| Кат. № | Название набора/ Объем рабочего раствора |
| 10501 99 10 921 | a-Амилаза (AMS CC FS)/ 4х120опр |
| 12701 99 10 920 | Аланинаминотрансфераза (ALT UV FS) /4х200опр. |
| 12601 99 10 920 | Аспартатаминотрансфераза (AST UV FS) /4х200опр. |
| 12801 99 10 920 | Гамма-глютамилтрансфераза (Gamma-GT FS) /4х200опр. |
| 11601 99 10 921 | Креатинкиназа (CK-NAC FS) /4х120опр |
| 11641 99 10 921 | Креатинкиназа MB (CK-MB FS) /4х120опр |
| 14211 99 10 920 | Лактатдегидрогеназа (LDH UV FS) /4х200опр. |
| 10441 99 10 920 | Щелочная фосфатаза (ALP FS) /4х200опр. |
| 11300 99 10 923 | Холестерин (CHOL FS) /4х200опр. |
| 15710 99 10 923 | Триглицериды (TG FS) /4х200опр. |
| 10220 99 10 923 | Альбумин (ALBU FS) /4х200опр. |
| 12500 99 10 923 | Глюкоза (GLU GOD FS fast) /4х200опр. |
| 13101 99 10 920 | Мочевина (UREA FS) /4х200опр. |
| 13001 99 10 920 | Мочевая кислота (URIC ASID FS TOOS) /4х200опр. |
| Общий белок (TP FS) /4х200опр. | |
| 10821 99 10 920 | Билирубин прямой (BIL Auto Direct FS) /4х200опр. |
| 10811 99 10 920 | Билирубин общий (BIL Auto Total FS) /4х200опр. |
| 11711 99 10 920 | Креатинин (CREAT FS) /4х200опр. |
| 11911 99 10 921 | Железо (Iron FS) /4х120опр. |
| 11181 99 10 920 | Кальций (Ca AS FS) /4х200опр. |
| Магний (Mg XL FS) /4х120опр. | |
| 15211 99 10 920 | Фосфор (Phosphate FS) /4х200опр. |
| 1 48080 99 10 921 | Натрий FC /400опр. |
| 3 1711 99 10 920 | Калий FC /4х100опр. |
плюсы и минусы Land Rover Freelander
Водительский стаж — больше 20 лет, в километрах — не меньше.Всегда с момента появления на рынке нравился именно Фрилендер 2, хотя я искренне и не понимал зачем кросовер в городе — чудеса проходимости демонстрировать негде, обслуживание — дороже, салон меньше, чем у универсала за те же деньги.В какой то момент жизнь изменилась так, что понадобилась машина для трассы.
Виделось примерно так — салон чем больше, тем лучше, мощный двигатель, удобное сидение и ОБЯЗАТЕЛЬНО! круиз контроль. По сумме идеалом показался шевроле тахо. Пока копили на него деньги грянул 2014 год, было решено взять на что хватает денег сейчас. И совершенно неожиданно попался Фрил 2008 года с заявленным пробегом 56 тыс.км. один хозяин, состояние «муха не сидела». Решил — раз всегда машина нравилась — судьба и не смотря на некоторые недостатки, естественные в таком возрасте Фрил был куплен.По неисправностям на момент покупки — не работала вебаста, чуть гудел задний дифференциал. Благодаря профильным форумам были понятны суммы ремонта и с учетом цены/состояния не пугали.Про надежность — управляемость. Если не пытаться гонять — машина просто идеальна! Несколько не хватает тормозов при езде «в две педали» нашел решение этой проблемы — поставить передние тормоза от вольво xc 70, но установка резины А/Т превратила автомобиль в абсолютно сбалансированный, желание что-то корячить пропало.Волей судьбы доверие к машине возникло через 20 минут после регистрации в гаи. Молодого не очень умного, зато шустрого водителя на 08 закрутило передо мной и пришлось уходить на газон. На скорости 80 я запрыгнул на поребрик с сугробом, правые колеса ехали по сугробу, левые по асфальту и при этом машина не потеряла управляемость дав выйти из ситуации с минимальным ущербом а из повреждений подвески — только разбортированное заднее правое колесо. (Сам знаю на такой скорости прыгать на поребрик это не от ума, но альтернатива на скорости придти в борт 08 полной людей ровно под 90% — ладно бы одним трупом отделались). Но машина удивила — сравнивать есть с чем. Позднее я понял что при нормальной резине Фрилу пофигу что под колесами — он разгоняется, маневрирует уверенно на абсолютно любой дороге, что скользко понимаешь только на торможении, иногда страшно, со временем привык чуть перестраховываться. В целом есть очень мало машин способных потягаться с Фрилом по соотношению комфорт/надежность управления. Вообще он оказался идеальным экспедиционником для 2 человек — что и требовалось. Его фишка не в том, что он может разгоняться до высокой мгновенной скорости а в том, что высокую среднюю скорость он держит на любой дороге. Я не знаю что надо сделать что бы пробить подвеску на А/Т резине.Салон. Простой, но чувствуется «порода». Именно ее не хватает корейцам на мой вкус. Правда у меня максимальная комплектация и, по моему, выбирая подержанного Фрила отдавать предпочтение стоит именно ей. посадка командирская — вертикальная. Кому-то не удобно, но я итак предпочитаю именно такую — мне в самый раз. Максимальный пробег «сел — встал» 1600 км — спина жива. Из всех недостатков салона выделю два — первый не хватает ниш вокруг водительского сидения — некуда положить очки, не очень удобно сотовый, поэтому экран решил не ставить — оставить нишу. Второй — не очень большой багажник, но тут кому не хватает или бокс на крышу или Дискавери.Обслуживание и ремонт.Самое дорогое — активация вебасто в роли предпускового подогревателя — была отзывная акция когда это делал дилер, но предыдущий хозяин — раздолбай этого не сделал, пришлось мне. Поставили беларусский модуль — полет отличный. На этом все, реально все. Гул диффернциала — никак не меняется с момента покупки — ограничился заменой масла в нем — будет сильнее замена подшипников 20 т.р. но пока не вижу смысла лезть. Еще приговорили к замене дроссельную заслонку 10 т.р., опять же внешне себя ничем не выдает, никакой лампы не зажигает, но на весеннем ТО поменяю. Подвеска, подшипники, линки — все как купил — так и ходит, а ходит уже около 80 т.км — только подо мной.Обслуживание — это да — это дорого, в основном потому, что много чего обслуживать надо. Причем если не потратить денег на обслуживание, то потом придется в разы больше тратить на ремонт. Причем надо или самому читать как его обслуживать или что бы машину обслуживали люди, имеющий опыт именно по этим машинам — тонкостей хватает. Из того, что делал — замена масла в двигателе, фильтра — каждые 8-10 т.км, замена ремня ГРМ (как выяснилось было не надо, но мне так спокойней), замена масла халдекс, раздатка, передний мост, задний диффиринциал, замена бачка ГУР (в нем встроен фильтр, и его надо после 100 т.км поменять что бы не поменять насос ГУР), чистка радиаторов со снятием, замена колодок перед — зад, весной надо будет поменять и все диски — около 15 т.р. на круг — вроде все.Для 8 летней машины по-моему немного. Проходимость — несколько раз залезал в леса — проходимость ограничивается только геометрией и «жалко поцарапать машину», однако владельцев стоковых внедорожников вы успеете удивить не раз. И вообще сам Ленд Ровер позиционирует Фрила как «легкий внедорожник», после того, где я проезжал на нем — подтверждаю — не врут. Начиная с того, что машина играючи трогается с диагонального вывешивания. И вообще — чем хуже дорога — тем больше кайфа от этой машиныОщущения от машины. Просто эйфория, на Фриле приятно ехать, особенно по трассе и далеко. Есть чувство абсолютной надежности и какой бы катаклизм дорога не устроила — ты все равно доедешь до места. Связка двигатель — коробка отлично работают в диапазоне 60-110 км/ч делая обгоны простыми и безопасными. нравится запас хода — на баке проезжаешь до 800 км. Биксеноновый свет делает комфортной езду в темное время, но в дождь машина «слепнет» — так и другие так же. За рулем не устаешь, а лендроверовские подлокотники — это нечто, лендровер без них — это другая машина (а ведь поначалу плевался — быстро рулить не дают). Толстое железо, основательность подвески, устойчивость на дороге — создают чувство уверенности в себе и машине.Итог — машиной полностью доволен, менять не собираюсь несмотря на приличный возраст. Кто сомневается — могу порекомендовать, но строго после диагностики. иначе ощущения могут быть совсем не такими радужными как у меня — пример перед глазами есть. И помните что на Фриле рубль потраченный на обслуживание — это 1000 не потраченная на ремонт.Фото сделаю позднее — как то не попадала машина в кадр
(PDF) синдром латентной дисфории
GENERAL PSYCHOPATHOLOGY
Latent dysphoria – autonomic emotional
disorder in patients with functional
disorders in general practice: an attempt
to present a new clinical phenomenon
M.A.Morozova, A.A.Alekseev,
G.E.Rupchev 4
RESEARCHER – TO THE PRACTICE
Predicting treatment response
on the use of anxiolytic Afobazol
in anxiety disorders: results of a
comparative clinical and biochemical
study of activity of dipeptidylpeptidase-4
with Phenazepam
T.S.Syunyakov, G.G.Neznamov,
N.N.Zolotov 8
Clonazepam: an updated review on their
clinical use
R.A.Bekker, Yu.V.Bykov 17
Particularities of psychic disorders and
psychosomatic mutual relations in case
of cardiovascular diseases.
Second communication
L.A.Podrezova, A.N.Bogdan, Yu.V.Seiku,
L.A.Krasnoslobodtseva, E.M.Mutnykh 30
Memantine: a review of its use
in neurology
R.A.Bekker, Yu.V.Bykov 34
WPA ACADEMY-SERVIER
From clinical to functional remission
in depression: how big is the gap?
M.P.Marachev 44
Changes in the concept of schizophrenia:
is it a good time for renaming it?
A.V.Pavlichenko 50
POINT OF VIEW
Talking about drug treatment
of personality disorders (open letter
to Professor V.D.Mendelevich)
D.S.Danilov 57
ON OPEN TRIBUNE
Child’s autism and the semantic content
of the term “autism spectrum disorders”
B.V.Voronkov, L.P.Rubina, I.V.Makarov 62
THE HISTORY OF PSICHIATRY
Pierre Deniker – giant
of psychopharmacology
(strokes to the biography)
P.V.Morozov 65
Jean Delay and Pierre Deniker:
the pioneers in psychopharmacology
Yu.V.Bykov, R.A.Bekker 66
Журнал имени П.Б.Ганнушкина
Gannushkin Journal
СОДЕРЖАНИЕ CONTENTS
Решением ВАК Минобразования и науки РФ журнал «Психиатрия и психофармакотерапия» им. П.Б.Ганнушкина включен в перечень ведущих рецензируемых
научных журналов и изданий, в которых публикуются основные научные результаты диссертаций на соискание ученых степеней доктора и кандидата наук.
ОБЩАЯ ПСИХОПАТОЛОГИЯ
Латентная дисфория –
самостоятельное психоэмоциональное
нарушение при функциональных
расстройствах в общемедицинской
практике: попытка описать новый
клинический феномен
М.А.Морозова, А.А. Алексеев,
Г.Е.Рупчев 4
ИССЛЕДОВАТЕЛЬ – ПРАКТИКЕ
Прогнозирование терапевтического
ответа на применение анксиолитика
Афобазола при тревожных
расстройствах: результаты
сравнительного с Феназепамом
клинико-биохимического
исследования активности
дипептидилпептидазы-4
Т.С.Сюняков, Г.Г.Незнамов,
Н.Н.Золотов 8
Клоназепам: обзор новейших данных
по применению
Р.А.Беккер, Ю.В.Быков 17
Особенности психических нарушений
и психосоматические
взаимоотношения при сердечно-
сосудистых заболеваниях.
Сообщение второе
Л.А.Подрезова, А.Н.Богдан, Ю.В.Сейку,
Л.А.Краснослободцева,
Е.М.Мутных 30
Мемантин: обзор применения
в неврологии
Р.А.Беккер, Ю.В.Быков 34
АКАДЕМИЯ ВПА-СЕРВЬЕ
От клинической к функциональной
ремиссии при депрессии: насколько
велик разрыв?
М.П.Марачев 44
Изменение концепции шизофрении:
настало ли время
для переименования?
А.В.Павличенко 50
ТОЧКА ЗРЕНИЯ
К вопросу о медикаментозном лечении
расстройств личности (открытое
письмо профессору В.Д.Менделевичу)
Д.С.Данилов 57
ОТКРЫТАЯ ТРИБУНА
Детский аутизм и смысловая
наполненность термина «расстройства
аутистического спектра»
Б.В.Воронков, Л.П.Рубина,
И.В.Макаров 62
ИСТОРИЯ ПСИХИАТРИИ
Пьер Деникер – великан
психофармакологии
(штрихи к биографии)
П.В.Морозов 65
Жан Деле и Пьер Деникер – пионеры
психофармакологии
Ю.В.Быков, Р.А.Беккер 66
ПСИХИАТРИЯ И ПСИХОФАРМАКОТЕРАПИЯ
PSIHIATRIJA I PSIHOFARMAKOTERAPIJA = PSYCHIATRYAND PSYCHOPHARMACOTHERAPY
Журнал «Психиатрия и психофармакотерапия» им. П.Б.Ганнушкина –
рецензируемый научно-практический журнал
для профессионалов в области здравоохранения.
Основан в 1999 году П.В.Морозовым
Журнал «Психиатрия и психофармакотерапия» им. П.Б.Ганнушкина индексируется
в следующих электронных поисковых системах/базах данных: РИНЦ
(Российский индекс научного цитирования), Google Scholar
Том 19, №1, 2017 / Vol.19, No. 1, 2017
Главный редактор журнала Editor-in-Chief
П.В.Морозов, д.м.н., проф. P.V.Morozov, prof. Dr. Sci.
Редакционный совет Editorial council
E-mail: [email protected]
Электронная версия: www.con-med.ru
ММА «МедиаМедика»/MMA «MediaMedica»
Почтовый адрес: 127055, Москва, а/я 37
Директор
Т.Л.Скоробогат
Директор по рекламе
Н.М.Сурова
Менеджер по рекламе
Н.А.Зуева ([email protected])
Работа с подписчиками
Телефон: +7 (495) 926-29-83 (доб. 125)
E-mail: [email protected]
Объединённая редакция/Ob’edinyonnaya redaktsia
Телефон/факс: +7 (499) 500-38-83
E-mail: [email protected]
Медицинский директор
Б.А.Филимонов
Исполнительный директор
Э.А.Батова
Арт-директор
Э.А.Шадзевский
Дизайнер
Д.А.Антонова
Адрес издателя: 117071, Москва, Ленинский пр-т, 16
Адрес типографии: 107023, Москва, ул. Электрозаводская, 21, 16
Журнал зарегистрирован в Федеральной службе по надзору в сфере связи,
информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Рег. номер: ПИ №ФС77-64502.
