
• вредные привычки;
• нарушения гормонального фона;
• избыточная масса тела;
• нарушение солевого баланса.

Нарушения в гормональном фоне вызывают изменения предстательной железы: избыток тестостерона провоцирует ее увеличение, а недостаток — нарушения в функционировании.

Вредные привычки вызывают поражения сосудистой системы. Алкоголь вызывает сужение мелких сосудов, а никотин приводит к отмиранию сосудов. Плохой кровоток способствует развитию патологических явлений в органах, ослаблению их защитных функций.

Гиподинамия, или малоподвижный образ жизни, сидящая или стоящая работа приводят к застою жидкости в области таза, вены испытывают повышенную нагрузку, в результате развивается варикоз, защитные функции организма снижаются, начинают развиваться различные заболевания, в том числе и воспаление предстательной железы.

При частой диарее, колитах, недостаточном потреблении жидкости, недостатке в организме калия возникает нарушение водно-солевого баланса, что неблагоприятно сказывается на состоянии предстательной железы.

Причинами инфекционного простатита являются распущенное половое поведение, частая смена партнёра, слабый иммунитет, осложнения общих инфекций, переохлаждения.

Статистика показывает омоложение болезни: фиксируются признаки простатита у мужчин молодого возраста и подростков. Этому способствует ношение тесной одежды и белья, частые переохлаждения.

Диагностические мероприятия

При осмотре врач, подозревая простатит, опрашивает пациента и проводит ректальное обследование простаты. Процедура не занимает много времени и является безболезненной. Пациент ложится набок, врач вводит указательный палец в прямую кишку. Близкое расположение простаты и кишечника позволяет оценить ее состояние. Увеличение железы, болезненность при нажатии являются признаками простатита.

Для подтверждения диагноза выполняются анализы крови и мочи, в том числе на наличие бактериальной инфекции, УЗИ органов малого таза; исследование выделений предстательной железы, анализ гормонального фона.

Основные методы лечения

Основным методом лечения простатита является медикаментозная терапия. В зависимости от выявленной причины назначаются антибиотики для борьбы с возбудителями инфекции или противовоспалительные препараты.

Дополняют основную схему лечения витаминными комплексами, препаратами, укрепляющими сосуды, гормональными лекарствами при необходимости, иммуномодуляторами. Лечебный эффект оказывают физиопроцедуры.

Иногда назначают курс массажа простаты, который ликвидирует застойные явления, способствует восстановлению активной работы органа, улучшает кровоснабжение. Отзывы пациентов свидетельствуют об эффективности данного вида лечения. Процедура занимает не более пяти минут. Наиболее эффективен массаж в лечении хронического и застойного простатитов.

Важно! Массаж простаты имеет ряд противопоказаний. При остром простатите, гнойных воспалениях, злокачественных опухолях данный вид лечения противопоказан.

Хирургическое вмешательство возможно только в крайних случаях и обычно проводится у пациентов преклонного возраста, так как после иссечения пораженной части железы или при полном ее удалении может проявиться ряд серьёзных побочных эффектов:

• бесплодие;
• половая дисфункция;
• недержание мочи;
• нарушения гормонального фона.

Своевременное лечение позволит быстро справиться с симптомами простатита, избежать опасных для жизни и здоровья осложнений. 

Профилактические меры

Одно из главных условий ремиссии застойного простатита — здоровый образ жизни. Медикаментозное лечение поможет убрать симптомы, но, если не ликвидировать истинные причины, рецидивы заболевания могут наблюдаться длительное время. Чтобы сохранить здоровье, избежать хронических заболеваний необходимо следовать данным рекомендациям:

• вести регулярную половую жизнь с одним партнёром;
• правильное питание, отказ от жирного, соленого, жареного;
• умеренные физические нагрузки;
• соблюдение режима дня, здоровый сон;
• отказ от вредных привычек. Как привычно бы это ни звучало, но алкоголь и никотин крайне разрушительно влияют на организм в целом.

избегать тряски, при долгом пребывании за рулём делать перерывы, разминки.

Что можно сделать?

Чтобы избежать развития хронической формы заболевания и возможных осложнений необходимо два раза в год проходить профилактический осмотр уролога. Важно ответственно отнестись к выбору поликлиники и врача. Бессимптомное протекание болезни требует внимательного осмотра, проведения комплекса исследований. Все это возможно в медицинских клиниках IMMA. Главные преимущества центров: новое высокоточное оборудование, возможность всех видов лабораторных исследований, высококвалифицированные специалисты, внимательное отношение к каждому пациенту. А удобное расположение центров и высокий уровень сервиса сделает визит к врачу комфортным.

Регулярное посещение врача не отнимет много времени, однако поможет сохранить мужское здоровье на долгие годы.

Как избавиться от простатита при помощи разгрузки позвоночника — Российская газета

Этот недуг мучает не только мужчин пожилого возраста, но нередко и совсем молодых. Способов его лечения с каждым днем все больше. В том числе и современных, бескровных операций. Но… Любое лечение простатита связано не только с физическими, но и моральными неприятностями. Опыт нашей работы с такими пациентами показывает, что можно избежать обострений процесса, полностью восстановиться, если обратить главное внимание на свой пояснично-крестцовый отдел позвоночника.

Известно же, что все наши органы, так или иначе, «завязаны» на позвоночник. И потому… Страдает предстательная железа по вине сбоя в работе четвертого позвонка. И когда к нам приходит пациент и жалуется, что каждый поход в туалет стал для него сущей мукой, что катастрофически пропадает мужская сила, что он в постоянной депрессии, что принимает прописанные препараты и процедуры, а вот результата почти никакого…

Мы направляем такого пациента на рентген или МРТ поясничного отдела позвоночника. В большинстве случаев явно видны проблемы с четвертым позвонком. Это он управляет деятельностью предстательной железы. И значит, нужно устранить сбои в этом позвонке. Для чего часто бывает достаточно нескольких четко направленных манипуляций, которые делает врач.

Но кое-что можно сделать и самому, чтобы помочь медикам справиться с вашим недугом.

1. Итак. Прежде всего разгрузите позвоночник. Для этого можно лечь на стол животом вниз, уцепившись руками за противоположный край стола. Чтобы таз повис, а ноги были в расслабленном состоянии. Находитесь в таком положении 30 секунд. Отдохните и повторите упражнение не менее 10 раз.

2. Следующее упражнение должно способствовать восстановлению кровоснабжения в органах малого таза. Для этого вам надо встать. Ноги на ширине плеч. Сделайте глубокий вдох. Задержите дыхание на 10-15 секунд. Затем сделайте резкий выдох. Это упражнение надо повторять от 10 до 120 раз в зависимости от самочувствия.

Два этих упражнения надо делать 3-4 раза в день на протяжении месяца. После этого вы, возможно, поймете, что простатит от вас ушел.

Лечение простатита у мужчин — цена в Санкт-Петербурге

Запущенный простатит может привести к острой задержке мочи, формированию абсцесса, воспалению других половых органов (семенных пузырьков, яичек и придатков). Заболевание достаточно быстро переходит в хроническую форму, которая сопровождается бесплодием и нарушением сексуальной функции, вплоть до импотенции. 

Специалисты медицинского центра «Таурас-Мед» успешно проводят комплексное лечение простатита у мужчин. В своей практике урологи центра руководствуются европейскими стандартами диагностики и принципами доказательной медицины. Своевременное обращение к врачу помогает избежать осложнений.

Что такое простатит?

Воспаление простаты развивается при снижении местного иммунитета по следующим причинам:

• нарушения кровообращения в органах малого таза;
• воздержание от сексуальных контактов;
• половые инфекции;
• системные инфекционные заболевания;
• переохлаждение;
• хронические стрессы;
• вредные привычки;
• истощение организма. 

Предрасположенность к простатиту отмечают у представителей определенных профессий (например, водители, строители, офисные работники). Во многом это объясняется гиподинамией и застоем крови в венах малого таза.

Заболевание может протекать в острой или хронической форме. Первый вариант характеризуется яркими симптомами, среди которых дизурические расстройства (затрудненное, болезненное, учащенное мочеиспускание), повышение температуры тела, признаки общей интоксикации организма (слабость, сонливость, снижение аппетита). Возможно появление интенсивных болей в крестцовой области и зоне промежности, острая задержка мочи, затрудненная дефекация. 

Хроническое воспаление простаты имеет вялую симптоматику. Мужчину могут беспокоить нарушения мочеиспускания, частые позывы в туалет, диспотенция (ухудшение эрекции, трудности с достижением оргазма, снижение чувствительности, частые ночные эрекции). 

Опасность простатита кроется в возможности изначального течения в хронической форме. Стертые симптомы не привлекают к себе особого внимания, поэтому мужчина не обращается к врачу или раньше времени прекращает назначенное лечение, что повышает риск развития осложнений. Среди них импотенция, бесплодие, пиелонефрит, абсцесс простаты и прочее.

Если у Вас остались вопросы, позвоните нам по телефону: +7 812 603-44-71
Администраторы медицинского центра «Таурас-Мед» всегда готовы проконсультировать Вас.

Записаться на прием

Диагностика

Лечение начинается с комплексного обследования. С проблемой следует обращаться к урологу. На первичной консультации врач проводит мануальное исследование простаты, назначает УЗ-сканирование, исследование секрета простаты, бактериологический посев отделяемого железы и мочи. При подозрении на бесплодие проводят спермограмму. 

Как проходит лечение?

Острый простатит лечат в амбулаторном порядке, за исключением случаев абсцедирования простаты. Терапия обычно проводится с применением антибактериальных средств. При гнойном расплавлении тканей проводят эндоскопическое вскрытие абсцесса.

Хронический простатит у мужчины требует длительного и комплексного лечения. Добиться полного выздоровления невозможно, однако можно достигнуть устойчивой и длительной ремиссии. Медикаментозная терапия хронического воспаления простаты включает антибиотики (до 2 месяцев), средства иммуномодулирующего действия (по назначению иммунолога), биорегуляторные пептиды и др. После стихания симптомов хронического воспаления мужчине назначают физиотерапию. Обычно рекомендуют курс массажей предстательной железы. Дополнительно лечение простатита проводят с помощью аппаратных физиотерапевтических процедур (лазеротерапия, ультразвуковое электромагнитное воздействие). 

Где можно пройти эффективное лечение простатита?

По вопросам лечения простатита обращайтесь в клинику «Таурас-Мед». На основании результатов обследования опытные урологи центра составляют персональный план лечения. Клиника располагает передовым оборудованием для диагностики и лечения острого и хронического простатита. 

Цены

Стоимость лечения простатита зависит от выраженности воспалительного процесса. Чем раньше начата терапия, тем выгоднее и тем быстрее можно добиться заметного улучшения.

Настало время избавиться от симптомов простатита надолго. Записывайтесь на консультацию к урологам центра «Таурас-Мед», чтобы вернуть и приумножить свое мужское здоровье!

Все о лечении простатита у мужчин

Лечение простатита у мужчин должно быть своевременным, комплексным и проходить под строгим наблюдением врача. Чтобы при хронической форме добиться стойкой ремиссии, а при острой как можно быстрее выздороветь, придется пройти ряд различных процедур, включающих медикаментозное лечение, физиотерапевтические методики, массаж. Если консервативная схема терапии не помогает избавиться от проблемы, врач принимает решение о проведении операции, во время которой пораженные ткани простаты удаляются.

Что такое простатит?

Простатит – инфекционное урологическое воспаление простаты, характеризующееся выраженной симптоматикой. В большинстве случаев болезнь имеет бактериальную этиологию и возникает вследствие снижения иммунитета, малоактивного образа жизни, переохлаждения, стресса, нерегулярной половой жизни.

Предстательная железа является частью мужской репродуктивной системы. Ее главная функция – выработка секрета, который отвечает за активность сперматозоидов. Если в простату проникла болезнетворная микрофлора, развивается острый простатит, характеризующийся ярко выраженной симптоматикой:

• учащенное мочеиспускание;
• боль и дискомфорт во время полового акта, посещения туалета;
• расстройство сексуальной функции;
• постоянная боль в паху, мошонке, половом органе, иногда симптомы распространяется на нижнюю часть живота, поясницу;
• выделения из уретры с патологическими включениями.

Как правильно лечить острый простатит у мужчин расскажет уролог. Если терапия несвоевременна или больной занимался самолечением, болезнь может перейти в хроническую форму, вылечить которую намного сложнее. При хроническом простатите периоды ремиссии чередуются с обострениями. Симптомы при этом не такие яркие, как при острой форме, но все же лечение важно проводить под контролем врача.

Иногда простатит протекает бессимптомно и обнаруживается во время профилактического медицинского осмотра. Болезни подвержены мужчины со слабым иммунитетом, ведущие малоактивный образ жизни, злоупотребляющие вредными привычками. После 35 лет риск воспаления простаты существенно возрастает. После 45 патология диагностируется у 50% представителей сильного пола. Поэтому после 40 желательно раз в год в целях профилактики посещать уролога, который поможет обнаружить заболевание на начальной стадии.

Диагностика заболевания

При наличии характерных симптомов необходимо как можно скорее посетить уролога, который подробно расскажет, как надо лечить простатит у мужчин. Во время первичного осмотра доктор соберет анамнез, внимательно выслушает жалобы пациента, после чего проведет физикальное обследование, во время которого оценит состояние и размер железы.

Для уточнения диагноза дается направление на дополнительное диагностическое обследование, включающее такие процедуры:

• Анализ мочи. Поможет обнаружить признаки воспаления и инфекции.
• Бактериальный посев мочи. Главная задача процедуры – идентифицировать возбудителя.
• Общий анализ крови. Особое внимание уделяется таким параметрам, как лейкоцитарная формула, концентрация белка и простатического специфического антигена.
• Микробиологическое исследование секрета предстательной железы. Посев биологической жидкости поможет выявить патогенную микрофлору, идентифицировать возбудителя, подобрать эффективный антибиотик.
• УЗИ простаты. С помощью ультразвукового обследования удастся обнаружить структурные изменения в органе.

При необходимости уролог может направить на компьютерную или магнитно-резонансную томографию, которая поможет получить более точное изображение органа. После того, как диагноз будет подтвержден, врач индивидуально подбирает эффективные методы лечения простатита.

Лечение простатита

Перед тем, как лечить простатит у мужчин, врач постарается выяснить причины его возникновения, потому что без устранения первопричины болезнь может вернуться. План терапии для каждого пациента подбирается персонально, с учетом тяжести течения, этиологии, степени запущенности.

Консервативное лечение

Суть консервативного лечения заключается в приеме лекарственных препаратов, прохождении курса физиотерапевтических процедур и массажа, выполнении специальных упражнений, посещении оздоровительных санаторно-курортных учреждений. Чтобы достичь максимально положительного эффекта во время консервативного лечения, важно строго соблюдать рекомендации врача и не заниматься самолечением.

Лечение медикаментами

Для купирования воспаления и сопутствующей патологической симптоматики используются такие группы препаратов:

• антибиотики;
• альфа-адреноблокаторы;
• нестероидные противовоспалительные;
• обезболивающие;
• спазмолитики;
• диуретики;
• иммуномодуляторы;
• препараты, нормализующие функцию предстательной железы.

Эффективные препараты

В лечении простатита хорошо зарекомендовали себя свечи, в состав которых входят натуральные компоненты растительного и животного происхождения. Несмотря не эффективность и безопасность, использовать препарат без предварительной консультации у врача чревато негативными последствиями.

Для борьбы с воспалением и облегчением симптоматики дополнительно назначаются такие препараты:

• «Простопин»;
• «Витапрост»;
• «Простатилен»;
• «Лонгидаза»;
• «ПростаНорм»;
• «Простамол Уно»;
• «Пепонен»;
• «Цернилтон».

Физиотерапия

В качестве дополнения к комплексной медикаментозной схеме терапии часто назначаются физиотерапевтические процедуры, которые благоприятно влияют на больной орган, ускоряют процессы регенерации и восстановления.

При простатите наиболее эффективными считаются такие методики физиотерапии:

• Магнитотерапия. Методика способствует стимулированию местного иммунитета, улучшению кровообращения, активации процессов регенерации пораженных тканей.
• СВЧ-терапия. Стимулирует кровоток, благодаря чему улучшается питание тканей простаты.
• Лазерная терапия. Способствует снижению вязкости крови, улучшению кровообращения и питания тканей.
• Электрофорез. Суть процедуры заключается в стимуляции тканей простаты токами слабой силы. Во время электрофореза используются лекарственные препараты – антибиотики, обезболивающие и пр.
• Грязелечение. Для борьбы с воспалением применяются сульфидные, торфяные, топочные грязи, а также сапропель. После курса терапии исчезают патологические симптомы, ускоряются процессы регенерации, снижается риск рецидивов.

Массаж простаты

Массаж предстательной железы должен выполнять специально обученный специалист с медицинским образованием. Процедура способствует нормализации кровообращения, открытию протоков и более активному выведению застоявшегося секрета, ускорению регенерационных процессов. Уже после первого сеанса ослабляется патологическая симптоматика, пациент чувствует облегчение во время мочеиспускания, нормализуется общее состояние.

