Пирогова мед вуз: Абитуриенту

Содержание

Медицинский университет имени Н.И. Пирогова

Немало воды утекло со времени создания в 1903 году медицинского института. Вуз неоднократно переименовывался пока не стал Российским национальным исследовательским медицинским университетом при Минздраве, сохранив почетное имя.

Выданная в 2014 году лицензия позволяет вести трехступенчатый учебный процесс, выпуская бакалавров, специалистов и готовить кадры высочайшей медицинской квалификации, вести дополнительное образование как для детей, так и для взрослых.

На очной и очно-заочной формах вуз готовит работников здравоохранения по тринадцати направлениям начиная от терапии и стоматологии, завершая медицинской биофизикой, биохимией и кибернетикой. При необходимости ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова осуществляет занятия для интернов, ординаторов и научных специалистов в аспирантуре.

О вузе

Тип учебного заведения: Государственное
Основан в 1903 году

Лицензия на осуществление образовательной деятельности: № 1022 от 16 июня 2014.
Свидетельство о государственной аккредитации: от 19 марта 2013 года №0490.
Форма обучения: Очная
Вид обучения: Платное, Бесплатное

Вуз оснащен всем необходимым для ведения полноценной учебной деятельности. В аудиториях есть высококлассное мультимедийное и компьютерное оборудование, что позволяет вести наглядные занятия, проводить конференции, культурные и массовые мероприятия. Университет заключил договора с лечебно-профилактическими учреждениями и использует для образования своих студентов их мощности.

Библиотечный фонд, объемом около 955 тысяч экземпляров, расположен в отдельном здании с читальным залом, оборудованным беспроводным доступом в интернет и автоматизированными пользовательскими местами.

Студенты не остаются без внимания в свободное время. Для спортивных занятий имеется отдельный корпус, где работают секции единоборств, гимнастики, хореографии, калланетики, волейбола, футбола и прочих популярных видов атлетики. В университете работает собственный конференц-зал, медпункт, кабинеты массажа.

Общежитие одновременно принимает 3657 иногородних студентов. Тут работает столовая и выделены учебные классы. Пройти курс лечения в процессе учебы молодые люди могут не только в собственном медцентре, но и в Городской поликлинике.

Уровни и направления подготовки

Факультеты

Медико-биологический
Лечебный
Фармацевтический
Международный
Стоматологический
Педиатрический
Психолого-социальный

Специальности

31.05.01 Лечебное дело
31.05.02 Педиатрия
31.05.03 Стоматология
33.05.01 Фармация
30.05.01 Медицинская биохимия
30.05.02 Медицинская биофизика
30.05.03 Медицинская кибернетика
37.05.01 Клиническая психология

39.03.02 Социальная работа
06.03.01 Биология

Отзывы и комментарии

Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова Министерства здравоохранения РФ

Бесплатная консультация

Получить бесплатную 15 мин. консультацию об этом вузе

{{rerrors.FirstName}}
Ваше имя *
{{rerrors.Email}}
Email *

Телефон *
{{rerrors. Mobile}}
На каком языке Вы планируете учиться? {{rerrors.languagePlan}}
Какой у Вас сейчас уровень языка {{languagePlanSelected}}? {{rerrors.currentLevel}}
Когда Вы планируете начать обучение за рубежом? {{rerrors.startStudy}}

В какой стране Вы планируете учиться? {{rerrors.countryStudy}} Страна {{item.Title}}
На какую стоимость обучения Вы рассчитываете? {{rerrors.tuitionFee}}
Какой предмет Вы планируете изучать? {{rerrors.subjectStudy}} Предметы {{item.Title}}
Каковы Ваши текущие академические успехи? {{rerrors.academicGrade}}

Предоставляя свои данные, вы даёте согласие Education Index направлять вам информацию, в том числе о программах университетов, мероприятиях, финансировании учебы, студенческой жизни, проживании, карьере и о своих услугах. Education Index обязуется не продавать или передавать ваши данные для стороннего маркетинга, но может работать с партнерами для организации пересылки вам информации Pigorov Russian National Research Medical University. Вы можете отказаться от получения информации в любое время, используя ссылки, предоставляемые в сообщениях Education Index в соответствии с политикой конфиденциальности компании.
{{rerrors.Message}}
Жду звонка

Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова (РНИМУ им. Пирогова)

2010 г.

— Национальный исследовательский Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова (РНИМУ им. Н.И. Пирогова)

1991 г. — Российский государственный медицинский университет (РГМУ)

1957 г. — 2-й Московский ордена Ленина государственный медицинский институт им. Н.И. Пирогова (2-й МОЛГМИ)

1946 г. — 2-й Московский государственный медицинский институт им. И.В. Сталина (2-й МГМИ)

1930 г. — 2-й Московский государственный медицинский институт (2-й МГМИ)

1918 г. — Медицинский факультет «2-го Московского государственного университета»

1906 г. — Медицинское отделение «Московских высших женских курсов»

Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н. И. Пирогова

Поставьте оценку от 1 до 5. Нам важен Ваш голос

[Total: 0 Average: 0]

Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н. И. Пирогова

РНИМУ им. Пирогова можно без сомнения назвать одним из крупнейших медицинских высших учебных заведений России и Европы. ВУЗ занимается подготовкой врачей по абсолютно всем специальностям: стоматология, фармацевтика, медицинская техника. Наиболее приоритетными научными направлениями ВУЗа можно считать разработку средств диагностики и лечения различных болезней на основе стволовых и прогениторных клеток, медицинских наноматериалов, зондов и наноконтейнерных систем. Кредом учебного заведения является развитие персонализированной медицины.

Кроме того, ВУЗ принимает активное участие в реализации концепций непрерывного образования, предлагает образовательные услуги по подготовке абитуриентов на подготовительных курсах, обучение по программам бакалавриата, специалитета, подготовки кадров высшей квалификации, дополнительное профессиональное образование.

По программам высшего профессионального образования в ВУЗе каждый год получает образование свыше 12 тыс. студентов и свыше 10 тыс. чел. – по программам дополнительного профессионального образования.

Подробнее о РНИМУ им. Пирогова.

Ведение подготовки специалистов в медицинской отрасли в ВУЗе происходит на более чем 150 клинических базах различного профиля и во входящих в состав ВУЗа медицинских центрах.

У университета имеется современный симуляционный центр для того, чтобы проводить обучение по различным учебным программам.

Кроме того, РНИМУ им. Пирогова является единственным ВУЗом России, который получил категорию «Национальный исследовательский университет». Сегодня на базе ВУЗа занимаются созданием эталонного центра доклинических трансляционных исследований мирового уровня.

РНИМУ им. Пирогова- это головная организация Московского кластера медицинских технологий «Южный», который объединяет свыше 20 научных и производственных организаций для того, чтобы координировать усилия по развитию новых медицинских технологий, а также их внедрению в практику.

В ВУЗе также функционирует единая информационная образовательная среда, которая поддерживает образовательный процесс с применение современных дистанционных технологий.

РНИМУ им. Пирогова. Сегодняшние дни.

С 2014 г. ВУЗ занимается разработкой автоматизированной системы дополнительного профессионального образования, способная совмещать функции управления обучением и поддержки процесса обучения. Минздравом России ВУЗу было дано задание, в соответствии с которым с 2015 г. осуществляется методическая и информационная поддержка портала непрерывного медицинского и фармацевтического образования, главная функция которого — организация и учет образовательной активности всех специалистов в медицинской отрасли.

РНИМУ им. Н.И. Пирогова также ведется активная деятельность с абитуриентами. ВУЗом принимается участие в проектах Департамента образования г. Москвы и поддерживаются профильные классы в школах Московского региона, проводятся учебные занятия для школьников. В ВУЗе осуществляют свою деятельность и подготовительные курсы, школа дополнительного образования Хим*Био*Плюс. Стоит отдельно сказать о летней «Школе юного хирурга» которая собирает уже 2-й год свыше 2-х тыс. участников.

Национальный исследовательский университет.

РНИМУ имени Н.И. Пирогова по праву является единственным медицинским учебным заведением страны, которому присвоили категорию «Национальный исследовательский университет».

Студенты ВУЗа также принимают активное участие в научно-исследовательской работе. Студенты вовлекаются в научную деятельность посредством большого количества студенческих научных кружков, которые действуют по различным направлениям и объединены в студенческое научное общество. Силами последнего каждый год проходит Пироговская студенческая научная конференция, которая удостоилась статуса Международной.

На базе ВУЗа осуществляют свою деятельность более 10 диссертационных советов по защите докторских и кандидатских диссертаций по более чем 25 специальностям. Г.С. Ковтюх

Кафедра истории медицины и социально-гуманитарных наук Лечебного факультета ФГБОУВО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова » МЗ РФ, Москва

В лекции представлены основные хронологические вехи становления Российского национального исследовательского медицинского университета им. Н.И. Пирогова: организации Московских высших женских курсов, преобразования их во 2-й Московский государственный университет, создания на его базе самостоятельного медицинского высшего учебного заведения — 2-го Московского медицинского института. Приводятся сведения об организации работы вуза, создании важнейших факультетов, участии вуза в подготовке кадров в период Великой Отечественной войны и в послевоенное время. Отдельный раздел посвящен современной истории Российского национального исследовательского медицинского университета им. Н.И. Пирогова — с 1991 г. по настоящее время. Перечислены все руководители вуза начиная с прошлого века и до сегодняшнего дня, а также приведены имена выдающихся ученых, удостоенных высокой чести прочесть и опубликовать актовую речь на Актовом дне — традиционном знаменательном дне научных достижений вуза.

Ключевые слова: Московские высшие женские курсы, 2-й Московский медицинский институт, 2-й Московский ордена Ленина государственный медицинский институт, Российский государственный медицинский университет, Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова.

Крупнейшему образовательному и научному медицинскому центру, известному не только в нашей стране, но и за ее пределами, исполнилось 110 лет. В течение всего этого периода университет готовил кадры для здравоохранения, используя самые талантливые и творческие силы. Профессорско-преподавательский состав университета всегда шел в ногу с прогрессом, сочетая педагогическую и научно-исследовательскую деятельность, придавая университетскому образованию высокое значение, обеспечивая его широту, фундаментальность и компетентность.

В свое время один из великих хирургов, ученых и организаторов, имя которого носит наша alma mater, — Николай Иванович

Контактная информация: Ковтюх Галина Семеновна, [email protected]

Пирогов писал, что «отделить учебное от научного в университете нельзя». Основатель Берлинского университета Вильгельм фон Гумбольдт представлял университет как элитарное высшее учебное заведение, в котором обучение студентов и научные исследования находятся в неразрывном единстве при обеспечении свободы для обучаемого и обучающего со стороны государства. И этим принципам следовали наши педагоги. На сегодняшний день Российский национальный исследовательский медицинский университет (РНИМУ) им. Н.И. Пирогова признан крупнейшим не только образовательным, но и научным медицинским центром: подтверждением этого является его научно-исследовательский статус, у единственного среди медицинских университетов России.

Юбилей РНИМУ

Начало истории: Московские высшие женские курсы

На протяжении всей своей 110-летней истории университет осуществлял поступательное развитие, достойно выстоял в сложные времена, сохранил и приумножил традиции мировой и отечественной медицины и является лидером отечественного медицинского образования.

Начиналась история нашего университета на Царицынской площади (Девичьем поле). Именно здесь в 1906 г. при Московских высших женских курсах (МВЖК) было открыто медицинское отделение и по решению Московской городской думы был выделен земельный участок в безвозмездное пользование, где и началось строительство учебных корпусов. Первыми были анатомический театр и физико-химические корпуса. Позднее к анатомическому корпусу было пристроено здание Института судебной медицины. Аудиторные корпуса проектировал известный московский архитектор С.И. Соловьев.

Московские высшие женские курсы были первым учебным заведением, позволившим женщинам получать высшее образование. По существующему на тот момент законодательству о высшей школе МВЖК приравнивались к университету. Следует отметить, что учебный план на этих курсах был намного прогрессивнее, чем в казенных образовательных заведениях. Здесь преподавали крупные ученые, которые отводили достойное место в образовательном процессе естественным, историческим и биологическим дисциплинам, закладывая фундамент высшего медицинского образования. Слушательницы осваивали такие предметы, как история медицины с древнейших времен, гистология, бактериология, фармакология, терапия, детские болезни и другие клинические дисциплины. Преподавание осуществляли ведущие ученые того времени, профессора: гистолог М.М. Гарднер, химик Н.Д. Зелинский, микробио-

лог П.В. Циклинская, анатом Г.В. Власов, биохимик В.С. Гулевич, акушер-гинеколог Н.И. Побединский, терапевт Э.В. Готье, терапевт Д.Д. Плетнев, лучший скульптор муляжей, анатом М.А. Курбатов, педиатр А.А. Кисель, офтальмолог М.И. Авербах, основатель клиники кожных болезней А.И. Лянц, невропатолог Л.С. Минор, хирург С.Ф. Чиж, оториноларинголог Л.И. Свержевский и др. Преподавание велось на русском языке, изучение медицинских дисциплин проходило в московских городских больницах. По решению Московской городской думы университету было отведено шесть лучших больниц в одном районе, где и были основаны госпитальные, терапевтические и хирургические клиники. Среди этих клиник была Первая градская больница, которая по сей день является одной из основных баз университета. Здесь сохранился исторический облик аудитории, названной в честь одного из первых преподавателей МВЖК — терапевта Эдуарда Владимировича Готье.

По окончании курсов слушательницы получали соответствующее свидетельство и именовались «лекарями». Они получали звание «учительницы гимназий», но в то время оно еще не имело силы официального диплома. И только после того как в 1912 г. выпускницы курсов получили право держать экзамен в государственных испытательных комиссиях, им стали выдавать диплом о высшем медицинском образовании. В 1913 г. министр народного просвещения утвердил «Положение об оставлении слушательниц при Московских высших женских курсах». Оставляли отличниц по рекомендации преподавателей МВЖК. В течение 2 лет они занимались научной деятельностью, и их готовили к преподавательской работе.

В период Первой мировой войны всё было подчинено фронту, и МВЖК вписались в новую ситуацию: был сокращен период обучения, организовано чтение специальных курсов по медицине в условиях военного времени, открыты курсы

Лекции

для сестер милосердия. Слушательницы курсов уходили добровольцами на фронт, участвовали в проведении вакцинации населения, работали в военных госпиталях, оказывали психологическую помощь населению.

После победы Февральской революции в России, падения монархии и образования Временного правительства, в котором профессор МВЖК Александр Аполлоно-вич Мануйлов получил пост министра просвещения, положение учебного заведения изменилось. В августе 1917 г. Временное правительство объявило МВЖК государственным учебным заведением с подчинением министру народного просвещения, после чего курсы должны были работать по общему уставу российских университетов. Московские высшие женские курсы включали три факультета: историко-филологический, физико-математический и медицинский. Решался вопрос о преобразовании этого учебного заведения в московский женский университет. После Октябрьской революции в России и прихода к власти большевиков, образования советского правительства многие высшие учебные заведения прежней государственной системы прекратили свое существование.

Благодаря самоотверженности преподавателей и студентов, которые проникали в здание курсов и продолжали заниматься и вести научную работу даже тогда, когда они были закрыты, советская власть посчитала МВЖК перспективным учебным заведением и преобразовала их во 2-й Московский государственный университет, что позволило продолжать им свою успешную деятельность.

2-й Московский медицинский институт — 2-й Московский ордена Ленина государственный медицинский институт

им. Н.И. Пирогова: перспективы развития

18 апреля 1930 г. по приказу Нарком -проса 2-й Московский государственный

университет был реорганизован, и на его базе было создано три самостоятельных института, среди них 2-й Московский медицинский институт (2-й ММИ), который был передан в подчинение Наркомздрава. Ему были отданы Погодинский корпус и биологическая станция, а также оставлены больницы, в которых размещались клинические кафедры. Первым исполняющим обязанности директора был назначен выдающийся педагог, известный ученый, терапевт Е.И. Цукерштейн, он же исполнял обязанности декана лечебного факультета. Так, с 1930 г. началась самостоятельная история нашего университета, появился знаменитый 2-й ММИ. В последующие годы институтом руководили И.И. Рыбак, А.Б. Топчан, С.И. Миловидов, О.В. Кер-биков, М.Г. Сироткина, Ю.М. Лопухин.

В том же 1930 г. во 2-м ММИ впервые не только в России, но и в мировой практике был открыт факультет охраны материнства, младенчества и детства — ныне существующий педиатрический факультет. 2-й ММИ состоял из двух факультетов: лечебно-профилактического с хирургическим, терапевтическим и стоматологи -ческим отделениями и факультета охраны материнства, младенчества и детства. В тяжелые 1930-е годы институт активно развивался, осуществлял фундаментальную подготовку медицинских кадров, проводил научные исследования, участвовал в жизни страны, преодолевая все трудности того времени.

Потребность в педиатрах была настолько высокой, что на новый факультет охраны материнства, младенчества и детства принимали не только первокурсников, но и студентов-лечебников, огромную роль в этом сыграл декан факультета профессор Г.Б. Гецов. Базой факультета стала детская городская клиническая больница (ДГКБ), впоследствии ДГКБ № 13 им. Н.Ф. Филатова. Здесь была открыта первая в мировой практике кафедра детской хирургии, первым заведующим кафедрой был профессор К.Д. Есипов. На базе ДГКБ

Юбилей РНИМУ

№ 13 им. Н.Ф. Филатова по инициативе кафедры детской хирургии впоследствии была организована анестезиологическая и реанимационная служба. В 1973 г. здесь была создана служба антибиотикотера-пии. Кафедра находилась у истоков создания отделения рентгенохирургических методов диагностики и лечения, не имеющего аналогов в мировой практике. В 2003 г. на этой клинической базе была проведена уникальная операция по разъединению сиамских близнецов Зиты и Гиты Резаха-новых, родившихся с общими непарными органами тазовой области, обеим была сохранена жизнь.

На этой же клинической базе была создана кафедра раннего детского возраста, возглавляемая известным педиатром С.О. Дулицким. В 1937 г. кафедра была переименована в кафедру госпитальной педиатрии в связи с расширением программы. По инициативе кафедры впоследствии впервые в СССР были созданы отделение патологии недоношенного ребенка и отделение патологии новорожденных. Основные исследования, проводимые на этой кафедре, касались методов лечения и выхаживания недоношенных детей с экстремально низкой массой тела и внутриутробными вирусными заболеваниями, методов адаптации новорожден -ных в раннем неонатальном периоде и на первом году жизни в зависимости от состояния при рождении.

В 1932 г. 2-й ММИ был переименован во 2-й Московский государственный медицинский институт (2-й МГМИ), директором которого стал И. И. Рыбак. В том же году прошел первый в стране выпуск 121 врача-педиатра. Наркомздрав положительно оценил этот выпуск. И в этом же году в стенах нашего института был организован врачеб-но-физкультурный факультет, первым деканом которого был доцент М.М. Авербах. На этот факультет также стали переводить студентов с других факультетов, но просуществовал он менее 2 лет. В 1934 г. вышло постановление Центрального исполни —

тельного комитета СССР о реорганизации медицинских вузов, которое коснулось и нашего института. На базе факультета охраны материнства, младенчества и детства был сформирован педиатрический факультет, лечебно-профилактический факультет был переименован в лечебный, был создан новый теоретический факультет, который возглавил М.М. Авербах. Факультет был расформирован в 1938 г., М.М. Авербах с

1939 по 1947 г. был деканом лечебного факультета.

Огромную роль в становлении новых принципов преподавания в целом и патологической анатомии в частности сыграл И.В. Давыдовский, автор руководства «Патологическая анатомия и патогенез важнейших заболеваний человека». И.В. Давыдовский уделял большое внимание клинико-анатомическому сопоставлению, он выступил инициатором проведения клинико-анатомических конференций.

В 1939 г. по приказу наркома обороны в стенах нашего института был организован военный факультет, который готовил врачей для Военно-воздушных сил Красной армии. Начальником факультета был назначен военврач 1-го ранга Я.И. Акодус. Факультет был сформирован из лучших студентов медицинских вузов страны. Базой факультета являлась психофизиологическая лаборатория Военно-воздушных сил Рабоче-крестьянской Красной армии, работавшая на базе 1-го Коммунистического госпиталя (в настоящее время это Главный военный клинический госпиталь им. акад. Н.Н. Бурденко Министерства обороны РФ). Первый выпуск состоялся в

1940 г., военные врачи были направлены в войска Военно-воздушных сил. Факультет просуществовал 6 лет, подготовил 10 выпусков военных врачей и был расформирован в 1944 г. Это была основа медицинской службы нашей авиации в период Великой Отечественной войны.

Директор 2-го МГМИ и одновременно главный врач 1-й Городской клинической

Лекции

больницы профессор А.Б. Топчан занимался организацией обеспечения больниц врачами и эвакуацией института. Институт был эвакуирован в Омск, где его сотрудники совместно с сотрудниками Омского медицинского института участвовали в создании эвакогоспиталей. Продолжалось обучение студентов, в марте 1942 г. состоялся первый выпуск наших студентов в эвакуации. Высшая школа продолжала работать и чувствовала в этом поддержку руководства страны. В 1943 г. 2-й МГМИ был возвращен в Москву и продолжал подготовку медицинских кадров в военных условиях. Преподаватели и студенты отправлялись на фронт и внесли огромный вклад в возвращение солдат и офицеров в строй.