Общий тираж 30 тыс. экз.
Учредитель ЗАО «Медицинские издания».
Издание распространяется бесплатно.
Каталог «Пресса России» 29575.
Авторы, присылающие статьи для публикаций, должны быть ознакомлены
с инструкциями для авторов и публичным авторским договором.
Информация на сайте www.hpmp.ru.
Редакция не несет ответственности за содержание рекламных материалов.
В статьях представлена точка зрения авторов, которая может не совпадать
с мнением редакции журнала.
Полное или частичное воспроизведение материалов,
опубликованных в журнале, допускается только
с письменного разрешения редакции.
Все права защищены. 2017 г.
Научное производственно-практическое издание для профессионалов
в области здравоохранения.
Согласно рекомендациям Роскомнадзора выпуск и распространение данного производственно-
практического издания допускаются без размещения знака информационной продукции.
А.С.Аведисова, д.м.н., проф.
Ю.А.Александровский, чл.-кор. РАН
А.В.Андрющенко, д.м.н.
И.П.Анохина, акад. РАН
Н.А.Бохан, чл.-кор. РАН
Ф.Е.Вартанян, д.м.н., проф.
Э.Б.Дубницкая, д.м.н., проф.
Н.Н.Иванец, чл.-кор. РАН
М.В.Иванов, д.м.н., проф.
С.В.Иванов, д.м.н., проф.
Б.А.Казаковцев, д.м.н., проф.
В.В.Калинин, д.м.н., проф.
В.Н.Краснов, д.м.н., проф.
Е.Г.Костюкова, к.м.н.
В.И.Крылов, д.м.н., проф.
Н.А.Мазаева, д.м.н., проф.
М.А.Морозова, д.м.н., проф.
С.Н.Мосолов, д.м.н., проф.
Г.Г.Незнамов, д.м.н., проф.
Н.Г.Незнанов, д.м.н., проф.
С.А.Овсянников, д.м.н., проф.
Ю.В.Попов, д.м.н., проф.
А.Б.Смулевич, акад. РАН
A.S.Avedisova, prof. Dr. Sci.
Yu.A.Alexandrovsky, prof. Assos. Member RAS
A.V.Andryuschenko, Dr. Sci.
I.P.Anokhina, prof. Member of RAS
N.A.Bohan, prof. Assos. Member RAS
F.E.Vartanian, prof. Dr. Sci.
E.B.Dubnitskaya, prof. Dr. Sci.
N.N.Ivanets, prof. Assos. Member RAS
M.V.Ivanov, prof. Dr. Sci.
S.V.Ivanov, prof. Dr. Sci.
B.A.Kazakovtsev, prof. Dr. Sci.
V.V.Kalinin, prof. Dr. Sci.
V.N.Krasnov, prof. Dr. Sci.
E.G.Kostukova, Ph. D.
V.I.Krylov, prof. Dr. Sci.
N.A.Mazaeva, prof. Dr. Sci.
M.A.Morozova, prof. Dr. Sci.
S.N.Mosolov, prof. Dr. Sci.
G.G.Neznamov, prof. Dr. Sci.
N.G.Neznanov, prof. Dr. Sci.
S.A.Ovsiannikov, prof. Dr. Sci.
Y.V.Popov, prof. Dr. Sci.
A.B.Smulevich, prof. Member RAS
Председатель – A.Jablensky (Перт)
С.А.Алтынбеков (Алматы)
Т.И.Галако (Бишкек)
Н.В.Измайлов (Баку)
Н.А.Марута (Харьков)
А.Э.Мелик-Пашаян (Ереван)
О.А.Скугаревский (Минск)
Н.И.Ходжаева (Ташкент)
C.Soldatos (Афины)
D.Moussaoui (Касабланка)
Международный совет International council
Кориця та мед мають надзвичайну користь для нашого здоров’я
- Додому
- Наша місія
- Наш погляд на здоров’я
- Команда
- Марджорі Базінет
- Елоїза Бенар
- Крістін Фалез
- Коломбе Говен
- Марі-Хосе Гойєт
- Карін Лавалле — медсестра
- Ані Левейе — гіпнотерапевт
- Сільві Морін
- Женев’єва Пепін
- Гейлен Річард
- Бріжит Робітай
- Марі-П’єр Віне, акупунктурист
- Наша підтримка
- Індивідуальне оцінювання в інтегративній медицині
- Шлях оновлення здоров’я
- Підтримка на основі симптомів
- Діяльність
- Без призначення
- Літописи
- Зв’язок
ЦИНАМ І МЕД МАЮТЬ НАДЗВИЧАЙНУ ПЕРЕВАГУ ДЛЯ НАШОГО ЗДОРОВ’Я
Відкрийте всі властивості, які одна ложка цієї суміші може принести вашому організму.
Кориця та мед мають надзвичайну користь для нашого здоров’я.
Кориця та мед — це поживні продукти, які мають багато користі для здоров’я, плюс вони смачні! Поєднуючи їх, ви примножуєте їх переваги та полегшуєте їх щоденне споживання.
Будь то для схуднення, підвищення імунного захисту, сприяння травленню, допомоги суглобам, профілактики серцево-судинних захворювань, лікування безсоння та втоми або стимулювання лібідо, щомісяця, що вживається в їжу, корисна суміш з медом пропонує вам хороші переваги для здоров’я.
Щоб скористатися усіма своїми властивостями, мед повинен бути медом біологічний, переконавшись, що він був приготований природним шляхом, без додавання цукру та води. До того ж краще, якщо це буде мед сирий, Тобто мед, який не варили при високих температурах, щоб він завжди залишався рідким. Тому цей сирий мед затвердіє при охолодженні; в цьому випадку ви можете нагріти його в пароварці, щоб розплавити, не втрачаючи своїх властивостей.
З іншого боку, кориця також повинна бути органічною, і по можливості з Цейлону. Його аромат буде свідчити про його якість.
Як приготувати засіб з корицею та медом?Змішайте рідкий мед і корицю, щоб отримати досить густий препарат. Помістіть цей препарат у скляну банку, яку ви щільно закриєте. Ви можете зберігати його в прохолодному місці за межами холодильника, якщо воно не дуже гаряче. Завдяки своїм властивостям цей препарат зберігається добре і досить довго.
Як слід споживати цей засіб?Нормальна доза — одна столова ложка на день. Дітям по одній чайній ложці на день. Ви можете змішати його з невеликою кількістю гарячої води, і ви отримаєте такий собі солодкий настій; або з холодною водою, цього разу ви отримаєте освіжаючий і корисний напій. Ви також можете змішати його з фруктовим соком, молоком, йогуртом, але готувати його ніколи не доведеться.
(PDF) Изучение и различение запахов меда медоносной пчелой
158 I. Bonod et al.
ССЫЛКИ
Обер С., Гонне М. (1983) Mesure de la couleur des
miels, Apidologie 14, 105–118.
Bakchine-Huber E., Pham-Delègue MH, Patte F.,
Masson C. (1992) Modification d’une preférence
ольфактивный апрэс ученик в аптеке:
влияние на природу сигнала, CR Acad.
Sci.Сер. III 314, 325–330.
Бикки К., Фраттини К., Беллиардо Ф., Нано Г.М. (1982)
Соображения и замечания относительно летучих компонентов меда
, в: Baltes W. (Ed.), Recent Adv.
Food Anal., Стр. 137–142.
Bicchi C., Belliardo F., Frattini C. (1983) Идентификация
летучих компонентов
некоторых пьемонтских медов, J. Apic. Res. 22,
130–136.
Биттерман М.Э., Мензель Р., Фиц А., Шефер С.
(1983) Классическое кондиционирование хоботка
удлинение медоносных пчел (Apis mellifera), J. Comp.
Psychol. 97, 107–119.
Bouseta A., Collin S., Dufour J.P. (1992)
Характерные профили аромата однотонного меда
, полученные с помощью динамической системы GC-MS
, J. Apic. Res. 31, 96–109.
Брандес К. (1988) Оценка наследственности
обучающего поведения медоносных пчел (Apis mellifera
capensis), Behav.Genet. 18, 119–132.
Чандра С., Смит Б.Х. (1998) Анализ
синтетической обработки смесей запахов у пчелы
(Apis mellifera), J. Exp. Биол. 201,
3113–3121.
Cour P. (1974) Новые методы обнаружения
flux et des retombées polliniques: исследование
sédimentation пыльцы и спор на
поверхности в золе, Pollen et Spores 16, 103–141.
Ферререс Ф., Ампаро Бласкес М., Гил М.И., Томас-
Барберан Ф.А. (1994) Разделение меда
флавоноидов мицеллярной электрокинетической капиллярной хроматографией
, J. Chromatogr. A 669, 268–
274.
Getz W.M., Smith K.B. (1991) Обонятельное восприятие
у медоносных пчел: комбинированный и смешанный запах
Эффекты стимула, концентрации и воздействия, J.
Comp. Physiol. А 169, 215–230.
Fröhlich B., Riederer M., Tautz J. (2000) Гребенчатый воск
распознавание медоносными пчелами, испытанное с помощью рефлекса разгибания хоботка
, J.Exp. Биол. 203,
1581–1587.
Fröhlich B., Riederer M., Tautz J. (2001) Медоносные пчелы
различают кутикулярные воски на основе сложных эфиров и
полярных компонентов, Apidologie 32, 265–274.
Гонне М., Ваче Г.И. (1985) Le Goût du Miel,
U.N.A.F., Париж.
Jaubert J.N., Gordon G., Doré J.C. (1987) Une
organization du champ des odeurs. Deuxième
partie: modèle descriptif de l’organisation de
l’espace odorant, Parfums Cosmétiques Arômes
78, 71–82.
Jeuring H.J., Kuppers F.J.E.M. (1980) Высокоэффективная жидкостная хроматография
фурфурола
и гидроксиметилфурфурола в спирте и меде,
J. Assoc. Выключенный. Анальный. Chem. 63, 1215–1218.
Kerkvliet J.D., Meijer H.A.J. (2000) Фальсификация меда
: связь между микроскопическим анализом и измерениями
C, Apidologie 31, 717–726.
Kriston I. (1973) Die Bewertung von Duft- und
Farbsignalen als Orientierungshilfen an der
Futterquelle durch Apis mellifera L., J. Comp.
Physiol. 84, 77–94.
Laloi D., Gallois M., Roger B., Pham-Delègue M.H.
(2001) Возрастные изменения обоняния
кондиционирование рабочих медоносных пчел
(Apis mellifera L.), Apidologie 32, 1–12.
Laska M., Galizia C.G., Giurfa M., Menzel R. (1999)
Обонятельная способность различения и запах
взаимосвязи структура-активность у медоносных пчел,
Chem. Senses 24, 429–438.
Ле Метайер М., Marion-Poll F., Sandoz J.C., Pham-
Delègue M.H., Blight M.M., Wadhams L.J.,
Masson C., Woodcock C.M. (1997) Влияние кондиционирования
на распознавание летучих компонентов масличного рапса
медоносной пчелой: использование газового анализа
для анализа поведения с расширением хоботка
, Chem. Senses 22, 391–398.
Louveaux J., Maurizio A., Vorwohl G. (1978)
Методы мелиссопалинологии, Bee World 59,
139–147.
Массон К., Арнольд Г. (1984) Онтогенез, созревание
и пластичность обонятельной системы у рабочей пчелы
, J. Insect Physiol. 30, 7–14.
Маурицио А. (1939) Untersuchungen zur Quantitativen
Pollenanalyse des Honigs, Mitt. Геб.
Lebensmittelunters. Hyg. 30, 27–72.
Маурицио А. (1951) Анализ пыльцы меда, Bee
World 32, 1–5.
Менцель Р., Греггерс У., Хаммер М. (1993)
Функциональная организация аппетивного обучения
и памяти у универсального опылителя, медоносной пчелы
, в: Papaj D.Р., Льюис А.К. (ред.),
Обучение насекомых, Чепмен Холл, Нью-Йорк,
стр. 79–125.
Menzel R., Manz G., Menzel RM, Greggers U.
(2001) Массовое и разнесенное обучение медоносных пчел:
роль CS, США, интервал между испытаниями и интервал испытаний
, Learn . Mem 8, 198–208.
Pham-Delègue MH, Masson C., Etievant P., Azar
M. (1986) Избирательный обонятельный выбор медоносной пчелы
среди ароматов подсолнечника: исследование
комбинированного обонятельного кондиционирования и химического анализа
, J .Chem. Ecol. 12, 781–793.
Pham-Delègue M.H., De Jong R., Masson C. (1990a)
Effet de l’âge sur la réponse conditionnée d’ex-
напряженность хоботка в домашних условиях,
C.R. Acad. Sci. Сер. III 310, 527–532.
Pham-Delègue MH, Roger B., Charles R.,
Masson C. (1990b) Effet d’une pre-exposition
ольфакторный эффект по составу ориентации
динамический ольфактометрический эффект на 4 потока за
л’абей (Apis mellifera L.), Insectes Soc. 37,
181–187.
Pham-Delègue MH, Bailez O., Blight MM,
Masson C., Picard-Nizou AL, Wadhams LJ
Профили экспрессии гена индикатора стресса, динамика колоний и развитие тканей медоносных пчел, подвергшихся воздействию сублетальных доз имидаклоприд в лабораторных и полевых экспериментах
Abstract
В этом исследовании изучались различные контекстно-зависимые эффекты воздействия имидаклоприда на реакцию медоносных пчел.Медоносные пчелы подвергались воздействию имидаклоприда в различных концентрациях в течение 40 дней. Рядом с этими переменными было проведено сравнение лаборатории и поля. Влияние хронического воздействия на уровни экспрессии генов определяли с использованием микрочипа собственной разработки, нацеленного на различные гены, связанные с иммунитетом и детоксикацией, для определения изменений экспрессии генов, связанных со стрессом. Повышенные уровни генов детоксикации, кодирующих CYP9Q3 и CYT P450, были обнаружены у медоносных пчел, подвергшихся воздействию имидаклоприда.Различные контекстно-зависимые эффекты воздействия имидаклоприда на медоносных пчел были физиологически подтверждены уменьшением размеров гипофарингеальных желез. Медоносные пчелы, подвергшиеся воздействию имидаклоприда в лабораторных клетках, показали общую иммуносупрессию, и никакие механизмы детоксикации не были задействованы в значительной степени, в то время как медоносные пчелы в полевых условиях показали устойчивый ответ с иммунной стимуляцией в более поздние моменты времени. Однако обработанные колонии имели тенденцию к сокращению расплода и популяции после первого цикла расплода в поле.В заключение, это исследование выявило различные контекстно-зависимые эффекты воздействия имидаклоприда на реакцию медоносных пчел. Эти результаты предупреждают о возможных подводных камнях, связанных с обобщением результатов, основанных на конкретных экспериментах с коротким временем воздействия. Повышенные уровни CYT P450 и CYP9Q3 в сочетании с реакцией иммунного ответа могут использоваться в качестве маркеров для пчел, которые подвергаются воздействию пестицидов в полевых условиях.