Фитотерапия

В качестве дополнения к комплексной консервативной терапии может использоваться фитотерапия. Для борьбы с воспалением и беспокоящими симптомами используются лекарственные травы, богатые на полезные вещества, элементы, обладающие бактерицидным и противовоспалительным эффектом. На основе лечебных трав готовятся настои, настойки, отвары, которые можно употреблять внутрь, делать компрессы и примочки, добавлять в ванну.

Для лечения простатита используются такие травы:

• ромашка аптечная;
• шалфей;
• календула;
• тысячелистник;
• крапива;
• зверобой;
• толокнятка;
• розмарин;
• золототысячник;
• женьшень;
• донник;
• каштан.

Введение стволовых клеток

Простатит, который успел перейти в хроническую форму, успешно лечится стволовыми клетками, которые вводятся в ткани органа для активации регенерационных процессов. Со временем пораженные ткани заменяются новыми, полностью здоровыми и функциональными.

Акупунктура

Суть процедуры заключается в стимулировании биологически активных точек, расположенных на теле пациента. Каждая точка отвечает за определенный орган. Активация этих участков способствует нормализации кровообращения, ускорению регенерации и улучшению питания тканей простаты. Акупунктура должна проводиться профессиональным мастером, который досконально знает человеческую анатомию и место расположения всех точек.

Гирудотерапия

Лечение простатита пиявками должно проходить курсово, под наблюдением врача-уролога. Слюна этих червей содержит специфический секрет, который способствует разжижжению крови, восстановлению микроциркуляции, снятия воспаления и отека. Курс терапии состоит в среднем из 5 – 8 сеансов. Длительность лечения гирудотерапией для каждого пациента определяется индивидуально.

Оперативное лечение

Если простатит запущен, и консервативные методики не приносят желаемого результата, врач принимает решение о проведении хирургического лечения, во время которого удаляется часть пораженных тканей или вся простата.

Профилактика

Чтобы предупредить простатит и его осложнения, важно соблюдать такие правила профилактики:

• вовремя лечить инфекционные, вирусные, грибковые заболевания;
• укреплять иммунитет;
• вести здоровый образ жизни;
• отказаться от вредных привычек;
• подключить умеренные физические нагрузки;
• следить за качеством и сбалансированностью питания;
• вести полноценную половую жизнь, используя защитные средства контрацепции;
• соблюдать личную гигиену;
• свести к минимуму стрессовые факторы;
• раз в год проходить профилактический медицинский осмотр;
• при наличии подозрительных симптомов не заниматься самолечением, а немедленно обращаться за врачебной помощью.

Врачи-уролог многопрофильной клиники «Медиал» быстро установят точный диагноз и подробно расскажут, как вылечить простатит у мужчин. У нас самые доступные цены, постоянно действуют выгодные акции и скидки, а при желании вы сможете оформить беспроцентный кредит, рассчитывая на профессиональную, своевременную медицинскую помощь.

Чтобы записаться на прием к врачу-урологу или получить консультацию, позвоните по номеру +7 (499) 137-00-00.

Так же смотрите по теме:

Опыт использования ЭУВТ при хроническом простатите

1 июля 2016

Предлагаем ознакомиться с обзором исследовательской работы, посвященной применению экстракорпоральной ударно-волновой терапии (ЭУВТ) при хроническом простатите. Исследование проводили екатеринбургский Международный медицинский центр «УРО-ПРО» и чешская компания «БТЛ Медикал Текнолоджис».

Описание

Для участия набрали 30 пациентов с диагностированным хроническим простатитом IIIБ (ХП IIIБ). Участников рандомизированным образом разделили на две равные группы. В первой использовали только ЭУВТ простаты, во второй — только медикаментозное лечение.

Воздействие ударными волнами на область промежности осуществлялось стандартным аппаратом УВТ. Процедуры проводились раз в неделю Курс длился 4 недели и проводился по принятому протоколу: одна процедура в неделю. Четыре раза после завершения курса пациенты из обеих групп проходили контрольные обследования. Эффективность лечения оценивалась по шкале NIH-CPSI. У всей первой группы наблюдалось более значимое уменьшение болевого синдрома и более заметное повышение качества жизни, если сравнивать с пациентами из второй группы.

Исследование продемонстрировало, что ЭУВТ простаты — работающий, простой и безопасный метод уменьшения симптоматики при хроническом простатите.

Хронический простатит (ХП) очень распространен. По классификации Национального института здоровья США (National Institute of Health, NIH) он может протекать в бактериальной и абактериальной форме. Чаще встречается абактериальная форма ХП IIIБ, которая связана с синдромом хронической тазовой боли (СХТБ).

Заболевание проявляется:

• расстройствами мочеиспускания,
• тазовыми болями,
• копулятивными расстройствами.

Характерная особенность ХП IIIБ — отсутствие в моче, сперме и секрете предстательной железы признаков воспаления. Как причины данной формы хронического простатита принято рассматривать инфекции в анамнезе, гипертонус мышц и нарушения кровообращения в области малого таза и др.

Лечат ХП IIIБ анальгетиками, антибактериальными и противовоспалительными препаратами, блокаторами α-адренорецепторов, ингибиторами 5α-редуктазы. Перечисленные группы препаратов применяются в виде монотерапии или в различных сочетаниях. Их побочные эффекты широко известны. Однако при ХП IIIБ медикаменты используются практически постоянно. По этим причинам актуальность поиска новых методик лечения ХП IIIБ нельзя преувеличить.

Одним из перспективных направлений считается ЭУВТ простаты. Хорошие результаты метода продемонстрированы в ряде работ по тематике терапии ХП IIIБ. Экстракорпоральная УВТ успешно применяется при болях в суставах, болях, вызванных травмами и ранами. При ишемической болезни, связанной с дисфункцией миокарда ЭУВТ способствует увеличению кровотока в зонах с нарушенным кровоснабжением.

Рассматриваемое исследование проводилось, чтобы сравнить эффективность ЭУВТ и медикаментозного лечения у пациентов с ХП IIIБ.

Материалы и методы исследования

В январе — августе 2012 года прошли лечение 30 мужчин с диагнозом ХП IIIБ среднего возраста 38-39 лет. При отборе испытуемых применялся следующий критерий: хроническая тазовая боль, сопровождаемая расстройствами мочеиспускания и копулятивными расстройствами и продолжающаяся как минимум 3 месяцев.

Больные прошли комплексное обследование, которое начиналось со сбором жалоб и включало все современные методы диагностики ХП. Затем их разбили на две группы по 15 человек. Мужчины из первой группы получали ЭУВТ (10 Гц, 3-5 бар) еженедельно в течение четырех недель. Использовался аппарат радиальной ударно-волновой терапии BTL-5000 SWT Power. Источник ударной волны фиксировался в 3 точках зоны промежности.

Пациенты второй группы прошли медикаментозную терапию, рекомендованную Европейской ассоциацией урологов: курс антибиотиков (4–6 недели), фитотерапия / НПВС. Контрольные обследования (через 7, 14, 28 и 84 дня после окончания лечения) состояли из клинического осмотра и фиксации жалоб. Ситуация оценивалась по шкале NIH-CPSI. Затем данные каждого больного анализировались.

Результаты

По итогам всех контрольных обследований у первой группы было выявлено более значительное снижение суммарного балла по NIH-CPSI, чем у больных, получивших медикаментозную терапию. В первой группе он упал с 36,7 до 13,8, во второй — с 35,9 до 20,6). Очевидно, что изменения у пациентов, получавших ЭУВТ, были более заметными. Побочные эффекты ЭУВТ не наблюдались.

Заключение

Поскольку лечение ХП IIIБ лекарственными препаратами обладает недостатками и связано с рисками побочных эффектов, использование ЭУВТ представляется перспективным методом. ЭУВТ быстро снижает выраженность болевого синдрома, не имеет побочного действия, а значит является эффективным и безопасным для больных ХП IIIБ.

Дополнительное преимущество ударно-волновой терапии состоит в локальности воздействия на пораженную область. Медикаменты же действуют системно. Уменьшая боли, ЭУВТ повышает качество жизни пациентов с хроническим простатитом. Это для большинства из больных — самая насущная потребность.

Ознакомиться с исследованием полностью можно здесь>>>

Пройти курс ЭУВТ в Новосибирске можно в нашем медицинском центре. Для записи к урологу, пожалуйста, позвоните нам или воспользуйтесь онлайн-консультантом на сайте.

Лечение простатита в Ивано-Франковске ⇒ цена, запись на консультацию в ЛДЦ «Мед-Атлант»

Простатит или воспаление предстательной железы — одно из наиболее распространенных заболеваний. Существует мнение, что это болезнь мужчин возраста старше 50 лет. Однако это не так, часто воспаление есть и у значительно более молодых мужчин.

По форме простатит подразделяют на:

• Инфекционный — как следствие мочеполовых инфекций (хламидиоз, гонорея и т.д.), а также гормональных нарушений или после тяжелых инфекционных болезней;
• Застойный — его причинами являются малоподвижный образ жизни, отсутствие регулярного секса, переохлаждения, вредные привычки.

Также простатит может быть в острой или хронической форме. В зависимости от причины заболевания и формы лечение подбирается индивидуально.

СИМПТОМЫ ПРОСТАТИТА

• Частые позывы к мочеиспусканию
• Ослабленная струя мочи
• Боль в промежности, пояснице
• Боли и отек предстательной железы во время мочеиспускания
• Гнойные или слизистые выделения
• Ослабление эрекции
• Слабость
• Недомогание

ДИАГНОСТИКА ПРОСТАТИТА В ЛДЦ «МЕД-АТЛАНТ» Г. ИВАНО-ФРАНКОВСК

Для постановки диагноза необходим осмотр уролога, сбор анамнеза, а также такие обследования как:

• Общий анализ крови
• Общий анализ мочи
• Бакпосев мочи и секрета простаты
• Ультразвуковое исследование простаты
• Анализ на PSA (простат специфический антиген)

Все эти анализы и обследования не займут много времени и в большинстве не требуют особой подготовки. С полными данными врач сможет назначить соответствующее лечение.

КАК ПРОВОДИТСЯ ЛЕЧЕНИЕ ПРОСТАТИТА В ИВАНО-ФРАНКОВСКЕ?

Для эффективного лечения простатита врач назначает комплекс мероприятий, как консервативное лечение, так и процедуры в Ивано-Франковске. Рекомендации составляются индивидуально, будут включать в себя часть из ниже перечисленного:

• Противомикробные препараты, а также лекарства, которые улучшают проникновение антибиотика к очагу воспаления (для лечения бактериального простатита)
• Противовоспалительные средства, фитопрепараты, простатопротекторы (для лечение не бактериального простатита)
• Физиотерапевтическое лечение
• Массаж простаты, специальные упражнения
• Лазеротерапия
• Ультразвукотерапия
• Магнитотерапия
• Озонотерапия
• Метод ударной волны

Особенно обращаем внимание на метод ударной волны — это один из самых современных методов лечения. Безболезненный и высокоэффективный. Для лечения простатита необходимо 4 сеанса (по 2-3 минуты каждый) 1 раз в неделю.

ПРОФИЛАКТИКА ПРОСТАТИТА

Мы медицинское учреждение где большое внимание уделяют профилактике заболеваний. Поверьте, профилактические осмотры действительно сохранят вам здоровье! Такие меры всегда занимают меньше времени, меньше средств и, к тому же, это ранняя диагностика не только простатита, а и раковых заболеваний.

Мужчинам регулярно, на профилактической основе, рекомендуется посещать уролога раз в год. Также раз в год рекомендуется сдать анализ на PSA и пройти ультразвуковое исследование предстательной железы.

Для здоровья важна регулярная и безопасная половая жизнь, отказ от курения, избегание переохлаждений, контроль за весом и полноценное питание.

В лечебно-диагностическом центре «Мед-Атлант» вы можете быть уверены в высоких стандартах качества обслуживания — квалификации врачей, современном оборудовании и понимания ценности здоровья! Для записи к врачу урологу просто выберите удобный вариант — через форму на сайте, Viber или по телефонам.

Мед снижает метастатические характеристики клеточных линий рака простаты, способствуя потере адгезии.

Abstract

Мед, как было показано, обладает рядом терапевтических эффектов у людей, включая противовоспалительные и антибактериальные эффекты среди ранее охарактеризованных. Здесь мы исследуем возможность новозеландского тимьяна, мануки и меда из пади, а также их основных сахарных и фенольных компонентов, снижающих развитие метастатического рака. Их активность была исследована in vitro на клеточных линиях рака предстательной железы PC3 и DU145 путем измерения влияния соединений на метастатические характеристики миграции, инвазии и адгезии.Во-первых, фенольные соединения галловой кислоты, кофейной кислоты, кверцетина, кемпферола и хризина были количественно определены в меде с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии и обнаружены в наномолярных концентрациях. В анализе миграции на основе камеры Бойдена нетоксичные концентрации тимьяна и меда снизили миграцию клеток на 20%, и все фенольные соединения, кроме кофейной кислоты, также снизили миграцию, хотя смесь только сахаров, содержащихся в меде, не оказала никакого эффекта. Все меды, фенольные смолы и смеси, содержащие только сахар, снижали инвазивное движение клеток через внеклеточный матрикс до 75%.В частности, каждый из трех видов меда и смесь, содержащая только сахар, снижали адгезию клеток к коллагену I на 90%. За исключением кверцетина, фенольные соединения не снижали адгезию. Следовательно, мед и его сахар и фенольные компоненты могут снизить метастатические свойства раковых клеток и могут сделать это, предотвращая эффективную адгезию клеток к внеклеточному матриксу. Сахар и фенольные соединения меда гораздо более эффективны в сочетании, чем по отдельности.

Ключевые слова: Мед, метастаз, адгезия, миграция, инвазия, фенольный, сахар

Введение

Мед делают из нектара пчелы ( Apis mellifera ), и было показано, что он обладает потенциальными терапевтическими преимуществами для людей.Некоторые из этих характеристик, включая антибактериальные, противовоспалительные, антиоксидантные и антигипертензивные эффекты, были продемонстрированы in vivo , а некоторые только in vitro . Эти свойства обычно приписываются полифенольным компонентам меда (Alvarez-Suarez, Giampieri & Battino, 2013).

Основными составляющими меда являются сахара, которые составляют более 99% сухого веса меда (White & Doner, 1980). Ферменты, в том числе инвертаза, диастаза и глюкозооксидаза, в медовом желудке пчел превращают полученные из нектара полисахариды в моносахариды (Winston, 1991).Сахарная смесь состоит в основном из фруктозы (40,5%), глюкозы (33,5%), мальтозы (7,5%) и сахарозы (1,5%), что характерно для меда независимо от происхождения нектара (Cooper, Molan & Harding, 2002 ). Однако мед также содержит много других компонентов, включая аминокислоты, витамины, минералы, полифенолы и ферменты (White, 1978). Полифенолы, включая фенольные кислоты и флавоноиды, составляют большую часть этой группы. Их состав и пропорции варьируются в зависимости от источника меда, пять из наиболее распространенных и биологически активных — это кверцетин, галловая кислота, кемпферол, хризин и кофейная кислота (Alvarez-Suarez, Giampieri & Battino, 2013; Kassim et al., 2010; Erejuwa, Sulaiman & Wahab, 2014).

Мед также оказывает цитотоксическое действие на линии раковых клеток и на моделях животных с опухолями. Было показано, что мед может подавлять пролиферацию раковых клеток и вызывать апоптоз при различных формах рака, включая рак груди, толстой кишки, печени и простаты (Fauzi, Norazmi & Yaacob, 2011; Hassan et al., 2012; Jubri et al., 2012). ; Tomasin & Gomes-Marcondes, 2011; Tsiapara et al., 2009; Wen et al., 2012).

Также вероятно, что мед может оказывать влияние на метастазирование, образование вторичных опухолей в других частях тела, что является причиной большинства смертей от рака (Mehlen & Puisieux, 2006).При метастазировании раковые клетки мигрируют от первичного очага опухоли, проникают через местную ткань и попадают в кровоток, инфильтрируются на вторичном участке и, наконец, возобновляют рост опухоли. Клеточные процессы, участвующие в метастазировании, регулируются рецепторами, такими как интегрины и внутриклеточные сигнальные белки, которые контролируют адгезию клеток к окружающей внеклеточной матрице, разрушают физические барьеры, такие как базальная мембрана, посредством протеолиза и повышают подвижность клеток (Liotta, Steeg & Stetler-Stevenson, 1991).Клетка перемещается в результате изменений цитоскелета, опосредованных циклом полимеризации и деполимеризации актина, контролируемой GTPases семейства Rho, что позволяет образовывать выступы на мембране. Выступы и тело клетки позади них прикрепляются к внеклеточному матриксу и отделяются от него регулируемым движением по мере продвижения клетки вперед (Pollard & Borisy, 2003). Каждый из процессов миграции, инвазии и адгезии может быть измерен отдельно in vitro , чтобы охарактеризовать механизм действия эффектов на метастазирование.