В 1944 г. при Наркомздраве СССР была создана Академия медицинских наук, среди действительных ее членов были утверждены профессора нашего института: А.И. Абрикосов, А.А. Богомолец, В.Н. Виноградов, В.А. Гиляровский, И.В. Давыдовский, Б.И. Збарский, В.Ф. Зеленин, И. Г. Руфанов, Л. С. Штерн, М.О. Гуревич, Е.К. Сепп.

После окончания Великой Отечественной войны, в 1946 г., по указу Президиума Верховного Совета СССР институту было присвоено имя И.В. Сталина, что являлось подтверждением его заслуг. Это было сложное время в истории нашего государства. Наш институт всегда был на передовой, участвовал в освоении целинных и залежных земель, за что в 1956 г. от имени Президиума Верховного Совета СССР был награжден медалью «За освоение целинных земель», вручена она была только в 1964 г.

Институт продолжал активно развивать науку. В 1953 г. была основана Центральная научно-исследовательская лаборатория, известная как ЦНИЛ, где проводились биомедицинские, гистологические, биохимические, радиологические исследования, из этой лаборатории вышло немало крупных ученых. В дальнейшем она превратилась

в крупнейший научно-исследовательскии центр, а на ее базе были организованы отдел трансплантации органов, лаборатория ангиологии, лаборатория микрохирургии глаза и др.

30 мая 1957 г. Указом Президиума Верховного Совета РСФСР 2-му МГМИ в связи с 50-летием со дня его основания было присвоено имя великого русского хирурга Николая Ивановича Пирогова. Это было значимое событие для нашего института, так как именно Н.И. Пирогов в высшей степени почитаем учеными-медиками. Он был не только блестящим врачом, естествоиспытателем, ученым, но и прекрасным педагогом, разработал принципы отечественного медицинского образования и воспитания, заложил основы гуманизации и гуманитаризации высшего и среднего медицинского образования. Всё это обязывало наш институт быть достойным носить имя Н.И. Пирогова.

Профессорско-преподавательский состав оправдывал надежды руководителей государства. В 1963 г. наш институт вновь лидировал и выступил первооткрывателем в создании новых медицинских специальностей: был открыт первый в России и в мире медико-биологический факультет для подготовки врачей-биохимиков и врачей-биофизиков, позднее была создана специализация по медицинской кибернетике. Упор делался на подготовку специалистов, владеющих новыми медицинскими технологиями, студенты получали фундаментальные знания в области биохимии, биофизики, гистологии, иммунологии и т. д. Факультет разместился в здании на Большой Пироговской улице, построенном в 1912 г. по проекту архитектора А.А. Остроградского. Деканом факультета стал выпускник лечебного факультета, заведующий кафедрой фармакологии профессор М.Ф. Меркулов. Факультет подготовил сотни высококвалифицированных специалистов, получивших признание не только в нашей стране. Он остается веду-

Юбилей РНИМУ

щим факультетом по подготовке научных медицинских кадров.

Достойно институт подошел и к своему 60-летию. Решением Совета министров РСФСР был учрежден и выпущен специальный нагрудный знак тиражом 8000 экз. Указом Президиума Верховного Совета СССР институт был награжден орденом Ленина, и 2-й МГМИ стал называться 2-й Московский ордена Ленина государственный медицинский институт (2-й МОЛГМИ) им. Н.И. Пирогова.

2-й МОЛГМИ не только расширял подготовку медицинских кадров разных специальностей, но и продвигал научные исследования, работал над такими важными проблемами медицины, как профилактика и ранняя диагностика атеросклеротиче-ских заболеваний сосудов и сердца, общая и медицинская генетика, аллергические заболевания, новые методы диагностики и терапии злокачественных новообразований, использование полимеров в медицине, были выполнены первые работы по пересадке органов и др.

Российский государственный медицинский университет -РНИМУ им. Н.И. Пирогова

В последние годы университетом руководили в качестве ректора и исполняющего обязанности ректора В.Н. Ярыгин, Г.И. Сторожаков, Н.Н. Володин, Н.В. Полунина, А.Г. Камкин. В 2015 г. ректором РНИМУ им. Н.И. Пирогова был избран академик РАН Сергей Анатольевич Лукьянов, крупный ученый с мировым именем, человек, прекрасно владеющий новыми технологиями управления, способный оптимизировать учебный, научный и воспитательный процесс.

В 1991 г. наш институт получил высокий статус университета и стал Российским государственным медицинским университетом (РГМУ). В стране наступила новая фаза исторического развития, произошел массовый переход от демократического управления к демократическому содержанию

образования и воспитания. Нужно было отстаивать свои позиции в конкурентном соперничестве с другими медицинскими вузами, переходить к новым методам обучения, используя новые информационные технологии, не только выстраивать новые взаимоотношения внутри университета, но и решать задачи, поставленные руководящими органами власти.

Так, например, возникла необходимость подготовки врачей для поликлинической службы в Москве. Для решения этой задачи в стенах нашего университета по инициативе Правительства Москвы был создан Московский факультет, просуществовавший более 10 лет и подготовивший сотни успешных специалистов для Москвы. На базе факультета были созданы новые кафедры, учитывающие специфику подготовки будущих специалистов для московской поликлинической службы.

Университет — это единство образования и воспитания, это формирование профессиональных и общекультурных компетенций, это умение правильно организовать учебу и умело применять знания на практике. Огромную роль в университете играет гуманизация и гуманитаризация медицинского образования, которая способствует формированию клинического мышления, логики постановки диагноза, воспитанию гражданина, патриота, умеющего защищать и отстаивать свои позиции. В связи с развитием этого направления значительно повысился статус гуманитарных и социально-экономических кафедр. В университете есть все возможности расширять этот потенциал.

Статус университета и необходимость подготовки кадров потребовали открытия новых факультетов. В 2001 г. в структуре университета появился факультет клинической психологии, расширивший затем свою специализацию направлением социальной работы. На сегодняшний день это один из достойных факультетов университета, который готовит клинических психологов и социальных работников.

Лекции

У истоков его создания стоял профессор М.Н. Гордеев.

В 2007—2008 годах было открыто еще два факультета — стоматологический и фармацевтический. В 2008 г. состоялся первый набор студентов-стоматологов. Необходимость подготовки фармацевтических кадров обусловила открытие в 2008 г. фармацевтического факультета, который продемонстрировал высокий уровень преподавания и проведения научных исследований.

Реорганизован факультет дополнительного профессионального образования, создаются новые кафедры, привлекаются ведущие ученые и организаторы здравоохранения, постдипломного образования.

В 2014 г. организован первый набор на международный факультет, работающий в рамках двойного диплома. Факультет готовит кадры в сотрудничестве с Миланским и Туринским университетами.

Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова сегодня — это более 10 тыс. студентов, аспирантов, интернов, ординаторов, более 2 тыс. преподавателей, ученых, научных сотрудников; это университетские клиники, институты, центры. Создаются учебные инновационные центры, новые кафедры, проводится оптимизация учебного процесса, реорганизация научных подразделений, РНИМУ им. Н.И. Пирогова одновременно участвует в двух кластерах: Московском кластере медицинских технологий «Южный» и Научно-образовательном медицинском клас тере «Восточно-Европейский».

В 2010 г. университет получил статус национального исследовательского медицинского университета и был реорганизован в РНИМУ им. Н.И. Пирогова. Этого высокого звания вуз был удостоен в связи с тем, что на протяжении многих лет своего существования всегда находился на передовой линии отечественной науки, являлся и является головным медицинским вузом по планированию и выполнению научных ис-

следований, организации помощи в проведении учебно-методической работы, создании образовательных стандартов и учебных планов.

Научные школы — хирургические, педиатрические, терапевтические, ревматологические, кардиологические, неврологические, офтальмологические, отори-ноларингологические, школы фармакологов, морфологов, гистологов, судебных медиков, организаторов здравоохранения, неонатологов, детских гематологов, инфекционистов, физиологов, — впервые возникшие в нашем вузе, сегодня известны и в России, и за рубежом. По многим из этих научных направлений созданы научно-исследовательские центры, выросли самостоятельные научно-исследовательские институты: НИИ ревматологии, НИИ урологии, НИИ физико-химической медицины, НИИ пульмонологии, Национальный научно-практический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева, НИИ инсульта и др.

Имена основателей научных школ нашего университета навсегда останутся в его истории, а прочитанные ими начиная с 1948 г. и изданные актовые речи составляют своеобразную антологию научных достижений ученых 2-го ММИ — 2-го МОЛГМИ — РГМУ — РНИМУ им. Н.И. Пирогова. Вот имена ученых, которые были удостоены чести выступить с актовой речью: Гамалея Н.Ф. (1948), Давыдовский И.В. (1949, 1960), Бакулев А.Н. (1951), Тимаков В.Д. (1952), Нестеров А.И. (1953, 1967), Багдасаров А.А. (1958), Тер-новский С.Д. (1959), Билибин А.Ф. (1963), Адо А.Д. (1968), Смольянинов В.М. (1969), Маят В.С. (1970), Лукомский П. Е. (1971), Гуляев А.В. (1972), Нисевич Н.И. (1973), Куприянов В.В. (1974), Лопаткин Н.А. (1975), Савельев В.С. (1976), Трофимов В.В. (1977), Исаков Ю.Ф. (1978), Кисляк Н.С. (1979), Косицкий Г.И. (1980), Бадалян Л.О. (1981), Волкова О.В. (1982), Нестеров А.П. (1983), Лопухин Ю.М. (1984), Владими-

Юбилей РНИМУ

ров Ю.А. (1985), Таболин В .А. (1986), Лисицын Ю.П. (1987), Татаринов Ю.С. (1988), Панцырев Ю.М. (1989), Пыц-кий В.И. (1990), Гусев Е.И. (1992), Сергеев П.В. (1993), Иванов В.И. (1994), Ми-хельсон В.А. (1995), Григорьев П.Я. (1996), Величковский Б.Т. (1997), Крюков В.Н. (1998), Люсов В.А. (1999), Чучалин А.Г. (2000), Романов Ю.А. (2001), Савельева Г.М. (2002), Гаспарян С.А. (2003), Пивоваров Ю.П. (2004), Шабалин В.Н. (2005),

Володин Н.Н. (2006), Румянцев А.Г. (2007), Порядин Г.В. (2008), Арчаков А.И. (2009), Чехонин В.П. (2010), Атьков О.Ю. (2011), Стародубов В.И. (2012), Учайкин В.Ф. (2013), Камкин А.Г. (2014), Лукьянов С.А. (2015), Богомильский М.Р. (2016).

С рекомендуемой литературой вы можете ознакомиться на нашем сайте www.atmosphere-ph.ru

110th Anniversary of the Russian National Research Medical University Named after N.I. Pirogov G.S. Kovtyukh

The article deals with the main steps of establishment of the Russian National Research Medical University named after N.I. Pirogov: Moscow Higher Women’s Courses, 2nd Moscow State University, and 2nd Moscow Medical Institute. The aspects of foundation of the main departments and education during and after Great Patriotic War are discussed. The article also contains data on the modern history of the Russian National Research Medical University named after N.I. Pirogov from 1991 until now. The names of all university leaders from the past century until now and all outstanding scientists honored to deliver declamations at speech days are provided. Key words: Moscow Higher Women’s Courses, 2nd Moscow Medical Institute, 2nd Moscow Order of Lenin State Medical Institute, Russian State Medical University, Russian National Research Medical University named after N.I. Pirogov.

XII Российская научно-практическая конференция с международным участием «Реабилитация и вторичная профилактика

в кардиологии»

Российское общество кардиосоматической реабилитации и вторичной профилактики (РосОКР)

Российское кардиологическое общество (РКО)

Российское научное медицинское общество терапевтов (РНМОТ)

Союз реабилитологов России (СРР)

ФГБУ «Государственный научно-исследовательский центр профилактической медицины» МЗ РФ

20-21 апреля 2017 г., Москва Информационное письмо

Уважаемые коллеги!

Приглашаем вас принять участие в объединенной XII Российской научно-практической конференции Российского общества кардиосоматической реабилитации и вторичной профилактики с международным участием «Реабилитация и вторичная профилактика в кардиологии», которая состоится 20-21 апреля 2017 г. в Москве.

Основная тематика Конференции:

• Достижения, нерешенные вопросы кардиореабилитации в России.

• Лечение и реабилитация больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями с сопутствующей патологией других органов.

• Вторичная профилактика при заболеваниях сердечно-сосудистой системы.

• Сочетанная реабилитация при кардиальной и сопутствующей соматической патологии.

• Медикаментозная терапия в кардиологической реабилитации и вторичной профилактике.

• Реабилитация больных после хирургических вмешательств в связи с заболеваниями сердечно-сосудистой системы.

• Реабилитация больных с заболеваниями сердечно-сосудистой системы на курортах и в санаториях.

• Патофизиологические аспекты физических нагрузок, физических тренировок у кардиальных и кардиосоматических больных.

• Методы диагностики и контроля в реабилитации.

Правила оформления тезисов

1. Тезисы принимаются оргкомитетом до 1 марта 2017 г

2. Объем тезисов — 1 страница (А4), поля сверху, снизу, справа и слева — 3 см. Пожалуйста, используйте шрифт Times New Roman 12 пт., через один интервал. Не допускается размещение в тексте таблиц и рисунков. Тезисы будут печататься факсимильно, без повторного набора и не будут подвергнуты редакторской правке.

3. В заглавии должны быть указаны: название (заглавными буквами), с новой строки — фамилия и инициалы авторов, без указания научных степеней и титулов; с новой строки — учреждение, город. Далее содержание тезиса: цель, методы исследования, полученные результаты, заключение. Не следует приводить ссылки на литературу. В названии тезисов не допускаются сокращения.

4. Тезисы принимаются только в электронном виде в формате Word по e-mail: [email protected] (Родзинская Елена Михайловна; обязательно следует указать адрес для переписки, телефон, факс, электронный адрес). Внимание!

Тезисы должны быть получены оргкомитетом до 1 марта 2017 г

Заявку на бронирование мест в гостинице направлять по адресу оргкомитета вед. науч. сотр. Красницкому Владимиру Борисовичу (тел.: 8 (499) 553-66-38; e-mail: [email protected]).

Заявки на выступления направлять до 1 февраля 2017 г по адресу оргкомитета зам. председателя Конференции докт. мед. наук, профессору Бубновой Марине Геннадьевне (факс: (495) 624-01-15; e-mail: [email protected]) или докт. мед. наук, профессоруАроновуДавидуМееровичу (e-mail: [email protected]). Участникам Конференции выдается сертификат НМО (непрерывное медицинское образование) с образовательными кредитами.

Адрес оргкомитета: 101000 Москва, Петроверигский пер., 10, стр. 3, ФГБУ «Государственный научно-исследовательский центр профилактической медицины» МЗ РФ, оргкомитет научно-практической конференции. Тел./факс: (495) 624-01-15, (499) 553-67-52 E-mail: [email protected] (проф. Бубнова М.Г.) [email protected] (проф. Аронов Д.М.) [email protected] (науч. сотр. Родзинская Е.М.). Адрес проведения Конференции: Центральный дом ученых РАН, Москва, ул. Пречистенка, д. 16. Проезд: ст. метро «Кропоткинская», далее пешком (700 м) или троллейбус № 15 до остановки «Дом ученых». Информация о Конференции размещена на сайте РосОКР http://www.rosokr.ru

Оргкомитет

РНИМУ им. Н.И. Пирогова и Первый МГМУ им. И.М. Сеченова вошли в рейтинг лучших университетов мира по версии журнала THE

Фото: medvestnik.ru

Британский журнал Times Higher Education (THE) 2 сентября представил результаты рейтинга лучших университетов мира World University Rankings 2021, в который вошли 1 527 вузов из 93 стран. В рейтинг попали два медицинских вуза из России – Российский национальный исследовательский университет им. Н.И. Пирогова и Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова.

Оба медвуза в общем зачете оказались в группе «1 000+». Всего в международный рейтинг вошли 48 российских университетов, первым из которых стал МГУ им. М.В. Ломоносова (174 место в общем зачете).

В апреле 2020 года THE также опубликовал свой очередной рэнкинг University Impact Ranking 2020. Тогда оценивались более 620 вузов из разных стран. В категории Good health and well-being («здоровье и благополучие») первое место среди российских вузов также занял РНИМУ им. Н.И. Пирогова (65 место в общем зачете).

Медвузы оценивались по нескольким показателям, включая проводимые исследования в области здравоохранения, поддержку связанных с медициной профессий, продвижение здорового образа жизни, донорское движение, акции помощи и различные мероприятия по профилактике охраны здоровья.

На 95-м месте оказался Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И.П. Павлова. В группу «101–200» вошли еще четыре медвуза – Казанский ГМУ, Рязанский ГМУ, Самарский ГМУ и Первый МГМУ им. И.М. Сеченова.

В аналогичном рейтинге за 2019 году РНИМУ им. Н.И. Пирогова занял 43 место в категории «здоровье и благополучие», однако тогда оценивались не 620 вузов, а почти на 200 университетов меньше. Во всех категориях, включая «качество обучения», из российских медвузов тогда оказался только Рязанский ГМУ.

Источник

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

РНИМУ – первый международный вуз в России

Министерство Здравоохранения Российской Федерации и Министерство иностранных дел Российской Федерации 9 декабря 2014 года провели Торжественное заседание, посвященное включению РНИМУ им Н.И. Пирогова в европейскую образовательную систему и заключению договоров по программам двух дипломов с университетами Итальянской республики: Туринским и Миланским.

Мероприятие прошло в Культурном центре Главного управления по обслуживанию дипломатического корпуса Министерства иностранных дел Российской Федерации.Российские и зарубежные официальные лица высоко оценили достижения российского вуза, сумевшего на равных войти в большую и престижную среду лучших университетов мира. По общему убеждению это – безусловный прорыв в сфере науки, образования и дипломатии.

Российский национальный исследовательский университет им. Н.И. Пирогова – признанный флагман российской медицинской науки и образования, принят в число европейских университетов, отбор студентов в которые производится по системе IMAT (International Medical Admission Test). Сдав экзамен в РНИМУ и начав обучение, студент может, в результате, получить два диплома – российский и европейский. Около 30 европейских университетов принимают студентов по результатам IMAT. Тест был разработан в Кембриджском университете.

ректор РНИМУ им Н.И. Пирогова Андрею Глебовичу Камкину (на фото справа)

РНИМУ имени Н.И. Пирогова ведет активную международную деятельность в сфере образования, в настоящее время ведутся переговоры с венским техническим университетом, с берлинским университетом Гумбольдта, с университетом Альтенберга в Германии и университетом в Восточной Финляндии. На базе университета создан медицинский кластер, РНИМУ является партнером Биомедицинского кластера Фонда «Сколково».

«РНИМУ им. Н.И. Пирогова – это единственный в нашей стране медицинский национальный исследовательский Университет. Это ведущий медицинский вуз страны, которому предначертано интенсивное развитие как мощного международного научно-образовательного медицинского кластера» – министр здравоохранения Российской Федерации В.И. Скворцова.

Российский национальный исследовательский медовый университет им. Пирогова. Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Пирогова (беру их. Пирогова). Высшее

Один из самых уважаемых исследовательских университетов страны — Российский государственный медицинский университет. Его история началась в 1906 году, когда прогрессивная общественность повлияла на решение властей об организации московских женских курсов. Спустя некоторое время курсы были преобразованы, и начал работу 2-й МГУ, лечебный факультет которого в 1930 году стал базой для создания медицинского института, в 1956 году ему было присвоено имя великого врача Н.И. Пирогов.

Новое время

Поскольку Российский государственный медицинский университет долгое время играл ведущую роль как научный, медицинский, образовательный, методический и медицинский центр страны, в ноябре 1991 года медицинский институт стал университетом, а в 2010 году единственным университетом. этого профиля получил статус национального исследовательского университета.

В 2011 году снова произошло переименование — в связи с получением нового статуса. Теперь он называется Российский национальный исследовательский университет имени Н.И. Пирогов.

Музей

Все, что происходило с этим учебным заведением за столь долгое время (более века!), Подробно можно узнать в университетском музее, который был организован в 1981 году. Посещение Исторического музея РНИМУ — это интересное времяпрепровождение, студенты и абитуриенты охотно изучают экспозицию, посвященную разным периодам существования вуза. Музей расположен в главном корпусе вуза по адресу: г. Москва, улица Островитянова, д.1, на четвертом этаже.

Это прослеживается ко всей истории отечественной медицины и даже ко всему развитию страны, ведь РГМУ всю свою деятельность разделял превратности жизни, невзгоды, войны, революции, участвовал в одних и тех же достижениях и терпел те же потери, разделяющие жизнь со всей страной в своих проявлениях, которые очень кратко будут описаны ниже. В музее так много исторических подробностей очень долгой жизни университета, что даже книги им мало.