Образец цитирования: De Smet L, Hatjina F, Ioannidis P, Hamamtzoglou A, Schoonvaere K, Francis F, et al.(2017) Профили экспрессии генов-индикаторов стресса, динамика колоний и развитие тканей медоносных пчел, подвергшихся воздействию сублетальных доз имидаклоприда в лабораторных и полевых экспериментах. PLoS ONE 12 (2): e0171529. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0171529
Редактор: Декан Э. Ричерс, Иллинойский университет в Урбана-Шампейн, США
Поступила: 4 мая 2016 г .; Одобрена: 23 января 2017 г .; Опубликовано: 9 февраля 2017 г.
Авторские права: © 2017 De Smet et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.
Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в документе и его файлах с вспомогательной информацией.
Финансирование: Эта работа была поддержана бельгийской научной политикой (BELSPO; BR / 132 / A1 / BELBEES; многопрофильная оценка упадка бельгийской дикой пчелы с целью адаптации политики управления смягчением последствий), Проект ЕС-Правительство Греции (EC Dir.797/07; Влияние неоникотиноидов и загрязнения воздуха на медоносных пчел. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.
Конкурирующие интересы: Соавтор профессор Гай Смагхе является членом редакционного совета PLOS ONE. Это не влияет на соблюдение авторами всех политик PLOS ONE в отношении обмена данными и образцами.
Введение
Имидаклоприд — нейротоксический инсектицид, который действует на никотинергические ацетилхолиновые рецепторы центральной нервной системы насекомых и относится к классу химических веществ, называемых неоникотиноидами [1].Последние обладают высокой инсектицидной активностью и используются против широкого круга сельскохозяйственных вредителей. Тем не менее, из-за их активности против нецелевых организмов, среди которых насекомые-опылители, в частности пчелы, эти инсектициды являются предметом дискуссий в Европе и за ее пределами.
Медоносные пчелы подвергаются воздействию этих химикатов в течение сезона кормодобывания несколькими способами [2], хотя интоксикация в большинстве случаев не достигает острого уровня и сообщается в контексте сноса пыли и опрыскивания.Более частый и гораздо больший эффект можно отнести к сублетальному воздействию этих неоникотиноидов. Хотя это не показывает немедленного воздействия на продолжительность жизни пчел [3], результат воздействия довольно тонкий с четкими поведенческими и физиологическими последствиями для пчел [4, 5]. Многие недавние исследования показали, что низкие дозы имидаклоприда также обладают сублетальным действием на уровне колоний [6]. Динамика колонии медоносных пчел является результатом широкого спектра физиологических и поведенческих изменений, таких как развитие расплода и популяции с течением времени.Эти переменные являются предикторами способности колонии выживать в течение зимы и воспроизводиться [7, 8]. Имидаклоприд в сублетальных концентрациях оказывал неблагоприятное воздействие на плодовитость и поведение маток, что приводило к кратковременному функционированию колонии [9]. Наряду с динамикой колонии, развитие определенных тканей, таких как гипофарингеальные железы (HPG) пчел (железы, производящие маточное молочко), рассматривается как надежный индикатор нарушения развития / физиологической недостаточности из-за воздействия пестицидов [10, 11] .Развитие HPG начинается очень рано в жизни взрослых медоносных пчел, а железы достигают максимального размера и веса в возрасте 8–12 дней [12].
Медоносные пчелы в первую очередь подвергаются воздействию химикатов, которые пчеловоды добровольно применяют для борьбы с эктопаразитарным клещом, Varroa destructor , и существует несколько научных отчетов, описывающих влияние акарицидов на пчел на молекулярном уровне. Такие химические вещества, как тимол, кумафос и муравьиная кислота, способны изменять пути детоксикации, иммунные процессы и экспрессию некоторых генов развития [13, 14].Однако первые сообщения о молекулярном действии фунгицидов и пестицидов на пчел были сосредоточены только на их личиночной стадии. Фунгициды миклобутанил и хлороталонил вызывали повышение экспрессии фермента, активирующего пропенолоксидазу (PPOact), конечного иммунного продукта, тогда как имидаклоприд отвечал за повышенную регуляцию экспрессии гена Hsp70 [15]. Эти менее выраженные изменения после воздействия экзогенных химикатов в некотором смысле противоречили сублетальным эффектам, которые эти химические вещества могут вызывать.В недавнем исследовании взрослых пчел с беспристрастным подходом (RNAseq), когда пчелы хронически подвергались воздействию инсектицидов фипронила или имидаклоприда, не наблюдалось значительного воздействия на детоксифицирующие ферменты, однако некоторые гены, связанные с иммунитетом, были подавлены [16]. Оба вышеупомянутых исследования проводились в лабораторных условиях: в первом использовалось выращенных in vitro личинок [15], во втором — взрослых особей в клетках [16]. Кроме того, было проведено очень мало исследований, в которых сравнивались результаты в лабораторных и полевых условиях и с использованием реальных концентраций химического стрессора в полевых условиях.
В этом исследовании сравнивалась реакция пчел, содержащихся в клетках, которые подвергались хроническому воздействию сублетальных и реальных концентраций имидаклоприда, с пчелами, получавшими аналогичные концентрации в полевых условиях. Изменения экспрессии набора из 109 генов-мишеней были проверены с помощью колориметрической матрицы собственной разработки, так называемой BeeClinic. Этот массив содержал наиболее важные гены-индикаторы стресса. Определенные эффекты на экспрессию генов количественно оценивали с помощью ПЦР в реальном времени. Параллельно изучались изменения диаметра ацинусов гипофарингеальных желез, выживаемость взрослых пчел, а также изменения расплода и популяции семей в поле.
Материалы и методы
Опытный образец
Лабораторные и полевые эксперименты были выполнены в Отделе пчеловодства Греческой сельскохозяйственной организации «DEMETER» (Неа Муданья, Греция) с местными медоносными пчелами Apis mellifera macedonica .
Эксперименты с клетками в основном проводились, как описано в [11]. Вкратце, использовали деревянные клетки с сетчатыми стенками (10 см X 10 см X 10 см) со съемным металлическим напольным покрытием. Гребни с закрытым расплодом из двух разных колоний помещали в инкубатор при 34 ° C и относительной влажности (RH) 70%.На следующий день вылупившихся взрослых медоносных пчел собирали и помещали в клетки (по 80 пчел в каждой). Вновь появившиеся пчелы из обеих семей были равномерно распределены по всем контрольным и экспериментальным клеткам, чтобы исключить возможное влияние уровня колонии на результаты. Клетки инкубировали в полной темноте при 28–29 ° C и относительной влажности 70%. Пчел кормили сахарным раствором (33% мас. / Об.) И пирожком из пыльцы ad libitum . Имидаклоприд вводился в растворе сахара в концентрации 5 частей на миллиард (группа C5) и 200 частей на миллиард (группа C200) и служил в качестве жидкого источника углеводов или смешивался с гранулами пыльцы (700 г пыльцы + 300 г раствора загрязненного сахара) в качестве полутвердый источник белка (пирожок из пыльцы).Загрязненную лепешку из пыльцы готовили путем смешивания пыльцы с сахарным раствором, содержащим правильное количество имидаклоприда, чтобы гарантировать правильную концентрацию имидаклоприда в пирожке из пыльцы. Концентрации 5 частей на миллиард и 200 частей на миллиард были выбраны как аналогичные соответствующим концентрациям имидаклоприда, обнаруженного в нектаре / пыльце / гранулах пыльцы и жидкости для потоотделения растений, протравленных семенами [17–21]. Были сделаны аликвоты, которые хранили в морозильной камере и использовали каждый раз для приготовления свежего раствора сахара для кормления пчел.Отрицательные контроли не получали имидаклоприда в растворе сахара или пирожках из пыльцы (группа C0). Для каждой концентрации имидаклоприда и контрольной группы использовали три повтора (клетки). Ежедневно регистрировали уровень смертности, убирали мертвых пчел и ежедневно обновляли корм.
Для полевого эксперимента использовали 10 колоний на группу. Все колонии получали 500 мл раствора сахара два раза в неделю (с или без имидаклоприда; такие же концентрации, как указано выше: 5 частей на миллиард = группа F5; 200 частей на миллиард = группа F200; без имидаклоприда = F0) и 250 г пирожков из пыльцы (приготовленных с соответствующим сахаром. растворов) один раз в неделю.Частые проверки гарантировали, что пчелы ели корм в течение следующих дней. У них также была возможность свободно добывать корм в незагрязненных источниках пищи. Эта процедура имитировала естественную ситуацию, когда пчелы добывают корм не только в источниках пищи, загрязненных пестицидами. Это может привести к разбавлению данного загрязнения в хранилищах ульев, в зависимости от наличия незагрязненных источников пищи. Эффективные концентрации имидаклоприда, действию которых подвергались медоносные пчелы, оценивали один раз путем химического анализа приготовленного раствора сахара и пирожка из пыльцы.Более подробно, один образец каждой концентрации, приготовленный для пирожков пыльцы и раствора сахара, был проанализирован с использованием жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией (HPLC-ESI-MS / MS). Предел обнаружения составил 0,45 мкг / кг, а предел количественного определения — 1,35 мкг / кг. Имидаклоприд был обнаружен в концентрациях 3,1 и 206,7 мкг / кг в котлетах из пыльцы и в концентрациях 5,1 и 176,2 в растворе сахара, соответственно для групп с концентрацией 5 и 200 частей на миллиард.
Изменения выводка и популяции в поле
Все колонии оценивали по количеству клеток расплода и взрослых пчел (популяции) в начале эксперимента.Эту процедуру повторяли через 20 и 40 дней. Конкретные временные интервалы были выбраны, чтобы включить два цикла расплода для лучшего понимания развития колонии. Площадь расплода и взрослую популяцию пчел оценивали путем визуальной оценки процента поверхностей сот, плотно покрытых расплодом или пчелами, соответственно. Это быстрый и точный метод, используемый в полевых условиях. Затем каждое процентное значение было количественно определено в фактическое количество ячеек расплода или популяции пчел на основании того факта, что каждая сторона рамки Лангстрота имеет около 2024 клеток расплода и 1144 пчелы (в частности: каждая сторона рамки имеет 8.8 x 10 см 2 площадь поверхности и каждые 10 см ( 2 ) содержат примерно 230 ячеек расплода или 130 взрослых пчел) [22, 23].
Измерения гипофарингеальной железы
Образцы гипофарингеальных желез были собраны на 10-й день как в лабораторных, так и в полевых экспериментах. В полевом эксперименте вылупившиеся пчелы были отмечены цветом на месте в начале эксперимента (= день 0), чтобы иметь пчел известного возраста. Гипофарингеальные железы удаляли путем рассечения голов в физиологическом растворе насекомых [24] и окрашивали кумасси бриллиантовым синим красителем R250 [25] в течение 5 с.Затем железы фотографировали на предметном стекле (без покровного стекла) с помощью цветной видеокамеры Sony CCD-Iris с высоким разрешением под бинокулярным микроскопом Leica MZ6. Программное обеспечение Image Pro-Plus использовалось для измерения диаметра ацинусов (долей) в двух перпендикулярных направлениях. Средний диаметр был рассчитан из расчета примерно 300 ацинусов на группу.
Экстракция общей РНК
Для профилирования экспрессии генов образцы пчел были собраны в двух временных точках на 10-й день (тот же день, что и для желез) и через 10 дней (= 20-й день) как в лабораторном, так и в полевом эксперименте.В полевом эксперименте вылупившиеся пчелы были отмечены цветом на месте в начале эксперимента (= день 0), чтобы иметь пчел известного возраста. Для каждой временной точки собирали по восемь пчел на группу и сначала подвергали анестезии путем охлаждения, а затем убивали обезглавливанием. Каждую пчелу помещали в 1 мл RNALater® (Life Technologies) после отделения грудной клетки от брюшной полости для оптимального сохранения тканей. После инкубации в течение ночи при 4 ° C (чтобы гарантировать полное проникновение RNALater® в ткань) образцы замораживали при -20 ° C.Они были доставлены в Гентский университет (Гент, Бельгия) для поддержания холодовой цепи, где они хранились при -80 ° C до дальнейшего использования. Суммарную РНК выделяли от каждой пчелы, восемь биологических повторов от каждой группы, используя мини-набор липидной ткани RNeasy (Qiagen), начиная с одной полной медоносной пчелы. Ткани гомогенизировали механическим перемешиванием в TissueLyser (Precellys) в течение 90 с при 30 Гц в присутствии пары шариков из нержавеющей стали и 1 мл реагента для лизиса Qiazol. Общую РНК выделяли в соответствии с рекомендациями протокола производителя, элюируя РНК в конечном объеме 50 мкл.Концентрацию общей РНК измеряли с помощью Nanodrop (Isogen).