В двух исследованиях изучалось влияние меда на метастазирование на животных моделях. Оршолич и др. (2005) показали, что 2 г / кг меда, вводимые перорально ежедневно перед внутривенной инъекцией опухолевых клеток молочной железы или фибросаркомы мышам CBA, уменьшали образование опухолей в легких примерно на 70%, но не оказывали никакого эффекта, если их вводили только после инокуляции опухоли. В более раннем исследовании той же группы также изучалась аденокарцинома толстой кишки у крыс Y59 после внутривенной инъекции. В этом исследовании было обнаружено, что мед, принимаемый перорально в течение 10 дней до инокуляции опухоли в дозе 1 г / кг, уменьшал опухолевые узелки в легких примерно на 56% (Oršolić et al., 2003).

In vitro любая оценка потенциальной антиметастатической активности меда была косвенной. Moskwa et al. (2014) измерили активность ферментов матриксной металлопротеиназы (ММП), важных для процесса инвазии, в клетках глиобластомы U87MG и обнаружили, что мед может ингибировать их до 95%, хотя доза также вызвала высокую цитотоксичность. Во всех остальных исследованиях использовались только отдельные полифенолы, которые также содержатся в меде. Например, галловая кислота (3.5 мкМ) снижает миграцию AGS в раковых клетках желудка примерно на 75% через 24 часа в анализе царапин и на 60% в анализе камеры Бойдена через 48 часов (Ho et al., 2010). Галловая кислота также снижает инвазию в клеточную линию глиомы U87 примерно на 50% при 40 мкг / мл (Lu et al., 2010). Было показано, что кофейная кислота (4 мкг / мл) снижает инвазию в клетки рака предстательной железы PC3 примерно на 50% (Lansky et al., 2005).

Целью этого исследования было выяснить, могут ли цельный мед или его основные компоненты, сахара или фенольные составляющие обладать антиметастатическими свойствами.Сначала мы измерили концентрации пяти основных фенольных соединений, а затем изучили три основные характеристики метастатических клеток, используя тесты in vitro для измерения миграции, инвазии и адгезии.

Материалы и методы

Материалы

Диметилсульфоксид (ДМСО) был от Scharlau (Барселона, Испания). Среда RPMI-1640, фетальная бычья сыворотка (FBS), пенициллин-стрептомицин (PS), PBS и трипсин были от Gibco (Карлсбад, Калифорния). Бычий сывороточный альбумин (БСА), 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2,5-дифенилтетразолий бромид (МТТ), кверцетин, кофейная кислота, сахароза, мальтоза, фруктоза, D — (+) — глюкоза , муравьиная кислота, метанол, бикарбонат натрия, этилацетат, гидроксид натрия и соляная кислота были от Sigma-Aldrich (St.Луис, Миссури, США). Мед из тимьяна, мануки и пади любезно пожертвовал компания New Zealand Honey Specialties Limited (Мосгил, Новая Зеландия). Кемпферол и хризин были от Sapphire Biosciences (Новый Южный Уэльс, Австралия). Галловая кислота была от Abcam (Кембридж, Великобритания). Фибронектин, коллаген I и Matrigel ^® были от Corning (Корнинг, Нью-Йорк, США).

Приготовление меда и соединений

Тимьян и мед манука были из региона Центральный Отаго в Новой Зеландии, произведены из куста тимьяна ( Thymus vulgaris) или дерева манука (Leptospermum scoparium) .Медоносный мед собирали в районе Кентербери в Новой Зеландии с дерева Букового леса (Nothofagus fusca). Все меды произведены европейской медоносной пчелой ( Apis mellifera). Смесь, содержащая только сахар, искусственный мед, была изготовлена ​​путем смешивания 40,5 г фруктозы, 33,5 г глюкозы, 7,5 г мальтозы и 1,5 г сахарозы в 17 мл бидистиллированной воды (ddH ₂ O) (Cooper, Molan & Harding, 2002). Сырой мед хранили при комнатной температуре с минимальным освещением.Исходные растворы меда получали растворением в подогретой бессывороточной среде RPMI-1640 и стерилизовали с использованием фильтра 0,22 мкм. Фенольные соединения растворяли в 100% ДМСО и фильтровали. Перед каждым экспериментом готовили свежие препараты меда и компаундов.

Приготовление фенольных экстрактов

Следующий метод был адаптирован из Wahdan (1998). Тимьян, манука и медовая роса растворяли в теплой воде MilliQ до конечной концентрации 20% (мас. / Об.) (10 мл или 15 мкл).48 г меда в 40 мл MilliQ). После экстракции высушенные образцы повторно растворяли в 600 мкл метанола.

Приготовление экстракта свободного фенола

Каждый раствор меда (50 мл) доводили до pH 4,5 с помощью концентрированной HCl. Бисульфит натрия (1 г) и этилацетат (50 мл) смешивали с раствором меда в делительной воронке. Смесь встряхивали 1 мин, чтобы фенольные соединения перешли в органическую фазу. Раствор меда сливали, а слой этилацетата переносили в отдельный стакан.К раствору меда добавляли еще 50 мл этилацетата. Эти этапы экстракции повторялись шесть раз. Смесь этилацетата (всего 300 мл) концентрировали с использованием роторного испарителя в вакууме (~ 240 мбар) при 30 ° C. Высушенные соединения восстанавливали (метанол: этилацетат, 1: 1) и сушили в атмосфере азота для хранения при -15 ° C.

Приготовление полного фенольного экстракта

Требовалось дополнительное приготовление для гидролиза фенольных соединений, которые были связаны с сахарами через сложноэфирные связи.Каждый раствор меда (25 мл) объединяли с NaOH (25 мл, 3 н.) И гидролизовали при комнатной температуре в течение 4 часов. После этого pH доводили до 3,5, используя концентрированную HCl, и проводили экстракцию, как для экстракции свободного фенола, описанной выше.

Количественное определение фенольных соединений с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)

Разделение фенолов проводили с использованием ВЭЖХ CBM-20Alite Prominence (Shimadzu Corporation, Япония) на обращенно-фазовой колонке Gemini 5 мкм C18 110 Å, LC (150 х 4.6 мм) (Phenomenex, США). Метод был адаптирован из Kassim et al. (2010), и состояла из градиентной системы для идентификации и количественного определения выбранных фенолов в экстрагированных образцах меда. Подвижная фаза представляла собой раствор бинарного растворителя, состоящий из А = 0,25% муравьиной кислоты и 2% метанола в воде, а В = 100% метанола. Градиентный метод был следующим: 0 мин 10% B, 20 мин 40% B, 30 мин 45% B, 50 мин 60% B, 52 мин 80% B, 60 мин 90% B, 62 мин 10% B до 65 мин. Фенольные соединения меда были обнаружены с помощью диодной матрицы, спектры которой контролировали при 370 нм (кемпферол и кверцетин), 325 нм (кофейная кислота) и 270 нм (галловая кислота и хризин).

Калибровочные кривые стандартов использовались для идентификации и количественного определения фенольных соединений в образцах меда. Идентификация была завершена путем сравнения стандартного времени удерживания и спектров поглощения с образцами. Добавление пробы использовалось для повышения достоверности идентификации пика. Чтобы решить проблемы количественной оценки из-за разделенных и смещенных пиков, был использован метод интегрирования от долины к долине.

Клеточная культура

Клеточные линии рака предстательной железы человека PC3 (более метастатические) и DU145 (менее метастатические) были подарком проф.Розенгрен (Университет Отаго, Новая Зеландия). Клетки поддерживали в среде RPMI-1640 с добавлением 5% FBS, 100 Ед / мл пенициллина, 100 мкг / мл стрептомицина и 2 г / л бикарбоната натрия. Клетки инкубировали в увлажненном воздухе с 5% CO ₂ /95% O ₂ при 37 ° C.

Анализ миграции камеры Бойдена

Нижние стороны мембран камеры Бойдена (размер пор 8 мкм, 24-луночные планшеты, Transwells от Corning) были покрыты коллагеном I (15 мкл, 150 мкг / мл 0,01 М HCl в PBS), слева сушить в стерильных условиях в течение 1 часа, дважды промыть PBS и высушить еще 1 час.30 × 10 ³ Клетки PC3 в бессывороточной ростовой среде высевали в верхнюю камеру. Нижняя камера содержала 5% ростовой среды, содержащей сыворотку. Обе верхние и нижние камеры обрабатывали в течение 48 часов соединениями в предварительно установленных максимальных нецитотоксических концентрациях, а именно: 1% (мас. / Об.) Меда, 25 мкМ кверцетина, 10 мкМ галловой кислоты, 50 мкМ кофейной кислоты, 150 мкМ кемпферола или 100 мкМ хризина (Abel & Baird, 2018). Использовали контрольный носитель 0,1% ДМСО, самую высокую добавленную концентрацию.После инкубации с обработкой раствор МТТ (0,5 мг / мл) добавляли в верхнюю и нижнюю камеры и планшеты инкубировали еще 3 часа (Mosmann, 1983). После этого использовали ватный наконечник для удаления кристаллов формазана из верхней камеры. Нижние стороны вставок подвергали воздействию ДМСО для растворения кристаллов формазана из мигрировавших клеток. Поглощение измеряли при 560 нм. Данные были выражены как процент мигрировавших клеток по сравнению с контролем-носителем.

Анализ инвазии камеры Бойдена

Этот анализ был использован для определения инвазивной способности in vitro клеток рака простаты PC3 через Matrigel ^® , раствор, содержащий белки внеклеточного матрикса и базальной мембраны, напоминающие структурные части окружающей опухоль стромальная среда (Hughes, Postovit & Lajoie, 2010).Инвазию клеток изнутри вставки по направлению к нижней стороне измеряли после того, как клетки подвергали воздействию соединений в ранее установленных нецитотоксических концентрациях в течение 72 часов: 0,5% (мас. / Об.) Мед, 5 мкМ кверцетина, 10 мкМ галловой кислоты. , 50 мкМ кофейной кислоты, 150 мкМ кемпферола или 100 мкМ хризина (Abel & Baird, 2018). Использовали контрольный носитель 0,1% ДМСО, самую высокую добавленную концентрацию. Matrigel ^® добавляли в верхнюю камеру вкладышей и через 1 час промывали бессывороточной ростовой средой.Остальная часть метода продолжалась так же, как и для анализа миграции, хотя продолжительность обработки составляла 72 часа. Данные были выражены как процент мигрировавших клеток по сравнению с контролем-носителем.

Анализ клеточной адгезии

Чтобы оценить способность меда влиять на адгезию клеток рака простаты PC3 in vitro , использовали анализ для измерения прикрепления (Jin et al., 2000). 96-луночные планшеты покрывали коллагеном I (20 мкл, 5 мкг / мл, 0,01 М HCl в PBS) или фибронектином (20 мкл, 5 мкг / мл в PBS) и сушили в течение 1 часа.Планшеты дважды промывали PBS. BSA (1%, в PBS) добавляли в каждую лунку на 1 час. Лунки дважды промывали PBS и оставляли сушиться еще на 2 часа. В каждую лунку добавляли 1 × 10 ⁴ клеток PC3 или DU145 в среде для выращивания. Клетки обрабатывали медом или соединением в концентрациях, которые были нетоксичными в течение 24 часов, как показано ранее ²⁴ , и оставляли инкубироваться на 30 и 60 минут (PC3) или 30, 60 и 90 минут (DU145). Используемые концентрации составляли 0,5–5% для меда, до 150 мкМ для кверцетина и кемпферола, до 50 мкМ для хризина и кофейной кислоты и до 10 мкМ для галловой кислоты.Использовали контрольный носитель 0,1% ДМСО, самую высокую добавленную концентрацию. Лунки отсасывали и дважды промывали PBS. RPMI 1640 с 5% FBS с MTT (0,5 мг / мл) добавляли в каждую лунку и инкубировали в течение 3 часов. Кристаллы формазана солюбилизировали в ДМСО, и оптическую плотность измеряли при 560 нм. Данные были выражены как процент адгезивных клеток контрольного носителя.

Статистика

Каждый эксперимент проводился в трех экземплярах и повторялся трижды. Результаты выражали как среднее значение ± стандартная ошибка среднего с использованием GraphPad Prism 5 (GraphPad, Сан-Диего, Калифорния, США).Данные считались значимыми при P <0,05 (*). Для экспериментов по цитотоксичности использовали двухфакторный дисперсионный анализ с последующим апостериорным тестом Бонферрони для определения влияния концентрации и времени на гибель клеток. В тех случаях, когда предполагалась нормальность, выбросы определялись с помощью теста Граббса Online GraphPad Prism Grubbs и удалялись из наборов данных в соответствии с рекомендациями, основанными на вычисленных критических значениях Z.

Результаты

Количественная оценка фенольных соединений в меде с помощью ВЭЖХ

Поскольку мы были заинтересованы в количественной оценке влияния цельного меда и его основных фенольных компонентов на прометастатические свойства клеточных линий рака простаты, мы сначала оптимизировали метод экстракции и измерять как общие, так и свободные фенолы, включая галловую кислоту, кофейную кислоту, кверцетин, кемпферол и хризин, из тимьяна, манука и меда из меда.Система градиента ВЭЖХ была разработана для обеспечения достаточного разделения соединений, которые были идентифицированы с использованием калибровочных кривых со стандартами, подтвержденных добавлением образца. Для анализа использовался метод интегрирования от долины к долине из-за частых расщеплений и выступов пиков ().

Абсорбционная хроматограмма фенольных соединений в тимьяновом меде с помощью ВЭЖХ.

Типичная хроматограмма свободных (A – C) или общих (D – F) фенолов, экстрагированных из тимьянового меда с использованием этилацетата и элюированных через колонку C18 с использованием ВЭЖХ.(A, D) Детекторы были установлены на 370 нм для кверцетина и кемпферола, (B, E) 325 нм для кофейной кислоты и (C, F) 270 нм для галловой кислоты и хризина. Пиковое время удерживания сравнивали со стандартами для идентификации соединений.

показывает концентрации свободных и общих фенолов, обнаруженных в тимьяне, мануке и меде пади, как в мкг / 100 г меда, так и в нМ, что позволяет сравнить с концентрациями, использованными в более поздних экспериментах. Время удерживания в минутах (± SEM, n = 18) составляло 4.3 ± 0,02 для галловой кислоты, 20,3 ± 0,02 для кофейной кислоты, 35,3 ± 0,12 для кверцетина, 41,1 ± 0,1 для кемпферола и 50,0 ± 0,07 для хризина.

Таблица 1

Анализ ВЭЖХ этилацетата фенольные соединения из меда.

250.4 ± 7,6 90 Th171 ± 12,22 ± 1,8 ± 1,1

Соединение	Мед	[мкг / 100 г меда]		[5% раствор в / в] (нМ)
		Бесплатно	Всего	Всего	Всего		Всего
Галловая кислота	Тимьян	94.2 ± 2,5	686,0 ± 15,2	276,8 ± 7,5	2016,0 ± 44,6
	Манука	741,5 ± 27,4	584,5 ± 25,9	2179,0 ± 80172	2179,0 ± 80172 9018	Honeydew	48,1 ± 6,2	1082,9 ± 16,3	141,5 ± 18,2	3183,0 ± 47,8
Кофейная кислота	Тимьян	90,2 ± 2,7	232,2 ± 7,5
	Манука	44,8 ± 3,5	131,3 ± 17,1	124,3 ± 9,8	364,4 ± 47,3
							± 9,0	80,2 ± 7,0	268,0 ± 25,1
Кверцетин	Тимьян	38,2 ± 3,2	—	63,2 ± 5,3	—
		6 ± 7,4	—	17,5 ± 12,2	—
	Honeydew	—	—	—	—
				79,2 ± 24,1	57,9 ± 0,6
	Манука	9,3 ± 2,6	12,2 ± 2,0	16,2 ± 4,6	21,3 ± 3,5
8,6 ± 0,2	19,6 ± 3,1	15,0 ± 0,3
Хризин	Тимьян	53,0 ± 0,3	38,1 ± 0,4	104,3 ± 0,5	75,0	Манука	77,6 ± 0,8	72,1 ± 1,3	152,6 ± 1,7	141,9 ± 2,5
	Honeydew	46,4 ± 0,5	26,8 ± 0,6			26,8 ± 0,6

Количество каждого фенола варьировалось до десяти раз между тремя типами меда. Галловая кислота зафиксировала самую высокую концентрацию среди фенольных соединений во всех сортах меда, в общей сложности 1082,88 ± 16,25 мкг / 100 г экстрагированного свободным фенолом меда из пади, что становится низкой концентрацией мкМ в 5% (мас. / Об.) Растворе меда, используемом в более поздние пробы. Кверцетин зафиксировал самую низкую концентрацию среди всех фенольных соединений, он обнаруживается только в тимьяне, извлеченном из свободного фенола, и меде манука.Более высокое извлечение галловой кислоты и кофейной кислоты наблюдалось в большинстве общих экстрактов фенола, что было в отличие от всех других соединений, которые показали более высокое извлечение в экстрактах свободного фенола.

Влияние меда и его компонентов на миграцию и инвазию клеток рака простаты

Миграцию и инвазию тестировали в камерах Бойдена с добавлением матригеля для анализа инвазии. Для этих экспериментов использовалась только клеточная линия PC3, поскольку клеточная линия DU145 не является очень мигрирующей, и было обнаружено, что она не перемещается через камеру Бойдена.Тесты проводились с использованием ранее сообщенных самых высоких нетоксичных концентраций меда: 1% для 48-часового анализа миграции и 0,5% для 72-часового анализа вторжения (Abel & Baird, 2018).