Вехи

В мае далекого 1872 года граф Д. А. Толстой, будучи министром просвещения, дал согласие на открытие Московских высших женских курсов. Это частное учреждение одобрено специальным положением. Так, в здании мужской гимназии на Волхонке 1 ноября состоялись первые в стране женские курсы профессора В.И. Гериер были торжественно открыты. На первом году обучения было не менее семидесяти студентов, а к 1885 году их число выросло до двухсот пятидесяти.

Первоначально студентки учились два года, но в 1879 году был написан новый устав, и занятия продолжались еще год. В центре внимания были московские курсы, из которых впоследствии вырос Российский государственный медицинский университет, историко-филологический, студентки изучали универсальную и русскую историю, мировую и русскую литературу, историю цивилизации и историю искусства. Обязательные в 1879 г. физика, математика, астрономия и гигиена были отменены, а в 1881 г. появился новый предмет — история философии.

Медицина

Курсы работали на Волхонке до 1873 года, затем переехали в Музей прикладных знаний на Пречистенке, а в 1877 году стали учиться в здании, построенном специально под политехнический музей. И только в 1906 году появился очередной устав Министерства жилищно-коммунального хозяйства, где закрепилось открытие нового факультета — медицинского. К тому времени к физико-математическим уже добавились первые — историко-философские.

Теперь курсы действительно стали той базой, на которой был построен РГМУ. В сентябре 1906 г. состоялась первая лекция на новом факультете, а в 1908 г. он открылся для студентов-медиков, который впоследствии стал анатомическим корпусом 2-го Московского медицинского института. Весной 1912 года уже состоялся самый первый в России выпуск первых женщин-врачей. Пока их было немного — не более двухсот человек.

После революции

В октябре 1918 года Коллегия Народного комиссариата просвещения учредила преобразование высших женских курсов во 2-й государственный университет — смешанное учебное заведение.В новоиспеченном университете еще три факультета, такие же, но через два года на медицинском факультете уже открылось научное общество. В 1921 году студенты-медики организовали комиссию по борьбе с детской безнадзорностью и борьбе с голодом, а также на собственные средства открыли детский дом.

В июле 1926 г. на медицинском факультете уже состоялось собрание по отбору первых аспирантов, после которого в печати стали периодически выходить научные статьи по медицинским предметам: в 1928 г. вышли два выпуска научных статей факультета лекарства были изданы.А в 1930 году Народный комиссариат просвещения издал приказ о реорганизации университета в три полностью независимых учреждения. Пока появился не Российский государственный медицинский университет (РГМУ), а его прототип — 2-й Московский

Независимость

В 1930 году факультет снова был реорганизован на лечебно-профилактический, а кроме того, появился второй. открылся рядом. Скорее — первый, самый первый в стране и во всей мировой практике! Это был факультет материнства, младенчества и детства.Будущее Российского Здравоохранения продолжало расти. В декабре 1932 г. был открыт еще один факультет — лечебно-физкультурный.

Правда, через два года его закрыли, а два других факультета переименовали в лечебный и детский. Но затем был создан новый — лечебно-теоретический факультет. В марте 1935 года было создано СНО — студенческое научное общество, которое существует до сих пор. А потом он поглотил шестнадцать тематических кружков. Через год снова было два факультета — общий лечебный факультет упразднили.

Довоенное время

Студенты-медики никогда не оставляли общественных работ на благо столицы и страны, проявляя исключительно полезные инициативы. Так, в 1938 году студенты института впервые в стране провели профилактический осмотр всего населения всего района Москвы, а не самого мелкого. Население Хамовнического района поставлено на медицинскую карту.

В марте 1939 года по приказу наркома обороны при медицинском институте был создан военный факультет, просуществовавший до 1944 года, который обеспечивал военных врачей на всех фронтах Великой Отечественной войны. С началом войны огромная часть сотрудников, профессоров, преподавателей и студентов института уехала добровольцами. В октябре 1941 года часть оставшихся была эвакуирована и до 1943 года работала и училась в Омске.

Послевоенное время

В 1948 году ученик Мечникова и Пастера, почетный академик Н.Ф. Свое первое выступление Гамалея произнес в стенах будущего Российского государственного медицинского университета им. Н.И. Пирогова. Тема была актуальной — «Микробактерии туберкулеза». В 1954 году начались эксперименты в Центральной научно-исследовательской лаборатории — Центральной научно-исследовательской лаборатории фундаментальных медицинских исследований.

Профессора и студенты продолжали участвовать во всех начинаниях и помогать достижениям, имевшим место в стране. В 1956 году институт был награжден медалью «За освоение целинных земель», а в следующем году ему было присвоено имя Николая Ивановича Пирогова, великого анатома и хирурга России. В шестидесятые годы появился вечерний факультет с педиатрическим и лечебным факультетами, а также медико-биологический факультет.

Переезд и новые достижения

В 1965 году Совет Министров СССР передал институту пятнадцать тысяч квадратных метров учебных и лабораторных корпусов на юго-западе Москвы, пока без проекта и строительства, но этого не произошло. далеко, потому что этот университет был чрезвычайно ценным для страны.В 1966 году за выдающиеся заслуги награжден орденом Ленина.

Еще один факультет появился в 1968 году. Здесь преподаватели повышали квалификацию. Он существует сейчас. В 1977 году открылся новый — факультет усовершенствования врачей. В последующие годы на базе медицинского института были созданы пульмонология и физико-химическая медицина, которые служили учебно-научно-производственными, то есть лечебными комплексами.

Переименовать

В ноябре 1991 года Совет Министров РСФСР преобразовал 2-й МОЛГМИ имени Н.И. Пирогова в Российском государственном медицинском университете. Он продолжал расти: довузовская подготовка открылась на отдельном факультете, затем по распоряжению Мэра Москвы был создан московский факультет для укомплектования столичных поликлиник и поликлиник. Открываются факультет клинической психологии и все остальные, перечисленные в списке ниже.

Российский государственный медицинский университет получает большую помощь и поддержку со стороны государства. Москва охотно использует созданное пространство для расширения творческих и научных границ в образовании.Университет по-прежнему активно участвует в организации и проведении различных медицинских форумов, выставок, конференций, продвигая столичную медицину на все более высокий уровень.

Один из пятнадцати

Теперь Российский государственный медицинский университет Росздрава становится крупнейшим медицинским университетом страны и одним из крупнейших в Европе. При этом на ста тридцати пяти образовательных факультетах обучается более девяти тысяч студентов. Состав профессоров и преподавателей в штате составляет более тысячи двухсот человек.

В интернатуре ежегодно обучается двести врачей, в их ординатуре более семисот по тридцати шести специальностям. Аспирантов — пятьсот пятьдесят — врачи, биологи, химики. И это было не последнее переименование. Лучший вуз в своей отрасли — Российский государственный медицинский университет. Пирогова — стал республиканским и исследовательским, базовым университетом со специальной программой развития до 2019 года. Их в стране всего пятнадцать.

Факультеты

Факультеты и кафедры Российского медицинского государственного университета перечислены ниже:

1.Факультет медицины. Это старейший факультет университета. Здесь готовят врачей по самым популярным медицинским специальностям — на факультете — тридцать пять кафедр.

2. Факультет педиатрии. Этот факультет был создан впервые в мире как педиатрический. Именно поэтому здесь устанавливаются те стандарты качественной подготовки педиатров, которыми славится наша страна. На факультете тридцать три кафедры.

3. Биомедицинский факультет с мощнейшей фундаментальной подготовкой и специализацией в области биохимических наук и клинических дисциплин.Здесь на двадцати трех кафедрах готовят врачей по специальностям «Медицинская биохимия», «Медицинская биофизика»

4. Психолого-социальный факультет. На факультете обучаются по программам специальности (клиническая психология) и бакалавриата (социальная работа). Четыре отдела готовят высококвалифицированных специалистов.

5. Стоматологический факультет. Этот факультет готовит стоматологов на кафедрах челюстно-лицевой хирургии и стоматологии.

6. Фармацевтический факультет.Единственный фармацевтический факультет готовит прекрасных теоретиков и практиков в области ботаники и фармакогнозии, освоивших самые современные направления в этой области.

7. Факультет по обучению иностранных граждан. На факультете тридцать две кафедры, на которых обучаются иностранные граждане по специальностям «Лечебное дело» и «Педиатрия». Обучение проходит на русском языке, но здесь также используется английский.

8. Международный факультет. Выпускникам выдается двойной диплом (Миланского университета).Специальность «Лечебное дело» изучается на гуманитарном факультете.

Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова — крупнейший центр медицинского образования и науки, признанный во всем мире. Здесь готовятся врачи, педиатры, стоматологи, специалисты в области фармации, психологии, социальной работы, а также исследователи, специализирующиеся в области медицинской биохимии, кибернетики и биофизики.

В РНИМУ им. Н.И. Пирогова, реализуются программы довузовской подготовки, бакалавриата и специальности, магистратуры, ординатуры, аспирантуры, а также программы послевузовской подготовки.В учебном процессе используются дистанционные образовательные технологии.

Ежегодно РНИМУ предоставляет абитуриентам около 1400 бюджетных и 1500 платных мест. 88,17% студентов обучаются по направлению «Клиническая медицина», 5,36% — по фундаментальной медицине, 2,94% — по психологическим наукам, 1,55% — по фармации, 0,74% по направлению «Социология и социальная работа», 0,2% — «Биологические науки».

В распоряжении студентов РНИМУ около полутора сотен клинических баз. Общая площадь учебно-лабораторных корпусов составляет более 176 тысяч квадратных метров.В структуре университета два медицинских центра: Педиатрия НИКИ. ac. Ю.Е. Вельтищев и Российский геронтологический научно-клинический центр. Имеется собственный симуляционный центр, оснащенный современным оборудованием.

РНИМУ успешно развивает международное сотрудничество. Например, в Миланском университете есть программа двух дипломов по специальности «Лечебное дело». Ведутся совместные исследования с крупными зарубежными биомедицинскими центрами.

Пироговский университет — головная организация Московского Южного технологического кластера медицинских технологий, объединяющего около двадцати научных организаций и производственных предприятий.Деятельность кластера направлена на исследование новейших медицинских технологий и их внедрение в практическое здравоохранение на основе принципов трансляционной медицины. Кроме того, РНИМУ является координатором Восточноевропейского научно-образовательного медицинского кластера.

Средняя стоимость обучения в год — 337000 руб. Около 25% студентов обучаются на платной основе. Всем студентам предоставляется общежитие. Развитая электронная образовательная среда.

В РНИМУ более 3300 преподавателей, 80% из них имеют ученые степени.

Доля трудоустройства выпускников — 75%, средняя заработная плата 49 866 руб.

Подробнее Свернуть http://www.rsmu.ru

график Режим работы:

пн, вт, ср, чт, пт с 10:00 до 16:00

Последние отзывы РНИМУ им. Н.И. Пирогова

Анонимный отзыв 20:35 26.02.2019

школа просто !!! отношение к студентам на анатомическом факультете как хрень какая-то

у преподавателя из группы будет только один фаворит

преподаватель Самохина отправила в комиссию треть группы, потому что ей просто не понравилась группа

декан лечения не предоставляет никакой полезной информации и готов выслать вас как минимум через 3 часа ночи. м.

сто раз подумай, прежде чем войти туда иди на 1 или 3 меда но не на пирог

даже если ты уверен в своих силах …

Сергей Кругляков 13:07 15.12.2018

Галерея РНИМУ им. Н.И. Пирогова

общая информация

Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздрава России

Лицензия

№02418 действует бессрочно с 29.09.2016

Аккредитация

№ 02598 действует с 24.05.2017

Результаты мониторинга Минобрнауки по РНИМУ им. Н.И. Пирогова

Индекс	2019	2018	2017	2016	2015	2014 г.
Показатель результативности (из 5 баллов)	5	6	5	5	4	4
Средний балл ЕГЭ по всем специальностям и формам обучения	80.06	79,24	79,64	79,93	76,23	76,44
Средний балл за экзамен, зачисляемый в бюджет	90,65	88,67	86,96	86,38	84,21	88,53
Средний балл за экзамен, начисляемый на коммерческой основе	70,9	69,83	69,76	70,42	61,42	67,72
Средний балл по всем специальностям минимальный экзаменационный балл, зачисляемый на очную форму	58.36	58,66	56,78	60,02	49,60	47,56
Количество учеников	8225	8078	8302	8480	8719	10385
Полный рабочий день	7777	7388	7266	7109	6946	7884
Неполный рабочий день	448	690	1036	1371	1773	2501
Заочная	0	0	0	0	0	0
Все данные	Отчет	Отчет	Отчет	Отчет	Отчет	Отчет

Обзоры университетов

О РНИМУ им.

Н.И. Пирогова

Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова — один из лучших медицинских вузов России, где готовят высококвалифицированных врачей, которые могут работать в любой медицинской организации.

Образование в Российском государственном педагогическом университете имени Н.И. Пирогова

В университете обучаются студенты по специальностям:

медицинское дело, получение квалификации врача общей практики;
педиатров с квалификацией врача общей практики;
врач-стоматолог, квалификация врача-стоматолога общего профиля;
медицинская биохимия, квалификация биохимика;
медицинских биофизиков, получив по окончании обучения квалификацию биофизика;
медицинская кибернетика, получив по окончании учебу квалификацию доктора кибернетика;
аптека, имеющая квалификацию провизора;
клинический психолог, квалифицированный клинический психолог;
социальная работа, получение по окончании академической степени бакалавра.

Форма обучения по всем этим специальностям исключительно дневная. Студенты могут учиться как на бюджетной форме обучения, так и за счет оплаты физическими лицами. Но даже в случае обучения на внебюджетной форме студенты могут перейти на бюджет при условии отличной учебы. Исключение составляет только специальность Социальная работа, по которой возможно только платное обучение.

Для поступления в университет студенты должны сдать вступительные экзамены по химии, физике, русскому языку, биологии, математике или обществознанию.Для подготовки к ним поступающие могут пройти подготовительные курсы или перейти в одну из 17 школ Москвы и любую из 6 школ Подмосковья.

Работающие специалисты могут поступить в вуз на факультет повышения квалификации. Обучение на факультете проходит в три этапа.

Посещение шестичасовых лекций в течение недели, во время которых студенты узнают обо всех нововведениях в психологии, клинической и экспериментальной медицине, а также изучат основы медицинской кибернетики.
Получение индивидуальных консультаций по актуальным вопросам от преподавателей вузов и посещение спецкурсов на кафедрах психологии и педагогики.
Работа по специальности на кафедрах вуза.

Состав РГИМУ им. Н.И. Пирогова

Медицинский университет

имеет сложную структуру, каждый элемент которой имеет важное образовательное или научное значение, а также способствует всестороннему развитию студентов университета. В университете:

научно-исследовательских институтов, в которых проводятся исследования, результаты которых затем внедряются в учебный процесс и отечественную медицину;
лабораторий, в которых студенты применяют полученные знания и выполняют лабораторные работы;
университетских баз в 38 городских больницах, роддомах и диспансерах, где студенты вузов проходят клиническую подготовку под чутким руководством преподавателей;
учебно-лабораторный комплекс, полностью оснащенный новейшим медицинским оборудованием;
библиотека с фондом научной и учебной литературы в количестве 700 000 экземпляров, необходимой учащимся для обучения и самообразования;
медицинский центр, где студенты могут получить медицинскую помощь и пройти практику;
мультимедийных аудиторий, в которых учителя проводят наглядную демонстрацию учебного материала учащимся, что способствует его лучшему усвоению;
научно-образовательный центр «Чрезвычайные ситуации в педиатрии», где студенты изучают методы оказания неотложной помощи детям с помощью современных инноваций;
Конаково спортивно-оздоровительный комплекс, где студенты могут отдохнуть летом;
столовая, где студенты и учителя могут перекусить между уроками;
комфортабельное общежитие для иногородних и иностранных студентов.

Внеучебная жизнь студентов РГИМУ им. Н.И. Пирогова

В университете студенты не только учатся, практикуются или занимаются исследованиями. В вузе созданы все условия, чтобы студенты могли разнообразить досуг и найти себе отдых по душе.

В университете создана собственная команда КВН, куда приглашаются все студенты, считающие, что у них есть чувство юмора. Благодаря участию в коллективе студенты осваивают актерское мастерство, развивают актерские и вокальные способности, учатся работать в команде.

В университете действует литературная студия. Участники студии пробуют себя в роли прозаиков или поэтов, участвуют в обсуждениях классической и современной литературы. А лучшие работы студентов университета публикуются на сайте университета, чтобы другие студенты могли с ними ознакомиться.

вокалистов университета могут записаться в хоровую секцию, первое публичное выступление которой состоялось в 2010 году на праздновании Дня студента. В университете есть студия для репетиций хора, где студенты оттачивают вокальное мастерство по средам и субботам.

Если ученики захотят попробовать свои силы в роли бардов, они могут записаться в клуб Авторской песни, где их научат игре на гитаре, разовьют сценическое и вокальное мастерство, и тогда они будут выступать не только в университета, но и за городом проводятся фестивали, конкурсы и концерты.

Кроме того, в университете работают ансамбль скрипачей и виолончелистов, Клуб исторической реконструкции Дружина Железной Зорн, Сектор нравственного и семейного воспитания и множество других клубов и творческих объединений на любой вкус.

Сдаю документы Пирогова для поступления. Российский национальный исследовательский медицинский университет имени

график Режим работы:

пн, вт, ср, чт, пт с 10:00 до 16:00

сб с 10:00 до 14:00

Последние отзывы РНИМУ им. Н.И. Пирогов

Анонимный отзыв 20:35 26.02.2019

старшеклассник просто !!! отношение к студентам на анатомическом факультете как хрень какая-то

у преподавателя из группы будет только один фаворит

преподаватель Самохина отправила в комиссию треть группы, потому что ей просто не понравилась группа

сто раз подумай, прежде чем войти туда иди на 1 или 3 меда но не на пирог

даже если ты уверен в своих силах …

Сергей Кругляков 13:07 15.12.2018

Галерея РНИМУ им. Н.И. Пирогова

общая информация

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова »Минздрава РФ

Лицензия

№ 02418 действует бессрочно с 29.09.2016

Аккредитация

№ 02598 действует с 24.05.2017 по 24.05.2023

Результаты мониторинга Минобрнауки по РНИМУ им. Н.И. Пирогова

Показатель	18 лет	17 лет	16 лет	15 лет	14 лет
Показатель результативности (от 7 баллов)	6	5	5	4	4
Средний балл ЕГЭ по всем специальностям и формам обучения	79.24	79,64	79,93	76,23	76,44
Средний балл за экзамен зачисляется в бюджет	88,67	86,96	86,38	84,21	88,53
Средний балл за экзамен, начисляемый на коммерческой основе	69,83	69,76	70,42	61,42	67,72
Средний минимальный балл за экзамен по всем специальностям, зачисляемый на очную форму	58.66	56,78	60,02	49,60	47,56
Количество учеников	8078	8302	8480	8719	10385
Полный рабочий день	7388	7266	7109	6946	7884
Неполный рабочий день	690	1036	1371	1773	2501
Заочная	0	0	0	0	0
Все данные	Отчет	Отчет	Отчет	Отчет	Отчет

Обзоры университетов

О РНИМУ им.

Н.И. Пирогова

Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н. И. Пирогова — один из лучших медицинских вузов России, где готовят высококвалифицированных врачей, которые могут работать в любой медицинской организации.

Образование в Российском государственном педагогическом университете имени Н.И. Пирогова

В университете обучаются студенты по специальностям:

медицинское дело, получение квалификации врача общей практики;
педиатров, получив квалификацию терапевта;
врач-стоматолог, квалификация врача-стоматолога общего профиля;
медицинская биохимия, квалификация биохимика;
медицинских биофизиков, получив по окончании обучения квалификацию биофизика;
медицинская кибернетика, получив по окончании учебу квалификацию доктора кибернетика;
аптека, имеющая квалификацию провизора;
клинический психолог, квалифицированный клинический психолог;
социальная работа, получение по окончании академической степени бакалавра.

Для поступления в вуз студенты должны успешно сдать вступительные экзамены по химии, физике, русскому языку, биологии, математике или обществознанию.Для подготовки к ним поступающие могут пройти подготовительные курсы или перейти в одну из 17 школ Москвы и любую из 6 школ Подмосковья.

Посещение шестичасовых лекций в течение недели, во время которых студенты узнают обо всех нововведениях в психологии, клинической и экспериментальной медицине, а также изучат основы медицинской кибернетики.
Получение индивидуальных консультаций по актуальным вопросам от преподавателей вузов и посещение спецкурсов на кафедрах психологии и педагогики.
Работа по специальности на кафедрах вуза.