Колориметрическая матрица
Целевые гены с соответствующими им зондами перечислены в таблице S1. Были выбраны олигонуклеотиды из мишеней, доступных в исследовании Johnson et al [26]. Новые олигонуклеотиды были сконструированы с использованием AlleleID7 (Premier Biosoft International). Все зонды были синтезированы и обессолены компанией Integrated DNA Technologies. Зонды были напечатаны в двух экземплярах на предметных стеклах, покрытых нитроцеллюлозой, с помощью ArrayIT.Напечатанные массивы хранили при комнатной температуре до использования. КДНК метили дигоксигенином (DIG) с использованием системы Superscript Direct cDNA Labeling от Invitrogen, как описано у De Smet et al. [27]. Вкратце, 25 мкг общей РНК от каждой отдельной пчелы (8 пчел на группу) подвергали обратной транскрипции в кДНК с заякоренными олиго (dT) 20 праймерами. РНК подвергали обратной транскрипции с использованием 2 мМ dATP, dGTP и dCTP, 1,3 мМ dTTP и 0,7 мМ щелочно-стабильного DIG-dUTP (Roche), в результате чего получали кДНК, меченную DIG.Исходная РНК была разрушена щелочным гидролизом, а меченая кДНК была очищена с использованием модуля прямой очистки Superscirpt III (Invitrogen). Очищенную одноцепочечную меченую кДНК элюировали из колонок в 70 мкл воды, обработанной DEPC. Микроматрицы предварительно гибридизовали с раствором BlockIT в течение 1 часа при комнатной температуре. После трех промывок 5x SSC (0,15 M NaCl– 0,015 M цитрат натрия для 1x SSC) и 0,1% додецилсульфата натрия, матрицы были помещены в кассету. Меченую кДНК, соответствующую 3 мкг общей РНК, смешивали с буфером для гибридизации (конечная концентрация составляет 25% формамида, 5x SSC и 0.1% SDS) до конечного объема 75 мкл и нагревали в течение 1 минуты при 65 ° C для денатурирования кДНК и резко охлаждали на льду в течение 30 секунд. Меченую кДНК затем переносили в массив и гибридизовали в течение ночи при 33,5 ° C. После гибридизации массивы дважды промывали при 45 ° C в течение 5 минут 2x SSC и 0,1% SDS, дважды 0,5x SSC и 0,1% SDS при 45 ° C в течение 5 минут с последующей 5-минутной промывкой при комнатной температуре 0,5%. х SSC.
Колориметрическое обнаружение — это трехэтапный процесс. На первом этапе мембраны обрабатывали 1% блокирующим раствором (Roche) в течение 30 минут, чтобы предотвратить неспецифическое привлечение антитела к мембране.На следующем этапе мембраны инкубировали с 1500-кратным разведением анти-дигоксигенина (Roche) в 1% блокирующем растворе. Антитела были конъюгированы с щелочной фосфатазой, что делает возможным колориметрическое развитие. Несвязавшееся антитело смывали в две стадии промывки PBS в течение 15 минут, после чего слайды уравновешивали буфером TBS в течение 5 минут. На последнем этапе мембрана, несущая гибридизированный зонд и конъюгат связанного антитела, реагировала с колориметрическими реагентами для обнаружения NBT (соль нитросинего тетразолия) и BCIP (5-бром-4-хлор-3-индолилфосфат).Исходный раствор NBT / BCIP (Roche) содержал 18,75 мг / мл хлорида нитросинего тетразолия и 9,4 мг / мл 5-бром-4-хлор-3-индолилфосфата, толуидиновой соли в 67% ДМСО (об. / Об.). Срезы инкубировали в 15 мл буфера TBS, содержащего 300 мкл NBT / BCIP, в течение 30 мин. Раствор 18,75 мг / мл хлорида нитросинего тетразолия и 9,4 мг / мл 5-бром-4-хлор-3-индолилфосфата, толуидин-соли в 67% (ДМСО) (об. / Об.). Раствор 18,75 мг / мл хлорида нитросинего тетразолия и 9,4 мг / мл 5-бром-4-хлор-3-индолилфосфата, толуидин-соли в 67% (ДМСО) (об. / Об.).Раствор 18,75 мг / мл хлорида нитросинего тетразолия и 9,4 мг / мл 5-бром-4-хлор-3-индолилфосфата, толуидин-соли в 67% (ДМСО) (об. / Об.). Раствор 18,75 мг / мл хлорида нитросинего тетразолия и 9,4 мг / мл 5-бром-4-хлор-3-индолилфосфата, толуидин-соли в 67% (ДМСО) (об. / Об.). Реакцию останавливали промыванием. слайды в дистиллированной воде. Массивы сушили центрифугированием. Затем слайды сканировали с помощью колориметрического сканера микрочипов ArrayIT® SpotWare TM с глубиной шкалы серого 16 бит и разрешением 5 мкм и сохраняли в формате TIFF.
Анализ данных
Инвертированные изображения TIFF были обработаны с помощью Mapix (Innopsys), чтобы приписать значение интенсивности пятна, которое было скорректировано с учетом интенсивности фона. Данные по интенсивности были нормализованы внутри и между массивами с использованием пакета Limma Bioconductor с использованием контрольных эталонных генов RPL8 и актина. Для проверки дифференциального выражения в объединенном наборе данных использовалась байесовская скорректированная t-статистика из линейных моделей для пакета данных Microarray (limma) [28, 29].Комбинированный набор данных содержит данные, полученные из 8 биологических повторений, и также был включен технический повтор. Скорректированные значения p были рассчитаны с использованием метода, разработанного Бенджамином и Хохбергом [30]. Дифференциальное выражение рассчитывали путем сравнения данных экспрессии из экспонированного эксперимента с соответствующим контрольным экспериментом. Таким образом, эксперименты с экспонированной клеткой сравнивали с экспериментами с необлученной клеткой при том же времени воздействия, и экспонированные полевые эксперименты сравнивали с необлученными полевыми экспериментами с соответствующим временем воздействия.
Количественная оценка экспрессии генов ключевых белков
Используя случайные гексамерные праймеры, 2 мкг тотальной РНК ретранскрибировали с помощью набора для синтеза кДНК первой цепи RevertAid H Minus (Thermo Scientific). На основании результатов колориметрического микрочипа были отобраны некоторые гены, и уровни их экспрессии были количественно определены с помощью qPCR. Праймеры для 10 референсных генов и выбор целевых генов на основе скрининга колориметрического массива (таблица S2) были использованы из литературы или были разработаны заново с помощью Primer3 (http: // www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/) с настройками по умолчанию.
Для каждой пары праймеров оценки эффективности амплификации были получены из стандартной кривой, построенной из серийных разведений объединенной кДНК (1 ×, 10 ×, 10 2 ×, 10 3 ×, 10 4 × и 10 5 × разведений). Значения среднего цикла количественной оценки (Cq) каждого десятикратного разведения наносили на график против логарифма объединенного коэффициента разведения кДНК. Были использованы только наборы праймеров, которые амплифицировались с эффективностью от 80 до 120%, рассчитанной по формуле эффективность (E) = -1 + 10 (-1 / наклон) , чтобы уменьшить любую ошибку из-за различной эффективности амплификации в сборе данных Cq.
Для анализов RT-qPCR использовали Platinum® SYBR® Green qPCR Supermix-UDG (Live Technologies). Каждые 15 мкл реакционной смеси состояли из 7,5 мкл мастер-смеси, 0,2 мкМ прямого и 0,2 мкМ обратного праймера (Integrated DNA Technologies) и 0,2 мкл матрицы кДНК с использованием системы обнаружения ПЦР в реальном времени CFX96 (Bio-Rad). Программа ПЦР включает этап активации продолжительностью 1 мин при 95 ° C и 40 циклов комбинированной денатурации (15 с при 95 ° C) и отжига (30 с при 60 ° C). В конце этой программы создается кривая плавления путем измерения флуоресценции после каждого повышения температуры до 0.5 ° C в течение 5 секунд в диапазоне от 65 ° C до 95 ° C, чтобы проверить наличие желаемого ампликона. Все реакции проводили в трех экземплярах. Контроли без матрицы, содержащие воду, обработанную DEPC, включали в каждый цикл, а контроли без RT выполняли для всех образцов. Для количественной оценки выбранных генов-мишеней с помощью qPCR в эксперимент были включены четыре биологических повтора из каждой группы (C0, C5, C200, F0, F5 и F200).
Стабильность контрольного генабыла проанализирована с помощью алгоритма geNorm PLUS в среде qBase PLUS (Biogazelle NV) с настройками по умолчанию [31].Программа geNorm генерирует показатель стабильности (значение M) для каждого гена, позволяя ранжировать их в соответствии со стабильностью их экспрессии (меньшее значение указывает на повышенную стабильность гена в разных выборках). Он также генерирует показатель попарной стабильности (v), чтобы определить преимущество добавления дополнительных контрольных генов для нормализации.
Дифференциальная экспрессия генов 15 различных генов-мишеней, генов детоксикации и иммунитета определялась с помощью кПЦР. Праймеры, используемые для этих различных генов, приведены в таблице S2.Статистический анализ дифференциальной экспрессии проводили с использованием qBase PLUS с помощью однофакторного дисперсионного анализа. Применялась двусторонняя значимость и поправка на множественное тестирование.
Результаты
Выживание взрослых пчел в клетках и развитие семьи
Медоносные пчелы в клетках, обработанных 5 и 200 частями на миллиард имидаклоприда, имели такую же выживаемость, как и необработанные медоносные пчелы (рис. 1), подтверждая, что обе концентрации были сублетальными. Однако при оценке развития колонии с точки зрения количества клеток расплода и взрослых пчел в полевых условиях наблюдалась иная картина, где были обнаружены значительные различия между группами, подвергавшимися обработке (рис. 2).В частности, несмотря на то, что все группы начали с одинаковым количеством выводковых клеток, через 20 дней их выводок оставался равным, но через 40 дней в группах F5 и F200 выращивалось значительно меньше выводков (план повторных измерений, многомерные тесты, «популяция» x взаимодействие «лечение»: лямбда Уилкса F. = 7,520, P <0,001; фиг. 2A). Популяция взрослых пчел показала сопоставимые закономерности. Количество взрослых пчел во всех группах было одинаковым после 20 дней воздействия имидаклоприда. Однако после 40 дней воздействия группа F200 увеличилась только на 18% по сравнению со 150% в контрольных колониях и 104% в колониях F5 (повторный план измерений, многомерные тесты, появилось взаимодействие «популяция x» лечение »: лямбда Уилкса. Ф.= 10,537, P <0,001; Рис 2B).
Рис. 1. Кривая выживаемости медоносных пчел в клеточном эксперименте.
Кривая выживаемости медоносных пчел в клеточном эксперименте в течение 20 дней. C0: клеточный эксперимент с необработанными медоносными пчелами; C5: клеточный эксперимент с медоносными пчелами, обработанными 5 частями на миллиард имидаклоприда; C200: клеточный эксперимент с медоносными пчелами, обработанными имидаклопридом 200 частей на миллиард (в среднем пчелы в 3 клетках на обработку).
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0171529.g001
Рис. 2. Динамика численности колонии.
Различия в выводке колонии и популяции после 20 и 40 дней обработки имидаклопридом в полевых условиях. Различное количество * и разные буквы над полосами обозначают существенные различия между группами. F0: полевой эксперимент не проводился; F5: полевой эксперимент, обработанный 5 частями на миллиард имидаклоприда; F200: полевой эксперимент, обработанный 200 частями на миллиард имидаклоприда (в среднем 10 колоний на обработку).
https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0171529.g002
Развитие гипофарингеальной железы
Диаметр ацинусов медоносных пчел в поле был меньше, чем у медоносных пчел, содержащихся в клетках (среднее значение ± SDEV: 155 ± 17 мкм для F0; и 166 ± 19 мкм для C0). Обработка медоносных пчел имидаклопридом уменьшала средний диаметр ацинусов гипофарингеальных желез как в лабораторных, так и в полевых экспериментах (рис. 3). Ацинусы медоносных пчел в клетках, обработанных 5 и 200 частями на миллиард, были значительно меньше, чем у необработанной группы (среднее значение ± SDEV: 141 ± 18 мкм для C5 и 139 ± 19 мкм для C200; однофакторный дисперсионный анализ ANOVA, F = 150.167; P <0,001). В лабораторных условиях не удалось зарегистрировать эффект реакции на дозу при уменьшении диаметра ацинусов (рис. 3А). Однако медоносные пчелы, обработанные имидаклопридом в одинаковых концентрациях в полевых условиях, реагировали по-разному; чем выше концентрация имидаклоприда, тем меньше диаметр ацинусов HPG (однофакторный дисперсионный анализ, F = 71,427; P <0,001). Медоносные пчелы, обработанные 5 частями на миллиард, имели промежуточный размер железы (среднее значение ± SDEV: 148 ± 19 мкм), в то время как размер железы пчел, обработанных имидаклопридом 200 частей на миллиард в полевых условиях, был сравним с таковым у обработанных медоносных пчел в клетках (среднее значение ± SDEV: 138 ± 16 мкм; рис. 3Б).
Рис. 3. Диаметр ацинусов HPG.
Диаграмма диаметра ацинусов (в микрометрах) различных экспериментальных групп. Разные буквы под столбиками обозначают значимые различия между группами, P <0,001 для каждого экспериментального дизайна. C0: эксперимент с клеткой не обрабатывали; C5: эксперимент с клеткой, обработанный 5 частями на миллиард; C200: эксперимент с клеткой, обработанный 200 частями на миллиард; F0: полевой эксперимент не проводился; F5: полевой эксперимент, обработанный 5 частями на миллиард; F200: полевой эксперимент, обработанный 200 частями на миллиард.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0171529.g003
Скрининг экспрессионных эффектов с помощью колориметрической матрицы
Профили экспрессии генов различных генов иммунитета и детоксикации показаны на рис. 4 и в таблице S3. В целом, лечение подавляет иммунный ответ медоносных пчел в клетках, но ответ в полевых условиях гораздо менее выражен. Пчелы, подвергшиеся воздействию более высоких концентраций, проявляют даже иммунную стимуляцию в более поздние моменты времени.То же самое можно сказать о профилях экспрессии различных генов детоксикации. Из этих профилей экспрессии ясно, что пчелы, подвергшиеся воздействию имидаклоприда, реагируют по-разному в зависимости от условий их содержания.
Рис. 4. Тепловая карта, показывающая профили относительной экспрессии генов, связанных с иммунитетом, и генов детоксикации.