1% меда тимьяна или пади вызвали небольшое, но значительное снижение миграции клеток PC3 по сравнению с контролем, обработанным носителем, на 20,59 ± 4,90% и 18,90 ± 1,62% соответственно (). Мед манука и смесь, содержащая только сахар, не вызывали какого-либо снижения миграции клеток, что позволяет предположить, что не связанные с сахаром соединения в меде могут быть ответственны за влияние на миграцию.

Влияние меда и фенольных соединений меда на миграцию и инвазию клеток PC3.

Клетки PC3 помещали в камеры Бойдена и обрабатывали 1% (мас. / Об.) Тимьяном, манукой, медвяной росой или смесью только сахара (A) или фенольным кверцетином (10 мкМ), галловой кислотой (10 мкМ), кемпферолом ( 150 мкМ), хризина (100 мкМ) или кофейной кислоты (50 мкМ) (B) в течение 48 часов для измерения миграции или в камерах Бойдена, содержащих матригель в течение 72 часов с 0,5% (мас. / Об.) Тимьяна, мануки, медвяной росы или сахара. только смесь (C) или фенольные кверцетин (10 мкМ), галловая кислота (10 мкМ), кемпферол (150 мкМ), хризин (100 мкМ) или кофейная кислота (50 мкМ) (D) в течение 72 часов для измерения инвазии.Эксперименты проводили в трех повторностях, и значения выражали как среднее значение миграции клеток ± стандартная ошибка среднего ( n = 2 или 3). Данные были проанализированы с использованием двустороннего критерия Стьюдента t . * ( p <0,05) представляет собой значительную разницу между индивидуальной обработкой и контролем клеток без обработки носителем 0,1% ДМСО для фенолов и только RPMI для меда.

Все исследованные нетоксичные концентрации фенольных соединений, за исключением кофейной кислоты, вызвали уменьшение миграции клеток PC3 ().Галловая кислота (10 мкМ) вызвала наибольшее снижение миграции на 49,10 ± 8,33% по сравнению с контролем, обработанным носителем (ДМСО). Вместе эти результаты продемонстрировали, что фенольные соединения, обнаруженные в меде, обладают антиметастатической активностью в отношении клеток PC3, однако не все соединения обладают аналогичной эффективностью.

При измерении инвазии, которая учитывает движение клеток PC3, а также способность перемещаться через матрикс Matrigel, 0,5% (мас. / Об.) Тимьяна, манука или меда пади вызвали значительное снижение по сравнению с контролем 50.53 ± 4,10%, 60,44 ± 9,71% и 75,32 ± 0,19% соответственно (). Смесь, содержащая только сахар, вызвала снижение инвазии клеток на 46,77 ± 17,01%, однако это не было статистически значимым. Эти изменения были намного значительнее, чем сокращение миграции, предполагая, что мед особенно снижает способность клеток перемещаться через матригель.

Инвазия была также снижена большинством фенольных соединений, с кверцетином (10 мкМ) и кофейной кислотой (50 мкМ), что привело к снижению на 45,28 ± 0,64% и 14.44 ± 1,17% соответственно (). Кроме того, хризин (100 мкМ) и галловая кислота (10 мкМ) снижали инвазию на 39,57 ± 14,57% и 29,03 ± 15,86% соответственно, однако они не были статистически значимыми. Наконец, кемпферол зафиксировал снижение инвазии только на 5,04 ± 2,11%. В целом снижение инвазии, вызванной фенольными соединениями, было сопоставимо с уменьшением миграции, за исключением кемпферола и кофейной кислоты.

Влияние меда и компонентов меда на адгезию клеток рака простаты

Мед тимьяна, манука и пади вызывал гораздо большее, зависящее от концентрации снижение адгезии клеток по сравнению с их влиянием на миграцию и инвазию как в клетках PC3, так и в клетках DU145 ( р <0.05) (). Это оценивали через 30 и 60 минут воздействия меда в клетках PC3 и через 60 и 90 минут в клетках DU145, которым требовалось больше времени для закрепления. Клетки DU145 были намного более чувствительны к действию меда, их адгезия к коллагену I почти полностью предотвращалась 2% (мас. / Об.) Медом, что снизилось до 8,98 ± 4,65% от контрольного, обработанного носителем меда из пади, через 60 мин. , тогда как для клеток PC3 требуется 5% (мас. / об.), достигая 8,93 ± 3,69% с падевым медом через 60 мин. В клетках PC3 смесь, содержащая только сахар, также была эффективна для снижения адгезии на 3% (мас. / Об.) (33.18 ± 25,05%) и 5% (мас. / Об.) (16,51 ± 4,68%) через 60 мин, но в клетках DU145 более низкие концентрации смеси, содержащей только сахар, фактически увеличивали адгезию (хотя и незначительно) до ее значительного снижения при 5% (мас. / Об.), До 21,88 ± 13,01% через 90 мин.

Влияние меда на адгезию клеток PC3 и DU145 к коллагену I.

(A, B) Клетки PC3 и (C, D) DU145 оставляли для прикрепления к пластинам, покрытым коллагеном I, на (A) 30, (B, C) 60 или (D) 90 мин. Эксперименты были выполнены в трех экземплярах, результаты выражены как средний процент от контроля ± S.E.M ( n = минимум 3). Индивидуальные данные были проанализированы с использованием двустороннего дисперсионного анализа с последующим апостериорным тестом Бонферрони, где p <0,05 требовалось для статистически значимой разницы. * представляет собой значительную разницу между контролем, обработанным носителем (только RPMI 0% масс. / об.), и индивидуальной обработкой.

Когда клетки прикреплялись к фибронектину, результаты были очень разными (). В клетках PC3, хотя мед снижает адгезию статистически значимым образом, эффект больше не является значительным и не зависит от концентрации.Смесь, содержащая только сахар, и мед дали аналогичные уровни снижения адгезии, при этом максимальное снижение было обнаружено через 60 минут с 4% (мас. / Об.) Медом манука при 67,15 ± 8,33%. В клетках DU145 эффекты также были намного меньше, чем с коллагеном I, хотя снижение было намного больше, чем с клетками PC3. Адгезия была снижена до 42,33 ± 1,05% за 90 мин на 3% (мас. / Об.) Падевого меда. Опять же, эффекты не зависели от концентрации. Однако с клетками DU145 изменения адгезии со смесью только сахара сильно отличались от того, что наблюдалось с клетками PC3.При большинстве концентраций было обнаружено увеличение адгезии до 190,97 ± 5,46% при 4% (мас. / Об.) Через 90 мин.

Влияние меда на адгезию клеток PC3 и DU145 к фибронектину. Клетки

(A, B) PC3 и (C, D) DU145 оставляли для прикрепления к планшетам, покрытым фибронектином, на (A) 30, (B, C) 60 или (D) 90 мин. Эксперименты проводили в трех повторностях, результаты выражали как средний процент контроля ± S.E.M ( n = 3). Индивидуальные данные были проанализированы с использованием двустороннего дисперсионного анализа с последующим апостериорным тестом Бонферрони, где p <0.05 требовалось для получения статистически значимой разницы. * представляет собой значительную разницу между контролем, обработанным носителем (только RPMI 0% масс. / об.), и индивидуальной обработкой.

Измерения адгезии обеих клеточных линий к коллагену I и фибронектину были использованы для определения того, были ли пять фенольных соединений, производных от меда, ответственны за потерю прикрепления клеток, наблюдаемую при введении меда (). Через 60 мин ни одно соединение не оказало никакого влияния на адгезию клеток PC3 или DU145 к фибронектину при любой концентрации.Только кверцетин и кемпферол (150 мкМ) вызвали какое-либо существенное изменение адгезии клеток к коллагену I. Кверцетин (150 мкМ) вызвал снижение адгезии клеток PC3 к коллагену I на 47,14 ± 10,27%. Кемпферол (150 мкМ) вызывал увеличение адгезии клеток PC3 и DU145 к коллагену I на 117,20 ± 11,10% и 104,10 ± 10,09% соответственно.

Влияние фенольных соединений меда на адгезию клеток PC3 и DU145.

Клетки PC3 и DU145 обрабатывали (A) кверцетином (0–150 мкМ), (B) галловой кислотой (0–10 мкМ), (C) кемпферолом (0–150 мкМ), (D) хризином (0– 50 мкМ) или (E) кофейная кислота (0–50 мкМ) в течение 60 мин.Эксперименты проводили в трех повторностях, и значения выражали как средний процент жизнеспособности клеток ± S.E.M ( n = 2 или 3). Данные были проанализированы с использованием двустороннего дисперсионного анализа с последующим апостериорным тестом Бонферрони, где p <0,05 требовалось для статистически значимой разницы. * представляет собой значительную разницу между контролем и индивидуальным лечением.

Обсуждение

Мы показали, что мед обладает антиметастатической активностью в двух линиях клеток рака простаты в ситуации in vitro , в которой их неметаболизированные формы контактируют с раковыми клетками.Мы также исследовали некоторые составляющие меда, включая основные сахара и пять основных фенольных соединений, и показали, что они также могут частично подавлять некоторые метастатические свойства. Цельный мед, а также сахар, в меньшей степени, могли предотвратить адгезию клеток к коллагену I, хотя фенольные соединения не были эффективны. Мед и кверцетин также сильно снижали инвазию, но влияние на миграцию было намного меньше.

Мы начали с измерения концентраций пяти фенольных соединений в цельном меде, выбранных из-за их обилия и заявленной биологической активности.Была разработана усовершенствованная система градиента ВЭЖХ, которая улучшила ранее описанные методики, используемые с медом (Yao et al., 2003), и позволила более чувствительное обнаружение и точный расчет концентраций фенолов. Например, кверцетин был обнаружен в тимьяне и меде манука, тогда как при использовании других методов его ранее не обнаруживали в тимьяновом меде (El-Hady & Shaker, 2013).

Фенольные соединения определяли как свободные, так и общие фенолы. Образцы свободного фенольного экстракта содержали несвязанные фенольные соединения (агликоны) в меде, которые легко экстрагировались этилацетатом.Образцы общего фенольного экстракта содержали как фенольные агликоны, так и связанные фенольные гликозиды, которые требовали гидролиза гликозидных сложноэфирных связей для высвобождения фенольных агликонов перед их экстракцией в органический растворитель (Wahdan, 1998).

Более высокое извлечение галловой кислоты и кофейной кислоты наблюдалось в общем феноле, чем в экстрактах свободного фенола, что было в отличие от флавоноидных соединений, которые показали более высокое извлечение в экстрактах свободного фенола. Объяснение этому может заключаться в том, что флавоноиды в меде существуют в основном в виде агликонов и были полностью обнаружены в образцах свободного фенола, однако две фенольные кислоты, кофейная кислота и галловая кислота, существуют преимущественно в виде гликозидов из пыльцы и, следовательно, могут потребовать гидролиза (в том виде, в котором они используются. для «полных» образцов) (Ferreres et al., 1991). Единственным исключением была галловая кислота в меде манука, большее количество которой было обнаружено в экстрактах свободного фенола. Это можно объяснить тем фактом, что мед манука, как сообщается, имеет высокую концентрацию глюкозооксидазы, которая может производить перекись водорода (White & Doner, 1980), а радикалы, включая перекись водорода, способны гидролизовать гликозидные связи между фенольными соединениями и сахарами. (Brudzynski et al., 2011; Hussein et al., 2011). Как мы обнаружили здесь, галловая кислота ранее описывалась как преобладающая фенольная кислота как в австралийском, так и в новозеландском меде (Yao et al., 2003; Yao et al., 2004).

Влияние цельного меда и фенольных соединений на миграцию клеток в камерах Бойдена было ограниченным, но значительным. Эффект был обнаружен как для тимьяна, так и для меда из пади, но снижение было не таким значительным, как у кемпферола и хризина, до 50%. Смесь только сахара, мед манука и другие фенольные соединения не повлияли на миграцию. Напротив, Ho et al. (2010) сообщили, что галловая кислота (3,5 мкМ) может ингибировать миграцию клеток AGS рака желудка на 60% в камерах Бойдена, но это было измерено только через 6 часов миграции после 48 часов воздействия галловой кислоты в других лунках, что весьма существенно. установка отличается от используемой здесь.

Интересно, что влияние меда на вторжение, движение через Матригель, а также камеру Бойдена, было гораздо более выраженным, при этом падевый мед имел наибольший эффект в снижении вторжения примерно на 75%, но все меды имели большую значительную эффект. Из фенольных соединений только кверцетин и кофейная кислота показали статистически значимое снижение, но также была тенденция к снижению для хризина, галловой кислоты и смеси, содержащей только сахар.

Это демонстрирует, что мед может ингибировать процесс инвазии сильнее, чем процесс миграции, и предполагает, что основная точка ингибирования, вероятно, является частью пути, который более важен для инвазии, чем для миграции.Хотя мы не исследовали это здесь, механизм действия может быть через ингибирование ММП, которые входят в число протеаз, экспрессируемых на переднем крае метастазирующих клеток, где они способствуют разрушению внеклеточного матрикса (Friedl & Wolf, 2003). . Ho et al. (2010) показали, что галловая кислота может снижать желатинолитическую активность MMP-2 и MMP-9, возможно, через NF-κB. Было показано, что мед может снижать экспрессию и ядерную транслокацию NF-κB как in vivo , так и in vitro (Batumalaie et al., 2013; Hussein et al., 2013), хотя также было показано, что мед не ингибирует активность NF-κB в клетках глиобластомы U87MG (Moskwa et al., 2014). Однако Moskwa et al. (2014) действительно показали, что мед может снижать ферментативную активность MMP-2 и MMP-9. Пихтовый мед также ингибировал миграцию кератиноцитов человека за счет снижения экспрессии MMP-9 (Majtan et al., 2013). Ли и др. (2004) продемонстрировали, что 20 мкМ кверцетина или лютеолина могут ингибировать секрецию ММП в клеточной линии MIA PaCa-2. Также сообщалось, что кверцетин (50–100 мкМ) подавляет экспрессию как MMP-2, так и -9 в клетках PC3 (Vijayababu et al., 2006).

Ранее было показано, что фенольные соединения влияют на другие части процесса миграции клеток, включая как GTPases семейства Rho, так и экспрессию интегрина, хотя это не было продемонстрировано в раковых клетках. Например, галловая кислота (25–100 мкМ) ингибирует экспрессию и активность белка RhoA в фибробластах, образованных из рубца, после стимуляции TGFβ (Hsieh et al., 2016). В фибробластах L929 после обработки 20 мкМ кверцетина в течение 24 часов, интегрин α _V был повышен на 18%, а интегрин β1 был аналогичным образом подавлен (Doersch & Newell-Rogers, 2017).Некоторые из этих концентраций были намного выше, чем те, которые использовались в нашем исследовании, однако, возможно, имелся кумулятивный эффект комбинации более низких концентраций многих фенольных соединений.

Еще одна необходимая особенность процессов миграции и инвазии — адгезия к внеклеточному матриксу. Впервые было показано, что за короткий промежуток времени 30–90 мин анализа адгезии с использованием коллагена I мед вызывал потерю клеточной адгезии более чем на 90% в обеих клеточных линиях, хотя клеточная линия DU145 была более чувствительной. .Составляющие сахара в меде, по-видимому, играют роль в потере адгезии, но не обеспечивают полного эффекта. Когда вместо коллагена I использовали фибронектин, снижение адгезии в клетках PC3 значительно снижалось. В клетках DU145 все еще было обнаружено снижение адгезии до 50%, но смесь, содержащая только сахар, увеличивала, а не снижала адгезию, что позволяет предположить, что механизм действия сахаров очень сильно зависит от белкового субстрата. Различия в изменениях адгезии между двумя типами клеток могут быть связаны с экспрессией ими интегринов.Было показано, что клетки DU145 высоко экспрессируют α _v и интегринов β1, которые предпочтительно связываются с фибронектином, и могут уменьшать миграцию и приводить к менее инвазивному фенотипу по сравнению с клетками PC3 (Ruoslahti & Giancotti, 1989; Witkowski et al. , 1993). Повышенная инвазивность клеток PC3 по сравнению с клетками DU145 вместо этого объясняется экспрессией интегринов α, 6 и β1, которые лучше связываются с коллагеном и ламинином (Witkowski et al., 1993; Suyin, Holloway & Dickinson, 2013).Коллагены, включая коллаген I, откладываются в опухолях с большей скоростью, часто линеаризованным образом, что увеличивает жесткость стромы и способствует миграции раковых клеток (Zhu et al., 1995; Egeblad, Rasch & Weaver, 2010). Таким образом, возможность уменьшения адгезии клеток предстательной железы к коллагену, если переводится in vivo , будет иметь потенциальную терапевтическую пользу.