Состав РГИМУ им. Н.И. Пирогова

Медицинский университет

научно-исследовательских институтов, в которых проводятся научные исследования, результаты которых внедряются в учебный процесс и отечественную медицину;
лабораторий, в которых студенты применяют полученные знания и выполняют лабораторные работы;
университетских баз в 38 городских больницах, роддомах и диспансерах, где студенты вузов проходят клиническую подготовку под чутким руководством преподавателей;
учебно-лабораторный комплекс, полностью оснащенный новейшим медицинским оборудованием;
библиотека с фондом научной и учебной литературы в количестве 700 000 экземпляров, необходимой учащимся для обучения и самообразования;
медицинский центр, где студенты могут получить медицинскую помощь и пройти практику;
мультимедийных аудиторий, в которых учителя проводят наглядную демонстрацию учебного материала учащимся, что способствует его лучшему усвоению;
научно-образовательный центр «Чрезвычайные ситуации в педиатрии», где студенты изучают методы оказания неотложной помощи детям с помощью современных инноваций;
Конаково спортивно-оздоровительный комплекс, где студенты могут отдохнуть летом;
столовая, где студенты и учителя могут перекусить между уроками;
комфортабельное общежитие для иногородних и иностранных студентов.

Внеучебная жизнь студентов РГИМУ им. Н.И. Пирогова

В университете студенты не только учатся, практикуются или проводят исследования. В вузе созданы все условия, чтобы студенты могли разнообразить досуг и найти себе отдых по душе.

Вокалистов университета могут записаться в хоровую секцию, первое публичное выступление которой состоялось в 2010 году на праздновании Дня студента. В университете есть студия для репетиций хора, где студенты оттачивают вокальное мастерство по средам и субботам.

Кроме того, в университете работают Ансамбль скрипачей и виолончелистов, Клуб исторической реконструкции Дружина Железного Рога, Сектор нравственного и семейного воспитания и многие другие клубы и творческие объединения на любой вкус.

Один из самых уважаемых исследовательских университетов страны — Российский государственный медицинский университет. Его история началась в 1906 году, когда прогрессивная общественность повлияла на решение властей об организации московских женских курсов. Спустя некоторое время курсы были преобразованы, и начал работу 2-й МГУ, лечебный факультет которого в 1930 году стал базой для создания медицинского института, в 1956 году он получил имя великого врача Н.И. Пирогов.

Новое время

Музей

Вехи

В мае далекого 1872 года граф Д. А. Толстой, будучи министром просвещения, дал согласие на открытие Московских высших женских курсов. Это частное учреждение одобрено специальным положением. Так, в здании мужской гимназии на Волхонке 1 ноября состоялись первые в стране женские курсы профессора В.И. Жериер были инаугурации. На первом году обучения было не менее семидесяти студентов, а к 1885 году их число выросло до двухсот пятидесяти.

Медицина

Курсы работали на Волхонке до 1873 года, затем переехали в Музей прикладных знаний на Пречистенке, а в 1877 году стали учиться в здании, построенном специально под политехнический музей. И только в 1906 г. появился очередной устав Министерства жилищно-коммунального хозяйства, где было закреплено открытие нового факультета — медицинского. К тому времени к первому — историко-философскому — уже добавились и физико-математические.

Теперь курсы действительно стали той базой, на которой был построен РГМУ. В сентябре 1906 г. состоялась первая лекция на новом факультете, а в 1908 г. он открылся для студентов-медиков, который впоследствии стал анатомическим корпусом 2-го Московского медицинского института. Весной 1912 года уже состоялся самый первый выпуск первых в России женщин-врачей. Пока их было немного — не более двухсот человек.

После революции

В октябре 1918 года Коллегия Народного комиссариата просвещения учредила преобразование высших женских курсов во 2-й государственный университет — смешанное учебное заведение.В новоиспеченном университете еще три факультета, такие же, но через два года на медицинском факультете уже открылось научное общество. В 1921 году студенты-медики организовали комиссию по борьбе с детской беспризорностью и борьбе с голодом, а также на собственные средства открыли детский дом.

Независимость

Довоенное время

В марте 1939 года приказом наркома обороны при медицинском институте был создан военный факультет, просуществовавший до 1944 года, который снабжал военных врачей всеми фронтами Великой Отечественной войны.С началом войны огромная часть сотрудников, профессоров, преподавателей и студентов института уехала добровольцами. В октябре 1941 года часть оставшихся была эвакуирована и до 1943 года работала и училась в Омске.

Послевоенное время

В 1948 году ученик Мечникова и Пастера, почетный академик Н.Ф. Гамалея впервые выступил в стенах будущего Российского государственного медицинского университета им. Н.И. Пирогова. Тема была актуальной — «Микробактерии туберкулеза». В 1954 году начались эксперименты в Центральной научно-исследовательской лаборатории — Центральной научно-исследовательской лаборатории фундаментальных медицинских исследований.

Профессора и студенты продолжали участвовать во всех начинаниях и помогать достижениям, имевшим место в стране. В 1956 году институт был награжден медалью «За освоение целинных земель», а в следующем году ему было присвоено имя Николая Ивановича Пирогова, великого анатома и хирурга России. В шестидесятые годы появился вечерний факультет с педиатрическим и медицинским отделениями и медико-биологический факультет.

Переезд и новые достижения

В 1965 году Совет Министров СССР передал институту пятнадцать тысяч квадратных метров учебных и лабораторных корпусов на юго-западе Москвы, пока без проектирования и строительства, но это не было далеко, потому что этот университет был чрезвычайно ценным для страны.В 1966 году за выдающиеся заслуги награжден орденом Ленина.

Еще один факультет появился в 1968 году. Здесь преподаватели повышали квалификацию. Он существует сейчас. В 1977 году открылся новый — факультет усовершенствования врачей. В последующие годы на базе медицинского института были созданы пульмонология и физико-химическая медицина, служившие учебными, научно-производственными, то есть лечебными комплексами.

Переименовать

Один из пятнадцати

Факультеты

Факультеты и кафедры Российского медицинского государственного университета перечислены ниже:

4. Психолого-социальный факультет. Они обучаются на факультете по программам специальности (клиническая психология) и бакалавриата (социальная работа). Четыре отдела готовят высококвалифицированных специалистов.

(Pdf)

Внимание! Внесены изменения в статью 71 Федерального закона «Об образовании в Российской Федерации» (Федеральный закон от 27 июня 2018 г. № 162-ФЗ).

Лица со средним общим образованием, подтвержденные при приеме на обучение по программам бакалавриата и программам специальностей — документ о среднем общем образовании или документ о среднем профессиональном образовании, или документ о высшем образовании и квалификации допускаются к освоению программ бакалавриата или специальности .

Прием на обучение осуществляется в первый год обучения.

Прием на обучение осуществляется в рамках контрольных цифр приема граждан на обучение за счет бюджетных ассигнований федерального бюджета, бюджетов субъектов Российской Федерации, местных бюджетов и по заключенным договорам об образовании. при поступлении на обучение за счет физических и (или) юридических лиц. В рамках контрольных цифр квота приема на программы бакалавриата, программы по специальностям за счет бюджетных ассигнований детям с ограниченными возможностями, инвалидам I и II групп, инвалидам с детства, инвалидам вследствие военной травмы или заболеванием, полученным во время службы в армии, детям-сиротам и детям, оставшимся без попечения родителей, а также лицам из числа детей-сирот и детей, оставшихся без попечения родителей, и ветеранам войны из числа лиц, указанных в подпунктах 1-4 пункта 1 статьи 3 Федерального закона. Закон от 12 января 1995 г. № 5 Федерального закона «О ветеранах» (далее — единичная квота).Специальная квота устанавливается организацией высшего образования в размере не менее 10% от общего количества контрольных цифр, выделяемых Университету на следующий год, по каждому комплексу условий приема на программы бакалавриата, программы специальностей; квота целевого приема на обучение.

Прием на обучение за счет бюджетных средств осуществляется на конкурсной основе, если иное не предусмотрено Федеральным законом № 273-ФЗ. Прием на очную практику с оплатой стоимости обучения физическими и (или) юридическими лицами осуществляется на условиях, определяемых локальными нормативными правовыми актами Университета в соответствии с законодательством Российской Федерации.

Условия приема на обучение по основным профессиональным образовательным программам гарантируют соблюдение права на образование и зачисление из числа поступающих, имеющих соответствующий уровень образования, наиболее способных и подготовленных к освоению образовательной программы соответствующего уровня и соответствующая ориентация лиц.

Прием на обучение осуществляется по программам бакалавриата и программам специальностей (кроме приема лиц, имеющих право приема на обучение без вступительных испытаний): на базе среднего общего образования — на основании результатов единого государственного образования. экзамены, оцениваемые по стобалльной шкале, которые признаются результатами вступительных испытаний, и (или) по результатам вступительных испытаний, проводимых Университетом самостоятельно в случаях, установленных Порядком и Правилами приема; на базе среднего профессионального или высшего образования (далее — профессиональное образование) — по результатам вступительных испытаний, форма и перечень которых определяются Университетом.

Количество мест

Количество мест для приема на обучение в Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования на имя им. Н.И. Пирогова Минздрава России в 2018 году
Количество мест в рамках пропускных пунктов обучения за счет бюджетных ассигнований на различные условия приема
Квота целевого приема на высшее образование по специальностям и программам бакалавриата за счет ассигнований федерального бюджета на 2018 год (PDF)

	Ориентиры для приема на обучение за счет бюджетных ассигнований				Места платных образовательных услуг для граждан РФ	Мест для платных образовательных услуг для иностранных граждан
	Итого	Количество мест в пределах допуска (общие соревнования)	Особые квоты	Мест в пределах целевой квоты	Места платных образовательных услуг для граждан РФ

Социальная работа
Биология

Лечебное дело
Педиатрия
Стоматология
Медицинская биохимия
Медицинская биофизика
Медицинская кибернетика
Аптека
Клиническая психология
Итого:

	Направление подготовки (специальность)	Количество мест в пределах допуска (общие соревнования)	Места особой квоты	Мест в пределах целевой квоты
	Направление подготовки (специальность)	Очная форма обучения
Бакалавр
	Социальная работа
	Биология
СПЕЦИАЛЬНОСТЬ
	Лечебное дело
	Педиатрия
	Стоматология
	Медицинская биохимия
	Медицинская биофизика
	Медицинская кибернетика
	Аптека
	Клиническая психология
	Итого:

Вступительные испытания

(Pdf)
(Pdf)
(Pdf)
Информация о возможности сдачи вступительных испытаний, проводимых организацией самостоятельно, на языке республики Российской Федерации, на территории которой расположена организация, на иностранном языке; сведения о языке, на котором проводятся вступительные испытания при поступлении в магистратуру с иностранным языком обучения (PDF)
(Pdf)
(Pdf)
(Pdf)

	Направление подготовки (специальность)	Вступительные испытания (в порядке очередности)	Минимальное количество экзаменационных баллов	Форма вступительного испытания	Форма вступительных испытаний, проводимых организацией самостоятельно
Высшее образование — бакалавриат
	« C социальная работа «	История Обществознание Русский язык			3 ПРЕДМЕТЫ
	«Биология»	Биология Математика Русский язык		ЕГЭ или письменный тестовый экзамен для определенных категорий поступающих	ПИСЬМЕННЫЙ КОНТРОЛЬНЫЙ ЭКЗАМЕН ПО 3 ПРЕДМЕТАМ
Высшее образование по специальности
	«Лечебное дело»	Химия Биология Русский язык		ЕГЭ или письменный тестовый экзамен для определенных категорий поступающих	ПИСЬМЕННЫЙ КОНТРОЛЬНЫЙ ЭКЗАМЕН ПО 3 ПРЕДМЕТАМ
	«Педиатрия»	Химия Биология Русский язык		ЕГЭ или письменный тестовый экзамен для определенных категорий поступающих	ПИСЬМЕННЫЙ КОНТРОЛЬНЫЙ ЭКЗАМЕН ПО 3 ПРЕДМЕТАМ
	«Стоматология»	Химия Биология Русский язык		ЕГЭ или письменный тестовый экзамен для определенных категорий поступающих	ПИСЬМЕННЫЙ КОНТРОЛЬНЫЙ ЭКЗАМЕН ПО 3 ПРЕДМЕТАМ
	«Медицинская биохимия»	Химия Биология Русский язык		ЕГЭ или письменный тестовый экзамен для определенных категорий поступающих	ПИСЬМЕННЫЙ КОНТРОЛЬНЫЙ ЭКЗАМЕН ПО 3 ПРЕДМЕТАМ
	«Медицинская биофизика»	Физика Биология Русский язык		ЕГЭ или письменный тестовый экзамен для определенных категорий поступающих	ПИСЬМЕННЫЙ КОНТРОЛЬНЫЙ ЭКЗАМЕН ПО 3 ПРЕДМЕТАМ
	«Медицинская кибернетика»	Математика Биология Русский язык		ЕГЭ или письменный тестовый экзамен для определенных категорий поступающих	ПИСЬМЕННЫЙ КОНТРОЛЬНЫЙ ЭКЗАМЕН ПО 3 ПРЕДМЕТАМ
	«Аптека»	Химия Биология Русский язык		ЕГЭ или письменный тестовый экзамен для определенных категорий поступающих	ПИСЬМЕННЫЙ КОНТРОЛЬНЫЙ ЭКЗАМЕН ПО 3 ПРЕДМЕТАМ
	«Клиническая психология»	Биология Математика Русский язык		ЕГЭ или письменный тестовый экзамен для определенных категорий поступающих	ПИСЬМЕННЫЙ КОНТРОЛЬНЫЙ ЭКЗАМЕН ПО 3 ПРЕДМЕТАМ

Особые права и льготы с учетом индивидуальных достижений

(Pdf)
(Pdf)
(Pdf)

Федеральный закон от 01.05.2017 N 93-ФЗ исключает требование о наличии у инвалида заключения федерального учреждения медико-социальной экспертизы об отсутствии противопоказаний к обучению в соответствующих организациях образования.

Право на поступление без вступительных испытаний:

Платные образовательные услуги

(Pdf)

Внимание! Вы не ходили в специализированные бюджетные места? Но достаточно ли высоки ваши баллы за ЕГЭ? Вы получили образование по специальностям «Лечебное дело», «Педиатрия», «Стоматология»? Вы можете получить СКИДКУ!

Специальность / обучения в год	Вы не набрали экзаменационные баллы до проходного балла на бюджетных местах	Скидка, руб.	Стоимость обучения в год со скидкой
Медицинское дело / 330,000.00 рублей	1 до 20	-60 000,00	270 000,00 руб.
Медицинское дело / 330,000.00 рублей	от 21 до 40	-30 000,00	300 000,00 руб.
Педиатрия / 290 000,00 руб.	1 до 20	-30 000,00	260 000,00 руб.
Педиатрия / 290 000,00 руб.	от 21 до 40	-15 000,00	275 000,00 руб.
Стоматология / 380 000,00 руб.	1 до 20	-60 000,00	320000 руб.00
Стоматология / 380 000,00 руб.	от 21 до 40	-30 000,00	350 000.00 рублей
Подать заявку на скидку можно в Приемной комиссии. Скидка предоставляется на год. Если вы учитесь без троек и без академической задолженности, вы можете ходатайствовать о продлении скидки.

(Pdf)

Информация о возможности подачи документов для приема на обучение в электронном виде, о местах приема документов, почтовых адресах для отправки документов

В 2018 году при поступлении на обучение в Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования на имя им.Н.И. Пирогова Минздрава России документы, необходимые для поступления, подаются в приемную комиссию одним из следующих способов:
а) предоставляются поступающим лично или его уполномоченным представителем по адресу: 117997, г. Москва, ул. . Островитянова, дом 1.
б) через операторов почтовой связи общего пользования по адресу:
Где: 117997, г. Москва, ул. Островитянова, дом 1.
Кому: ФГБОУ ВО «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова »Минздрава России, приемная комиссия.

При отправке необходимых для получения документов через операторов почтовой связи общего пользования эти документы принимаются, если они поступили в организацию не позднее установленного срока приема документов в текущем году.

В 2018 году появилась возможность подачи документов для приема на обучение в ФГБОУ ВО на имя им. Н.Пирогова И.М. Минздрава России в электронном виде № не предоставлена.

Дополнительная информация при поступлении: Дополнительный прием не предусмотрен.

Информация о количестве мест в общежитии для иногородних поступающих

Название показателя	Значение
	117437, г. Москва, ул.Академика Волгина 35, 37, 39, 41
Кол-во домов
Общая площадь, кв.м
Жилая площадь, кв.м
Количество мест	3280 коек / мест, используемых для студентов-иногородних, в том числе адаптированных для использования инвалидами и инвалидами определенных категорий
Оснащение общежитий мягким и твердым оборудованием в соответствии с установленными стандартами
Наличие продуктов питания
Информация о количестве мест в общежитии для иногородних поступающих в 2019 году	400 (370 для поступающих на бакалавриат и специальность, 30 для поступающих на обучение в ординатуре)
Правила общежития	Общежитие предоставляется иногородним студентам.В первую очередь, общежитие предоставляется инвалидам I, II групп, детям-сиротам и детям боевиков.
Дополнительная информация

21.08.2018

Код		Всего	Количество поданных заявок
Код		Всего	Полный рабочий день	Переписка	неполный рабочий день
06.03.01	Биология	531	531	0	0
39.03.02	Социальная работа	37	37	0	0
30.05.01	Медицинская биохимия	1648	1648	0	0
30.05.02	Медицинская биофизика	103	103	0	0
30.05.03	Медицинская кибернетика	563	563	0	0
31.05.01	Медицинское дело	7507	7507	0	0
31.05.02	Педиатрия	5155	5155	0	0
31.05.03	Стоматология	2530	2530	0	0
33.05.01	Аптека	2215	2215	0	0
37.05.01	Клиническая психология	690	690	0	0

Российский государственный медицинский университет

ГОУ ВПО «Российский государственный медицинский университет Федерального агентства здравоохранения и социального развития»
(ГОУ ВПО РГМУ Росздрава)

Прежние названия	2-й МОЛГМИ им.Н.И. Пирогов
Год основания
Ректор	Володин Николай Николаевич
Расположение	Москва
Юридический адрес	117997, г. Москва, ул. Островитянова, 1
Сайт	http://rsmu.ru/

Современное здание РГМУ в г. Тропарев.

Российский государственный медицинский университет — медицинский университет в Москве.Один из крупнейших медицинских университетов России и Европы. Общее количество студентов — более 9000 человек. В Российском государственном медицинском университете 115 учебных кафедр. Общая численность профессорско-преподавательского состава составляет 1205 штатных единиц. Ежегодно в интернатуре университета обучается более 200 человек. В клинической ординатуре РГМУ обучаются более 700 ординаторов по 36 специальностям на 72 кафедрах университета. В аспирантуре (дневная и заочная) на 90 кафедрах РГМУ обучаются 550 человек по 36 специальностям (медицинским, биологическим и химическим).

Полное наименование университета: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Сокращенное наименование вуза: ГОУ ВПО РГМУ Росздрава.

История университета

История университета начинается с. Затем были организованы московские женские курсы. Затем курсы были преобразованы во 2-й МГУ, из которого выделился самостоятельный 2-й Московский государственный медицинский институт, получивший в году имя выдающегося русского хирурга и анатома Николая Ивановича Пирогова (-).28 ноября 1966 года институт был награжден орденом Ленина по случаю 60-летия Президиума Верховного Совета СССР.

5 ноября 1991 г. Распоряжением Совета Министров Российской Федерации 2 МОЛГМИ им. Н.И. Пирогова преобразовали в Российский государственный медицинский университет.

История зданий РГМУ

В сентябре 1965 года Совет Министров СССР санкционировал проектирование и строительство учебных и лабораторных корпусов института общей площадью 15000 квадратных метров на юго-западе Москвы.м

Структура вуза

Факультет педиатрии

Декан факультета — член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор Полунина Наталья Валентиновна.

Он был открыт в 1930 году. Это был первый педиатрический факультет в мире.

Принципы обучения

Студенты изучают медицину, ее различные аспекты в течение шести лет на 54 кафедрах университета. Обучение ведется не только на чисто педиатрических отделениях, но и на отделениях, где изучаются болезни среди взрослых.

Помимо клинической подготовки, педиатры изучают фундаментальные науки. Выпускники имеют возможность после получения диплома педиатра работать по любой медицинской специальности.

Студенты, помимо теоретической подготовки, должны пройти производственную практику. В соответствии с учебной программой студенты проходят интернатуру в качестве ассистентов: после второго курса — медсестры, после третьего курса — медсестра отделения, после четвертого курса — врач больницы (хирургия, терапия, акушерство и гинекология), после пятого курса. — врач поликлиники.

Лечебный факультет

Декан факультета: член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор, Порядин Геннадий Васильевич

Биологический факультет

Декан — Балякин Юрий Викторович, профессор. 9 января 1963 года постановлением ЦК КПСС и Совета Министров СССР «О мерах по дальнейшему развитию биологической науки и укреплению ее связи с практикой» было создано биомедицинское отделение.Приказом Минздрава РСФСР от 15 декабря 1964 г. биомедицинский факультет преобразован в биомедицинский факультет (БМФ).

Факультет довузовской подготовки

Международный центр теоретической медицины

Московский факультет (педиатрия, лечебное дело)

Декан — Ильенко Лидия Ивановна, профессор.

29 июня 1998 года распоряжением Мэра Москвы Ю. М. Лужков, «О мерах по обеспечению системы здравоохранения Москвы медицинским персоналом» и с целью укомплектования поликлиник медицинским персоналом был создан московский факультет.