C5 T1 и C5 T2: эксперимент в клетке, обработанный 5 частями на миллиард в течение 10 и 20 дней, соответственно, по сравнению с контролем в клетке через 10 и 20 дней; C200 T1 и C200 T2: эксперимент в клетке, обработанный 200 частями на миллиард в течение 10 и 20 дней, соответственно, по сравнению с контролем в клетке через 10 и 20 дней; F5 T1 и F5 T2 a: полевой эксперимент, обработанный 5 частями на миллиард в течение 10 и 20 дней, соответственно, по сравнению с контролем через 10 и 20 дней; F200 T1 и F200 T2: полевой эксперимент, обработанный 200 частями на миллиард в течение 10 и 20 дней, соответственно, по сравнению с полевым контролем через 10 и 20 дней.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0171529.g004
Количественная оценка эффектов экспрессии для выбранных генов
Для всех пар праймеров был проведен анализ кривой плавления для подтверждения специфической амплификации каждого гена и отсутствия видимого образования праймер-димер. Алгоритм geNorm использовался для определения лучших и наиболее надежных эталонных генов и ранжирования всех эталонных генов-кандидатов в соответствии с их значением стабильности для точной экспрессии генов.Принимая во внимание данные, полученные при различных обработках, ранжирование генов от наиболее к наименее стабильным: енолаза> GADPH> RPS18> RPL8> Mlc2> RPL13a> RPS5> actin> eIF3> MGST (S1 Рис.). Он также генерирует меру попарной стабильности для определения преимущества добавления дополнительных эталонных генов для нормализации. Попарную вариацию (Vn / Vn + 1) анализировали между факторами нормализации NFn и NFn + 1, чтобы определить оптимальное количество референсных генов, необходимых для надежной нормализации.Принимая во внимание значение отсечения 0,15 [32], наши данные предполагают, что для нормализации данных в исследовании экспрессии генов требуется минимум 3 гена (S1 Рис.).
Изменения экспрессии некоторых генов, кодирующих конечные иммунные продукты, вителлогенин и ферменты детоксикации, определяли с помощью кПЦР с ген-специфическими праймерами (перечислены в таблице S2). Образцы РНК, экстрагированные из четырех биологических повторов, использовали в качестве матрицы для количественной ПЦР. Согласно результатам 18 наборов кПЦР, включая эталонные гены (енолаза, GADPH и RPS18), тенденции паттернов экспрессии тестируемых генов из анализа микрочипов соответствовали уровням экспрессии с помощью кПЦР, хотя высота кратного изменения отличается из-за чувствительности каждого метода (рис. 5).Данные КПЦР подтвердили наблюдение, что пчелы, подвергшиеся воздействию имидаклоприда, содержащиеся в клетках, реагируют иначе, чем пчелы, подвергшиеся воздействию имидаклоприда в полевых условиях (рис. 6, таблица S4). Наши результаты показывают, что естественная среда обитания пчел (полевые условия) имеет решающее значение для индукции иммунного ответа и процесса детоксикации. В эксперименте с клеткой почти все протестированные гены, связанные с иммунитетом, были подавлены в обоих временных точках, за исключением дефенсина 1, который активизировался через 20 дней.В полевых условиях профиль экспрессии генов иммунитета был более сложным, и при воздействии 5 частей на миллиард имидаклоприда на пчел практически не оказывалось никакого эффекта. Однако воздействие более высоких концентраций, 200 частей на миллиард, усиливало иммунный ответ. Экспрессия вителлогенина подавлялась у медоносных пчел в клетках, в то время как она повышалась у пчел, подвергшихся воздействию имидаклоприда в полевых условиях.
Рис. 5. Сравнение данных микрочипа с результатами qRT-PCR.
На оси ординат приведены средние кратные изменения экспрессии мРНК AChE-1 для различных условий относительно соответствующего контроля.C5 T1 и C5 T2: эксперимент с клеткой, обработанный 5 частями на миллиард соответственно в течение 10 и 20 дней, по сравнению с экспериментом в клетке, в котором не лечили в течение соответственно 10 и 20 дней; C200 T1 и C200 T2: эксперимент с клеткой, обработанный 200 частями на миллиард соответственно в течение 10 и 20 дней, по сравнению с экспериментом в клетке, в котором не лечили в течение соответственно 10 и 20 дней; F5 T1 и F5 T: полевой эксперимент, обработанный 5 частями на миллиард соответственно в течение 10 и 20 дней, по сравнению с полевым экспериментом без обработки в течение соответственно 10 и 20 дней; F200 T1 и F200 T2: полевой эксперимент, обработанный 200 частями на миллиард соответственно в течение 10 и 20 дней по сравнению с полевым экспериментом без обработки в течение соответственно 10 и 20 дней.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0171529.g005
Рис. 6.
Профиль экспрессии различных генов, связанных с иммунитетом (панель A) и генов детоксикации (панель B). Средние кратные изменения экспрессии мРНК для различных условий относительно их соответствующего контроля приведены на оси ординат, которая представляет собой кратное изменение с преобразованием log2. * P <0,05, однофакторный дисперсионный анализ. C5 T1 и C5 T2: эксперимент с клеткой, обработанный 5 частями на миллиард соответственно в течение 10 и 20 дней, по сравнению с экспериментом в клетке, в котором не лечили в течение соответственно 10 и 20 дней; C200 T1 и C200 T2: эксперимент с клеткой, обработанный 200 частями на миллиард соответственно в течение 10 и 20 дней, по сравнению с экспериментом в клетке, в котором не лечили в течение соответственно 10 и 20 дней; F5 T1 и F5 T2 a: полевой эксперимент, обработанный 5 частями на миллиард соответственно в течение 10 и 20 дней, по сравнению с полевым экспериментом без обработки в течение соответственно 10 и 20 дней; F200 T1 и F200 T2: полевой эксперимент, обработанный 200 частями на миллиард соответственно в течение 10 и 20 дней по сравнению с полевым экспериментом без обработки в течение соответственно 10 и 20 дней.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0171529.g006
Уровень большинства детоксикационных ферментов снижается после 10-дневного воздействия имидаклоприда у медоносных пчел в клетках со значительным снижением уровня CYP9Q3, а через 20 дней некоторые гены AChE-2, CYP9Q1, CYP9Q3 и CYT P450 скорее повышали регуляцию, хотя эти изменения экспрессии не были значительными. Однако в полевых условиях активность большинства ферментов детоксикации повышалась через 20 дней при воздействии более высоких концентраций со значительным повышением уровня CYT P450 и CYP9Q3.Некоторые гены активировали через 10 дней, но на более низком уровне. Воздействие более низких концентраций имидаклоприда в полевых условиях практически не влияло на уровни экспрессии тестируемых генов детоксикации.
Обсуждение
Различные эксперименты документально подтвердили, что некоторые неоникотиноидные продукты токсичны для пчел. В зависимости от количества воздействия неоникотиноидов, воздействие на пчел может быть летальным или сублетальным [6, 33–39]. Неоникотиноиды также участвуют, наряду с фунгицидами, либо в угнетении иммунной системы пчел, либо в повышении их восприимчивости к биологическим инфекциям [40–42].Многие из этих исследований были выполнены в лабораторных или полуполевых условиях, но ни одного в открытом поле. Текущее исследование ясно показало, что специфическая реакция медоносной пчелы на лечение более сложна и зависит от нескольких факторов.
Влияние имидаклоприда на гипофарингеальную железу и развитие колоний
Размер HPG, измеренный как диаметр ацинусов, является показателем активности железы и отражает количество продуцируемых белков [43]. Различные виды обработки в лабораторных и полевых условиях по-разному влияли на размер HPG.Диаметр ацинусов контрольных групп (как в лаборатории, так и в полевых условиях) соответствовал значениям, определенным в более ранних исследованиях [11, 44–47]. В клетках размер желез пчел, подвергшихся воздействию имидаклоприда, был значительно меньше, чем в контрольной группе, но не зависел от введенной концентрации. Эффект имидаклоприда, даже при очень низкой концентрации, резко снижает HPG, что не позволяет дальнейшее снижение при более высоких концентрациях. Однако в полевых условиях уменьшение размера желез напрямую связано с воздействующей концентрацией, что может быть объяснено выражением реакций детоксикации медоносными пчелами в их естественной среде обитания.Очевидно, что наблюдаемый эффект стрессора в нашем исследовании был более очевидным и острым в лаборатории, чем в полевых условиях. Частично это можно объяснить тем фактом, что пчелы в поле также имеют доступ к незагрязненному корму, что привело к возможному разбавлению имидаклоприда в полевых условиях, что неприменимо в лабораторных исследованиях. Аналогичные результаты по дозовой реакции в полевых условиях были продемонстрированы в других исследованиях, касающихся развития колоний и вытеснения маток [9] или содержания белка в пчелах [48].Также возможно, что разбавление загрязнения будет более очевидным, когда фактор стресса применяется в низких концентрациях (например, 5 частей на миллиард), что соответствует наблюдению, что размер желез коррелирует с концентрацией воздействия в поле, а не в лаборатории.
В результате сокращения HPG производилось меньше расплода, что впоследствии привело к уменьшению популяции. Это связывает физиологический эффект на индивидуальном уровне с производственным эффектом на уровне колонии.Уменьшение размера железы происходит по той же схеме, что и уменьшение потомства / популяции, полученной позже, что подтверждает эту идею. В полевых условиях оптимальное количество маточного молочка, вырабатываемого железами HPG, необходимо для максимального развития расплода и популяции. Сублетальные концентрации пестицидов могут привести к коллапсу или сокращению колонии из-за отказа самонаведения у медоносных пчел [49], что вызывает более раннее превращение кормящих пчел в собирателей, чтобы компенсировать потерю. Размер желез уменьшается естественным образом, когда пчелы-кормилицы начинают добывать пищу [12], и, поскольку воздействие пестицидов также вызывает прямое сокращение желез [11], пестициды могут вызвать более раннее превращение медсестер в собирателей, что также приводит к сокращению продолжительности жизни [7, 11] .
Механизмы детоксикации при воздействии имидаклоприда
Предыдущее исследование, сравнивающее активность ацетилхолинэстеразы (AChE) у медоносных пчел, подвергшихся воздействию имидаклоприда, показало повышенную активность AChE как в полевых, так и в лабораторных экспериментах [50]. Это соответствует тенденциям недавнего исследования. Apis mellifera экспрессирует два изотипа AChE. В клетках только AChE-2 был ответственен за эту активность после 20 дней воздействия, в то время как в поле AChE-1 и AChE-2 были активированы.
Монооксигеназы цитохрома P450 (P450s) катализируют широкий спектр реакций, которые способствуют детоксикации природных и синтетических ксенобиотиков у насекомых [51–53]. Клада CYP6AS может метаболизировать вторичные соединения растений, содержащиеся в меде и продуктах улья [54]. Джонсон и др. [55] не показали индукции CYP6AS в ответ на токсическое воздействие, хотя эти результаты могут частично объясняться предоставленной диетой. Наши результаты показали, что CYP6AS3 активируется только в полевом эксперименте при воздействии более высоких концентраций.CYP6AS4 активизировался через 10 дней, когда пчелы были помещены в клетки и подвергались воздействию 200 частей на миллиард. Эти изменения не были значительными, но, исходя из этих тенденций, предполагается, что клады ферментов CYP6AS могут участвовать в детоксикации пестицидов у медоносных пчел. Однако транскриптомное исследование личинок, подвергшихся воздействию имидаклоприда, показало повышенные уровни транскрипции для кластера генов, кодирующих детоксифицирующие ферменты P450, включая гены CYP6AS и CYP9Q [56]. Тау-флувалинат увеличивал уровни транскрипта CYP9Q3, в то время как бифентрин увеличивал уровни транскрипта CYP9Q2 и подавлял транскрипт CYP9Q3 [57].Недавнее исследование показало, что все три изученных CYP9Q индуцировались в полевых условиях при воздействии 200 частей на миллиард в более поздние моменты времени. В условиях клетки только CYP9Q1 активировался после 20 дней воздействия. Поскольку ген CYP9Q3 и CYT P450 были значительно активированы в полевых условиях, эти ферменты, скорее всего, участвовали в детоксикации имидаклоприда в естественных условиях и могут использоваться в качестве индикаторов стресса при воздействии пестицидов. Стоит отметить, что CYP9Q3 значительно подавлялся в эксперименте с клеткой, тогда как в полевых условиях он повышался только после 20 дней воздействия.Это говорит о том, что пчелам нужно время, чтобы вызвать механизмы детоксикации. Причем реакция детоксикации зависела от жилищных условий. Это не первое исследование, в котором сообщается о сравнении лабораторных и полевых условий, в котором сделан вывод о том, что пчелы реагируют по-разному в зависимости от жилищных условий. У отдельных рабочих медоносных пчел, чьи семьи подверглись воздействию имидаклоприда, накопилось значительно увеличившееся количество спор Nosema после экспериментального заражения [58].
Иммунный ответ различен в условиях поля и клетки
Влияние воздействия имидаклоприда на иммунную компетентность пчел также было изучено, поскольку снижение иммунной компетентности может привести к повышенной восприимчивости к патогенным инфекциям, потенциально влияя на выживаемость человека и семьи [59]. Медоносные пчелы в клетках показали общее подавление иммунитета при воздействии имидаклоприда, за исключением дефенсина 1, уровень которого повышался в более поздние моменты времени. В наших полевых экспериментах большинство генов иммунитета показало повышенный уровень экспрессии при воздействии более высоких концентраций.Абаецин значительно повышается при воздействии имидаклоприда 200 частей на миллиард, в то время как тот же ген значительно снижается при воздействии 5 частей на миллиард после 20 дней воздействия. Эти результаты предполагают, что пчелы, подвергшиеся воздействию имидаклоприда в полевых условиях, способны вызывать иммунную реакцию, в то время как пчелы, содержащиеся в искусственных клетках, подавляют эту реакцию. Иммунный ответ в полевых условиях также может быть результатом разбавления контаминации или реакции детоксикации, которая была вызвана в полевых условиях, а не в клетках.Комбинация обеих реакций может привести к более устойчивой реакции медоносных пчел в полевых условиях. Абаецин также был активирован у личинок, подвергшихся воздействию имидаклоприда в полевых условиях [56].
Экспрессия вителлогенина была наиболее ярким примером различных реакционных способностей пчел при воздействии имидаклоприда в зависимости от условий их содержания. Вителлогенин подавлялся у пчел, подвергшихся воздействию имидаклоприда в клетках, в то время как в полевых условиях наблюдалась повышенная регуляция.Подавление вителлогенина в клетках соответствовало исследованию личинок, подвергшихся действию имидаклоприда, личинок in vitro [15]. Эта противоположная реакция может быть результатом индуцированных реакций детоксикации в полевых условиях.
В заключение, это исследование выявило различные контекстно-зависимые эффекты воздействия имидаклоприда на реакцию медоносных пчел. Эти данные вместе с возможным фактором «естественного разбавления» загрязнения очень важны. Исследователи должны учитывать эти результаты при планировании экспериментов по изучению влияния определенного фактора.Исследование также показало, что обобщение результатов, основанное на конкретном эксперименте, сложно и должно быть тщательно продумано, поскольку существует высокая сложность задействованных физиологических и поведенческих параметров, а также времени и продолжительности воздействия стрессора. Полученные результаты могут объяснить различия между лабораторными и полевыми исследованиями. Более того, некоторые гены, участвующие в детоксикации имидаклоприда и иммунном ответе, такие как абаецин, вителлогенин, CYP9Q3 и CYT P450, могут быть хорошими кандидатами для включения в тест профилирования экспрессии генов для скрининга воздействия пестицидов.