Напротив, фенольные соединения, по-видимому, не играют роли в снижении адгезии клеток рака простаты.Самая высокая концентрация кверцетина (150 мкМ) только снижает адгезию клеток PC3, прикрепляющихся к коллагену I, а 150 мкМ кемпферол увеличивает адгезию обеих линий клеток к коллагену I. Кверцетин может влиять на адгезию через рецептор эпидермального фактора роста, который опосредует клетки DU145. адгезия к коллагену I (Lamb, Zarif & Miranti, 2011) и может подавляться кверцетином (Kumar et al., 2008; Bhat et al., 2014). Мы отмечаем, что для наблюдения биологической активности в наших анализах с этими соединениями требовались гораздо более высокие (мкМ) концентрации фенольных соединений, чем в меде, и поэтому маловероятно, что какие-либо эффекты будут вызваны одним фенольным соединением.

Отсутствие влияния фенольных соединений на адгезию клеток рака простаты было неожиданным, учитывая роль этих соединений в процессе адгезии в других типах клеток. Может быть некоторая специфичность клеточного типа или подтипа интегрина. Например, было показано, что хризин (3 мкМ и 10 мкМ) ингибирует индуцированную коллагеном агрегацию тромбоцитов за счет снижения передачи сигналов P-селектина и интегрина α IIb β3 (Liu et al., 2016) и кофейной кислоты в концентрации до 100 мкМ. мкМ также может снижать агрегацию тромбоцитов с помощью тех же двух механизмов (Lu et al., 2015). Кофейная кислота в концентрации 1–20 мкМ также снижает адгезию моноцитов к эндотелиальным клеткам пупочной вены человека посредством подавления шести различных молекул адгезии и интегринов (Lee et al., 2012).

Часто считается, что фенольные соединения ответственны за биологическую активность многих натуральных продуктов, включая мед. Поскольку мед содержит несколько полифенолов, представляет интерес эффект комбинированного лечения in vivo и in vitro . Мы обнаружили, что фенольные соединения присутствовали в меде в диапазоне нМ (), однако при индивидуальном использовании in vitro в диапазоне мкМ они продемонстрировали минимальные антиметастатические свойства.Это говорит о том, что польза от меда может быть связана с комбинацией многих соединений, а не с отдельными действиями.

Об ингибировании адгезии раковых клеток цельным медом ранее не сообщалось. Мэддокс и др. (2013) сообщили, что мед манука (16–50% масс. / Об.) Может ингибировать адгезию 8 штаммов бактерий к фибронектину, фибриногену и коллагену. Считалось, что это связано с уменьшением количества связывающих фибронектин белков, а также с ингибированием образования биопленок (Maddocks et al., 2013; Maddocks et al., 2012). При метастазировании клетка должна иметь возможность регулировать свое прикрепление к окружающей среде, чтобы двигаться вперед. Из-за того, что лечение медом вызывает нарушение этого процесса, метастазы не могут развиваться (Bendas & Borsig, 2012).

Мы также сделали новое открытие, что сахарные компоненты меда, а также фенольные соединения играют роль в его ингибировании in vitro адгезии, миграции и инвазии рака. Сахара могут действовать в организме как антиоксиданты, подобно тому, как это описано для полифенолов.Было показано, что однократное пероральное введение меда (1,5 г / кг) людям увеличивает общий фенольный, антиоксидантный и снижает емкость плазмы. Контрольный препарат, содержащий только сахар, кукурузный сироп, не увеличивал общие уровни фенолов в плазме, однако он действительно значительно увеличивал антиоксидантную способность плазмы (Schramm et al., 2003), скорее всего, за счет образования продуктов Майяра или действуя как редуцирующие сахара. (Уайт и Донер, 1980; Майярд, 1912). Это говорит о том, что активность меда обусловлена ​​присутствием как фенольных соединений, так и сахаров, и может повысить его общую биологическую активность по сравнению с другими природными источниками фенола, не содержащими сахара.

Мед снижает метастатические характеристики клеточных линий рака простаты, способствуя потере адгезии

Abstract

Мед было показано, что он оказывает ряд терапевтических эффектов у людей, включая противовоспалительные и антибактериальные эффекты среди ранее охарактеризованных . Здесь мы исследуем возможность новозеландского тимьяна, мануки и меда из пади, а также их основных сахарных и фенольных компонентов, снижающих развитие метастатического рака. Их активность была исследована in vitro на клеточных линиях рака предстательной железы PC3 и DU145 путем измерения влияния соединений на метастатические характеристики миграции, инвазии и адгезии.Во-первых, фенольные соединения галловой кислоты, кофейной кислоты, кверцетина, кемпферола и хризина были количественно определены в меде с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии и обнаружены в наномолярных концентрациях. В анализе миграции на основе камеры Бойдена нетоксичные концентрации тимьяна и меда снизили миграцию клеток на 20%, и все фенольные соединения, кроме кофейной кислоты, также снизили миграцию, хотя смесь только сахаров, содержащихся в меде, не оказала никакого эффекта. Все меды, фенольные смолы и смеси, содержащие только сахар, снижали инвазивное движение клеток через внеклеточный матрикс до 75%.В частности, каждый из трех видов меда и смесь, содержащая только сахар, снижали адгезию клеток к коллагену I на 90%. За исключением кверцетина, фенольные соединения не снижали адгезию. Следовательно, мед и его сахар и фенольные компоненты могут снизить метастатические свойства раковых клеток и могут сделать это, предотвращая эффективную адгезию клеток к внеклеточному матриксу. Сахар и фенольные соединения меда гораздо более эффективны в сочетании, чем по отдельности.

Ключевые слова: Мед, метастаз, адгезия, миграция, инвазия, фенольный, сахар

Введение

Мед делают из нектара пчелы ( Apis mellifera ), и было показано, что он обладает потенциальными терапевтическими преимуществами для людей.Некоторые из этих характеристик, включая антибактериальные, противовоспалительные, антиоксидантные и антигипертензивные эффекты, были продемонстрированы in vivo , а некоторые только in vitro . Эти свойства обычно приписываются полифенольным компонентам меда (Alvarez-Suarez, Giampieri & Battino, 2013).

Основными составляющими меда являются сахара, которые составляют более 99% сухого веса меда (White & Doner, 1980). Ферменты, в том числе инвертаза, диастаза и глюкозооксидаза, в медовом желудке пчел превращают полученные из нектара полисахариды в моносахариды (Winston, 1991).Сахарная смесь состоит в основном из фруктозы (40,5%), глюкозы (33,5%), мальтозы (7,5%) и сахарозы (1,5%), что характерно для меда независимо от происхождения нектара (Cooper, Molan & Harding, 2002 ). Однако мед также содержит много других компонентов, включая аминокислоты, витамины, минералы, полифенолы и ферменты (White, 1978). Полифенолы, включая фенольные кислоты и флавоноиды, составляют большую часть этой группы. Их состав и пропорции варьируются в зависимости от источника меда, пять из наиболее распространенных и биологически активных — это кверцетин, галловая кислота, кемпферол, хризин и кофейная кислота (Alvarez-Suarez, Giampieri & Battino, 2013; Kassim et al., 2010; Erejuwa, Sulaiman & Wahab, 2014).

Мед также оказывает цитотоксическое действие на линии раковых клеток и на моделях животных с опухолями. Было показано, что мед может подавлять пролиферацию раковых клеток и вызывать апоптоз при различных формах рака, включая рак груди, толстой кишки, печени и простаты (Fauzi, Norazmi & Yaacob, 2011; Hassan et al., 2012; Jubri et al., 2012). ; Tomasin & Gomes-Marcondes, 2011; Tsiapara et al., 2009; Wen et al., 2012).

Также вероятно, что мед может оказывать влияние на метастазирование, образование вторичных опухолей в других частях тела, что является причиной большинства смертей от рака (Mehlen & Puisieux, 2006).При метастазировании раковые клетки мигрируют от первичного очага опухоли, проникают через местную ткань и попадают в кровоток, инфильтрируются на вторичном участке и, наконец, возобновляют рост опухоли. Клеточные процессы, участвующие в метастазировании, регулируются рецепторами, такими как интегрины и внутриклеточные сигнальные белки, которые контролируют адгезию клеток к окружающей внеклеточной матрице, разрушают физические барьеры, такие как базальная мембрана, посредством протеолиза и повышают подвижность клеток (Liotta, Steeg & Stetler-Stevenson, 1991).Клетка перемещается в результате изменений цитоскелета, опосредованных циклом полимеризации и деполимеризации актина, контролируемой GTPases семейства Rho, что позволяет образовывать выступы на мембране. Выступы и тело клетки позади них прикрепляются к внеклеточному матриксу и отделяются от него регулируемым движением по мере продвижения клетки вперед (Pollard & Borisy, 2003). Каждый из процессов миграции, инвазии и адгезии может быть измерен отдельно in vitro , чтобы охарактеризовать механизм действия эффектов на метастазирование.

В двух исследованиях изучалось влияние меда на метастазирование на животных моделях. Оршолич и др. (2005) показали, что 2 г / кг меда, вводимые перорально ежедневно перед внутривенной инъекцией опухолевых клеток молочной железы или фибросаркомы мышам CBA, уменьшали образование опухолей в легких примерно на 70%, но не оказывали никакого эффекта, если их вводили только после инокуляции опухоли. В более раннем исследовании той же группы также изучалась аденокарцинома толстой кишки у крыс Y59 после внутривенной инъекции. В этом исследовании было обнаружено, что мед, принимаемый перорально в течение 10 дней до инокуляции опухоли в дозе 1 г / кг, уменьшал опухолевые узелки в легких примерно на 56% (Oršolić et al., 2003).

In vitro любая оценка потенциальной антиметастатической активности меда была косвенной. Moskwa et al. (2014) измерили активность ферментов матриксной металлопротеиназы (ММП), важных для процесса инвазии, в клетках глиобластомы U87MG и обнаружили, что мед может ингибировать их до 95%, хотя доза также вызвала высокую цитотоксичность. Во всех остальных исследованиях использовались только отдельные полифенолы, которые также содержатся в меде. Например, галловая кислота (3.5 мкМ) снижает миграцию AGS в раковых клетках желудка примерно на 75% через 24 часа в анализе царапин и на 60% в анализе камеры Бойдена через 48 часов (Ho et al., 2010). Галловая кислота также снижает инвазию в клеточную линию глиомы U87 примерно на 50% при 40 мкг / мл (Lu et al., 2010). Было показано, что кофейная кислота (4 мкг / мл) снижает инвазию в клетки рака предстательной железы PC3 примерно на 50% (Lansky et al., 2005).

Целью этого исследования было выяснить, могут ли цельный мед или его основные компоненты, сахара или фенольные составляющие обладать антиметастатическими свойствами.Сначала мы измерили концентрации пяти основных фенольных соединений, а затем изучили три основные характеристики метастатических клеток, используя тесты in vitro для измерения миграции, инвазии и адгезии.

Материалы и методы

Материалы

Диметилсульфоксид (ДМСО) был от Scharlau (Барселона, Испания). Среда RPMI-1640, фетальная бычья сыворотка (FBS), пенициллин-стрептомицин (PS), PBS и трипсин были от Gibco (Карлсбад, Калифорния). Бычий сывороточный альбумин (БСА), 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2,5-дифенилтетразолий бромид (МТТ), кверцетин, кофейная кислота, сахароза, мальтоза, фруктоза, D — (+) — глюкоза , муравьиная кислота, метанол, бикарбонат натрия, этилацетат, гидроксид натрия и соляная кислота были от Sigma-Aldrich (St.Луис, Миссури, США). Мед из тимьяна, мануки и пади любезно пожертвовал компания New Zealand Honey Specialties Limited (Мосгил, Новая Зеландия). Кемпферол и хризин были от Sapphire Biosciences (Новый Южный Уэльс, Австралия). Галловая кислота была от Abcam (Кембридж, Великобритания). Фибронектин, коллаген I и Matrigel ^® были от Corning (Корнинг, Нью-Йорк, США).

Приготовление меда и соединений

Тимьян и мед манука были из региона Центральный Отаго в Новой Зеландии, произведены из куста тимьяна ( Thymus vulgaris) или дерева манука (Leptospermum scoparium) .Медоносный мед собирали в районе Кентербери в Новой Зеландии с дерева Букового леса (Nothofagus fusca). Все меды произведены европейской медоносной пчелой ( Apis mellifera). Смесь, содержащая только сахар, искусственный мед, была изготовлена ​​путем смешивания 40,5 г фруктозы, 33,5 г глюкозы, 7,5 г мальтозы и 1,5 г сахарозы в 17 мл бидистиллированной воды (ddH ₂ O) (Cooper, Molan & Harding, 2002). Сырой мед хранили при комнатной температуре с минимальным освещением.Исходные растворы меда получали растворением в подогретой бессывороточной среде RPMI-1640 и стерилизовали с использованием фильтра 0,22 мкм. Фенольные соединения растворяли в 100% ДМСО и фильтровали. Перед каждым экспериментом готовили свежие препараты меда и компаундов.

Приготовление фенольных экстрактов

Следующий метод был адаптирован из Wahdan (1998). Тимьян, манука и медовая роса растворяли в теплой воде MilliQ до конечной концентрации 20% (мас. / Об.) (10 мл или 15 мкл).48 г меда в 40 мл MilliQ). После экстракции высушенные образцы повторно растворяли в 600 мкл метанола.

Приготовление экстракта свободного фенола

Каждый раствор меда (50 мл) доводили до pH 4,5 с помощью концентрированной HCl. Бисульфит натрия (1 г) и этилацетат (50 мл) смешивали с раствором меда в делительной воронке. Смесь встряхивали 1 мин, чтобы фенольные соединения перешли в органическую фазу. Раствор меда сливали, а слой этилацетата переносили в отдельный стакан.К раствору меда добавляли еще 50 мл этилацетата. Эти этапы экстракции повторялись шесть раз. Смесь этилацетата (всего 300 мл) концентрировали с использованием роторного испарителя в вакууме (~ 240 мбар) при 30 ° C. Высушенные соединения восстанавливали (метанол: этилацетат, 1: 1) и сушили в атмосфере азота для хранения при -15 ° C.

Приготовление полного фенольного экстракта

Требовалось дополнительное приготовление для гидролиза фенольных соединений, которые были связаны с сахарами через сложноэфирные связи.Каждый раствор меда (25 мл) объединяли с NaOH (25 мл, 3 н.) И гидролизовали при комнатной температуре в течение 4 часов. После этого pH доводили до 3,5, используя концентрированную HCl, и проводили экстракцию, как для экстракции свободного фенола, описанной выше.

Количественное определение фенольных соединений с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)

Разделение фенолов проводили с использованием ВЭЖХ CBM-20Alite Prominence (Shimadzu Corporation, Япония) на обращенно-фазовой колонке Gemini 5 мкм C18 110 Å, LC (150 х 4.6 мм) (Phenomenex, США). Метод был адаптирован из Kassim et al. (2010), и состояла из градиентной системы для идентификации и количественного определения выбранных фенолов в экстрагированных образцах меда. Подвижная фаза представляла собой раствор бинарного растворителя, состоящий из А = 0,25% муравьиной кислоты и 2% метанола в воде, а В = 100% метанола. Градиентный метод был следующим: 0 мин 10% B, 20 мин 40% B, 30 мин 45% B, 50 мин 60% B, 52 мин 80% B, 60 мин 90% B, 62 мин 10% B до 65 мин. Фенольные соединения меда были обнаружены с помощью диодной матрицы, спектры которой контролировали при 370 нм (кемпферол и кверцетин), 325 нм (кофейная кислота) и 270 нм (галловая кислота и хризин).

Калибровочные кривые стандартов использовались для идентификации и количественного определения фенольных соединений в образцах меда. Идентификация была завершена путем сравнения стандартного времени удерживания и спектров поглощения с образцами. Добавление пробы использовалось для повышения достоверности идентификации пика. Чтобы решить проблемы количественной оценки из-за разделенных и смещенных пиков, был использован метод интегрирования от долины к долине.

Клеточная культура

Клеточные линии рака предстательной железы человека PC3 (более метастатические) и DU145 (менее метастатические) были подарком проф.Розенгрен (Университет Отаго, Новая Зеландия). Клетки поддерживали в среде RPMI-1640 с добавлением 5% FBS, 100 Ед / мл пенициллина, 100 мкг / мл стрептомицина и 2 г / л бикарбоната натрия. Клетки инкубировали в увлажненном воздухе с 5% CO ₂ /95% O ₂ при 37 ° C.

Анализ миграции камеры Бойдена

Нижние стороны мембран камеры Бойдена (размер пор 8 мкм, 24-луночные планшеты, Transwells от Corning) были покрыты коллагеном I (15 мкл, 150 мкг / мл 0,01 М HCl в PBS), слева сушить в стерильных условиях в течение 1 часа, дважды промыть PBS и высушить еще 1 час.30 × 10 ³ Клетки PC3 в бессывороточной ростовой среде высевали в верхнюю камеру. Нижняя камера содержала 5% ростовой среды, содержащей сыворотку. Обе верхние и нижние камеры обрабатывали в течение 48 часов соединениями в предварительно установленных максимальных нецитотоксических концентрациях, а именно: 1% (мас. / Об.) Меда, 25 мкМ кверцетина, 10 мкМ галловой кислоты, 50 мкМ кофейной кислоты, 150 мкМ кемпферола или 100 мкМ хризина (Abel & Baird, 2018). Использовали контрольный носитель 0,1% ДМСО, самую высокую добавленную концентрацию.После инкубации с обработкой раствор МТТ (0,5 мг / мл) добавляли в верхнюю и нижнюю камеры и планшеты инкубировали еще 3 часа (Mosmann, 1983). После этого использовали ватный наконечник для удаления кристаллов формазана из верхней камеры. Нижние стороны вставок подвергали воздействию ДМСО для растворения кристаллов формазана из мигрировавших клеток. Поглощение измеряли при 560 нм. Данные были выражены как процент мигрировавших клеток по сравнению с контролем-носителем.