Стоматологический факультет

Создан в 2008 году. Декан — Панкратов Александр Сергеевич, доктор медицинских наук, профессор.

Фармацевтический факультет

Создана в 2008 году. Декан Козлов Иван Генрихович, доктор медицинских наук, профессор

Психолого-социальный факультет

Как факультет клинической психологии, основанный в 2001 году.

Факультет клинической ординатуры, аспирантуры и докторантуры

Факультет интернатуры и производственной практики

Декан — доц.Гапоненков Юрий Петрович.

Контактный телефон: +7 495 434-4522.

Факультет усовершенствования врачей

Факультет открыт в марте 1977 года.

Факультет непрерывного образования

Отдел по обучению иностранных граждан

Учебно-вспомогательные подразделения Университета

Высшим органом управления Российского государственного медицинского университета является Ученый совет. Срок полномочий Ученого совета — 5 лет.Ученый совет, руководствуясь принципами прозрачности, дает возможность для широкого обсуждения и совместно с обществом решать проблемы вуза и перспективы его развития.

Ректорат

Администрация является исполнительным органом Университета. Во главе его ректор; В состав ректората также входят пять проректоров: два проректора по учебной работе, проректор по научной работе, проректор по лечебной работе и проректор по АЗЧ.

Ректоры РГМУ, 2-го МГУ, 2-го МОЛГМИ им. Н. И. Пирогова и режиссеры

Эти люди руководили университетом на протяжении всей его истории:

Герье Владимир Иванович 1872-1888, 1900-1905
Пинкевич Альберт Петрович 1924-30
Цукерштейн Евгений Израилевич 1930-1931
Рыбак Иосиф Исаакович 1932-1936
Басия Любовь Яковлевна Март 1937 г. — декабрь 1937 г.
Топчан Авраам (Абрам) Борисович 1937-1946
Миловидов Сергей Иванович 1946-1956
Кербиков Олег Васильевич 1956-1958
Сироткина Мария Гавриловна 1958-1964
Володин Николай Николаевич с 2008 года

Учебная часть

Библиотека

AHC

Музей РГМУ

Международные связи

РГМУ поддерживает связи со следующими университетами мира:

с А.Университет Пуанкаре и Центр А. Вотрена, Нанси (Франция)
с Институтом медицинской биологической физики, Лейпциг
с клиникой Высшей школы медицины Рейн-Вестфалия, Ахен
с Берлинским университетом (Германия)
с Базельским университетом (Швейцария)
с онкологическим центром Fox Chase, Филадельфия (со студентами)
с Университетом Айовы (

Выпускник этого вуза: Учился в 2009-2015 гг.Сейчас работаю врачом.
Чтобы не нагружать водой, постараюсь эффектно и полезные моменты)
Кто не прочитал результат в конце написано.
-Первые 3 курса, те курсы, на которых вас заставляют учиться, понятно, что не силой, а путем давления и угроз отчисления, постановки 2екс и практики. Учиться действительно сложно. Все свободное и несвободное время будет отдано на учебу с вами. Что касается преподавания и оснащения кафедр, скажу, ясно, что все могло измениться, но меня это не впечатлило.По информации з / п у них тогда было 10-15-18 т.р. в месяц. Понятно, что отсюда следует коррупционная составляющая, нежелание учителей работать и ссылаться на фразу — вы в вузе, сами читаете учебник, а мы вам только поставим оценку и оставим нас в покое. .. все дополнительные занятия и т.д. отсюда …
Экзамены сложные, тяжелые, утомительные.
-После экватора и следующих 3-х курсов, которые являются полной халявой, за редким исключением.
И это на мгновение все клинические дисциплины. Преподаватели кафедры — это сотрудники кафедрального собора, работающие неполный рабочий день врачами, или врачи общего штаба кафедры. А это значит, что им нет дела до вас, у них будет время сделать операцию, написать чертову тучу бумажек в истории и обойти больных. В клинических отделениях вы легко можете сидеть в интернатуре, проигрывая по телефону весь цикл операции и никогда не ходить в операционную, ваш учитель запросто может не ходить на занятия, и вместо него будет ординатор на 3-4 года старше чем ты …. но это меня не волнует — тест был написан на компьютере, а финальный тест
— карман. Да, чтобы получить за них заслугу, достаточно привести свое тело на урок и не прогуляться. В общем, для сведения — слово пропустить должно выйти из употребления за 6 лет обучения здесь, и тогда у вас будет гораздо меньше проблем)
-Теперь в целом про качество образования я пролистал обзоров немного, короче, когда я был на 2 курсе, все началось, теперь это стало полной ерундой… Я говорю о своих любимых ТЕСТах …. да, изучив там, вы узнаете, как здорово их запоминать (даже не понимая, что там говорится) и писать … Я ставил себе рекорды, управляя написать экзаменационный тест на 100% за 1,5 минуты ….. вся философия обучения свелась к формуле — разбейся на пары, напиши заученный тест, не понимая — чтобы получить хорошую оценку, так пару раз и смещение автоматически …
###
В результате: Вся теоретическая подготовка сводится к тестам на зубрежку, но ааааа, на самом деле почему-то не существует…… на 4-5 курсах есть люди, которые не могут измерить давление, не могут оказать базовую первую помощь и многое другое. Все это ох как повлияет, когда вы приедете в резидентуру. Здесь вы поймете всю цену знаний, навыков и их практического применения. Там, кстати, я узнал от коллег из других регионов, что у них все было по-другому, на 4-м курсе помогали в операциях, в палатах не дурачились, я сижу в пустом цикле, а их нет. отпустили домой в 12 часов дня…. Отсюда я не рекомендую университетское образование. В защиту скажу, что из плюсов — обучение 5 дней в неделю и первые 3 курса в одном корпусе — поездок по Москве не будет …. Не могу гарантировать, что другие московские школы лучше, хотя были отзывы о Сеченке от учеников получше … ну и самообразование это сила))

Изготовление микрожидкостных систем по принципу «Сделай это в классе» путем точного формования макаронных структур

Реферат

Здесь мы описываем новый метод изготовления микрофлюидных структур в классных комнатах.Этот метод основан на формовании точных копий макаронных изделий из полидиметилсилоксана. Размещение макаронных структур на базовом слое вазелина позволяет создавать шаблоны округлой формы с контролируемыми профилями поперечного сечения. Структуры макаронных изделий можно легко деформировать и комбинировать для создания более сложных трехмерных микрофлюидных структур. Проверочные эксперименты показывают возможность этого метода для изучения смешения соседних потоков, образования капель, боковой миграции частиц, а также культивирования, стимуляции напряжения сдвига и визуализации клеток.Наш метод «делай это в классе» ликвидирует разрыв между классом и лабораторией.

ВВЕДЕНИЕ

Микрофлюидика включает в себя манипуляции с жидкостями в микромасштабных структурах. Он предлагает портативные, одноразовые и недорогие устройства типа «лаборатория на кристалле» для различных биомедицинских приложений, таких как диагностика на месте, ¹ иммуноанализов, ^2,3 доставки лекарств, ⁴ и различные клеточные исследования. ⁵ В последнее десятилетие наблюдается постоянный рост компаний и коммерчески доступных продуктов, использующих микрофлюидные технологии.⁶ Дальнейшее развитие микрофлюидных технологий зависит от подготовки квалифицированных студентов и исследователей в университетах. Это требует эффективного включения практических занятий, лабораторий и мини-проектов в текущие лекционные курсы, чтобы предоставить студентам как теоретические, так и практические навыки, необходимые для разработки микрофлюидных систем. Что еще более важно, мультидисциплинарный характер микрофлюидики требует, чтобы эти курсы были подходящими для студентов с различным инженерным, научным и биомедицинским образованием.Учитывая, что разработка микрожидкостного устройства включает в себя этапы проектирования, изготовления и определения характеристик, успех такого интерактивного микрожидкостного курса зависит от успешного включения «этапа изготовления» в учебную программу курса.

В микрофлюидике обычно используются четыре технологии изготовления: фотолитография, литье под давлением, лазерная резка и 3D-печать. Фотолитография включает создание шаблона для создания шаблонов структур микро / наноразмеров ⁷ и подходит для параллельного изготовления 2D структур.⁸ Его также можно использовать для изготовления трехмерных структур, хотя могут потребоваться утомительные процессы выравнивания. ⁹ Важно отметить, что для фотолитографии требуются чистые помещения стоимостью в несколько миллионов долларов и опыт микротехнологии. ⁷ Литье под давлением, с другой стороны, включает впрыскивание расплавленных гранул термопласта в предварительно изготовленную форму. ^10–12 Позволяет массовое производство микроструктур с минимальными трудозатратами для создания трехмерных многослойных структур или структур с высоким соотношением сторон.¹³ Лазерная резка включает удаление материала с помощью высокотемпературного лазерного луча (например, лазера CO ₂) для непосредственного изготовления микрожидкостных чипов в одноэтапном процессе. ^14,15 Он подходит для быстрого прототипирования, хотя лазер может создавать нежелательные шероховатые поверхности. ¹⁴ 3D-печать включает создание слоев материала для изготовления желаемой структуры. ^16,17 Облегчает изготовление трехмерных структур со сложной геометрией в относительно быстром процессе, ^18–20, таким образом, он подходит для быстрого прототипирования с использованием самых разных материалов.^21–24

В большинстве университетов нет предприятий по изготовлению микротехнологий. Даже когда университеты имеют такие возможности (например, здесь, в университете RMIT, у нас есть доступ к технологиям фотолитографии, лазерной резки и 3D-печати), количество времени и ресурсов, необходимых для обучения студентов в течение 12-недельного периода, все равно может ограничивать эффективное включение производства в курс микрофлюидики. Следовательно, принятие подходов к изготовлению «делай это в классе» потенциально может принести пользу проведению таких интерактивных курсов по микрожидкостям.Эти подходы должны позволить изготовление микрожидкостных структур: (i) в классной комнате без необходимости в оборудовании для микропроизводства и (ii) без обязательного наличия базовых знаний в программном обеспечении САПР, чтобы студенты, не являющиеся инженерами, могли извлечь из них пользу.

Внимательный взгляд на литературу показывает разнообразие методов, представленных для изготовления микрофлюидных структур без использования обычных техник микротехнологии. Это включает в себя создание шаблонов микромасштабных структур, таких как оптические волокна, ²⁵ жидкого металла, ^26,27 металлических проволок, ^28,29 и нейлоновых нитей ³⁰ в полимерах, таких как полидиметилсилоксан (PDMS), и последующие удаление таких структур вручную, химическим или термическим способом после отверждения полимера.Вдохновленные этими методами, мы попробовали другие материалы, которые были более доступными (особенно в регионах с низким социально-экономическим положением), относительно дешевыми, безопасными, реконфигурируемыми для создания как простых, так и сложных микрофлюидных структур и пригодными для использования студентами и исследователями из разных слоев общества.

В этой рукописи мы разработали новый метод изготовления микрожидкостных структур в классе. В этом методе используются только коммерчески доступные расходные материалы, такие как макаронные изделия и вазелин.Мы не ограничивались прямыми каналами и смогли создать более сложные структуры, добавив несколько простых шагов к нашему основному методу. Например, с помощью вращающегося шлифовального инструмента мы смогли вычесть части макаронных изделий, чтобы создать сужение в прямом канале. Мы также замачивали макароны, чтобы придать им изогнутые структуры, такие как змеевики, а также комбинированные конструкции, такие как смесители или генераторы капель. Чтобы еще больше подчеркнуть универсальность нашего метода, мы создали высокое соотношение сторон и скрученные змеевидные структуры.Мы также изготовили конструкции разной высоты и трехмерный спиральный канал, полностью встроенный в PDMS. Мы продемонстрировали биосовместимость наших макаронных шаблонов устройств, показав, что эндотелиальные клетки могут расти в условиях напряжения сдвига внутри микрофлюидного канала. Таким образом, наш подход к изготовлению «делай это в классе» облегчает разработку интерактивных курсов микрофлюидики и подходит для студентов, не имеющих инженерного образования.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Изготовление микрофлюидных структур с помощью шаблона макаронных изделий

Процесс изготовления представлен на рис.и Рис. S1 (дополнительный материал). Стандартная пластиковая чашка Петри диаметром 85 мм была заполнена ~ 18 мл белого вазелина (вазелин ^®) при комнатной температуре [рис. ]. Чашку Петри помещали в обычную тостерную печь (Home & Co, Toaster Oven MG18CHV) при 70 ° C на 15 мин, пока вазелин не расплавился и не стал прозрачным [Рис. ]. Чашку Петри вынули из печи, и структуры макаронных изделий (Сан-Ремо) были вручную нанесены на поверхность вазелина по мере ее охлаждения (~ 1.Через 5 мин после извлечения из печи) [Рис. ]. Вазелин оставляли охлаждаться и переходили в гелевую фазу (~ 2 мин). Основу PDMS и отвердитель (Sylgard ^® 184 Silicone Elastomer Kit) смешивали при стандартном весовом соотношении 10: 1 и выливали в чашку Петри [фиг. ]. Чашку Петри оставляли на ровной поверхности для отверждения ПДМС при комнатной температуре в течение 48 часов.

Схема формовки реплик макаронных конструкций. (а) Чашка Петри наполнена вазелином (вазелин ^®).Вазелин показан красным для контраста. (b) Вазелин плавят в обычной печи при 70 ° C в течение 15 минут до прозрачности. (c) Макаронным изделиям придают рисунок желаемой конфигурации и помещают на вазелин до того, как он перейдет в гелеобразную фазу. (d) ПДМС получают в соотношении 10: 1 мас. / мас. и выливают в чашку Петри. (e) ПДМС отверждают при комнатной температуре (~ 25 ° C) в течение 48 часов. После полного отверждения PDMS снимается с чашки Петри. (f) Блок PDMS со встроенными микрожидкостными каналами собирается на предметное стекло и зажимается во избежание утечки.

Наши эксперименты показали, что неотвержденный ПДМС и вазелин не смешивались. После отверждения блок ПДМС был снят с чашки Петри [рис. ]. Структуры макаронных изделий обычно остаются в вазелине и могут быть легко удалены для повторного использования. Затем блоки PDMS со встроенными микрофлюидными структурами разрезали на отдельные блоки с помощью скальпеля и собирали их на предметное стекло размером 76 × 26 × 1 (Д × Ш × В) мм (Menzel-Glaser) [рис. ]. Блоки PDMS пробивали биопсийным перфоратором 1,0 мм (Harris Uni-Core) во входном и выходном портах канала.Специально изготовленный механический зажим, изготовленный из полиметилметакрилата (ПММА) толщиной 3 мм, был использован для уплотнения блока PDMS относительно предметного стекла, чтобы избежать утечки при высоких скоростях потока. Для затяжки зажима использовалось восемь винтов диаметром 3 мм.

Экспериментальная установка

Пробирки Tygon ^® (ID 0,02 и OD 0,06 дюйма, 06419-01, Cole-Palmer ^®), собранные с алюминиевыми наконечниками, вырезанными из игл шприца (TERUMO, 23G), использовались для сопряжения. микрофлюидные структуры с помощью шприцевого насоса (Harvard Apparatus PHD 2000).Для визуализации воду окрашивали пищевым красителем (Queen) в объемном соотношении 5: 1 (вода: краситель) и вливали через структуры при различных скоростях потока от 5 до 2000 мк л / мин. Для экспериментов по миграции частиц мы использовали 8 и 15 мкм мкм полистирольных частиц (PPs-8.0, PPs-15.0, Kisker Biotech GmbH & Co. KG) для получения изображений в светлом поле и желтые флуоресцентные частицы 7.3 мкм мкм (PFP-6052, Kisker Biotech GmbH & Co. KG) для флуоресцентной визуализации.

Каналы наблюдали с помощью микроскопа USB (универсальная последовательная шина) (цифровой микроскоп Celestron COSMOS 5MP LCD).Инвертированный микроскоп (Nikon Eclipse, TE 2000), оснащенный охлаждаемой камерой CDD (QuantEM: 512SC, Photometrics) и 10-кратным объективом (CFI Plan Apo Lambda 10x), использовали для получения изображений с высоким разрешением. Синий флуоресцентный фильтр (Nikon B-2A, 450–490 нм) использовался для наблюдения за желтыми флуоресцентными частицами. Для изучения деталей поверхности PDMS мы напыляли каналы PDMS тонким слоем золота толщиной 20 нм и наблюдали поверхность под растровым электронным микроскопом (FEI Quanta), соединенным с детектором вторичных электронов Эверхарта-Торнли с обратным рассеиванием, работающим под высоким напряжением и высокий вакуум.Измерения температуры вдоль поверхности вазелина проводились с помощью инфракрасной камеры (системы FLIR, Thermo Vision A320, Швеция), подключенной к исследовательскому программному обеспечению ThermaCAM.

Культура клеток, эксперимент в ночном потоке и иммуноцитохимия

Для культивирования клеток микрофлюидный канал закрепляли на покровном стекле с помощью механического зажима. Канал промывали 70% этанолом, а затем стерильной водой, подавая поток 1 мл / мин через канал в течение 30 минут с использованием шприцевого насоса (Harvard Apparatus PHD 2000).Затем канал был покрыт компонентами внеклеточного матрикса человека (MaxGel ^TM ECM, Sigma-Aldrich) в соответствии с инструкциями поставщика. Эндотелиальные клетки пупочной вены человека (HUVEC) были приобретены у Lonza и культивированы при плотности 2,5 × 10 ⁶ клеток / мл среды внутри канала с использованием ростовой среды EGM ^TM -2 с добавлением набора SingleQuots ^TM (Lonza ) в течение ночи с образованием полного монослоя. Затем среду для роста клеток рециркулировали через канал со скоростью потока 1.25 мл / мин в течение 24 часов с использованием перистальтического насоса (OINA QP6 LAB High Accuracy), чтобы вызвать напряжение сдвига 1 дин / см ² на культивируемых клетках. Чтобы исследовать ремоделирование цитоскелета и формирование актиновых стрессовых волокон в культивируемых клетках, клетки фиксировали 4% параформальдегидом в течение 1 часа и пропитывали 0,2% Triton X-100 в PBS (фосфатно-солевой буфер) в течение 30 секунд. Неспецифическое связывание блокировали 5% бычьим сывороточным альбумином в PBS и зондировали фаллоидином, который был непосредственно конъюгирован с Alexa Fluor 568 (Sigma-Aldrich) и DAPI 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндолом (Sigma-Aldrich).Визуализацию проводили на лазерном сканирующем конфокальном микроскопе Nikon A1.

Вычислительная гидродинамика (CFD)

CFD использовалась для моделирования характеристик каждой структуры, таких как скорость потока и отслеживание частиц. Точные 3D-модели изготовленных структур были построены в программном обеспечении Fusion360 CAD путем воссоздания и выдавливания поперечных сечений каналов, полученных с помощью SEM-изображений. В целом геометрия конструкций после зажима не изменилась. В случае значительных деформаций после зажима (например,g., возникающие для серпантинных каналов с высоким соотношением сторон), макроизображения деформированных поперечных сечений были получены с помощью цифровой однообъективной зеркальной камеры (Canon 6D, оснащенной макро ультразвуковой моторной линзой Canon EF 100 мм f / 2.8) для воссоздания и экструдирован в Fusion360. Затем 3D-модели были экспортированы в Gambit-2.3 (ANSYS Fluent) для создания сетки. Fluent-6.3 (ANSYS Fluent) использовался для моделирования и последующей обработки контуров скорости и отслеживания частиц через микрофлюидные структуры.Модель второго порядка против ветра, сопровождаемая алгоритмом SIMPLE-C, использовалась для связи скорости и давления. Граничные условия включали желаемые скорости потока на входе, нулевое давление на выходе и отсутствие проскальзывания на стенках и поверхности предметного стекла.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Прямые каналы с управляемым полукруглым поперечным сечением

В своей простейшей форме наш метод позволял изготавливать прямые каналы с полукруглым поперечным сечением [Рис.], положив сырые цилиндрические макаронные изделия диаметром 1,5 мм поверх вазелина. Мы использовали пасту в качестве компонента канала, потому что она сохраняет свою форму в сухом виде и может деформироваться во влажном состоянии. Наши предыдущие попытки с тонкими медными и алюминиевыми проводами были нежелательны, так как провода сморщились и не лежали ровно. Мы также пытались положить макароны прямо на чашку Петри и наполнили ее PDMS. Однако это привело к образованию тонкой пленки на дне канала, которая затрудняет просмотр содержимого канала (см. Дополнительный материал на рис.S2). Мы выбрали вазелин в качестве основного материала, потому что он переходит из жидкой фазы в гелевую за считанные минуты, он безопасен, прост в обращении и биосовместим. Другие вещества, такие как воск, мед и шоколад, также использовались в качестве основного материала; однако полученный ПДМС не прилипал к стеклу, имел складки по краям канала (см. дополнительный материал на рис. S3) или был слишком грязным для использования. Плоская нижняя поверхность в канале облегчает наблюдение за образцами, протекающими через канал, при использовании инвертированного микроскопа, а круглая верхняя поверхность имитирует структуру кровеносных сосудов.Интересно, что сканирование с помощью сканирующей электронной микроскопии (СЭМ) также показало шероховатую внутреннюю поверхность [см. Дополнительные материалы на рис. S4 (a) и S4 (b)], который также напоминает шероховатую поверхность кровеносных сосудов из-за наличия эндотелиальных клеток. ^31–33 Хотя вазелин немного изменил шероховатость поверхности ПДМС [см. Дополнительный материал Рис. S4 (c)] и снизил его адгезионную способность, мы смогли преодолеть эти ограничения, механически прижав ПДМС к стеклу, исключив любую утечку [Рис. .].