Вклад авторов
- Концептуализация: LDS FH FF IM GS DdG.
- курирование данных: LDS FH.
- Формальный анализ: LDS FH.
- Получение финансирования: DdG FH.
- Расследование: LDS FH PI AH KS.
- Методология: LDS FH DdG.
- Администрация проекта: FH DdG.
- Ресурсы: FH PI AH DdG.
- Надзор: DdG FH GS FF.
- Подтверждение: FH DdG.
- Визуализация: LDS FH.
- Написание — первоначальный черновик: LDS FH.
- Написание — просмотр и редактирование: LDS FF GS IM DdG KS.
Список литературы
- 1. Belzunces LP, Tchamitchian S, Brunet JL. Нервные эффекты инсектицидов на медоносную пчелу. Apidologie. 2012. 43 (3): 348–70.
- 2.Крупке Ч., Хант Г. Дж., Эйцер Б. Д., Андино Г., Гивен К. Множественные пути воздействия пестицидов на медоносных пчел, живущих вблизи сельскохозяйственных полей. Plos One. 2012; 7 (1).
- 3. Крессвелл Дж. Э., Пейдж С. Дж., Уйгун М. Б., Холмберг М., Ли Й., Уиллер Дж. Г. и др. Дифференциальная чувствительность медоносных пчел и шмелей к диетическому инсектициду (имидаклоприду). Зоология (Йена). 2012. 115 (6): 365–71.
- 4. Decourtye A, Devillers J, Cluzeau S, Charreton M, Pham-Delegue MH. Влияние имидаклоприда и дельтаметрина на ассоциативное обучение медоносных пчел в полуполевых и лабораторных условиях.Ecotoxicol Environ Saf. 2004. 57 (3): 410–9. pmid: 15041263
- 5. Blacquiere T, Smagghe G, van Gestel CA, Mommaerts V. Неоникотиноиды у пчел: обзор концентраций, побочных эффектов и оценки риска. Экотоксикология. 2012. 21 (4): 973–92. pmid: 22350105
- 6. Сандрок С., Танадини М., Танадини Л.Г., Фаузер-Мисслин А., Поттс С.Г., Нойманн П. Влияние хронического воздействия неоникотиноидов на производительность колонии медоносных пчел и вытеснение матки. PLoS One. 2014; 9 (8): e103592.pmid: 25084279
- 7. Хури Д.С., Майерскоу М.Р., Бэррон А.Б. Количественная модель динамики численности колонии медоносных пчел. PLoS One. 2011; 6 (4): e18491. pmid: 21533156
- 8. Уинстон М. Биология медоносной пчелы. В: Havard University Press, США. С. 281. 1987.
- 9. Ву-Смарт Дж., Спивак М. Сублетальные эффекты воздействия диетических неоникотиноидных инсектицидов на плодовитость маток медоносных пчел и развитие колоний. Научный доклад 2016; 6: 32108. pmid: 27562025
- 10.Skerl MIS, Gregorc A. Белки теплового шока и локализация гибели клеток in situ в гипофарингеальных железах медоносных пчел ( Apis mellifera carnica) после обработки имидаклопридом или кумафосом. Apidologie. 2010. 41 (1): 73–86.
- 11. Hatjina F, Papaefthimiou C, Charistos L, Dogaroglu T, Bouga M, Emmanouil C и др. Сублетальные дозы имидаклоприда уменьшали размер гипофарингеальных желез и дыхательный ритм медоносных пчел in vivo. Apidologie. 2013. 44 (4): 467–80.
- 12. Крайльсхайм К., Стольберг Э. Влияние диеты, возраста и состояния колонии на протеолитическую активность кишечника и размер гипофарингеальных желез у медоносной пчелы ( Apis mellifera L). J. Insect Physiol. 1989. 35 (8): 595–602.
- 13. Бонкристиани Х., Андервуд Р., Шварц Р., Эванс Дж. Д., Петтис Дж., Ван Энгельсдорп Д. Прямое влияние акарицидов на патогенные нагрузки и уровни экспрессии генов у медоносных пчел Apis mellifera . J. Insect Physiol.2012. 58 (5): 613–20. pmid: 22212860
- 14. Гарридо П.М., Антунес К., Мартин М., Поррини М.П., Зунино П., Эгуарас М.Дж. Экспрессия связанных с иммунитетом генов у медоносных пчел ( Apis mellifera ), подвергшихся воздействию синтетических акарицидов. J. Insect Physiol. 2013; 59 (1): 113–9. pmid: 23147024
- 15. Грегорк А., Эванс Дж. Д., Шарф М., Эллис Дж. Д.. Экспрессия гена у личинок медоносной пчелы ( Apis mellifera ), подвергшихся воздействию пестицидов и клещей Варроа (Varroa destructor). J. Insect Physiol.2012; 58 (8): 1042–9. pmid: 22497859
- 16. Aufauvre J, Misme-Aucouturier B, Vigues B, Texier C, Delbac F, Blot N. Анализ транскриптомов реакции медоносных пчел на Nosema ceranae и инсектициды. Plos One. 2014; 9 (3).
- 17. Аист А. Остатки 14C-NTN 33893 (имидаклоприд) в цветках подсолнечника (Helianthus annuus) после протравливания семян. Неопубликованный отчет № МР-550/99. 1999.
- 18. Бонматин JM, Moineau I, Charvet R, Fleche C, Colin ME, Bengsch ER.Метод LC / APCI-MS / MS для анализа имидаклоприда в почвах, растениях и пыльце. Anal Chem. 2003. 75 (9): 2027–2033. pmid: 12720336
- 19. Бонматин JM, Marchand PA, Charvet R, Moineau I, Bengsch ER, Colin ME. Количественная оценка поглощения имидаклоприда культурами кукурузы. J Agr Food Chem. 2005. 53 (13): 5336–41.
- 20. Chauzat MP, Martel AC, Cougoule N, Porta P, Lachaize J, Zeggane S и др. Оценка матриц пчелиных семей, Apis mellifera (Hymenoptera: Apidae) для мониторинга присутствия пестицидов в континентальной Франции.Environ Toxicol Chem. 2011; 30 (1): 103–11. pmid: 20853451
- 21. Таппаро А., Джорджо С., Марзаро М., Мартон Д., Сольда Л., Джиролами В. Экспресс-анализ неоникотиноидных инсектицидов в каплях потрошения проростков кукурузы, полученных из семян с покрытием. J Environ Monit. 2011. 13 (6): 1564–8. pmid: 21509402
- 22. Коста С., Бухлер Р., Берг С., Бьенковска М., Буга М., Бубало Д. и др. Общеевропейский эксперимент по оценке влияния взаимодействий генотип-окружающая среда на жизнеспособность и продуктивность семей медоносных пчел: план эксперимента и оценка признаков.J Apic Sci. 2012. 56 (1): 147–58.
- 23. Delaplane KS, van der Steen J, Guzman-Novoa E. Стандартные методы оценки силовых параметров колоний Apis mellifera . J Apicult Res. 2013; 52 (1).
- 24. Бергер Б., Кармарго Абдалла Ф. Запрограммированная гибель клеток во время дифференцировки яичников у маток Apis mellifera linne, 1758 (Hymenoptera, Apini). Braz J Morphol Sci. 2005; 22: 4.
- 25. Родс Дж., Сомеррвилл Д.Интродукция и ранняя продуктивность пчелиных маток. Отчет: Корпорация исследований и развития сельской промышленности, Сельское хозяйство Нового Южного Уэльса. 03.049. 2003.
- 26. Джонсон Р.М., Эванс Д.Д., Робинсон Г.Е., Беренбаум М.Р. Изменения в обилии транскриптов, связанные с нарушением коллапса колонии у медоносных пчел ( Apis mellifera ). Proc Natl Acad Sci U S. A. 2009; 106 (35): 14790–5. pmid: 19706391
- 27. Де Смет Л., Равоэт Дж., Венселирс Т., де Грааф, округ Колумбия. Экспрессия ключевых компонентов аппарата РНКи подавлена в Apis mellifera , которые страдают высокой вирусной инфекцией.Энтомологическая наука. 2016. Epub сентябрь 2016.
- 28. Ричи М.Э., Фипсон Б., Ву Д., Ху Ю., Лоу С.В., Ши В. и др. limma обеспечивает анализ дифференциальной экспрессии для секвенирования РНК и исследований на микрочипах. Nucleic Acids Res. 2015; 43 (7): e47. pmid: 25605792
- 29. Смит Г.К. Линейные модели и эмпирические байесовские методы для оценки дифференциальной экспрессии в экспериментах с микрочипами. Stat Appl Genet Mol Biol. 2004; 3: Статья 3.
- 30. Бенджамини Ю., Хохберг Ю.Контроль ложного обнаружения — практичный и эффективный подход к множественному тестированию. J Roy Stat Soc B Met. 1995. 57 (1): 289–300.
- 31. Hellemans J, Mortier G, De Paepe A, Speleman F, Vandesompele J. Система относительной количественной оценки qBase и программное обеспечение для управления и автоматического анализа количественных данных ПЦР в реальном времени. Genome Biol. 2007; 8 (2): R19. pmid: 17291332
- 32. Вандесомпеле Дж., Де Претер К., Паттин Ф., Поппе Б., Ван Рой Н., Де Паэпе А. и др.Точная нормализация количественных данных ОТ-ПЦР в реальном времени путем геометрического усреднения нескольких генов внутреннего контроля. Genome Biol. 2002; 3 (7): RESEARCH0034. pmid: 12184808
- 33. Гедес Р.Н., Смагге Г., Старк Дж., Десне Н. Стресс, вызванный пестицидами, у членистоногих-вредителей для оптимизированных комплексных программ борьбы с вредителями. Анну Рев Энтомол. 2016; 61: 43–62. pmid: 26473315
- 34. Уильямс Г.Р., Трокслер А., Ретшниг Г., Рот К., Янез О., Шатлер Д. и др. Неоникотиноидные пестициды серьезно влияют на маток медоносных пчел.Научный доклад 2015; 5: 14621. pmid: 26459072
- 35. Laycock I, Lenthall KM, Barratt AT, Cresswell JE. Влияние имидаклоприда, неоникотиноидного пестицида, на размножение рабочих шмелей ( Bombus terrestris ). Экотоксикология. 2012. 21 (7): 1937–45. pmid: 22614036
- 36. Блох Г., Франкой Т.М., Вахтель I, Паниц-Коэн Н., Фукс С., Мазар А. Промышленное пчеловодство в долине реки Иордан в библейские времена с анатолийскими медоносными пчелами. Proc Natl Acad Sci U S A.2010. 107 (25): 11240–4. pmid: 20534519
- 37. Крессвелл Дж. Э., Роберт FX, Флоранс Х., Смирнофф Н. Удаление проглоченного неоникотиноидного пестицида (имидаклоприд) у медоносных пчел ( Apis mellifera ) и шмелей ( Bombus terrestris ). Pest Manag Sci. 2014; 70 (2): 332–7. pmid: 23633150
- 38. Mommaerts V, Reynders S, Boulet J, Besard L, Sterk G, Smagghe G. Оценка риска побочных эффектов неоникотиноидов против шмелей с нарушением кормового поведения и без него.Экотоксикология. 2010. 19 (1): 207–15. pmid: 19757031
- 39. Уильямсон С.М., Райт Г.А. Воздействие нескольких холинергических пестицидов ухудшает обонятельное обучение и память у медоносных пчел. J Exp Biol. 2013; 216 (Pt 10): 1799–807. pmid: 23393272
- 40. Wu JY, Smart MD, Anelli CM, Sheppard WS. Медоносные пчелы ( Apis mellifera ), выращенные в сотах для расплода, содержащих высокие уровни остатков пестицидов, проявляют повышенную восприимчивость к инфекции Nosema (Microsporidia).J Invertebr Pathol. 2012; 109 (3): 326–9. pmid: 22285445
- 41. Петтис Дж. С., Лихтенберг Е. М., Андре М., Стицингер Дж., Роуз Р., Ваненгельсдорп Д. Опыление сельскохозяйственных культур подвергает медоносных пчел воздействию пестицидов, которые изменяют их восприимчивость к кишечному патогену Nosema ceranae. Plos One. 2013; 8 (7).
- 42. Сурьянараян С. Контроль баланса и сложность полевых исследований неоникотиноидов и здоровья медоносных пчел. Насекомые. 2013. 4 (1): 153–67. pmid: 26466800
- 43. Knecht D, Kaatz HH.Закономерности личиночной продукции гипофарингеальными железами у взрослых рабочих медоносных пчел. Apidologie. 1990. 21 (5): 457–68.
- 44. Ласс А., Крейлсхейм К. Влияние возраста и клетки на метаболизм белков, гипофарингеальные железы и трофаллактическое поведение медоносной пчелы ( Apis mellifera L). Насекомое Soc. 1996. 43 (4): 347–58.
- 45. Hrassnigg N, Crailsheim K. Влияние расплода на потребление пыльцы рабочих пчел ( Apis mellifera L.). J. Insect Physiol. 1998. 44 (5–6): 393–404. pmid: 12770157
- 46. Мэлоун Лос-Анджелес, Тодд Дж. Х., Берджесс EPJ, Кристеллер Дж. Т.. Развитие гипофарингеальных желез у взрослых медоносных пчел, которых кормили токсином Bt, биотин-связывающим белком и ингибитором протеазы. Apidologie. 2004. 35 (6): 655–64.
- 47. Десейн Дж., Биллен Дж. Возрастная морфология и ультраструктура гипофарингеальной железы Apis mellifera рабочих (Ymenoptera, Apidae). Apidologie. 2005. 36 (1): 49–57.
- 48. Уайльд Дж., Фразек Р., Сиуда М., Бак Б., Хатджина Ф., А. М.. Влияние сублетальных доз имидаклоприда на содержание белка и протеолитическую активность у медоносных пчел ( Apis mellifera L.). Журнал исследований пчеловодства. 2016.
- 49. Генри М., Бегин М., Рекье Ф., Роллин О., Оду Дж. Ф., Апинель П. и др. Обычный пестицид снижает успешность кормления и выживаемость медоносных пчел. Наука. 2012. 336 (6079): 348–50. pmid: 22461498
- 50.Бойли М., Саррасин Б., ДеБлуа С., Арас П., Шаньон М. Ацетилхолинэстераза медоносных пчел ( Apis mellifera ), подвергшихся воздействию неоникотиноидов, атразина и глифосата: лабораторные и полевые эксперименты. Environ Sci Pollut R. 2013; 20 (8): 5603–14.