Анализ инвазии камеры Бойдена

Этот анализ был использован для определения инвазивной способности in vitro клеток рака простаты PC3 через Matrigel ^® , раствор, содержащий белки внеклеточного матрикса и базальной мембраны, напоминающие структурные части окружающей опухоль стромальная среда (Hughes, Postovit & Lajoie, 2010).Инвазию клеток изнутри вставки по направлению к нижней стороне измеряли после того, как клетки подвергали воздействию соединений в ранее установленных нецитотоксических концентрациях в течение 72 часов: 0,5% (мас. / Об.) Мед, 5 мкМ кверцетина, 10 мкМ галловой кислоты. , 50 мкМ кофейной кислоты, 150 мкМ кемпферола или 100 мкМ хризина (Abel & Baird, 2018). Использовали контрольный носитель 0,1% ДМСО, самую высокую добавленную концентрацию. Matrigel ^® добавляли в верхнюю камеру вкладышей и через 1 час промывали бессывороточной ростовой средой.Остальная часть метода продолжалась так же, как и для анализа миграции, хотя продолжительность обработки составляла 72 часа. Данные были выражены как процент мигрировавших клеток по сравнению с контролем-носителем.

Анализ клеточной адгезии

Чтобы оценить способность меда влиять на адгезию клеток рака простаты PC3 in vitro , использовали анализ для измерения прикрепления (Jin et al., 2000). 96-луночные планшеты покрывали коллагеном I (20 мкл, 5 мкг / мл, 0,01 М HCl в PBS) или фибронектином (20 мкл, 5 мкг / мл в PBS) и сушили в течение 1 часа.Планшеты дважды промывали PBS. BSA (1%, в PBS) добавляли в каждую лунку на 1 час. Лунки дважды промывали PBS и оставляли сушиться еще на 2 часа. В каждую лунку добавляли 1 × 10 ⁴ клеток PC3 или DU145 в среде для выращивания. Клетки обрабатывали медом или соединением в концентрациях, которые были нетоксичными в течение 24 часов, как показано ранее ²⁴ , и оставляли инкубироваться на 30 и 60 минут (PC3) или 30, 60 и 90 минут (DU145). Используемые концентрации составляли 0,5–5% для меда, до 150 мкМ для кверцетина и кемпферола, до 50 мкМ для хризина и кофейной кислоты и до 10 мкМ для галловой кислоты.Использовали контрольный носитель 0,1% ДМСО, самую высокую добавленную концентрацию. Лунки отсасывали и дважды промывали PBS. RPMI 1640 с 5% FBS с MTT (0,5 мг / мл) добавляли в каждую лунку и инкубировали в течение 3 часов. Кристаллы формазана солюбилизировали в ДМСО, и оптическую плотность измеряли при 560 нм. Данные были выражены как процент адгезивных клеток контрольного носителя.

Статистика

Каждый эксперимент проводился в трех экземплярах и повторялся трижды. Результаты выражали как среднее значение ± стандартная ошибка среднего с использованием GraphPad Prism 5 (GraphPad, Сан-Диего, Калифорния, США).Данные считались значимыми при P <0,05 (*). Для экспериментов по цитотоксичности использовали двухфакторный дисперсионный анализ с последующим апостериорным тестом Бонферрони для определения влияния концентрации и времени на гибель клеток. В тех случаях, когда предполагалась нормальность, выбросы определялись с помощью теста Граббса Online GraphPad Prism Grubbs и удалялись из наборов данных в соответствии с рекомендациями, основанными на вычисленных критических значениях Z.

Результаты

Количественная оценка фенольных соединений в меде с помощью ВЭЖХ

Поскольку мы были заинтересованы в количественной оценке влияния цельного меда и его основных фенольных компонентов на прометастатические свойства клеточных линий рака простаты, мы сначала оптимизировали метод экстракции и измерять как общие, так и свободные фенолы, включая галловую кислоту, кофейную кислоту, кверцетин, кемпферол и хризин, из тимьяна, манука и меда из меда.Система градиента ВЭЖХ была разработана для обеспечения достаточного разделения соединений, которые были идентифицированы с использованием калибровочных кривых со стандартами, подтвержденных добавлением образца. Для анализа использовался метод интегрирования от долины к долине из-за частых расщеплений и выступов пиков ().

Абсорбционная хроматограмма фенольных соединений в тимьяновом меде с помощью ВЭЖХ.

Типичная хроматограмма свободных (A – C) или общих (D – F) фенолов, экстрагированных из тимьянового меда с использованием этилацетата и элюированных через колонку C18 с использованием ВЭЖХ.(A, D) Детекторы были установлены на 370 нм для кверцетина и кемпферола, (B, E) 325 нм для кофейной кислоты и (C, F) 270 нм для галловой кислоты и хризина. Пиковое время удерживания сравнивали со стандартами для идентификации соединений.

показывает концентрации свободных и общих фенолов, обнаруженных в тимьяне, мануке и меде пади, как в мкг / 100 г меда, так и в нМ, что позволяет сравнить с концентрациями, использованными в более поздних экспериментах. Время удерживания в минутах (± SEM, n = 18) составляло 4.3 ± 0,02 для галловой кислоты, 20,3 ± 0,02 для кофейной кислоты, 35,3 ± 0,12 для кверцетина, 41,1 ± 0,1 для кемпферола и 50,0 ± 0,07 для хризина.

Таблица 1

Анализ ВЭЖХ этилацетата фенольные соединения из меда.

250.4 ± 7,6 90 Th171 ± 12,22 ± 1,8 ± 1,1

Соединение	Мед	[мкг / 100 г меда]		[5% раствор в / в] (нМ)
		Бесплатно	Всего	Всего	Всего		Всего
Галловая кислота	Тимьян	94.2 ± 2,5	686,0 ± 15,2	276,8 ± 7,5	2016,0 ± 44,6
	Манука	741,5 ± 27,4	584,5 ± 25,9	2179,0 ± 80172	2179,0 ± 80172 9018	Honeydew	48,1 ± 6,2	1082,9 ± 16,3	141,5 ± 18,2	3183,0 ± 47,8
Кофейная кислота	Тимьян	90,2 ± 2,7	232,2 ± 7,5
	Манука	44,8 ± 3,5	131,3 ± 17,1	124,3 ± 9,8	364,4 ± 47,3
							± 9,0	80,2 ± 7,0	268,0 ± 25,1
Кверцетин	Тимьян	38,2 ± 3,2	—	63,2 ± 5,3	—
		6 ± 7,4	—	17,5 ± 12,2	—
	Honeydew	—	—	—	—
				79,2 ± 24,1	57,9 ± 0,6
	Манука	9,3 ± 2,6	12,2 ± 2,0	16,2 ± 4,6	21,3 ± 3,5
8,6 ± 0,2	19,6 ± 3,1	15,0 ± 0,3
Хризин	Тимьян	53,0 ± 0,3	38,1 ± 0,4	104,3 ± 0,5	75,0	Манука	77,6 ± 0,8	72,1 ± 1,3	152,6 ± 1,7	141,9 ± 2,5
	Honeydew	46,4 ± 0,5	26,8 ± 0,6			26,8 ± 0,6

Количество каждого фенола варьировалось до десяти раз между тремя типами меда. Галловая кислота зафиксировала самую высокую концентрацию среди фенольных соединений во всех сортах меда, в общей сложности 1082,88 ± 16,25 мкг / 100 г экстрагированного свободным фенолом меда из пади, что становится низкой концентрацией мкМ в 5% (мас. / Об.) Растворе меда, используемом в более поздние пробы. Кверцетин зафиксировал самую низкую концентрацию среди всех фенольных соединений, он обнаруживается только в тимьяне, извлеченном из свободного фенола, и меде манука.Более высокое извлечение галловой кислоты и кофейной кислоты наблюдалось в большинстве общих экстрактов фенола, что было в отличие от всех других соединений, которые показали более высокое извлечение в экстрактах свободного фенола.

Влияние меда и его компонентов на миграцию и инвазию клеток рака простаты

Миграцию и инвазию тестировали в камерах Бойдена с добавлением матригеля для анализа инвазии. Для этих экспериментов использовалась только клеточная линия PC3, поскольку клеточная линия DU145 не является очень мигрирующей, и было обнаружено, что она не перемещается через камеру Бойдена.Тесты проводились с использованием ранее сообщенных самых высоких нетоксичных концентраций меда: 1% для 48-часового анализа миграции и 0,5% для 72-часового анализа вторжения (Abel & Baird, 2018).

1% меда тимьяна или пади вызвали небольшое, но значительное снижение миграции клеток PC3 по сравнению с контролем, обработанным носителем, на 20,59 ± 4,90% и 18,90 ± 1,62% соответственно (). Мед манука и смесь, содержащая только сахар, не вызывали какого-либо снижения миграции клеток, что позволяет предположить, что не связанные с сахаром соединения в меде могут быть ответственны за влияние на миграцию.

Влияние меда и фенольных соединений меда на миграцию и инвазию клеток PC3.

Клетки PC3 помещали в камеры Бойдена и обрабатывали 1% (мас. / Об.) Тимьяном, манукой, медвяной росой или смесью только сахара (A) или фенольным кверцетином (10 мкМ), галловой кислотой (10 мкМ), кемпферолом ( 150 мкМ), хризина (100 мкМ) или кофейной кислоты (50 мкМ) (B) в течение 48 часов для измерения миграции или в камерах Бойдена, содержащих матригель в течение 72 часов с 0,5% (мас. / Об.) Тимьяна, мануки, медвяной росы или сахара. только смесь (C) или фенольные кверцетин (10 мкМ), галловая кислота (10 мкМ), кемпферол (150 мкМ), хризин (100 мкМ) или кофейная кислота (50 мкМ) (D) в течение 72 часов для измерения инвазии.Эксперименты проводили в трех повторностях, и значения выражали как среднее значение миграции клеток ± стандартная ошибка среднего ( n = 2 или 3). Данные были проанализированы с использованием двустороннего критерия Стьюдента t . * ( p <0,05) представляет собой значительную разницу между индивидуальной обработкой и контролем клеток без обработки носителем 0,1% ДМСО для фенолов и только RPMI для меда.

Все исследованные нетоксичные концентрации фенольных соединений, за исключением кофейной кислоты, вызвали уменьшение миграции клеток PC3 ().Галловая кислота (10 мкМ) вызвала наибольшее снижение миграции на 49,10 ± 8,33% по сравнению с контролем, обработанным носителем (ДМСО). Вместе эти результаты продемонстрировали, что фенольные соединения, обнаруженные в меде, обладают антиметастатической активностью в отношении клеток PC3, однако не все соединения обладают аналогичной эффективностью.

При измерении инвазии, которая учитывает движение клеток PC3, а также способность перемещаться через матрикс Matrigel, 0,5% (мас. / Об.) Тимьяна, манука или меда пади вызвали значительное снижение по сравнению с контролем 50.53 ± 4,10%, 60,44 ± 9,71% и 75,32 ± 0,19% соответственно (). Смесь, содержащая только сахар, вызвала снижение инвазии клеток на 46,77 ± 17,01%, однако это не было статистически значимым. Эти изменения были намного значительнее, чем сокращение миграции, предполагая, что мед особенно снижает способность клеток перемещаться через матригель.

Инвазия была также снижена большинством фенольных соединений, с кверцетином (10 мкМ) и кофейной кислотой (50 мкМ), что привело к снижению на 45,28 ± 0,64% и 14.44 ± 1,17% соответственно (). Кроме того, хризин (100 мкМ) и галловая кислота (10 мкМ) снижали инвазию на 39,57 ± 14,57% и 29,03 ± 15,86% соответственно, однако они не были статистически значимыми. Наконец, кемпферол зафиксировал снижение инвазии только на 5,04 ± 2,11%. В целом снижение инвазии, вызванной фенольными соединениями, было сопоставимо с уменьшением миграции, за исключением кемпферола и кофейной кислоты.

Влияние меда и компонентов меда на адгезию клеток рака простаты

Мед тимьяна, манука и пади вызывал гораздо большее, зависящее от концентрации снижение адгезии клеток по сравнению с их влиянием на миграцию и инвазию как в клетках PC3, так и в клетках DU145 ( р <0.05) (). Это оценивали через 30 и 60 минут воздействия меда в клетках PC3 и через 60 и 90 минут в клетках DU145, которым требовалось больше времени для закрепления. Клетки DU145 были намного более чувствительны к действию меда, их адгезия к коллагену I почти полностью предотвращалась 2% (мас. / Об.) Медом, что снизилось до 8,98 ± 4,65% от контрольного, обработанного носителем меда из пади, через 60 мин. , тогда как для клеток PC3 требуется 5% (мас. / об.), достигая 8,93 ± 3,69% с падевым медом через 60 мин. В клетках PC3 смесь, содержащая только сахар, также была эффективна для снижения адгезии на 3% (мас. / Об.) (33.18 ± 25,05%) и 5% (мас. / Об.) (16,51 ± 4,68%) через 60 мин, но в клетках DU145 более низкие концентрации смеси, содержащей только сахар, фактически увеличивали адгезию (хотя и незначительно) до ее значительного снижения при 5% (мас. / Об.), До 21,88 ± 13,01% через 90 мин.

Влияние меда на адгезию клеток PC3 и DU145 к коллагену I.

(A, B) Клетки PC3 и (C, D) DU145 оставляли для прикрепления к пластинам, покрытым коллагеном I, на (A) 30, (B, C) 60 или (D) 90 мин. Эксперименты были выполнены в трех экземплярах, результаты выражены как средний процент от контроля ± S.E.M ( n = минимум 3). Индивидуальные данные были проанализированы с использованием двустороннего дисперсионного анализа с последующим апостериорным тестом Бонферрони, где p <0,05 требовалось для статистически значимой разницы. * представляет собой значительную разницу между контролем, обработанным носителем (только RPMI 0% масс. / об.), и индивидуальной обработкой.

Когда клетки прикреплялись к фибронектину, результаты были очень разными (). В клетках PC3, хотя мед снижает адгезию статистически значимым образом, эффект больше не является значительным и не зависит от концентрации.Смесь, содержащая только сахар, и мед дали аналогичные уровни снижения адгезии, при этом максимальное снижение было обнаружено через 60 минут с 4% (мас. / Об.) Медом манука при 67,15 ± 8,33%. В клетках DU145 эффекты также были намного меньше, чем с коллагеном I, хотя снижение было намного больше, чем с клетками PC3. Адгезия была снижена до 42,33 ± 1,05% за 90 мин на 3% (мас. / Об.) Падевого меда. Опять же, эффекты не зависели от концентрации. Однако с клетками DU145 изменения адгезии со смесью только сахара сильно отличались от того, что наблюдалось с клетками PC3.При большинстве концентраций было обнаружено увеличение адгезии до 190,97 ± 5,46% при 4% (мас. / Об.) Через 90 мин.

Влияние меда на адгезию клеток PC3 и DU145 к фибронектину. Клетки

(A, B) PC3 и (C, D) DU145 оставляли для прикрепления к планшетам, покрытым фибронектином, на (A) 30, (B, C) 60 или (D) 90 мин. Эксперименты проводили в трех повторностях, результаты выражали как средний процент контроля ± S.E.M ( n = 3). Индивидуальные данные были проанализированы с использованием двустороннего дисперсионного анализа с последующим апостериорным тестом Бонферрони, где p <0.05 требовалось для получения статистически значимой разницы. * представляет собой значительную разницу между контролем, обработанным носителем (только RPMI 0% масс. / об.), и индивидуальной обработкой.

Измерения адгезии обеих клеточных линий к коллагену I и фибронектину были использованы для определения того, были ли пять фенольных соединений, производных от меда, ответственны за потерю прикрепления клеток, наблюдаемую при введении меда (). Через 60 мин ни одно соединение не оказало никакого влияния на адгезию клеток PC3 или DU145 к фибронектину при любой концентрации.Только кверцетин и кемпферол (150 мкМ) вызвали какое-либо существенное изменение адгезии клеток к коллагену I. Кверцетин (150 мкМ) вызвал снижение адгезии клеток PC3 к коллагену I на 47,14 ± 10,27%. Кемпферол (150 мкМ) вызывал увеличение адгезии клеток PC3 и DU145 к коллагену I на 117,20 ± 11,10% и 104,10 ± 10,09% соответственно.

Влияние фенольных соединений меда на адгезию клеток PC3 и DU145.

Клетки PC3 и DU145 обрабатывали (A) кверцетином (0–150 мкМ), (B) галловой кислотой (0–10 мкМ), (C) кемпферолом (0–150 мкМ), (D) хризином (0– 50 мкМ) или (E) кофейная кислота (0–50 мкМ) в течение 60 мин.Эксперименты проводили в трех повторностях, и значения выражали как средний процент жизнеспособности клеток ± S.E.M ( n = 2 или 3). Данные были проанализированы с использованием двустороннего дисперсионного анализа с последующим апостериорным тестом Бонферрони, где p <0,05 требовалось для статистически значимой разницы. * представляет собой значительную разницу между контролем и индивидуальным лечением.