Прямой канал полукруглого поперечного сечения, изготовленный методом макаронного шаблона. (а) Микроскопия с высоким разрешением поперечного сечения канала, полученная с помощью SEM. (b) Вид сверху канала PDMS, заполненного водой, окрашенной синим цветом, для улучшения визуализации, что указывает на отсутствие утечки. (c) Контуры скорости жидкости в поперечном сечении канала, полученные путем численного моделирования при расходе 50 мкм л / мин. (d) Площадь и высота поперечного сечения в зависимости от времени осаждения. Сплошная линия указывает область, а пунктирная линия указывает высоту.Планки погрешностей соответствуют среднему значению ± стандартное отклонение, полученному для четырех наборов независимых изготовленных структур. (e) HUVEC выращивали внутри канала при напряжении сдвига, вызванном потоком, равным 1 дин / см ² в течение 24 часов. F-актин окрашивали Alexa Fluor 568 (красный), а ядра окрашивали DAPI (синий). Белые стрелки указывают на формирование актиновых стрессовых волокон в эндотелиальных клетках при росте под напряжением сдвига.

Чтобы проверить герметичность канала, мы вливали в канал воду, окрашенную синим цветом, при различных скоростях потока от 5 до 2000 мк л / мин в течение не менее 30 мин.Контуры скорости, полученные с помощью моделирования CFD при расходе 50 мкм л / мин, показали максимальную скорость 1 мм / с в центре канала и нулевую скорость на стенках, как и ожидалось [Рис. ]. Число Рейнольдса на основе гидравлического диаметра канала было рассчитано как Re = ρUDhμ ≈ 1 (где ρ и μ — плотность и вязкость жидкости, U — средняя скорость, а D _{— плотность и вязкость жидкости. h} — гидравлический диаметр поперечного сечения канала), который указывает ламинарные характеристики потока.Отсутствие утечек в канале было также подтверждено применением раствора воды и глицерина, который был в 20 раз более вязким, чем вода, при скоростях потока от 1 до 200 мк л / мин.

Уникальная особенность нашего метода изготовления заключается в использовании субстрата вазелин (вазелин ^®), а не обычного твердого субстрата. Этот вазелин представляет собой чувствительную к температуре коллоидную систему, которая при охлаждении претерпевает фазовый переход из жидкости в гель.Наши эксперименты показали, что это фазовое изменение происходит от 59 до 48 ° C в течение ∼0,75–2 мин при охлаждении по механизму естественной конвекции при комнатной температуре и связано с изменением цвета вазелина (см. Дополнительный материал на рис. S5 + видео S1). . Фазовый переход жидкость-гель изменил свойства поверхности подложки и впоследствии изменил площадь поперечного сечения макаронных изделий, погруженных в вазелин. Это позволило нам модулировать площадь поперечного сечения и высоту каналов, просто изменяя время осаждения (см. Дополнительные материалы на рис.S6 и S7) пасты на вазелин (рис. ]. Как показано, площадь поперечного сечения канала может составлять от 42% до 96% от общей площади поперечного сечения макаронных изделий и от 44% до 93% от общей высоты поперечного сечения. Это означает, что мы можем получить поперечные сечения, которые представляют собой только сегментную часть круга, до почти полного круга, поскольку макароны погружены в вазелин на разных уровнях. Однако даже после перехода в гелевую фазу поверхность вазелина была достаточно мягкой, чтобы позволить макаронам погрузиться на ~ 100 мкм м в желе, ограничивая максимальную площадь поперечного сечения ~ 96%.100% площадь поперечного сечения могла быть достигнута в отсутствие слоя вазелина, но это привело к образованию тонкой пленки из PDMS под каналом, что было нежелательно для визуализации с помощью инвертированной микроскопии. Этот эксперимент ясно показывает повышенную универсальность по сравнению с традиционными каналами прямоугольной формы, изготовленными из литографии.

Чтобы подтвердить биосовместимость наших каналов для проведения клеточных экспериментов, эндотелиальные клетки (HUVEC) культивировали в канале, как подробно описано в разделе «Материалы и методы».Среду для роста клеток рециркулировали через канал при скорости потока 1,25 мл / мин (что соответствует напряжению сдвига 1 дин / см ², индуцированному на культивируемых клетках) в течение 24 часов. Ответ HUVEC на напряжение сдвига был проанализирован с точки зрения ремоделирования цитоскелета и образования актиновых стрессовых волокон, как подробно описано в разделе «Материалы и методы» [Рис. ]. Результаты показали образование тонких напряженных волокон (обозначенных белыми стрелками), распределенных по ячейке в результате напряжения сдвига.^34–36 Для сравнения, контрольные эксперименты в условиях отсутствия потока показали образование плотных полос актина только на периферии клеток (см. Дополнительный материал Fig. S8). Результаты свидетельствуют о пригодности наших каналов для проведения клеточных анализов. ^37–40

Прямые каналы с локальным сжатием

Мы также продемонстрировали способность создавать произвольную геометрию с помощью методов вычитания. В качестве подтверждения концепции мы сделали прямой канал с полукруглым сужением, используя ротационный шлифовальный инструмент (Dremel Micro), оснащенный фрезой в форме шарика 3 мм при 15 000 об / мин.Использовалась плоская паста с эллиптическим поперечным сечением, поскольку ее большая ширина позволяет лучше контролировать размер сокращения, а также лучше визуализировать. Хотя при желании можно получить аналогичные суженные структуры с круглой пастой, ранее использовавшейся для прямого канала. Микрожидкостные каналы с локальным сокращением обычно используются для гидродинамической манипуляции (фокусировки, сортировки по размеру) микрочастиц. ⁴¹ Кроме того, такие сокращения могут имитировать аномальное сужение кровеносных сосудов, известное как стеноз, для изучения агрегации тромбоцитов, вызванной сдвигом.⁴²

Для создания суженных каналов мы использовали роторный шлифовальный инструмент для вычитания частей макарон вручную в течение 2 минут [Рис. ]. Этот процесс привел к полукруглому сокращению длиной 3,65 мм с коэффициентом сжатия θ = Вт _сжатие/ Вт _канал ≈ 60%, где Вт — ширина. Мы смогли контролировать коэффициент сжатия от 20% до 80%, регулируя количество вычтенных макаронных изделий, то есть его можно было полностью настраивать.После аккуратного удаления остатков макаронных изделий из структуры PDMS ее можно повторно использовать для воспроизводимого изготовления. Эксперименты показали, что коэффициент сжатия, превышающий 80%, потенциально может разрушить структуру, поскольку макаронные изделия станут более хрупкими. Однако можно использовать индивидуальное зажимное устройство, чтобы аккуратно удерживать макароны во время процесса измельчения и увеличить этот порог.

Каналы с полуэллиптическим поперечным сечением и локальным сужением, изготовленные с помощью шаблона макаронных изделий. (а) Шлифовальный инструмент вычитает часть макаронных изделий, чтобы создать локальное сокращение.(b) Вид сверху канала PDMS, заполненного водой с синими пятнами, подчеркивающая сжатую форму без утечки. (c) Снимки процесса наполнения водой с синими пятнами в предварительно заполненном водном канале, показывающие ускорение потока в суженном канале. Пунктирными линиями обозначены точки рассечения канала, чтобы показать (d) полуэллиптическое поперечное сечение вне сужения и (e) четвертьэллиптическое поперечное сечение на вершине сужения. (е) Контуры скорости потока в различных поперечных сечениях канала, полученные при расходе 50 мкм л / мин.

Полученная в результате сжатая структура PDMS была приклеена к стеклу посредством механического зажима между двумя листами PMMA с просверленными отверстиями для входа / выхода и заполнена водой с синими пятнами, которая показала минимальную утечку [Рис. ]. Дополнительные отверстия были видны, поскольку один и тот же механический зажим использовался для различных конструкций. На видео, снятом с помощью USB-микроскопа (см. Дополнительный материал Video S2), запечатлено впрыскивание окрашенной в синий цвет воды, проходящей через суженный проход со скоростью потока 50 мкм л / мин [Рис.]. Мы заметили, что окрашенная вода имела сродство к суженным стенкам перед заполнением всего канала из-за повышенной скорости в месте сжатия.

СЭМ-изображения показывают, как поперечное сечение изменяется от полуэллиптического до четвертьэллиптического вдоль сжатой конструкции [(рис. И]. Это объясняет увеличение скорости при уменьшении площади поперечного сечения, как показано в численном моделировании [Рис.] Простота и эффективность по времени этого метода облегчают изготовление более сложных структур с множественными сокращениями вдоль одного и того же канала.

Изогнутые микрожидкостные каналы с несколькими входами

Мы дополнительно исследовали универсальность нашего метода для создания изогнутых и многозаходных структур. Пасту замачивали в теплой воде (40 ° C) в течение ~ 45 минут, пока она не стала мягкой и податливой (на что указывает изменение цвета от желтого до бледно-желтого и увеличение диаметра), чтобы создать индивидуальные изогнутые структуры. Мы назвали эту процедуру процессом замачивания-сушки. Опорные плиты LEGO ^® использовались для придания макаронам желаемой формы, поскольку они были доступными, недорогими и давали однородные структуры.Для случая змеевидных структур, одиночные нити макаронные изделия были помещены вокруг устои LEGO ® опорной плиты в зигзагообразный рисунок. Множественные пряди макаронных изделий были объединены для создания множественных входных каналов, которые можно было использовать как смесители, генераторы капель или H-образные фильтры (рис.). Этот процесс позволил параллельное изготовление нескольких макаронных структур на одном LEGO ® опорной плиты. Мы также могли деформировать макароны, вставив их между двумя опорными плитами LEGO ^®, чтобы создать каналы с более прямоугольным поперечным сечением.Как показано на [Рис. ], Макаронные изделия не осталось высохнуть на воздухе в течение 3 ч в его образовани требуемого до жесткой (обозначенный цветовой реверсии на более темный желтый и диаметр усадки), прежде чем он был удален из LEGO ^® опорной плиты и внедрены в ранее установленном макаронных изделий шаблонам метод. Хотя процесс сушки можно осуществить мгновенно с помощью горячего воздуха, эксперименты показывают, что это приводит к термическому изгибу.

Изогнутые конструкции по индивидуальному заказу, изготовленные с помощью шаблонов макаронных изделий. (А) Soaked макаронных изделий помещают в индивидуальные механизмы на LEGO ® опорной плиты.В верхнем ряду показаны змеевидные структуры разных размеров. В нижнем ряду показаны структуры с несколькими входами, в которых используется несколько нитей макаронных изделий в y-, T-, H- и t-образных каналах соответственно. (b) Вид сверху змеевидного канала в PDMS, заполненном водой, окрашенной синим цветом. Пунктирными линиями показаны точки рассечения следующих сечений. SEM показывает последовательные полукруглые поперечные сечения как на изогнутом (c), так и на прямом (d) участках змеевидного канала.

Змеевидный канал с рисунком в PDMS был прикреплен к стеклу с помощью механического зажима и заполнен водой, окрашенной синим цветом, при 50 мк л / мин, что показывает отсутствие утечки [Рис.]. Змеевидные каналы являются обычными структурами в микрофлюидике из-за их увеличенной длины, что позволяет улучшить пассивное перемешивание или увеличить время реакции. ⁴³ Число Дина было рассчитано как De = ReWR≈0,7 (где W, — ширина канала, а R — радиус одной кривизны змеевика), что показывает, что вихри Дина не являются доминирующими. ⁴⁴ Используя опорную пластину LEGO ^®, мы смогли создать змеевики, которые были довольно однородными и имели эквидистантные кривые.Было также показано, что поперечное сечение остается неизменным по всему каналу даже после процесса пропитки-сушки [Рис. и ]. Хотя мы использовали коммерчески доступный конструктор LEGO ^®, любые произвольные строительные блоки, содержащие массивы столбов, можно использовать для создания индивидуальных или более сложных изогнутых структур.

Микрожидкостные структуры с несколькими входами, позволяющие использовать пассивные смесители и генераторы капель

Y-канал, созданный в процессе замачивания-сушки, был сделан с двумя входами и одним выходом, которые использовались как смеситель и генератор капель [Рис.]. Блок PDMS был прикреплен к стеклу с помощью механического зажима, как объяснялось ранее. СЭМ-изображения показали формирование поперечного сечения двойной дуги на выходе из y-образного канала со структурой сужающегося клина, сформированной на границе раздела соседних каналов [рис. и ]. Дальнейший анализ SEM показал некоторые неровности поверхности вдоль этой клиновидной структуры (см. Дополнительный материал на рис. S9), которые могли быть вызваны объединением двух соседних нитей макаронных изделий.

Y-образный канал с двойным входом, изготовленный с полукруглым поперечным сечением по шаблону макаронных изделий.(а) Вид сверху структуры PDMS, заполненной водой, окрашенной в синий цвет, для улучшения визуализации. SEM показывает поперечные сечения на стыке (b) двух каналов и (c) на выходе. (d) Работа Y-канала в качестве пассивного смесителя путем подачи воды, окрашенной в красный и синий цвета, при различных расходах на входе. Пурпурная область смешения дельта показана пунктирными линиями. (e) Эффективность смешивания в зависимости от расхода на входе. (f) Работа Y-канала в качестве генератора капель путем применения несмешивающихся потоков воды и масла, показанных при различных соотношениях потоков нефти к воде.(g) Длина капли в зависимости от отношения потока нефти к воде. Результаты получены из пяти независимых экспериментов и показаны как среднее значение ± стандартная ошибка.

Пара смешивающихся жидкостей (т.е. вода, окрашенная в красный и синий цвета) была введена в два впускных отверстия для исследования пассивного перемешивания. Мы обнаружили немедленное перемешивание между соседними жидкостями, о чем свидетельствует образование пурпурной дельта-области на выходе из канала [Рис. ]. Увеличение скорости потока с 10 до 200 мкм л / мин на каждом входе значительно уменьшило пурпурную дельта-область и, как следствие, снизило эффективность смешивания соседних жидкостей [Рис.+ дополнительный материал Рис. S10]. Следовательно, y-канал работал как эффективный пассивный смеситель, в котором эффективность смешивания могла регулироваться от 24% до 98%, в зависимости от скорости потока на входе. Число Рейнольдса было рассчитано как R e ≈ 1, а число Пекле рассчитано как Pe = UDhD≈1200 (где D — массовая диффузия пищевого красителя в водных растворах), что свидетельствует о преобладании диффузионного перемешивания. Мы предполагаем, что сильное пассивное перемешивание в нашем y-канале связано с конической структурой клина и сопряженными неровностями поверхности (показанными на рис.S9). Если нежелательно, неровности поверхности можно удалить, выполнив некоторые дополнительные этапы обработки поверхности, такие как полировка поверхности раздела двух паст с тонкими полировальными вращающимися инструментами или покрытие нежелательных полостей вдоль границы раздела тонким слоем вазелина.

Затем мы применили несмешивающиеся жидкости (например, воду и оливковое масло), чтобы изучить полезность одного и того же Y-канала для непрерывного образования капель (см. Дополнительный материал Video S3). Видео были сняты с помощью USB-микроскопа со скоростью 30 кадров в секунду.Эксперименты показали, что нанесение воды и масла в тех же условиях, что и в пассивном смесителе, не создает достаточного напряжения сдвига, чтобы разделить воду на мелкие капли. Мы преодолели это ограничение, изменив положение входов и выходов. Таким образом, две жидкости будут конкурировать, чтобы войти в канал смешивания, и было создано достаточное напряжение сдвига, чтобы разделить воду на мелкие капли [Рис. ]. Мы продолжали этот эксперимент в течение 30 минут, чтобы убедиться, что не было значительных различий между размерами капель и скоростью их образования.Длина капель воды была обратно пропорциональна соотношению потоков нефти и воды, определяемому как φ = Q _{o i l}/ Q _вода. ⁴⁵ Таким образом, увеличив φ с 0,3 до 1,0, мы смогли уменьшить длину капель с 4 до 2 мм [Рис. ]. Следовательно, это снизило скорость образования капель с 1,5 до 0,2 капель в секунду. Скорость образования капель может быть увеличена за счет увеличения расходов нефти и воды при том же соотношении потоков.

Микрожидкостные каналы с нестандартными поперечными сечениями

Мы также исследовали универсальность нашего метода изготовления для создания микрофлюидных структур с нестандартными поперечными сечениями. В качестве доказательства концепции мы изготовили каналы с высоким соотношением сторон и скрученными змеевиками. Мы создали змеевидный канал с высоким соотношением сторон, применив плоские макаронные изделия в процессе замачивания-сушки и поместив мягкие макароны более тонкой стороной в опорную плиту LEGO ^® [Рис.]. СЭМ-изображение показало продолговатое поперечное сечение канала [Рис. ]. Однако повышенная сложность создавала изгиб на нижнем крае микрожидкостного канала. Этот прогиб может быть вызван образованием выпуклого мениска на поверхности слоя вазелина, соприкасающегося с макаронными структурами с высоким коэффициентом сжатия и PDMS. Деформация канала, вызванная зажимом, привела к получению ровной поверхности на границе змеевидного канала и предметного стекла, что было желательно для достижения потока без утечек [Рис.]. Численное моделирование с использованием этого модифицированного фиксированного поперечного сечения предсказало максимальную скорость потока 0,7 мм / с в более широкой области поперечного сечения [Рис. ]. Никакой утечки не наблюдалось при расходах от 5 до 2000 мк л / мин, что указывает на эффективность нашей техники зажима [Рис. ]. Это подтверждает полезность нашего метода шаблонов макаронных изделий для создания структур с высоким соотношением сторон, что является сложной задачей при использовании обычных литографических процессов. Такие структуры с высоким аспектным отношением могут быть особенно интересны для сортировки частиц на основе размеров или плотности путем приложения магнитных или электрических сил.⁴⁶

Трехмерные микрофлюидные структуры с нестандартными поперечными сечениями, изготовленные из плоских макаронных изделий с помощью шаблонов макаронных изделий. (а) Макаронные изделия, расположенные в виде змеевика, для создания канала с высоким соотношением сторон. (b) СЭМ показывает полукруглое поперечное сечение и изгиб на дне канала. (c) Поперечное сечение канала после механического зажима. (d) Контуры скорости потока, основанные на фиксированном поперечном сечении, полученном при 50 мкм л / мин. (e) Вид снизу канала с высоким соотношением сторон, заполненного водой с синими пятнами для лучшей визуализации.(f) Макаронные изделия, расположенные в виде змеевика, деформированного под углом 45 °, с образованием скрученной змеевидной структуры. Поперечные сечения криволинейных (g) и прямых (h) участков конструкции после зажима. (i) Изолинии скорости в заданных сечениях, полученные при 50 мкм л / мин. (j) Изометрический вид извилистой змеевидной структуры, заполненной водой с голубыми пятнами, чтобы подчеркнуть ее трехмерную природу. Пунктирными линиями обозначены точки рассечения предыдущих сечений.