- 51. Фейерайзен Р. Эволюция насекомых P450. Biochem Soc T. 2006; 34: 1252–5.
- 52. Фейерайзен Р. Ферменты насекомых P450. Анну Рев Энтомол. 1999; 44: 507–33. pmid: 99
- 53. Ли XC, Шулер MA, Беренбаум MR.Молекулярные механизмы метаболической устойчивости к синтетическим и природным ксенобиотикам. Анну Рев Энтомол. 2007; 52: 231–53. pmid: 16925478
- 54. Мао В., Рупасингхе С.Г., Джонсон Р.М., Зангерл А.Р., Шулер М.А., Беренбаум М.Р. Кверцетин-метаболизирующие ферменты CYP6AS опылителя Apis mellifera (Hymenoptera: Apidae). Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol. 2009. 154 (4): 427–34. pmid: 19737624
- 55. Джонсон Р.М., Мао В.Ф., Поллок Г.С., Ниу Г.Д., Шулер М.А., Беренбаум М.Р.Экологически приемлемые ксенобиотики индуцируют цитохром P450 в Apis mellifera . Plos One. 2012; 7 (2).
- 56. Дерека К., Блайт М.Дж., Малла С., Дженере Д.П., Гуффанти А., Паван П. и др. Кратковременное воздействие низких уровней инсектицида влияет на метаболические сети личинок медоносных пчел. Plos One. 2013; 8 (7).
- 57. Мао В.Ф., Шулер М.А., Беренбаум MR. CYP9Q-опосредованная детоксикация акарицидов у медоносных пчел ( Apis mellifera ). Proc Natl Acad Sci USA.2011. 108 (31): 12657–62. pmid: 21775671
- 58. Петтис Дж. С., ван Энгельсдорп Д., Джонсон Дж., Дивели Дж. Воздействие пестицидов на медоносных пчел приводит к повышению уровня кишечного патогена носема. Naturwissenschaften. 2012; 99 (2): 153–8. pmid: 22246149
- 59. Брандт А., Горенфло А., Зиде Р., Мейкснер М., Бухлер Р. Неоникотиноиды тиаклоприд, имидаклоприд и клотианидин влияют на иммунокомпетентность медоносных пчел ( Apis mellifera L.). J. Insect Physiol.2016; 86: 40–7. pmid: 26776096
Продольная оценка и снижение ответа антител при инфекции SARS-CoV-2
Резюме
Ответы антител (Ab) на SARS-CoV-2 могут быть обнаружены у большинства инфицированных людей через 10-15 дней после появления симптомов COVID-19 . Однако из-за недавнего появления этого вируса в человеческой популяции еще не известно, как долго эти ответы антител будут поддерживаться и будут ли они обеспечивать защиту от повторного заражения.Используя последовательные пробы сыворотки, собранные до 94 дней после появления симптомов (POS) у 65 лиц, инфицированных SARS-CoV-2, подтвержденных методом RT-qPCR, мы демонстрируем сероконверсию в> 95% случаев и ответы нейтрализующих антител (nAb) при взятии проб за пределами 8 дней поз. Мы демонстрируем, что величина ответа на nAb зависит от тяжести заболевания, но это не влияет на кинетику ответа на nAb. В течение периода наблюдения наблюдалось снижение титров nAb. В то время как некоторые люди с высоким ID пика 50 (> 10 000) сохраняли титры> 1000 в течение более 60 дней POS, у некоторых с более низким ID пика 50 титры приближались к исходному уровню в течение периода наблюдения.Аналогичное снижение титров nAb наблюдалось также в когорте серопозитивных медицинских работников из больниц Гая и Сент-Томаса. Мы предполагаем, что этот временный ответ на nAb является признаком как инфекции SARS-CoV-2, вызывающей низкую тяжесть заболевания, так и циркулирующих сезонных коронавирусов, которые связаны с простудными заболеваниями. Это исследование имеет важное значение при рассмотрении широко распространенных серологических тестов, защиты на антитела от повторного заражения SARS-CoV-2 и долговечности защиты от вакцины.
Заявление о конкурирующем интересе
Авторы заявили об отсутствии конкурирующего интереса.
Заявление о финансировании
King’s Together Rapid COVID-19 Call награды для MHM, KJD, SJDN и RMN. Премия MRC Discovery Award MC / PC / 15068 для SJDN, KJD и MHM. AWS и CG были поддержаны Партнерством MRC-KCL по подготовке докторантов в области биомедицинских наук (MR / N013700 / 1). Великобритания была поддержана Wellcome Trust (106223 / Z / 14 / Z для MHM). SA была поддержана Партнерством MRC-KCL по обучению докторантов в области промышленного сотрудничества в области биомедицинских наук в области науки и техники (iCASE) в партнерстве с Orchard Терапия (MR / R015643 / 1).NK был поддержан Советом по медицинским исследованиям (MR / S023747 / 1 — MHM). SP HDW и SJDN были поддержаны стипендиатом Wellcome Trust Senior Fellowship (WT098049AIA). Fondation Dormeur, Вадуц на финансирование оборудования (KJD). Разработка реагентов SARS-CoV-2 (RBD) была частично поддержана контрактом HHSN272201400008C Центров передового опыта по исследованиям и надзору за гриппом (CEIRS) NIAID.
Заявления авторов
Я подтверждаю, что были соблюдены все соответствующие этические принципы и получены все необходимые разрешения IRB и / или комитета по этике.
Да
Подробная информация об IRB / надзорном органе, предоставившем одобрение или исключение для описанного исследования, приводится ниже:
Работа была проведена в соответствии с Основой политики Великобритании в области исследований в области здравоохранения и социального обеспечения и одобрена Управлением по рискам и Комитет по обеспечению качества при фонде NHS Foundation Trust Гая и Сент-Томаса (GSTFT). Сыворотка была собрана у согласившихся медицинских работников с ускоренного одобрения отдела исследований и разработок GSTFT, отдела гигиены труда и медицинского директора.
Получено все необходимое согласие пациента / участника, а соответствующие институциональные формы заархивированы.
Да
Я понимаю, что все клинические испытания и любые другие проспективные интервенционные исследования должны быть зарегистрированы в одобренном ICMJE реестре, таком как ClinicalTrials.gov. Я подтверждаю, что любое такое исследование, указанное в рукописи, было зарегистрировано и предоставлен идентификатор регистрации испытания (примечание: при публикации проспективного исследования, зарегистрированного ретроспективно, просьба предоставить заявление в поле идентификатора испытания, объясняющее, почему исследование не было зарегистрировано заранее) .
Да
Я выполнил все соответствующие инструкции по составлению отчетов об исследованиях и загрузил соответствующие контрольные списки отчетов по исследованиям сети EQUATOR и другие соответствующие материалы в качестве дополнительных файлов, если применимо.
Да
Доступность данных
В этом исследовании использовались анонимные данные, которые не доступны для распространения за пределами принимающих организаций.
На месте: д-р Люстиг отвечает
В рамках нашей новой веб-функции On the Spot Dr.Роберт Люстиг, профессор клинической педиатрии и директор Центра оценки веса подростков и детей (WATCH), согласился ответить на ваши вопросы. Ниже мы опубликовали некоторые вопросы, которые вы задали доктору Люстигу, вместе с его ответами. Помните, что мы не сможем ответить на все вопросы или рассмотреть все комментарии. Ни мы, ни преподавательский состав не можем дать конкретный медицинский совет. Для получения медицинской консультации вам всегда следует обращаться к своему личному врачу. Общие вопросы В. Какие шаги должны предпринять наши избранные представители для решения проблемы токсичных процессов производства пищевых продуктов? A. Действительно хороший вопрос. К сожалению, хороших ответов нет. Я лично считаю, что пищевые продукты должны иметь стандарты питания (а не просто ящик с фактами о питании), которые должны контролироваться FDA, и следует исключать продукты, которые не соответствуют этим стандартам. Но вы не найдете слишком много политиков, готовых взяться за это. Более простой способ — запретить кукурузный сироп с высоким содержанием фруктозы.Это, конечно, поднимет цены на сахар, но это может быть не так уж и плохо. Он позволит получать сахар из многих продуктов питания и из наших школ, что значительно решит эту проблему. Ожирение следует рассматривать как болезнь, а не поведение, чтобы врачи могли получить компенсацию, а пациенты имели доступ к терапии. Здесь могут помочь политики. Также обязательно наличие врача, школы и образования родителей. Прямо сейчас педиатры не знают, что рассказывать матерям о кормлении грудных детей и детей, и у них нет времени.Это начало. Q. Уроки физического воспитания и питания (где учащиеся учились готовить из полезных ингредиентов) в значительной степени заброшены во многих американских школах. Повлияет ли их восстановление и оценка на описанные вами факторы ожирения? A. Конечно, это поможет. Одна из моих главных мантр — «ешьте углеводы с клетчаткой». Это связано с тем, что клетчатка снижает инсулиновую реакцию с помощью трех отдельных механизмов: 1) ускорение прохождения пищи через кишечник, чтобы быстрее получить сигнал сытости; 2) снижение скорости всасывания сахара из кишечника в кровоток; и 3) помощь кишечным бактериям в переваривании триглицеридов до короткоцепочечных жирных кислот, которые ослабляют инсулиновую реакцию.Но никому не нравится клетчатка (потому что мы были лишены ее из-за Big Food), и никто не хочет ждать, пока готовятся продукты с высоким содержанием клетчатки (например, приготовление коричневого риса занимает 45 минут, а белого риса — 20 минут). . Так что разумное приготовление пищи (больше клетчатки, меньше сахара, меньше насыщенных жиров), безусловно, может помочь. Сахар и подсластители Q. Доктор Люстиг, я слышал вас на KQED и был очень впечатлен информацией о сахаре. Мне интересно, являются ли более «натуральные» или менее обработанные формы сахара, такие как кленовый сироп или мед, более здоровым способом подсластить? Или они эквивалентны белому сахару? А. Белый сахар — это сахароза, которая наполовину состоит из глюкозы и наполовину из фруктозы (фруктовый сахар). Хотя глюкоза вызывает реакцию инсулина (и, следовательно, способствует отложению энергии в жир и увеличению веса сразу после еды), фруктоза — действительно плохой фактор. Фруктоза похожа на «алкоголь без кайфа». Он отравляет печень и делает ее инсулинорезистентной; Таким образом, ваша поджелудочная железа вырабатывает еще больше инсулина для правильной работы печени. Это все время заставляет энергию превращаться в жир. Кленовый сироп и мед — это просто глюкоза.Хотя они вырабатывают калорийность и инсулин (следовательно, вызывают ожирение), они не содержат фруктозы, которая может повредить печень и вызвать инсулинорезистентность. Так что, хотя они и не идеальны, они лучше, чем сахароза. Q. Вы говорили, что сок, даже «100% натуральный», не лучше газировки, потому что он содержит те же углеводы. Вы бы порекомендовали пить диетическую газировку в качестве альтернативы соку или обычной газировке? А как насчет кофе или чая, подслащенных сахаром (я имею в виду заваренный, а затем подслащенный, в отличие от чая в бутылках и кофейных напитков, которые, как я полагаю, так же вредны, как газировка и сок)? А. Диетические газированные напитки не содержат калорий, хотя некоторые подсластители могут вызывать небольшой инсулиновый ответ. Итак, в целом, диетические газированные напитки лучше, чем сахаристые, если вам нравится проникать в кровь химическими веществами. Подслащенный кофе или чай ничем не лучше газированных напитков, поскольку они по-прежнему вызывают реакцию инсулина, и они подслащены сахарозой (которая наполовину состоит из фруктозы, что вредно для вашей печени). Мой вопрос к вам: зачем вам вообще сладкие напитки? Что не так с водой? Человечество не употребляло сладких напитков до 1915 года, когда Coca-Cola стала национальной.А до этого у нас были вода и молоко, и у нас все было хорошо, спасибо. Сок был изобретен в 1950-х годах. В первой половине ХХ века у нас не было ожирения. Но мы наблюдаем астрономический рост продаж безалкогольных напитков и соков, в то время как эпидемия ожирения начала нарастать. Есть предположение, что чем раньше вы откроете ребенку «сладкое», тем больше вероятность, что он захочет этого позже. Нам нужно избавить Америку от ее «сладкой привычки». В воде есть все, что вам нужно, и ничего лишнего.И это дешево. Диета и гормоны Q. Уважаемый доктор Люстиг! У меня вопрос относительно диеты и гормонального баланса. Мне 33 года, и, к сожалению, у меня растительность на лице, равная мужской бороде. Я проконсультировалась со своим лечащим врачом, и он исключил кисту яичника. Он заявил, что это генетическое. Когда мне было чуть больше 20, я проконсультировалась с эндокринологом, который сказал, что мой уровень тестостерона на 20 пунктов выше обычного. Может ли что-то в моем рационе вызывать этот гормональный дисбаланс? Могу ли я что-нибудь сделать, чтобы исправить эту ситуацию, не принимая противозачаточные таблетки или другие лекарства? Если мне все же нужно будет принять лекарство, у какого препарата будет меньше всего побочных эффектов? Спасибо за ваше время. A. Не зная вашего анамнеза, физических и лабораторных анализов, я не могу точно диагностировать ваше состояние. Это определенно звучит как синдром поликистозных яичников (который может иметь или не иметь кисты яичников). Есть «тонкий» PCO и «толстый» PCO, но это не одно и то же. Но они, кажется, разделяют инсулинорезистентность как побуждающий фактор. Инсулинорезистентность в яичниках вызывает выработку слишком большого количества тестостерона и недостаточного количества эстрогена. Есть два метода лечения PCO.Один из них — метформин, который улучшает инсулинорезистентность и снижает уровень инсулина, а другой — противозачаточные таблетки, которые эффективно «усыпляют» яичник, поэтому он не производит больше тестостерона. Вам следует обсудить свое состояние с врачом. Ссылки по теме: Детское ожирение, вызванное «токсичной средой» западных диет, говорится в исследовании Пресс-релиз UCSF, 11 августа 2006 г. «Токсические диеты» способствуют детскому ожирению BBC News, 19 августа 2006 г. Диеты с высоким содержанием калорий и низким содержанием клетчатки приводят детей к ожирению Forbes , 22 августа 2006 г. О еде: наши пищевые привычки обрабатываются так же, как и наша еда Seattle Post-Intelligencer , 23 августа 2006 г.Амитраз и его метаболит регулируют сердечную функцию медоносных пчел и устойчивость к вирусным инфекциям.