Обсуждение

Мы показали, что мед обладает антиметастатической активностью в двух линиях клеток рака простаты в ситуации in vitro , в которой их неметаболизированные формы контактируют с раковыми клетками.Мы также исследовали некоторые составляющие меда, включая основные сахара и пять основных фенольных соединений, и показали, что они также могут частично подавлять некоторые метастатические свойства. Цельный мед, а также сахар, в меньшей степени, могли предотвратить адгезию клеток к коллагену I, хотя фенольные соединения не были эффективны. Мед и кверцетин также сильно снижали инвазию, но влияние на миграцию было намного меньше.

Мы начали с измерения концентраций пяти фенольных соединений в цельном меде, выбранных из-за их обилия и заявленной биологической активности.Была разработана усовершенствованная система градиента ВЭЖХ, которая улучшила ранее описанные методики, используемые с медом (Yao et al., 2003), и позволила более чувствительное обнаружение и точный расчет концентраций фенолов. Например, кверцетин был обнаружен в тимьяне и меде манука, тогда как при использовании других методов его ранее не обнаруживали в тимьяновом меде (El-Hady & Shaker, 2013).

Фенольные соединения определяли как свободные, так и общие фенолы. Образцы свободного фенольного экстракта содержали несвязанные фенольные соединения (агликоны) в меде, которые легко экстрагировались этилацетатом.Образцы общего фенольного экстракта содержали как фенольные агликоны, так и связанные фенольные гликозиды, которые требовали гидролиза гликозидных сложноэфирных связей для высвобождения фенольных агликонов перед их экстракцией в органический растворитель (Wahdan, 1998).

Более высокое извлечение галловой кислоты и кофейной кислоты наблюдалось в общем феноле, чем в экстрактах свободного фенола, что было в отличие от флавоноидных соединений, которые показали более высокое извлечение в экстрактах свободного фенола. Объяснение этому может заключаться в том, что флавоноиды в меде существуют в основном в виде агликонов и были полностью обнаружены в образцах свободного фенола, однако две фенольные кислоты, кофейная кислота и галловая кислота, существуют преимущественно в виде гликозидов из пыльцы и, следовательно, могут потребовать гидролиза (в том виде, в котором они используются. для «полных» образцов) (Ferreres et al., 1991). Единственным исключением была галловая кислота в меде манука, большее количество которой было обнаружено в экстрактах свободного фенола. Это можно объяснить тем фактом, что мед манука, как сообщается, имеет высокую концентрацию глюкозооксидазы, которая может производить перекись водорода (White & Doner, 1980), а радикалы, включая перекись водорода, способны гидролизовать гликозидные связи между фенольными соединениями и сахарами. (Brudzynski et al., 2011; Hussein et al., 2011). Как мы обнаружили здесь, галловая кислота ранее описывалась как преобладающая фенольная кислота как в австралийском, так и в новозеландском меде (Yao et al., 2003; Yao et al., 2004).

Влияние цельного меда и фенольных соединений на миграцию клеток в камерах Бойдена было ограниченным, но значительным. Эффект был обнаружен как для тимьяна, так и для меда из пади, но снижение было не таким значительным, как у кемпферола и хризина, до 50%. Смесь только сахара, мед манука и другие фенольные соединения не повлияли на миграцию. Напротив, Ho et al. (2010) сообщили, что галловая кислота (3,5 мкМ) может ингибировать миграцию клеток AGS рака желудка на 60% в камерах Бойдена, но это было измерено только через 6 часов миграции после 48 часов воздействия галловой кислоты в других лунках, что весьма существенно. установка отличается от используемой здесь.

Интересно, что влияние меда на вторжение, движение через Матригель, а также камеру Бойдена, было гораздо более выраженным, при этом падевый мед имел наибольший эффект в снижении вторжения примерно на 75%, но все меды имели большую значительную эффект. Из фенольных соединений только кверцетин и кофейная кислота показали статистически значимое снижение, но также была тенденция к снижению для хризина, галловой кислоты и смеси, содержащей только сахар.

Это демонстрирует, что мед может ингибировать процесс инвазии сильнее, чем процесс миграции, и предполагает, что основная точка ингибирования, вероятно, является частью пути, который более важен для инвазии, чем для миграции.Хотя мы не исследовали это здесь, механизм действия может быть через ингибирование ММП, которые входят в число протеаз, экспрессируемых на переднем крае метастазирующих клеток, где они способствуют разрушению внеклеточного матрикса (Friedl & Wolf, 2003). . Ho et al. (2010) показали, что галловая кислота может снижать желатинолитическую активность MMP-2 и MMP-9, возможно, через NF-κB. Было показано, что мед может снижать экспрессию и ядерную транслокацию NF-κB как in vivo , так и in vitro (Batumalaie et al., 2013; Hussein et al., 2013), хотя также было показано, что мед не ингибирует активность NF-κB в клетках глиобластомы U87MG (Moskwa et al., 2014). Однако Moskwa et al. (2014) действительно показали, что мед может снижать ферментативную активность MMP-2 и MMP-9. Пихтовый мед также ингибировал миграцию кератиноцитов человека за счет снижения экспрессии MMP-9 (Majtan et al., 2013). Ли и др. (2004) продемонстрировали, что 20 мкМ кверцетина или лютеолина могут ингибировать секрецию ММП в клеточной линии MIA PaCa-2. Также сообщалось, что кверцетин (50–100 мкМ) подавляет экспрессию как MMP-2, так и -9 в клетках PC3 (Vijayababu et al., 2006).

Ранее было показано, что фенольные соединения влияют на другие части процесса миграции клеток, включая как GTPases семейства Rho, так и экспрессию интегрина, хотя это не было продемонстрировано в раковых клетках. Например, галловая кислота (25–100 мкМ) ингибирует экспрессию и активность белка RhoA в фибробластах, образованных из рубца, после стимуляции TGFβ (Hsieh et al., 2016). В фибробластах L929 после обработки 20 мкМ кверцетина в течение 24 часов, интегрин α _V был повышен на 18%, а интегрин β1 был аналогичным образом подавлен (Doersch & Newell-Rogers, 2017).Некоторые из этих концентраций были намного выше, чем те, которые использовались в нашем исследовании, однако, возможно, имелся кумулятивный эффект комбинации более низких концентраций многих фенольных соединений.

Еще одна необходимая особенность процессов миграции и инвазии — адгезия к внеклеточному матриксу. Впервые было показано, что за короткий промежуток времени 30–90 мин анализа адгезии с использованием коллагена I мед вызывал потерю клеточной адгезии более чем на 90% в обеих клеточных линиях, хотя клеточная линия DU145 была более чувствительной. .Составляющие сахара в меде, по-видимому, играют роль в потере адгезии, но не обеспечивают полного эффекта. Когда вместо коллагена I использовали фибронектин, снижение адгезии в клетках PC3 значительно снижалось. В клетках DU145 все еще было обнаружено снижение адгезии до 50%, но смесь, содержащая только сахар, увеличивала, а не снижала адгезию, что позволяет предположить, что механизм действия сахаров очень сильно зависит от белкового субстрата. Различия в изменениях адгезии между двумя типами клеток могут быть связаны с экспрессией ими интегринов.Было показано, что клетки DU145 высоко экспрессируют α _v и интегринов β1, которые предпочтительно связываются с фибронектином, и могут уменьшать миграцию и приводить к менее инвазивному фенотипу по сравнению с клетками PC3 (Ruoslahti & Giancotti, 1989; Witkowski et al. , 1993). Повышенная инвазивность клеток PC3 по сравнению с клетками DU145 вместо этого объясняется экспрессией интегринов α, 6 и β1, которые лучше связываются с коллагеном и ламинином (Witkowski et al., 1993; Suyin, Holloway & Dickinson, 2013).Коллагены, включая коллаген I, откладываются в опухолях с большей скоростью, часто линеаризованным образом, что увеличивает жесткость стромы и способствует миграции раковых клеток (Zhu et al., 1995; Egeblad, Rasch & Weaver, 2010). Таким образом, возможность уменьшения адгезии клеток предстательной железы к коллагену, если переводится in vivo , будет иметь потенциальную терапевтическую пользу.

Напротив, фенольные соединения, по-видимому, не играют роли в снижении адгезии клеток рака простаты.Самая высокая концентрация кверцетина (150 мкМ) только снижает адгезию клеток PC3, прикрепляющихся к коллагену I, а 150 мкМ кемпферол увеличивает адгезию обеих линий клеток к коллагену I. Кверцетин может влиять на адгезию через рецептор эпидермального фактора роста, который опосредует клетки DU145. адгезия к коллагену I (Lamb, Zarif & Miranti, 2011) и может подавляться кверцетином (Kumar et al., 2008; Bhat et al., 2014). Мы отмечаем, что для наблюдения биологической активности в наших анализах с этими соединениями требовались гораздо более высокие (мкМ) концентрации фенольных соединений, чем в меде, и поэтому маловероятно, что какие-либо эффекты будут вызваны одним фенольным соединением.

Отсутствие влияния фенольных соединений на адгезию клеток рака простаты было неожиданным, учитывая роль этих соединений в процессе адгезии в других типах клеток. Может быть некоторая специфичность клеточного типа или подтипа интегрина. Например, было показано, что хризин (3 мкМ и 10 мкМ) ингибирует индуцированную коллагеном агрегацию тромбоцитов за счет снижения передачи сигналов P-селектина и интегрина α IIb β3 (Liu et al., 2016) и кофейной кислоты в концентрации до 100 мкМ. мкМ также может снижать агрегацию тромбоцитов с помощью тех же двух механизмов (Lu et al., 2015). Кофейная кислота в концентрации 1–20 мкМ также снижает адгезию моноцитов к эндотелиальным клеткам пупочной вены человека посредством подавления шести различных молекул адгезии и интегринов (Lee et al., 2012).

Часто считается, что фенольные соединения ответственны за биологическую активность многих натуральных продуктов, включая мед. Поскольку мед содержит несколько полифенолов, представляет интерес эффект комбинированного лечения in vivo и in vitro . Мы обнаружили, что фенольные соединения присутствовали в меде в диапазоне нМ (), однако при индивидуальном использовании in vitro в диапазоне мкМ они продемонстрировали минимальные антиметастатические свойства.Это говорит о том, что польза от меда может быть связана с комбинацией многих соединений, а не с отдельными действиями.

Об ингибировании адгезии раковых клеток цельным медом ранее не сообщалось. Мэддокс и др. (2013) сообщили, что мед манука (16–50% масс. / Об.) Может ингибировать адгезию 8 штаммов бактерий к фибронектину, фибриногену и коллагену. Считалось, что это связано с уменьшением количества связывающих фибронектин белков, а также с ингибированием образования биопленок (Maddocks et al., 2013; Maddocks et al., 2012). При метастазировании клетка должна иметь возможность регулировать свое прикрепление к окружающей среде, чтобы двигаться вперед. Из-за того, что лечение медом вызывает нарушение этого процесса, метастазы не могут развиваться (Bendas & Borsig, 2012).

Мы также сделали новое открытие, что сахарные компоненты меда, а также фенольные соединения играют роль в его ингибировании in vitro адгезии, миграции и инвазии рака. Сахара могут действовать в организме как антиоксиданты, подобно тому, как это описано для полифенолов.Было показано, что однократное пероральное введение меда (1,5 г / кг) людям увеличивает общий фенольный, антиоксидантный и снижает емкость плазмы. Контрольный препарат, содержащий только сахар, кукурузный сироп, не увеличивал общие уровни фенолов в плазме, однако он действительно значительно увеличивал антиоксидантную способность плазмы (Schramm et al., 2003), скорее всего, за счет образования продуктов Майяра или действуя как редуцирующие сахара. (Уайт и Донер, 1980; Майярд, 1912). Это говорит о том, что активность меда обусловлена ​​присутствием как фенольных соединений, так и сахаров, и может повысить его общую биологическую активность по сравнению с другими природными источниками фенола, не содержащими сахара.

При простатите полезно есть мед и пыльцу | Линда Гейтс

Простатит составляет значительную часть мужских заболеваний в клинике. В дополнение к лекарствам врачи часто советуют пациентам вести фантастический образ жизни, например, не употреблять раздражающую пищу, избегать малоподвижного образа жизни или, может быть, больше физических упражнений, достаточно спать всю ночь. сбалансированная диета, например, яблоки, помидоры, пыльца, мед и т. д. Но действуют ли пыльца и мед? Ниже приводится более короткое введение:

Пыльца играет решающую роль в профилактике и лечении заболеваний предстательной железы.Механизм использования пыльцы при заболеваниях простаты неясен. Это может быть связано с фармакологическим действием эстрогенов и антиандрогенов и может регулировать гладкие мышцы мочевого пузыря и уретры.

Кроме того, пыльца богата функциональными веществами (включая белки, аминокислоты, витамины, микроэлементы, основные элементы, ферменты и коферменты, флавоноиды, фитоантибиотики и т. Д.). Эти вещества действуют синергетически на человеческий организм, способствуют метаболизму, регулируют различные функции, балансируют питание организма, предотвращают и излечивают закупорку, вызванную проницаемостью капилляров тела (включая простату).

Исследования показывают, что пчелиная пыльца может регулировать функции органов, усиливать обмен веществ, повышать жизнеспособность организма, укреплять иммунную функцию простаты и способствовать местной эндокринной функции. Было обнаружено, что прием пыльцы может увеличить количество и функцию Т-лимфоцитов и макрофагов, а также повысить иммунную способность организма.

Некоторые эксперты считают, что пчелиная пыльца может уменьшить воспаление и отек, улучшая кровообращение ткани простаты, а также уменьшая различные симптомы, вызванные воспалением и гиперплазией простаты.Кроме того, пыльца также содержит много флавоноидов. В настоящее время некоторые ученые обнаружили, что изофлавоны сои могут значительно подавлять воспаление и разрастание простаты у крыс.

Мед содержит различные аминокислоты, ферменты, витамины и микроэлементы, которые могут регулировать эндокринную функцию человека и эндокринную функцию простаты, улучшать и способствовать метаболизму простаты. Добавьте 10 раз прохладной кипяченой воды к 102 мл меда, принимайте дважды в день. Если он у вас в течение длительного времени, он может оказать очевидное влияние на профилактику и лечение заболеваний предстательной железы.

Употребление меда и пыльцы может помочь предотвратить и вылечить заболевание простаты. Но важно отметить, что диабетикам не следует переоценивать мед.

Простатит может быть сложным синдромом, включающим сложный патогенез, неизвестный патогенез, а также ряд клинических симптомов. Вам следует искать подходящее лекарство, помимо пыльцы и меда. Запатентованное лекарственное средство на травах, называемое мочегонными и противовоспалительными таблетками, доказало свою эффективность при лечении хронического простатита.Он может работать глубоко внутри простаты, убивая инфекции и жар в теле; он может способствовать циркуляции крови и ци, устранять закупорки и растворять застой, повышать иммунитет и усиливать способность к самовосстановлению; он включает в себя разное количество китайских активных трав, которые действительно работают вместе, обеспечивая эффективность. Он лечит не только хронический простатит по симптомам, но и по его первопричинам.