Витая канал серпантина была сделана путем принятия такой же процедура, описанной выше, и затем прессование структуры макаронных изделий с использованием второго LEGO ® опорной плиты сверху, пока он не был в контакте с нижней опорной плитой [рис.]. Скрученный канал имел переменное поперечное сечение в разных точках канала. Поперечное сечение резко изменилось по сравнению с формой крыла на прямом участке змеевика [Рис. ] до прямоугольной формы на крутых поворотах змеевика [рис. ]. Это привело к существенно различающимся профилям потока в разных местах канала, что подтверждается численным моделированием [Рис. ], которые были основаны на зажимаемых поперечных сечениях (см. дополнительный материал Рис. S11).Канал PDMS был заполнен окрашенной в синий цвет водой для визуализации ее трехмерного закрученного эффекта, как показано градиентом синего цвета на прямых участках канала и концентрированным темно-синим цветом на кривых [Рис. ]. Эту нерегулярную структуру можно использовать для наблюдения за динамикой частиц при изменении поперечного сечения каналов. ⁴⁷

Более сложные трехмерные структуры, встроенные в PDMS

Затем мы исследовали полезность метода шаблонов макаронных изделий для создания более сложных микрофлюидных структур.Во-первых, мы изготовили Y-образный канал с различными диаметрами каналов, объединив тонкую нить из макаронных изделий (Ø 0,8 мм) с толстой полосой из макаронных изделий (Ø 1,5 мм) [Рис. ], что хорошо видно на СЭМ-изображениях [рис. ]. Это позволило нам изучить боковую миграцию частиц через канал. Путем впрыскивания 15 мкм мкм частиц полистирола в меньший канал мы наблюдали боковую миграцию частиц к большему каналу сразу после соединения [Рис. ]. Сильное изменение диаметров канала вызвало достаточную гидродинамическую подъемную силу ⁴⁸, притягивающую частицы к большему каналу.Это также было подтверждено численным моделированием [Рис. ]. Визуализированный вид структуры y-канала, используемой в нашем моделировании, представлен на рис. S12 (дополнительный материал). Это явление было дополнительно продемонстрировано с более мелкими частицами размером 8 мкм, мкм и 7,3 мкм, мкм флуоресцентными частицами (см. Дополнительный материал Video S4 + Video S5). Увеличение расхода воды через больший канал приводит к полной миграции частиц в конце канала (см. Дополнительный материал Video S4).Такие структуры могут быть полезны для изучения боковой миграции биочастиц под действием гидродинамических сил. ⁴⁹

Более сложные трехмерные структуры, созданные с помощью шаблонов макаронных изделий. (а) Две пряди макаронных изделий разного диаметра (Ø 0,8 мм и Ø 1,5 мм) объединены для создания Y-образного канала. Пунктирная линия указывает точку рассечения для следующего поперечного сечения. (b) SEM показывает разницу в высоте в поперечном сечении на выходе Y-канала. (c) Сшитое изображение с высоким разрешением, полученное с помощью инвертированной микроскопии, показывающее 15 мкм мкм частиц, введенных в малый канал, мигрирующих латерально к большому каналу.(d) Моделирование отслеживания частиц показывает миграцию частиц в стыке y-канала. Следы частиц окрашены в соответствии с величиной скорости. На вставке показаны изолинии скорости потока на выходе, полученные при 50 мкм л / мин на каждом входе. (e) Макаронные изделия, сформированные в спиральную структуру с помощью винта диаметром 3 мм. Проведение внутри спирали стало видимым с помощью воды, окрашенной в синий цвет. (f) Вид сбоку спирального канала, встроенного в цилиндрический блок PDMS, заполненного водой, окрашенной синим цветом для визуализации.

Наконец, мы создали трехмерный спиральный канал, полностью инкапсулированный в PDMS, путем наматывания пропитанной нити макарон вокруг винта диаметром 3 мм [Рис. ]. Затем макаронные изделия оставляли сушиться и снимали с шнека. Полученную спиральную структуру помещали в пробирку Эппендорфа на 1,5 мл. ПДМС наливали в пробирку для погружения макаронных изделий и через 48 часов получали цилиндрический блок из ПДМС с заделанной спиралью макаронных изделий. Чтобы удалить макароны, мы замочили блок ПДМС в 1 М гидроксиде натрия (NaOH). NaOH был способен постепенно портить макароны, чтобы образовался пустой спиральный канал в PDMS.Ручное прессование каждый час (в общей сложности до 6 часов) было необходимо для удаления распавшихся частей макаронных изделий и обеспечения того, чтобы вся залитая паста подвергалась воздействию раствора NaOH. После удаления всех фрагментов пасты спиральный канал промывали водой со скоростью 120 мк л / мин в течение 10 мин для удаления любых следов NaOH. Затем этот пустой спиральный канал был заполнен водой, окрашенной синим цветом, для визуализации, что указывало на отсутствие утечки [Рис. ]. Спиральные структуры могут использоваться для усиления пассивного перемешивания путем создания вихрей Дина ^44,50, а также для создания электронных устройств на основе микрожидкостей.^26,51 Этот метод жертвенного формования ^26,51 облегчает изготовление многослойных каналов PDMS, полезных для устройств «орган на кристалле». ^52–54

ВЫВОДЫ

Мы разработали новый процесс для изготовления микрожидкостных структур от микро до миллиметров. Этот так называемый метод изготовления «сделай это в классе» включал только доступные и доступные расходные материалы и оборудование, о чем свидетельствует использование макаронных изделий, вазелина и обычной печи.Мы смогли изготовить традиционные структуры, используемые в микрофлюидике (прямые каналы, змеевики, смесители и генераторы капель), а также нетрадиционные структуры (змеевики с высоким соотношением сторон, скрученные змеевики, Y-каналы с различной высотой поперечного сечения и трехмерные спиральные каналы. ).

С помощью нашего метода высоту канала можно удобно контролировать, изменяя время осаждения, что позволяет контролировать профили поперечного сечения от полукруглых до почти полностью круглых.Кроме того, пользователь не ограничен геометрией и структурой макаронных изделий, поскольку она может быть изменена с помощью методов вычитания, а также процесса замачивания-сушки для индивидуальных конфигураций, как показано. Изготовление многослойных структур, пригодных для изготовления устройств ⁵² «орган на кристалле», также возможно путем удаления макаронных изделий с помощью NaOH. Кроме того, макаронные изделия меньшего диаметра также можно использовать для создания меньших каналов, а шероховатость поверхности макаронных изделий можно регулировать, пока макароны мягкие.

Наш метод не обеспечивает точности, разрешения и качества поверхности (гладкости) обычно используемых технологий микротехнологии. ⁵⁵ Несмотря на эти недостатки, он позволяет полностью проводить процесс изготовления в классе. ⁵⁶ Этот метод также сочетает в себе этапы проектирования и изготовления и поэтому подходит для не инженеров, которые не обязательно обладают достаточными знаниями САПР. С помощью нашего метода мы можем преодолеть разрыв между классом и лабораторией, облегчая проведение курсов по микрожидкостным проектам, которые развивают навыки творческого и критического мышления, которые очень востребованы у нынешних сотрудников.

Вместе с другими самодостаточными микрофлюидными системами с ручным управлением, ^57–60 метод шаблонов макаронных изделий может облегчить знакомство биологов и практиков с развивающейся областью микрофлюидики. Кроме того, наш метод способствует расширению области микрофлюидики в учреждениях и странах, которые не имеют доступа к средствам микропроизводства, но желают участвовать в развивающемся рынке микрофлюидики.

Персонал кафедры — Национальный медицинский университет «Мемориал Пирогова»

Химич Сергей Дмитрович

Заведующий кафедрой, профессор, доктор медицинских наук Сергей Химич родился 20 января 1959 года в Винницкой области.С отличием окончил два учебных заведения: в 1978 г. — Бершадское медицинское училище, получив квалификацию фельдшера, в 1986 г. — Винницкий медицинский институт имени М.И. Пирогова. С 1986 по 1988 годы учился в клинической ординатуре на кафедре общей хирургии. С сентября 1988 г. начал работать старшим лаборантом, а с января 1990 г. — ассистентом кафедры общей хирургии Винницкого медицинского института. Е. Пирогов. В январе 1992 года защитил диссертацию на соискание ученой степени кандидата медицинских наук на тему «Использование протока мочевого пузыря в хирургии холецистита».Впоследствии он активно занимался научной и учебно-методической работой. В 2004 году защитил диссертацию на тему «Анализ морфофункциональных особенностей развития и течения некоторых острых хирургических заболеваний органов брюшной полости у людей с ожирением» на Специальном ученом совете Харьковского государственного медицинского университета. В 2001 году Сергей Дмитрович был избран доцентом, а в 2005 году — профессором. С 2016 г. по настоящее время — заведующий кафедрой общей хирургии ВНМУ.Е. Пирогов. Он автор и соавтор более 350 научных работ, 108 инновационных предложений и 15 изобретений. Его научные работы были представлены и опубликованы в различных изданиях в Украине, России, Беларуси, Грузии, Молдове, Болгарии, Германии, Словакии, США, Венгрии, Швейцарии, Польше. С 1992 г. по настоящее время разработаны учебные программы и проведено 26 научно-практических и учебно-методических конференций с изданием печатных материалов.Химич С.Д. является соавтором первого национального учебника «Общая хирургия» для студентов высших медицинских учебных заведений Украины III-IV уровней аккредитации, который стал основным учебным пособием по данной дисциплине. Со временем учебник был переработан и издан на русском языке. Эти учебники одобрены Министерством образования и науки Украины как официальные учебники для студентов высших учебных заведений Украины. В начале 2004 года под редакцией Химича С.Д. издан учебник «Хирургия» для студентов высших медицинских учебных заведений Украины первого и второго уровней аккредитации; 2010 г. — соавтор учебника «Хирургия» для студентов стоматологических факультетов ВУЗов III-IV уровней аккредитации.В 2011 году по запросу Государственного комитета телевидения и радиовещания Украины в рамках программы «Украинская книга» индивидуально выпущено «Справочник хирурга». В 2016 году в соавторстве под непосредственной редакцией Химич С.Д. издан учебник «Симптомы и синдромы в хирургии». В 2019 году под непосредственной редакцией Сергея Химича был издан базовый учебник по общей хирургии для иностранных студентов, обучающихся в ВУЗе Украины на английском языке. Работая в Университетской клинике, профессор Химич С.Д. является не только ученым и педагогом, но и выполняет значительную работу в качестве хирурга и организатора.Освоив современные методы диагностики и лечения сложных хирургических заболеваний, он постоянно оказывает консультативную помощь пациентам и проводит сложные хирургические вмешательства, передавая свой опыт молодым хирургам.
С.Д. Химич награжден Почетными грамотами Минздрава и Минобрнауки Украины, Заслуженный деятель науки года (2019), является академиком НАН Украины и членом Коллегии Ассоциация хирургов Украины.

Желиба Николай Дмитрович

профессор, доктор медицинских наук. На кафедре работает с 1976 года. В 1983 году защитил кандидатскую диссертацию на тему: «Комплексное лечение осложненного холецистита у пожилых и пожилых людей». В 1988 г. присвоено звание доцента кафедры общей хирургии. Он защитил докторскую диссертацию на тему: «Профилактика и лечение послеоперационной раневой инфекции и гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей», а в 2003 году получил ученое звание профессора кафедры общей хирургии.
Член правления Ассоциации хирургов Винницкой области, специализированного ученого совета Д.05.600.01 — Хирургия, Аттестационная коллегия хирургических дисциплин.

Жученко Александр Петрович

профессор, доктор медицинских наук, окончила Винницкий медицинский институт. Н.И. Пирогов с отличием с 1979 по 1979 — 1981 гг. Работал старшим лаборантом кафедры общей хирургии. 1981 — 1985 гг. Учился в аспирантуре хирургии на кафедре общей хирургии.В 1986 — 1997 годах работал ассистентом отделения общей хирургии. В октябре 2008 года успешно защитил докторскую диссертацию на тему: «Актуальные вопросы острых заболеваний органов брюшной полости, профилактики и лечения гнойно-воспалительных осложнений послеоперационных ран», в апреле 2009 года получил диплом доктора медицинских наук по специальности. «Операция». С 2015 года по настоящее время — профессор кафедры общей хирургии.

Палий Виктор Гордиевич

профессор, доктор медицинских наук В 1995 году окончил Винницкий государственный медицинский институт.Пирогова Е., в 2002 г. — Национальная фармацевтическая академия Украины. С 1995 по 1998 годы учился в магистратуре по специальности хирургия на кафедре общей хирургии Винницкого государственного медицинского университета. Е. Пирогов. В 2006 году защитил докторскую диссертацию на тему: «Микробиологическое обоснование применения четвертичных аммониевых антисептиков в медицине». Читает лекции и проводит практические занятия со студентами 2 и 3 курсов медицинского и фармацевтического факультетов. Свободно владеет языком B2 (сертификат IELTS).Имеет высшую аттестационную категорию по хирургии. Консультирует пациентов реанимационного отделения №1 г. Винницы. Член специализированного ученого совета К.05.600.05 Винницкий национальный медицинский университет. E. Министерство здравоохранения Украины. Изобретатель, соавтор 17 патентов, 124 печатных работ, 5 монографий и учебников, в том числе: «Общая хирургия», изд. проф. M.D. Zhelibi, S.D. Химича К. Медицина, 2010, «Микробиология (практикум)» Винница, Эдельвейс и К., 2009, «Медицинская микробиология, вирусология, иммунология», под ред.Академика НАН, НАМН Украины Широбокова, Винница, Новая книга, 2011 (на украинском языке), 2015 (на русском языке). Подготовил трех кандидатов медицинских наук.

Нагайчук Василий Иванович

профессор, доктор медицинских наук Родился 16 августа 1947 года в пос. Кудлай Немировского района Винницкой области.
Винницкий медицинский институт. Пирогов Е.П. окончил институт в 1972 году и после прохождения интернатуры по хирургии в Немировском центральном медицинском центре с 1973 по 1976 год работал заведующим хирургическим отделением на 25 коек Оратовской районной больницы.
С 1976 года — врач-ординатор в отделении на 40 коек Винницкой областной клинической больницы. Пирогов Е.А., с 1987 г. — заведующий ожоговым отделением.
В 1995 г. принимал активное участие в организации и открытии государственного реабилитационного отделения ожоговых выздоравливающих на 20 детских и 40 взрослых коек на базе санатория «Авангард» г. Немиров Винницкой области.
В 1998 г. защитил кандидатскую диссертацию «Био-гальванизация в остром периоде ожоговой болезни» по специальности «Хирургия».С 2005 г. доцент кафедры общей хирургии Винницкого национального медицинского университета. Е. Пирогов.
В 2009 году защитил докторскую диссертацию «Тактика раннего хирургического лечения поверхностных и глубоких ожогов с использованием лиофилизированных ксенодермоимплантатов, активируемых био-гальваническим током» по специальности «Хирургия».
член-корреспондент Академии технологических наук Украины (с 20 мая 2011 г.), член Европейской академии естественных наук (с 8 августа 2011 г.), основатель научной школы «Биоактивационная терапия и реабилитация в ожоговой практике», Доктор медицинских наук, доцент кафедры общей хирургии медицинского университета.Пирогов Е.П., заведующий ожоговым отделением Винницкой областной клинической больницы. Е. Пирогов.
Разработчик нового направления комбустиологии «Вегетативная коррекция и био-гальванизация в ожоговой практике». Разработал и внедрил ряд прорывных технологий: «Быстрая нейтрализация травматического действия гипертермических экзо-, эндогенных факторов поражения», «Хирургическая некрэктомия в период ожогового шока с распространенными поверхностными и глубокими ожогами с использованием лиофилизированной ксенодермолимфомы». с широко распространенными глубокими ожогами микроавтодермотрансплантатами с применением биогальванизации »,« Анемия некрэктомия в период ожогового шока с последующим восстановлением м. кожного покрова сетчатыми аутодермотрансплантатами 1: 4, 1: 6 с применением биогальванизации »,« Лечение больных с ожогами, отморожениями,
Под руководством Нагайчука В.И. защищены 2 кандидатские диссертации.В 2012 году успешно защитил докторскую диссертацию врачом-комбустиологом Поворозник А.М. на тему «Повышение эффективности хирургического лечения больных с глубокими ожогами за счет преодоления донорских ресурсов». В 2016 году успешно защитил кандидатскую диссертацию доктора Стойки В. на тему «Пути повышения эффективности лечения больных с обморожениями». В 2012 году подготовлена и защищена магистерская диссертация магистра отделения общей хирургии Халеда Махмуда Басюни Фаррага на тему «Лазерная допплеровская флоуметрия как метод контроля коррекции нарушений микроциркуляции в коже сильно обгоревшего препарата Волювен».С 2016 г. — консультант PhD.
В среднем на базе отделения обучается 500 студентов Винницкого национального медицинского университета имени Ющенко. Пирогова и 200 практикантов.
Автор и соавтор 8 монографий, 162 научных работ, 6 инновационных предложений, 3 авторских свидетельств, 11 методических рекомендаций, 18 патентов, 7 из которых на изобретения. Награжден грамотой II века. и серебряная медаль за развитие нового направления в медицине «Био-гальванизация» в 1998 г., многочисленные почетные грамоты, в том числе Почетная грамота МОЗ Украины No.109-КН от 08.06.2005 г. за значительный личный вклад в развитие здравоохранения и высокий профессионализм.
В научных трудах Василия Ивановича Нагайчука изложены современные технологии раннего хирургического лечения поверхностных и глубоких ожогов в условиях влажной камеры методами био-гальванизации (токи малой силы без внешних источников)

Ошовский Иван Никифорович

доцент, кандидат медицинских наук, окончил Винницкий медицинский институт им. М.И. Пирогова в 1970 году.1970-1972 гг. Служба в Советской Армии. 1972-1974 гг. Клиническая ординатура при хирургическом отделении ВМИ. 1974 — 1977 Ассистент кафедры общей хирургии. 1977 — 1979 гг. Прикомандирован к хирургии в Республику Сьерра-Леоне. С 1980 г. работает в отделении общей хирургии. В 1983 году защитил кандидатскую диссертацию на тему «Лечение острого панкреатита и холеканкреатита». С 1991 года доцент кафедры общей хирургии. Хирург высшей квалификации.Широко внедрен в клинику метод лечения острого панкреатита и холеканкреатита. Автор 10 крыс. 54 научных публикации.

Вильцанюк Александр Афанасьевич

доцент, кандидат медицинских наук, лауреат Государственной премии Украины в области науки и техники Вильцанюк Александр Афанасьевич, врач-хирург высшей категории, работает на кафедре общей хирургии с 1987 года.В 1989 г. защитил диссертацию на соискание ученой степени кандидата медицинских наук по теме «Морфологическое обоснование профилактики осложнений при хирургическом лечении острой кишечной непроходимости», а в 1996 г. присвоено ученое звание доцента.
Вильцанюк А.А. соавтор 8 препаратов для местного лечения гнойно-воспалительных процессов и новых видов хирургических шовных материалов из углеродно-модифицированных нанотрубок, углеродных нанотрубок с антисептиками, наночастиц серебра и наномодифицированных тканевых имплантатов.В 2016 году Государственная премия Украины в области науки и техники присуждена за разработку методов эфферентной терапии и препаратов на основе нанодисперсного кремнезема с антимикробными свойствами для местного лечения гнойно-воспалительных процессов. Автор и соавтор 320 научных работ, 5 учебников, 6 монографий, одна из которых издана в Германии, 58 авторских свидетельств и патентов на изобретения, 8 информационных листов Минздрава Украины, Вильцанюк О.А. подготовила 2 магистра. Медицины и 4 кандидата медицинских наук.
Основные направления исследований: профилактика и лечение послеоперационных гнойных осложнений и гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей, наномодифицированные хирургические швы и сетчатые имплантаты для гриплопластики.

Шевня Петр Семенович

доцент, кандидат медицинских наук, окончила Винницкий медицинский институт. Пирогова в 1972 году. С 1972 по 1973 год стажировался в Тульчинском ЦРЛ. С 1973 по 1983 год работал ординатором хирургического отделения ЦРЛ №4 г. Винница.Хирург высшей категории. В 1983 году избран ассистентом кафедры общей хирургии. В 1996 г. — доцент кафедры общей хирургии.

Фунников Анатолий Владимирович

доцент, кандидат медицинских наук Родился 29 мая 1957 года в г. Староконстантинов Хмельницкой области. В 1972 году с отличием окончил среднюю школу. С 1972 по 1976 год учился в Винницком мед. школа им. Ак, Джек. Болото, который закончил с красным дипломом.С 1976 по 1977 год работал фельдшером в Винницкой области. их. Е. Пирогов. С 1977 по 1979 год служил подряд в звании Б в МВД СССР в Киеве. С 1979 по 1985 годы учился в ДМИ им. Пирогова, окончившего с отличием. С 1985 по 1987 год учился в клинической ординатуре по хирургии на кафедре детской хирургии. Факультет ВМИ им. Е. Пирогов. С 1987 по 1998 год работал ассистентом отделения общей хирургии.Е. Пирогов. В 1993 году защитил кандидатскую диссертацию. диссертация: «Хирургическое лечение осложненных кист поджелудочной железы». С 1998 г. по настоящее время доцент кафедры общей хирургии мед. № 1 ВНМУ им. М.И. Пирогова. В 2000 г. секретарь Попечительского совета по хирургическому профилю ВНМУ. Е. Пирогов. В 2010 г. — зам. декан милая. Ф-Вт №1 в V — VI курсах. Имеет 82 печатных произведения и 2 патента на изобретения.

Бурковский Николай Иванович

доцент, кандидат медицинских наук В 1988 году окончил Винницкий медицинский институт.М.И. Пирогов. С 1989 по 1989 годы проходил хирургическую интернатуру в хирургическом отделении Яготинского ЦРК Киевской области. С 1989 по 1994 год работал хирургом в Барышевском ЦРБ Киевской области. В 1994 году поступил в клиническую ординатуру Винницкого государственного медицинского университета. Окончил отделение госпитальной хирургии в 1996 году. В сентябре-ноябре 1996 года работал врачом-хирургом Вороновичского ЦРБ Винницкой области. С декабря 1996 г. по декабрь 1999 г. — аспирант кафедры общей хирургии Винницкого государственного медицинского университета.М.И. Пирогов. С декабря 1999 г. — доцент кафедры общей хирургии Винницкого национального медицинского университета. М.И. Пирогов. В сентябре 2000 г. на Специализированном совете Винницкого государственного медицинского университета. М.И. Пирогов защитил кандидатскую диссертацию на тему «Внутриартериальное применение антибиотиков в тенях аутологичных эритроцитов в комплексном лечении ишемически-гангренозной формы синдрома диабетической стопы». В декабре 2000 г. присвоена ученая степень кандидата медицинских наук, а в ноябре 2013 г. — звание доцента кафедры общей хирургии.Он является автором и соавтором 102 научных работ, 16 из которых являются патентами на изобретения. В декабре 2000 г. присвоена ученая степень кандидата медицинских наук, а в ноябре 2013 г. — звание доцента кафедры общей хирургии. Он является автором и соавтором 102 научных работ, 16 из которых являются патентами на изобретения. В декабре 2000 г. присвоена ученая степень кандидата медицинских наук, а в ноябре 2013 г. — звание доцента кафедры общей хирургии.Он является автором и соавтором 102 научных работ, 16 из которых являются патентами на изобретения.