% PDF-1.7 % 1 0 объект > эндобдж 6 0 obj > эндобдж 2 0 obj > транслировать 2018-02-21T19: 38: 04-08: 002018-02-21T19: 38: 04-08: 002018-02-21T19: 38: 04-08: 00Appligent AppendPDF Pro 5.5uuid: 5a73cd25-a7ff-11b2-0a00- 782dad000000uuid: 5a742aa9-a7ff-11b2-0a00-10cba910ff7fapplication / pdf
Является ли Гарнье» Без жестокости?
После разговора с Мишель Тью, генеральным директором Cruelty Free International, и Эмили Вестхед, директором по международным связям L’Oréal, мы углубились в процесс аккредитации, через который прошел Гарнье. Мы также коснулись Китая и будущих планов L’Oréal.
Я рад сообщить своим читателям, что Garnier — действительно безжалостный бренд и в настоящее время не продается в магазинах материкового Китая.Бренд также подтвердил, что у них нет планов расширяться в континентальном Китае в будущем, поскольку испытания на животных вызывают беспокойство. Теперь вы можете делать покупки у Garnier, зная, что это безжалостная сертифицированная компания Leaping Bunny.
В компании «Cruelty-Free Kitty» мы не позволяем компаниям отказываться от «безжалостных» маркетинговых заявлений, которые являются полуправдой. Garnier доступен более чем в 65 странах мира. Вы можете найти их в нескольких местных аптеках, где бы вы ни жили.Вот почему так важно знать все факты об их статусе безжалостных. Для некоторых безжалостных покупателей Garnier может быть единственным брендом по уходу за волосами, к которому они имеют доступ без жестокости.
Тщательный процесс утверждения прыгающего кролика
Leaping Bunny: процесс утверждения является строгим, независимо от того, идет ли утверждение небольшого независимого бренда или крупной компании, такой как Garnier. В случае с Гарнье процесс утверждения занял более двух лет, и пришлось проверить более 500 поставщиков.
После этого первоначального аудита компания Garnier будет регулярно проверяться, чтобы поддерживать свой статус Leaping Bunny и отображать логотип Leaping Bunny на продуктах, который демонстрирует, что компания делает все возможное, чтобы не допускать жестокого обращения и исключить тестирование на животных из своей цепочки поставок.
больше не продается в Китае
Как вы знаете, в компании «Cruelty-Free Kitty» мы не считаем, что бренды, которые продаются в материковом Китае, не относятся к жестокому обращению, даже если они обходят предпродажные испытания на животных, используя определенные лазейки.Эти бренды включают Herbal Essences, Dove, First Aid Beauty и Aussie. Хотя эти бренды одобрены PETA, они не соответствуют нашим критериям жестокости.
До 2017 года Garnier продавал небольшое количество товаров в Китае. С тех пор они полностью ушли из Китая, и товары, которые там продавались, больше не продаются.
На рынке нет продуктов Garnier, которые тестировались на животных с 2013 года. Таким образом, Garnier не подлежит ни предпродажным испытаниям на животных, ни пост-рыночным испытаниям на животных в Китае.
Официально: Гарнье не подвергается жестокому обращению!
Теперь вы можете делать покупки у Гарнье, зная, что этот бренд действительно свободен от жестокости. Они не продаются в континентальном Китае, что означает, что не используются лазейки, и они были проверены Leaping Bunny.
Garnier в настоящее время является одним из немногих недорогих брендов по уходу за волосами, которые можно найти в аптеке. Более того, это часто только бренд по уходу за волосами без жестокого обращения, к которому могут легко получить доступ многие покупатели по всему миру.
L’Oréal по-прежнему не свободна от жестокости
Несмотря на то, что сейчас Garnier не требует жестокого обращения, их материнская компания L’Oréal, к сожалению, все еще проводит испытания на животных там, где это требуется по закону. В то время как мы рекомендуем поддерживать все бренды без жестокости в Cruelty-Free Kitty, некоторые покупатели без жестокости предпочитают избегать любых брендов, принадлежащих материнской компании, которые не являются безжалостными. Если это вы, то теперь вы найдете Garnier в нашем списке безжалостных брендов, принадлежащих материнской компании, которая проводит испытания на животных.Garnier также будет четко обозначен как принадлежащий L’Oréal на странице своего бренда.
Собираются ли L’Oréal больше брендов, исключающих жестокость?
Нам не удалось получить подтверждение того, пойдут ли другие бренды, принадлежащие L’Oréal, по стопам Гарнье и не прибегнут к жестокости. В настоящее время L’Oréal владеет следующими брендами, не допускающими жестокого обращения: NYX, IT Cosmetics, Urban Decay и Carol’s Daughter.
L’Oréal также владеет следующими брендами, НЕ допускающими жестокого обращения: L’Oréal Paris, Maybelline, Lancôme, Yves Saint Laurent, Kiehl’s, Giorgio Armani, Shu Uemura, Biotherm, Keratase, La Roche-Posay, Vichy, SkinCeuticals, и более.
Недавно мы добавили Essie в наш список брендов из серой зоны.
В будущее без жестокости
Попытки таких брендов, как Garnier и CoverGirl, отказаться от жестокости, очень многообещающие. Получение сертификата Leaping Bunny — непростой процесс для этих крупных игроков, что доказывает, насколько важно отказаться от жестокости в 2021 году. Эти бренды устанавливают стандарт для всех других брендов на рынке. Если такие гиганты, как Garnier и CoverGirl, возьмут на себя обязательство не проводить испытания на животных, другие бренды могут (и должны) последовать их примеру.
Принадлежит ли Гарнье материнской компании, проводящей испытания на животных?
Garnier принадлежит L’Oréal, которая не придерживается принципов жестокого обращения. Если вы предпочитаете избегать брендов, принадлежащих компании, которая проводит испытания на животных, мы рекомендуем избегать Garnier.
Продается ли Гарнье там, где испытания на животных требуются по закону?
Нет, Garnier не продается там, где по закону проводятся испытания на животных.
Сертифицирован ли Гарнье какой-либо организацией без жестокого обращения?
Да, Гарнье сертифицирован Leaping Bunny & Peta.
Гарнье веганский?
Garnier не требует жестокого обращения, но не на 100% веганский, а это означает, что некоторые из их продуктов содержат ингредиенты животного происхождения.
Как вы определяете, что такие бренды, как Garnier, произведены без насилия сделаны с любовью?
Мы напрямую связываемся с брендами с нашими вопросами, чтобы узнать их полную политику тестирования на животных. Если бренды ответят на все наши вопросы и подтвердят, что испытания на животных не проводятся ни на каком этапе производства и за его пределами, они добавляются в наш список безжалостных действий.Все добавленные бренды подтвердили приведенную выше информацию.
% PDF-1.3 % verypdf.com 313 0 объект > эндобдж xref 313 298 0000000022 00000 н. 0000038369 00000 п. 0000038575 00000 п. 0000039006 00000 п. 0000039150 00000 п. 0000039401 00000 п. 0000047191 00000 п. 0000047279 00000 н. 0000047333 00000 п. 0000047421 00000 п. 0000047900 00000 н. 0000057389 00000 п. 0000058118 00000 п. 0000058157 00000 п. 0000060834 00000 п. 0000060883 00000 п. 0000060933 00000 п. 0000061012 00000 п. 0000062196 00000 п. 0000062264 00000 п. 0000062464 00000 п. 0000070049 00000 п. 0000071244 00000 п. 0000071326 00000 п. 0000071515 00000 п. 0000072573 00000 п. 0000072880 00000 п. 0000073664 00000 п. 0000075501 00000 п. 00000
00000 п. 0000091622 00000 н. 0000091698 00000 п. 0000091914 00000 п. 0000095281 00000 п. 0000095570 00000 п. 0000096627 00000 н. 0000098459 00000 п. 0000113237 00000 н. 0000113377 00000 н. 0000113517 00000 н. 0000113657 00000 н. 0000113797 00000 н. 0000113936 00000 н. 0000114074 00000 н. 0000114214 00000 н. 0000114354 00000 н. 0000114494 00000 н. 0000114634 00000 н. 0000114773 00000 н. 0000114911 00000 н. 0000115049 00000 н. 0000115187 00000 н. 0000115327 00000 н. 0000115467 00000 н. 0000115607 00000 н. 0000115747 00000 н. 0000115885 00000 н. 0000116023 00000 н. 0000116163 00000 п. 0000116303 00000 н. 0000116442 00000 н. 0000116580 00000 н. 0000116720 00000 н. 0000116860 00000 н. 0000116998 00000 н. 0000117136 00000 н. 0000117276 00000 н. 0000117416 00000 н. 0000117556 00000 н. 0000117696 00000 н. 0000117835 00000 н. 0000117973 00000 н. 0000118113 00000 н. 0000118253 00000 н. 0000118837 00000 н. 0000118890 00000 н. 0000119300 00000 н. 0000119388 00000 н. 0000119675 00000 н. 0000131370 00000 н. 0000132195 00000 н. 0000132251 00000 н. 0000133233 00000 н. 0000133274 00000 н. 0000150514 00000 н. 0000150650 00000 н. 0000151144 00000 н. 0000151185 00000 н. 0000167733 00000 н. 0000167862 00000 н. 0000168350 00000 н. 0000169338 00000 н. 0000169555 00000 н. 0000169946 00000 н. 0000170391 00000 п. 0000170816 00000 н. 0000174249 00000 н. 0000175441 00000 н. 0000175539 00000 н. 0000175748 00000 н. 0000184188 00000 н. 0000184494 00000 н. 0000185031 00000 н. 0000186873 00000 н. 0000202901 00000 н. 0000202961 00000 н. 0000203019 00000 н. 0000203086 00000 н. 0000203135 00000 н. 0000203204 00000 н. 0000203274 00000 н. 0000203413 00000 н. 0000203552 00000 н. 0000203692 00000 н. 0000203832 00000 н. 0000203972 00000 н. 0000204112 00000 н. 0000204252 00000 н. 0000204392 00000 н. 0000204532 00000 н. 0000204672 00000 н. 0000204812 00000 н. 0000204952 00000 н. 0000205860 00000 н. 0000205948 00000 н. 0000206347 00000 н. 0000220338 00000 н. 0000221582 00000 н. 0000221623 00000 н. 0000240933 00000 п. 0000240974 00000 н. 0000259652 00000 н. 0000260831 00000 н. 0000260899 00000 н. 0000261097 00000 н. 0000268226 00000 н. 0000268364 00000 н. 0000268502 00000 н. 0000268640 00000 н. 0000268778 00000 н. 0000268918 00000 н. 0000269058 00000 н. 0000269198 00000 н. 0000269338 00000 н. 0000269478 00000 н. 0000269618 00000 н. 0000269756 00000 н. 0000269894 00000 н. 0000270032 00000 н. 0000270170 00000 н. 0000270310 00000 п. 0000270450 00000 н. 0000270590 00000 н. 0000270730 00000 н. 0000270868 00000 н. 0000271006 00000 н. 0000271145 00000 н. 0000271283 00000 н. 0000271421 00000 н. 0000271559 00000 н. 0000271699 00000 н. 0000271839 00000 н. 0000272817 00000 н. 0000272905 00000 н. 0000273464 00000 н. 0000285010 00000 н. 0000286132 00000 н. 0000286173 00000 н. 0000304887 00000 н. 0000304946 00000 н. 0000305084 00000 н. 0000305222 00000 п. 0000305360 00000 н. 0000305498 00000 п. 0000305638 00000 н. 0000305778 00000 н. 0000305918 00000 н. 0000306058 00000 н. 0000306198 00000 п. 0000306338 00000 п. 0000306478 00000 н. 0000306618 00000 н. 0000306758 00000 н. 0000306898 00000 н. 0000307038 00000 п. 0000307178 00000 н. 0000307318 00000 н. 0000307458 00000 н. 0000307598 00000 н. 0000307738 00000 п. 0000307878 00000 н. 0000308018 00000 н. 0000308158 00000 н. 0000308298 00000 н. 0000308438 00000 п. 0000308578 00000 н. 0000308718 00000 н. 0000308858 00000 н. 0000308998 00000 н. 0000309138 00000 н. 0000309278 00000 н. 0000309418 00000 н. 0000309558 00000 п. 0000309698 00000 п. 0000309838 00000 п. 0000309978 00000 н. 0000310118 00000 п. 0000310258 00000 н. 0000310398 00000 н. 0000310538 00000 п. 0000310678 00000 н. 0000310818 00000 н. 0000310958 00000 п. 0000311098 00000 н. 0000311238 00000 н. 0000311378 00000 н. 0000312209 00000 н. 0000312297 00000 н. 0000312696 00000 н. 0000324148 00000 н. 0000324737 00000 н. 0000324877 00000 н. 0000325017 00000 н. 0000325157 00000 н. 0000325297 00000 н. 0000325437 00000 н. 0000325577 00000 н. 0000325717 00000 н. 0000325857 00000 н. 0000325997 00000 н. 0000326137 00000 н. 0000326277 00000 н. 0000326417 00000 н. 0000326557 00000 н. 0000326697 00000 н. 0000326837 00000 н. 0000326977 00000 н. 0000327117 00000 н. 0000327257 00000 н. 0000327397 00000 н. 0000327537 00000 н. 0000327677 00000 н. 0000327817 00000 н. 0000327957 00000 н. 0000328097 00000 н. 0000328235 00000 н. 0000328373 00000 н. 0000329048 00000 н. 0000329136 00000 н. 0000329315 00000 н. 0000338774 00000 н. 0000338961 00000 н. 0000339677 00000 н. 0000340386 00000 н. 0000340456 00000 н. 0000341659 00000 н. 0000341729 00000 н. 0000341951 00000 н. 0000362019 00000 н. 0000362308 00000 н. 0000363501 00000 н. 0000363575 00000 н. 0000363769 00000 н. 0000380994 00000 н. 0000381284 00000 н. 0000381797 00000 н. 0000383641 00000 п. 0000399541 00000 н. 0000399679 00000 н. 0000399817 00000 н. 0000399956 00000 н. 0000400095 00000 н. 0000400235 00000 п. 0000400375 00000 н. 0000400515 00000 н. 0000400655 00000 н. 0000400795 00000 н. 0000400935 00000 п. 0000401075 00000 н. 0000401215 00000 н. 0000401355 00000 н. 0000401495 00000 н.