Пациентам с простатитом следует употреблять мед и пыльцу

Пациентам с простатитом необходимо принимать мед и пыльцу
На лучшее лечение простатита в клинике приходится значительная часть мужских заболеваний.В дополнение к лекарствам врачи часто рекомендуют пациентам вести хороший образ жизни, например, избегать раздражающей пищи, избегать малоподвижного образа жизни или больше заниматься физическими упражнениями, достаточно спать и иметь здоровую пищу, такую ​​как яблоки, помидоры, пыльца, мед и т. Д. Но пыльца и мед работают. • Ниже приводится краткое введение:
Пыльца играет важную роль в профилактике и лечении заболеваний предстательной железы. Механизм лечения пыльцой при заболеваниях простаты не ясен. Это может быть связано с фармакологическим действием эстрогенов и антиандрогенов и может регулировать гладкие мышцы мочевого пузыря и уретры.
Кроме того, пыльца богата функциональными веществами (включая белки, аминокислоты, витамины, микроэлементы, основные элементы, ферменты и коферменты, флавоноиды, фитоантибиотики и т. Д.). Эти вещества синергетически действуют на организм, способствуют обмену веществ, регулируют различные функции, балансируют питание организма, предотвращают и лечат нарушение проницаемости капилляров всего тела (включая простату).
Исследования показывают, что пчелиная пыльца может регулировать функцию органов, усиливать обмен веществ, повышать жизнеспособность организма, укреплять иммунную функцию простаты и улучшать местную эндокринную функцию.Также было обнаружено, что прием пыльцы может увеличить количество и функцию Т-лимфоцитов и макрофагов, а также улучшить иммунную способность организма.
Некоторые эксперты считают, что пчелиная пыльца может уменьшить воспаление и отек за счет улучшения кровообращения в ткани простаты и облегчения различных симптомов, вызванных воспалением и гиперплазией простаты. Кроме того, пыльца также содержит большое количество флавоноидов. В настоящее время некоторые ученые обнаружили, что изофлавоны сои могут значительно подавлять воспаление и разрастание простаты у крыс.
Мед содержит множество аминокислот, ферментов, витаминов и микроэлементов, которые могут регулировать мужскую эндокринную функцию и эндокринную функцию простаты, улучшать и способствовать метаболизму простаты. Добавить 10 раз прохладной кипяченой воды к 102 мл меда, принимать дважды в день. Если он у вас в течение длительного времени, он может оказать очевидное влияние на профилактику и лечение заболеваний предстательной железы.
Употребление меда и пыльцы может помочь предотвратить и вылечить заболевание простаты. Но важно отметить, что диабетикам не следует переоценивать мед.
Лучшее лечение хронического простатита — это сложный синдром, состоящий из сложного патогенеза, неизвестного патогенеза и множества клинических симптомов. Вам следует искать подходящие лекарства, кроме пыльцы и меда. Запатентованное лекарственное средство на травах, называемое мочегонными и противовоспалительными таблетками, доказало свою эффективность при лечении хронического простатита. Он может работать глубоко в простате, убивая инфекции и жар в теле; он может способствовать циркуляции крови и ци, очищать закупорки и растворять застой, повышать иммунитет и усиливать способность к самовосстановлению; он содержит разное количество китайских активных трав, которые вместе обеспечивают эффективность.Он лечит хронический простатит не только от симптомов, но и от первопричин. Более подробную информацию о диуретических и противовоспалительных таблетках можно найти на официальном сайте: http://www.diureticspill.com/

Влияние корицы на пациентов с хроническим простатитом / синдромом хронической тазовой боли; пилотное исследование — Просмотр полного текста

Хронический простатит / синдром хронической тазовой боли (ХП / СХТБ), тем не менее, является одной из распространенных урологических проблем; его этиология и патофизиология плохо изучены, нет четких рекомендаций по эффективному лечению.Несколько исследователей сообщили о полезных свойствах корицы, ее производных и компонентов для здоровья. Это исследование призвано показать возможные преимущества корицы для пациентов с хроническим простатитом / синдромом хронической тазовой боли (ХП / СХТБ)

Хронический простатит / синдром хронической тазовой боли (ХП / ХТББ), определяемый Национальным институтом здравоохранения (NIH) как «наличие боли в мочеполовой системе в отсутствие уропатогенных бактерий, обнаруженных с помощью стандартной микробиологической методологии» (1) Наличие симптомов, напоминающих показатели CP / CPPS в различных популяциях находятся в диапазоне от 2.2% и 9,7% при средней распространенности 8,2%. тем не менее, что делает CP / CPPS одной из распространенных урологических проблем; его этиология и патофизиология плохо изучены, нет четких рекомендаций по эффективному лечению (2, 3). Длительный период антибактериальной терапии обычно используется в качестве первой линии в лечении ХП / СХТБ, независимо от обнаружения жидкости предстательной железы под микроскопом. обследование и посев, когда это не удалось, следующий вариант лечения, который был опробован и исследован, включает лекарства, такие как альфа-блокаторы, противовоспалительные препараты, миорелаксанты, противосудорожные препараты или даже гормональные манипуляции, а также физиотерапию, поведенческую терапию, травяные или даже хирургические вмешательства все были опробованы без убедительных доказательств, подтверждающих превосходство одного варианта лечения над другими для всех пациентов, что делает желательными дальнейшее изучение и анализ для лучшего понимания эффективности таких вариантов или даже испытания различных вариантов лечения в надежда найти эффективное лечение.(4) Сандал (lignum Santali Albi), жасмин и корица — ароматические травы, которые традиционно используются для регулирования ци, удаления застоя крови и снятия боли. (5) Предыдущие исследования показали, что корица обладает антибактериальным действием. (6) Корица — это кора деревьев, принадлежащих к роду Cinnamomum. (7) Корица имеет хорошо известный узнаваемый запах из-за содержания в ней масла, которое имеет высокую концентрацию соединения коричного альдегида в дополнение к нескольким другим соединениям, таким как циннамилацетат, L-борнеол, оксид кариофиллена, эвгенол, b-кариофиллен, L- борнилацетат, Е-неролидол, α-терпинеол, α-кубебен, терпинолен и α-туген.Кроме того, корица содержит множество смолистых соединений, в том числе корицу, коричную кислоту. (8-10) Корица долгое время использовалась на кухне в качестве приправы и закуски, о серьезных побочных эффектах не сообщалось. Несколько исследователей сообщили о полезных для здоровья свойствах корицы, ее производных и компонентов: к ним относятся ее противомикробное, противовоспалительное, антиоксидантное, антидиабетическое и даже противоопухолевое действие; Дальнейшие исследования все еще необходимы, чтобы выявить потенциальную пользу для здоровья от специй.(11) Индекс симптомов хронического простатита Национального института здравоохранения (NIH-CPSI) был разработан в качестве инструмента для оценки тяжести симптомов СХТБ. (12) Снижение баллов по шкале NIH-CPSI на шесть или более баллов считается клинически ощутимой разницей для пациентов, что подтверждается предыдущими исследованиями. (13)

Манука Мед и мочевой пузырь

Исследования изучают возможности Манука Меда для лечения ИМП и IC

Мед является натуральным подсластителем для пищевых продуктов, а также для других популярных применений, таких как успокаивающее средство от боли в горле, кашля и ожогов.Тем не менее, недавние исследования в Великобритании показали, что мед манука может иметь терапевтические преимущества, особенно для мочевого пузыря. (1) (2) Мед манука производят пчелы, которые опыляют куст манука в Новой Зеландии. (3)

В конце 1800-х годов исследователи впервые обнаружили антибактериальные свойства меда. С тех пор новые исследования подтвердили, что мед манука может убивать и / или ограничивать рост множества патогенов, бактериальных биопленок и, что наиболее важно, подавлять развитие лекарственно-устойчивых инфекций.Было обнаружено, что мед манука оказывает синергетический эффект при использовании в сочетании с системным антибиотиком при местном нанесении на раны. (4)

В прошлом году исследователи из Великобритании также обнаружили, что разбавленный мед манука может остановить некоторые бактерии от образования биопленок на твердых пластиковых поверхностях, что повышает вероятность того, что его можно использовать для подавления инфекций из мочевых катетеров. Может ли промывание катетера медом предотвратить катетерную инфекцию мочевыводящих путей (ОСТОРОЖНО)? Необходимы дополнительные исследования, чтобы определить влияние меда на сам мочевой пузырь, но это открывает новые возможности для лечения.(1)

Одна исследовательская группа также исследовала использование меда манука для лечения кишечной палочки. Еще в 2011 году группа исследователей из Великобритании обнаружила, что мед, который также продается под такими названиями, как Medihoney и Comvita, работал как антигистаминный препарат и уменьшал повреждение клеток в мочевом пузыре крыс. Антигистаминные и противовоспалительные средства работают рука об руку, поэтому уменьшение содержания гистамина в мочевом пузыре означает уменьшение воспаления, что означает уменьшение симптомов. Теория интересная, но необходимы дополнительные исследования, чтобы определить, можно ли безопасно ввести ее в мочевой пузырь.Также необходимы исследования для выделения активного ингредиента, ответственного за антигистаминные свойства в меде манука, чтобы затем можно было разработать лучшее лекарство для мочевого пузыря IC. (2)

И все это заставляет пациентов сомневаться, может ли помочь употребление меда Манука. Мед, безусловно, считается дружественным к IC при потреблении в небольших количествах. Пациенты с интерстициальным циститом поделились разнообразным опытом после употребления меда в целом. Согласно обсуждению на форуме поддержки ICN, большинство из них переносят это довольно хорошо.

Член ICN Джейн написала : «У нас пчелиные ульи, и я ела много меда год назад, когда мне было хуже всего, и меня это никогда не беспокоило. На самом деле, я думал, что это помогло мне вылечиться. Я до сих пор ем наш мед часто и без проблем ». Донна, диабетик, предложила «Я ела мед всю свою жизнь, и на самом деле это одна из моих безопасных вещей — ставить тосты — а я диабетик! Мне просто нужно смотреть, сколько сахара я проглатываю. Я бы никогда никого не отговорил от еды ».

Однако два пациента поделились, что действительно реагировали на мед.Джейд обратилась к меду, когда ей было 19 лет, потому что она думала, что его целебные свойства могут помочь ее мочевому пузырю. Несмотря на то, что она была довольно худой, у нее был диагностирован диабет 2-го типа, и со временем ее боль в IC значительно усилилась. Она написала : «Я ела тонны меда за последние 6 месяцев, и боль не прекращалась». Пару дней обходясь без меда, она заметила, что ее боль уменьшилась. Она считает, что мед постепенно раздражал ее мочевой пузырь, и теперь призывает пациентов быть осторожными.

Другой член ICN, pmlov, поделился, что мед также сработал у нее IC. Хотя реакции на мед редки, у некоторых пациентов может быть редкая аллергия или чувствительность к компонентам меда или, возможно, даже к типу меда, который они потребляли.

До сих пор ведутся серьезные дискуссии и споры об использовании меда манука при приеме внутрь, но по крайней мере одно крупное исследование показало, что он не поддерживает антибиотический эффект. (5) Тем не менее, вы найдете восторженные отзывы о меде и, в частности, о мануке мед во многих онлайн-дискуссиях о здоровье.Исследователям просто нужно выяснить, как наилучшим образом использовать его и его свойства, чтобы помочь пациентам с интерстициальным циститом. И пациенты, конечно, должны прислушиваться к своему телу, чтобы определить, улучшает ли оно их симптомы IC.

Артикул:

1. Emineke S., et al. Разбавленный мед ингибирует образование биопленки: возможное применение при управлении мочевым катетером ?. J Clin Pathol Февраль 2017 г. Том 70, выпуск 2, страницы 140-144.
2. Аллен П. При лечении интерстициального цистита может помочь компонент в меде.Urology Times, 1 ноября 2011 г.
3. Википедия, бесплатная энциклопедия. Манука мед.
4. Carter et al. Лечебный мед манука: больше нет альтернативы. Front Microbiol. 2016; 7: 569. (ОТЛИЧНАЯ СТАТЬЯ !!!)
5. Rosendale D. et al. Потребление антимикробного меда манука не оказывает значительного воздействия на микробиоту в заднем кишечнике мышей. Peer J, 2016 Том 4, Опубликовано онлайн, 2016 20 декабря.

5 шагов к улучшению здоровья простаты

Как только мужчины сталкиваются с какими-либо проблемами со здоровьем простаты, будь то рак простаты, увеличенная простата из-за доброкачественной гиперплазии простаты (ДГПЖ) или простатит, они немедленно хотят знать, что они могут сделать.Хотя лучший план — предотвратить проблемы с простатой с помощью здорового образа жизни, хорошая новость заключается в том, что на самом деле существует множество естественных способов, с помощью которых мужчина может улучшить здоровье простаты, даже если у него уже есть симптомы или диагноз проблемы.

Совершенно очевидно, что образ жизни, физические упражнения и диета мужчины имеют огромное влияние на его здоровье простаты. Хорошие привычки могут помочь предотвратить и снизить факторы риска заболеваний и состояний простаты, так же как и других частей тела.Если мужчина уже испытывает проблемы с предстательной железой, эти естественные изменения могут помочь предотвратить ухудшение состояния, облегчить симптомы и даже вылечить их.

В случае хронического простатита / синдрома хронической тазовой боли, который представляет собой трудно поддающееся лечению и часто болезненное воспалительное состояние, традиционные методы лечения, такие как антибиотики, не работают. Часто изменение диеты и образа жизни и попытки альтернативных и естественных методов лечения, таких как методы снятия стресса, являются единственным успешным подходом к облегчению симптомов.

Пить чай

И зеленый чай, и чай из гибискуса являются одними из лучших напитков для здоровья простаты. Оба вида чая содержат сильнодействующие антиоксиданты. Исследования показывают, что зеленый чай может помочь предотвратить образование рака простаты, а также замедлить рост агрессивного рака простаты. Исследования показывают, что зеленый чай также полезен мужчинам с аденомой простаты и простатитом.

Тем не менее, важно выбирать источники чая без кофеина. Кофеин может вызвать раздражение как простаты, так и мочевого пузыря.Исследование показало, что мужчины, которые потребляли 234 мг или более кофеина каждый день, на 72 процента чаще страдали недержанием мочи по сравнению с мужчинами, которые употребляли наименьшее количество кофеина. Если у вас есть симптомы мочеиспускания или боли из-за простатита, кофеин может усугубить эти симптомы. Если у вас аденома простаты или простатит, постарайтесь снизить потребление кофеина, сократив потребление кофе, газированных или энергетических напитков. Отказ от кофеина может сильно повлиять на здоровье мочевыводящих путей.

Еще один важный напиток для предстательной железы — это вода.Сохраняйте водный баланс и не пытайтесь пить меньше, чтобы уменьшить количество мочи.

Тренируйтесь и худейте

Физические упражнения и похудение — одни из лучших способов улучшить здоровье простаты. Многие исследования показывают, что умеренные или энергичные упражнения снижают риск ДГПЖ и симптомов мочевыводящих путей, а также помогают при простатите. Физические упражнения также полезны для сердечно-сосудистой системы и могут помочь предотвратить другие проблемы со здоровьем и сексуальные отношения, такие как эректильная дисфункция.

Если у вас избыточный вес, потеря веса является одним из наиболее важных естественных изменений, которые вы можете внести в улучшение здоровья простаты, независимо от того, что вас беспокоит — рак, аденома простаты или простатит.Исследование, опубликованное в Журнале урологии, показало, что мужчины с избыточным весом, особенно мужчины с большим количеством абдоминального жира, имеют повышенный риск ДГПЖ. Если вы хотите уменьшить простату, похудение может помочь вам уменьшить размер простаты и облегчить раздражающие и неприятные симптомы мочеиспускания. Кроме того, потеря веса может снизить риск рака простаты и помочь облегчить простатит.

Соблюдайте диету, благоприятную для простаты

Есть много полезных для простаты продуктов, которые могут помочь предотвратить рак и замедлить рост клеток простаты и раковых клеток.Некоторые из лучших продуктов для здоровья простаты включают жирную рыбу с высоким содержанием омега-3 жирных кислот, овощи и продукты с высоким содержанием полезных жиров, такие как авокадо, орехи и оливки. Продукты, которые помогают бороться с раком простаты, включают азиатские грибы, помидоры, гранатовый сок и грецкие орехи.

В тех регионах мира, где у мужчин меньше заболеваемости раком простаты, у всех есть что-то общее: элементы их рациона. Они едят рыбу и растительные источники белка. Они не едят много сахара или полуфабрикатов, которые так легко найти в американской диете.Лучшая диета для здоровья простаты — это диета с низким содержанием сахара, обработанных пищевых продуктов и насыщенных жиров. Средиземноморская диета — одна из тех, на которую стоит обратить внимание, потому что это также образ жизни и здоровый образ жизни, которому вы можете следовать всю оставшуюся жизнь.

Принимать добавки

Иногда невозможно получить все это с помощью диеты и в постоянных терапевтических количествах. Кроме того, вы можете знать, что что-то полезно для вас, но это просто не согласуется с вами, или вы просто не можете есть это регулярно.Вот почему многие мужчины, которые хотят значительно улучшить здоровье простаты, принимают ежедневные добавки. Множество различных натуральных добавок могут помочь улучшить здоровье простаты.

Снижение стресса

Стресс отрицательно влияет на здоровье простаты. Фактически, некоторые мужчины неосознанно напрягают мышцы таза при стрессе. Это хроническое сжатие может вызвать проблемы с мышцами тазового дна и может быть одной из причин хронического простатита.

Стресс также может влиять на мужчин с аденомой простаты.Стресс может ухудшить такие симптомы, как позывы к мочеиспусканию, частое мочеиспускание и боль.

Проблемы с простатой могут также усилить стресс и беспокойство, что может ухудшить ваше состояние, поскольку стресс снижает способность иммунной системы бороться с болезнью. Вот почему так важно контролировать уровень стресса, снимать напряжение и заботиться о своем эмоциональном здоровье. Методы, которые, возможно, стоит изучить, включают терапию, медитацию, глубокое дыхание или такие действия, как упражнения, йога или тай-чи.Не изолируйте себя, когда дело касается здоровья простаты. Важно поддерживать социальные отношения и иметь кого-то, с кем вы можете поговорить с вами о вашем разочаровании, страхах и боли.

Внесение изменений

Следование этим пяти естественным принципам для лучшего управления здоровьем простаты может иметь большое влияние на ваше здоровье. Они не стоят больших денег, и их можно начать делать уже сегодня. Для улучшения здоровья не нужно получать рецепт.

Как только вы поймете, что улучшение здоровья простаты зависит от вашей диеты, веса и образа жизни, вы сможете начать жить с целью улучшения здоровья простаты. Это поможет улучшить ваше психическое здоровье, а также принесет пользу вашему здоровью в целом. Некоторые вещи находятся вне вашего контроля, но вы можете контролировать факторы, снижающие риск, и дать своему организму лучшие инструменты для борьбы с болезнями.

–Крэйг Купер

Источник: personalliberty.com

.