Превар Анатолий Петрович

доцент, кандидат медицинских наук В 1992 году с отличием окончил Винницкий медицинский институт. Е. Пирогов. 1992-1995 гг. — интернатура в хирургическом отделении МЦЛ №4 г. Винницы. С 1995 по 1999 год работал врачом-ординатором хирургического отделения межрегиональной соматической больницы при учреждении ИБ 301/81.1999-2001 гг. — обучение в клинической ординатуре на кафедре госпитальной хирургии. Е. Пирогов. С 2001 по 2004 год учился в аспирантуре на кафедре общей хирургии ВНМУ. В 2005 году защитил кандидатскую диссертацию «Оптимизация комплексного лечения гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей». С 2004 г. — доцент, с 2012 г. — доцент кафедры общей хирургии. Хирург высшей категории, имеет 54 научных публикации, 2 патента на изобретение.

Чепляк Алексей

доцент, кандидат медицинских наук 2000 — окончила Винницкий государственный медицинский университет.Е. Пирогов. 01.08.2000-31.01.2002 — Врач-хирург-интерн МЦЛ №2 г. Винница. 2002-2005 гг. — аспирантура на кафедре общей хирургии ВНМУ. Е. Пирогов. С 2006 г. — доцент, с 2014 г. — доцент кафедры общей хирургии. Оказывает лечебно-консультативную помощь пациентам Винницкого МКЛ №1. 2010 г. — приказом МОЗ Украины присвоена высшая квалификационная категория по специальности «Хирургия». 2011 г. — обучение на факультете повышения квалификации преподавателей Национального медицинского университета.Богомолец О.О. «Современные инновационные технологии медицинского образования. Актуальные проблемы общей хирургии ». 2012 г. — прошел цикл тематических усовершенствований «Лапароскопические и другие малоинвазивные технологии в хирургии и урологии».

Лутковский Руслан Анатольевич

, доцент, кандидат медицинских наук, Лутковский Руслан Анатольевич, кандидат медицинских наук, доцент кафедры общей хирургии, врач — хирург первой категории, работает на кафедре общей хирургии с 2012 года.29 января 2013 года защитил диссертацию на соискание ученой степени кандидата медицинских наук по теме: «Обоснование эффективности использования хирургического шовного материала, модифицированного углеродными нанотрубками и антисептиком, для профилактики послеоперационных гнойных осложнений».
Лутковский Р.А. Соавтор хирургического шовного материала, модифицированного углеродными нанотрубками и антисептиком. Автор и соавтор 32 научных работ, 5 патентов на изобретения и 1 информационного листа Министерства здравоохранения Украины, который внесен в реестр инноваций и внедрен в медицинскую практику.Неоднократно выступал на международных конференциях, в том числе в Республике Беларусь и Польше.
Основные направления исследований: наномодифицированные хирургические швы и наномодифицированные сетчатые имплантаты с антимикробными свойствами для гриопластики.

Чернопищук Роман

ассистент, кандидат медицинских наук В 2012 году окончил Винницкий национальный медицинский университет. Пирогова. С 2012 по 2015 год проходил стажировку по специальности «Хирургия» в отделении общей хирургии и хирургическом отделении МЦЛ №1 г. Винница.Завершил и защитил кандидатскую диссертацию на тему: «Форм-фактор нейтрофильных гранулоцитов как морфометрический критерий оценки течения раневого процесса». С 2015 по 2017 год — аспирант дневного отделения общей хирургии. Во время учебы в аспирантуре защитил диссертацию на тему «Местная иммунокоррекция в комплексном лечении инфицированных ран» (экспериментально-клиническое исследование).

Наталья Вендичанская

старший лаборант Окончила Винницкий медицинский университет в 1989 году, работает на кафедре с 1979 года.В 1993-1995 гг. Обучалась в клинической ординатуре. Отвечает за ведение документации в отделе и за безопасность.

Семиз Светлана Петровна

лаборант На кафедре работает с 1994 года. В 1969 году окончил медицинское училище в Виннице. Ответственный за обеспечение учебного процесса на кафедре.

Марущак Людмила Михайловна

лаборант Работает на кафедре с 1994 года.Отвечает за ведение ведомственной документации.

Проина Зинаида Никитовна

лаборант Работает на кафедре с 1972 года. Отвечает за обеспечение учебного процесса на базе кафедры в ВКЛ.

Полычун Оксана Дмитровна

рабочий председатель В отделении работает с 2010 года. Работа отделения общей хирургии — отвечает за санитарное состояние отделения.

ПОДАТЬ ЗАЯВКУ

[contact-form-7 id = ”2152 ″ title =” Apply Now ”]

IJMS | Бесплатный полнотекстовый | Противомикробные пептиды как новые комбинированные агенты в терапии рака: многообещающий протокол против опухолевых сфероидов HT-29

1. Введение

Несмотря на недавние достижения в области лечения, рак по-прежнему остается ведущей причиной смерти во всем мире. Терапия, основанная на хирургическом вмешательстве, лучевой терапии, химиотерапии или их комбинации, может продлить период выживания пациента.Однако есть много препятствий, которые могут повлиять или ограничить их эффективность. Некоторые из препятствий возникают из-за внутриопухолевой сложности и гетерогенности, а также из-за взаимодействия клеток внутри опухоли или с окружающей микросредой [1,2]. Это может ограничить доступ лекарства ко всему объему опухоли, что приведет к устойчивости к химиотерапии [1,3,4]. Еще одна неприятная проблема связана с недостаточной специфичностью некоторых противоопухолевых препаратов, которые также убивают здоровые клетки, что приводит к токсическим побочным эффектам [5].В последние годы некоторые из привлекательных соединений, которые были протестированы in vitro и которые, как ожидается, превзойдут обычные ограничения лекарственных средств, представляют собой антимикробно-противораковые пептиды (AMP). АМП являются важными компонентами системы врожденного иммунитета хозяина, которые секретируются большим количеством организмов в ответ на различные патогены и стрессовые условия [6]. Благодаря своим характеристикам, таким как высокая гидрофобность и положительный общий заряд, AMP можно считать ценным ресурсом с низкой склонностью вызывать развитие резистентности раковых клеток.Эти характеристики придают пептидам повышенное сродство к клеточным мембранам. По сравнению со здоровыми клеточными мембранами, мембраны раковых клеток заряжены отрицательно, что облегчает прикрепление пептида к мембране с последующим его разрушением с помощью различных механизмов. Более того, AMP обладают пониженной токсичностью для быстро пролиферирующих здоровых клеток [7,8,9,10]. В зависимости от структуры и концентрации пептида были описаны различные механизмы действия AMP, такие как образование мембранных детергентоподобных «ковров» или дискретных мембранных пор, которые рассеивают ионные градиенты [11,12,13].До сих пор большинство результатов, касающихся противоопухолевых эффектов AMP, было получено в экспериментах, проведенных на двумерных (2D) культурах клеток [14,15]. В 2D-культурах клетки выращивают в нереальных условиях на жестких материалах, таких как полистирол и стекло. Этот тип культуры неправильно отражает истинную морфологию реальных тканей. Эти условия изменяют тканеспецифическую архитектуру (трехмерную форму клетки), механические и биохимические сигналы и последующие пути межклеточной коммуникации, влияя на результаты [16].Эти ограничения преодолеваются с помощью систем трехмерного культивирования (например, сфероидов). Клеточные сфероиды более точно имитировали некоторые особенности опухоли [17], таким образом, становясь важными инструментами для исследований in vitro, связанных с доставкой лекарств и устойчивостью к лекарствам [18]. Ожидается, что из-за сложности сфероидов концентрации АМФ, необходимые для оказания того же биологического эффекта, что и в 2D-культуре, будут выше, как и у других изученных препаратов [19,20]. Альтернативный многообещающий подход, о котором сообщается в научном сообществе, — это использование протоколов комбинации лекарственных препаратов, которые дают лучшие результаты на сфероидах или ксенотрансплантатах опухолей [21], а также у пациентов [22].Пептид, который вызвал большой интерес в последние годы, — это грамицидин A (GA), короткий пептид из 15 аминокислотных остатков, продуцируемый Aneurinibacillus migulanus (ранее известный как Bacillus brevis), с известной эффективностью против бактерий, грибов и простейших [23,24]. Известно, что GA формирует ионные каналы, которые могут способствовать диффузии одновалентных ионов (Na ⁺ и K ⁺), что приводит к изменениям внутриклеточной осмоляльности и, наконец, к гибели клеток [25]. Недавно сообщалось о его противоопухолевом действии на почечно-клеточную карциному [26,27], клетки рака желудка [28] или клетки поджелудочной железы [29].Более того, было показано, что GA, используемый в сочетании с куркумином, убивает клетки, экспрессирующие переносчик ABCG2, связанный с множественной лекарственной устойчивостью, путем стимулирования истощения уровней АТФ [30].

Целью этого исследования было оценить эффекты двух соединений — GA (AMP) и известного противоопухолевого препарата Doxo — доставляемых отдельно или в комбинации против систем трехмерных культур клеток (т. Е. Сфероидов). Эксперименты проводились на клетках колоректального рака HT-29, и эволюция сфероидов для всех экспериментальных условий оценивалась с помощью световой микроскопии.Анализы жизнеспособности клеток и АТФ использовали для количественной оценки эффектов GA и Doxo на исследуемые системы. Оба соединения, доставляемые по отдельности или в комбинации, влияют на организацию сфероидов, снижая жизнеспособность клеток и уровень клеточного АТФ. Было показано, что два соединения действуют синергетически против клеток рака прямой кишки 3D.

3. Обсуждение

Недавние исследования связали микросреду, присутствующую в опухолях, с координацией роста опухоли, метастазирования и устойчивости к противоопухолевой терапии [35].Кроме того, тот факт, что 2D-системы не позволяют правильно прогнозировать терапевтическую эффективность лекарственного средства при viv, привел к увеличению использования трехмерных сфероидных моделей опухоли для оценки лекарств, которые лучше имитируют in viv-условия внутриопухолевого пространства [36]. широко распространен во всем мире и считается вторым по распространенности раком у женщин и третьим у мужчин [37,38]. Эффективность терапии колоректального рака и выживаемость пациентов ограничены побочными эффектами, такими как развитие лекарственной устойчивости или высокая токсичность для здоровых клеток [39,40].Поиск новых, более эффективных лекарств [41] или использование комбинированной химиотерапии [39,40] — вот некоторые из решений упомянутых проблем. В недавних исследованиях сообщалось об использовании различных лекарств (5-фторурацил, симвастатин и иринотекан) или природных соединений (гелам-мед, куркумин и т. Д.) В качестве возможных синергических комбинаций против клеточных линий рака толстой кишки in vitro и in vivo [42,43, 44,45,46]. Принимая во внимание недавний импульс использования противоопухолевых пептидов, существует значительное количество исследований лекарств, которые более эффективны против клеточных линий рака толстой кишки [14,15,47,48,49,50].Однако существует лишь несколько исследований, в которых пептиды тестируются на сфероидах рака толстой кишки [51,52,53].

Учитывая эти факторы, комбинацию обычных химиотерапевтических агентов с природными соединениями, в нашем случае AMP (GA), можно рассматривать как новый подход, который, возможно, лучше повлияет на исследования и лечение рака толстой кишки.

Как уже упоминалось, мы изучили эффекты GA и известного химиотерапевтического препарата Doxo, вводимых отдельно и в комбинации, против колоректальных сфероидов HT-29.Две молекулы были выбраны из-за их различных механизмов действия: GA — это ионофор, который формирует мембранные каналы и снижает уровень АТФ в клетках [26,54], в то время как Doxo, как известно, генерирует активные формы кислорода, изменяя ДНК и нарушая процессы репарации ДНК. [55]. При выборе препаратов мы также учитывали размер их молекул. Предыдущие исследования показали, что использование двух противораковых соединений с разной молекулярной массой снижает эффективность проникновения высокомолекулярных агентов [56].В нашем случае, используя два соединения, оба с низким молекулярным весом, мы показали, что отдельные или комбинированные методы лечения эффективны против сфероидов. При лечении только одним из препаратов диаметр сфероидов уменьшался, причем наибольшее влияние оказывала ГА. При более высоких концентрациях GA сфероиды были дестабилизированы, в результате чего образовалось облако отделившихся клеток вокруг основного ядра сфероидов. Напротив, в случае лечения Doxo сфероиды оставались неповрежденными, но становились темнее с увеличением концентрации лекарства.Однако при использовании в комбинации два препарата вызывали увеличение размера сфероидов. Это могло быть связано с GA, который при использовании в малых концентрациях приводил к изменению целостности сфероидов, что позволяло лучше проникать Doxo, что наблюдалось по потемнению сфероидов даже при меньших концентрациях.

Мониторинг жизнеспособности клеток путем анализа морфологии сфероидов подтвердил результаты — оба препарата, применяемые по отдельности, эффективны против сфероидов, а их комбинация еще больше снижает жизнеспособность клеток.Благодаря механизму действия Doxo более эффективен через 24 часа по сравнению с GA. Однако эффект ГА лучше через 48 часов. Это может быть связано с эффективностью проникновения Doxo, которая со временем снижается. Однако ГА может дестабилизировать целостность сфероидов, и требуется больше времени, чтобы увидеть эффекты. Два разных механизма действия становятся важными, когда два препарата используются вместе. ГК способствует лучшему проникновению лекарственного средства внутрь сфероидов, как видно из более низких кривых жизнеспособности, полученных после комбинированного действия двух молекул.

Когда клеточные уровни АТФ измеряли отдельно для обеих молекул, уровни АТФ снижались с концентрацией и временем. У сфероидов, обработанных Doxo, было обнаружено большее снижение уровня АТФ, чем у сфероидов, обработанных только GA. Это открытие для GA было ожидаемым результатом, основанным на предыдущих исследованиях, которые показали, что этот пептид вызывает истощение энергии в почечно-клеточной карциноме [26,27]. Кроме того, известно, что Doxo убивает раковые клетки толстой кишки посредством апоптоза [57], и это было в других клеточных линиях показано, что ингибирует клеточное дыхание, что приводит к повышенной токсичности и снижению уровня АТФ [58,59].Таким образом, результаты, полученные для двух препаратов при раздельном применении, были ожидаемыми. Однако неожиданный эффект был обнаружен при использовании двух препаратов в комбинации. Хотя мы ожидали более значительного истощения энергии, экспериментальные данные показали более высокий уровень клеточного АТФ по сравнению с одним Doxo, предполагая, что GA защищает клетки от лечения Doxo. Хотя о защитном эффекте против Doxo сообщалось в предыдущем исследовании [58], цели упомянутого исследования не состояли в том, чтобы найти механизмы, с помощью которых истощение энергии вызывается двумя препаратами по отдельности или в комбинации.Основываясь на предыдущих результатах, Doxo продемонстрировал синергетический эффект в сочетании с другими молекулами против различных клеточных линий, как in vitro, так и in vivo [60,61,62,63]. В конечном итоге мы проверили с помощью индекса комбинации (CI), если эти два испытанные соединения обладают синергическим действием. Используя CI, можно также определить тип взаимодействия [64]. Комбинация GA и Doxo через 24 часа дала значения CI в диапазоне от 0,25 до 0,71, что указывает на синергетический тип взаимодействия. Для той же комбинации через 48 часов значения CI варьировались от 0.16 и 0,38, что свидетельствует о сильном синергизме.

4. Материалы и методы

4.1. Материалы

Доксорубицин (Doxo) и грамицидин A (GA) были приобретены у Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури, США). Структура GA была HCO-L-Val-Gly-L-Ala-D-Leu-L-Ala-D-Val-L-Val-D-Val-L-Trp-D-Leu-L-Trp-D-Leu. -L-Trp-D-Leu-L-Trp-NHCH ₂ CH ₂ OH. Диметилсульфоксид (ДМСО) был приобретен у Merck (Дармштадт, Германия), 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2,5-дифенилтетразолийбромид (МТТ) был приобретен у Serva (Гейдельберг, Германия) и CellTiter- Тест на жизнеспособность люминесцентных клеток Glo ^® был приобретен у Promega Corporation (Фитчбург, Висконсин, США).Все среды и реагенты для культивирования клеток были приобретены у Biochrome AG (Берлин, Германия).

4.2. Культура клеток

Клетки колоректальной аденокарциномы человека HT-29 (ATCC, Манассас, Вирджиния, США) культивировали в минимальной основной среде (MEM) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) и пенициллин-стрептомицина (0,05% -100 единиц / мл) в увлажненном инкубаторе в атмосфере, содержащей 5% CO ₂.

4.3. Формирование и анализ сфероидов

Для оценки образования сфероидов в течение 5 дней использовали различные посевные концентрации клеток HT-29 (1000, 2000, 2500, 5000, 7500 и 10 000 клеток на лунку).Конечный объем клеточной суспензии 200 мкл помещали в каждую лунку 96-луночного микропланшета с прозрачным круглым дном и сверхнизким прикреплением (Corning, NY, USA). После этого планшет центрифугировали 2 мин, а затем инкубировали при 37 ° C до 5 дней. Образование сфероида было подтверждено наблюдением за пластиной под световым микроскопом (бинокулярный микроскоп Olympus CX23, Дюссельдорф, Германия). Сфероиды контролировали ежедневно, а инкубационную среду заменяли каждые 3 дня.

4.4. Обработка сфероидов HT-29

Оценка обработки проводилась на сфероидах, полученных из исходной суспензии 5000 клеток / лунку.Через 3 дня были применены обработки Doxo и GA по отдельности или в комбинации. Только Doxo добавляли в четырех концентрациях (20, 50, 75 и 100 мкг / мл), в то время как только GA также добавляли в четырех концентрациях (10, 20, 40 и 60 мкМ). Для комбинированного лечения мы использовали две разные концентрации GA (10 и 20 мкМ), каждая в сочетании с другими 4 концентрациями Doxo. Изменения целостности сфероидов оценивали с помощью световой микроскопии через 24 и 48 ч после обработки.

4.5. Анализы жизнеспособности клеток

Жизнеспособность клеток оценивали с помощью анализа МТТ. Культуральную среду удаляли из каждой лунки после желаемого времени обработки (24 и 48 ч). В каждую лунку добавляли МТТ до конечной концентрации 1 мг / мл и культуру клеток дополнительно инкубировали. Через 4 ч среду удаляли и добавляли ДМСО для растворения образовавшихся кристаллов. Оптическое поглощение регистрировали при λ = 490 нм с помощью планшет-ридера Mithras LB 940 (Berthold, Германия). Жизнеспособность клеток рассчитывалась по следующей формуле:

% Жизнеспособных клеток = Скорректированное поглощение обработанных клеток Скорректированное поглощение контрольных клеток × 100

(1)

Значения полумаксимальной ингибирующей концентрации (IC ₅₀) оценивали путем аппроксимации данных с помощью логистического сигмоидального уравнения с использованием Origin 8.1 (Microcal Inc., Нортгемптон, Массачусетс, США).

4.6. Анализы АТФ Оценивали уровни

АТФ в обработанных сфероидах, как будет описано ниже. Здесь по 100 мкл среды удаляли из каждой лунки, затем оставшиеся 100 мкл со сфероидом переносили в непрозрачный 96-луночный планшет. После этого 100 мкл реагента CellTiter-Glo ^® (Promega, Мэдисон, Висконсин, США) добавляли к сфероидам, которые инкубировали при комнатной температуре в течение 10–15 минут при тщательном встряхивании, чтобы убедиться, что сфероиды разбиты. .Наконец, люминесценцию клеток измеряли с помощью планшет-ридера. Процент уровня АТФ рассчитывали по следующей формуле:

% АТФ = Скорректированное свечение обработанных клеток Скорректированное свечение контрольных клеток × 100

(2)

4,7. Анализ комбинированного индекса (CI)

Межлекарственные взаимодействия между GA и Doxo оценивали с использованием комбинированного индекса (CI), описанного Chou и Talalay, и рассчитывали с помощью программного обеспечения Compusyn [64,65].ДИ> 1 указывает на антагонизм к лекарственным средствам, ДИ = 1 указывает на аддитивный эффект препарата, а ДИ

4,8. Статистический анализ

Каждый эксперимент проводился по крайней мере три раза с по крайней мере 6 сфероидами на условие в каждом эксперименте. Все данные представлены как средние значения ± стандартное отклонение, если не указано иное. Статистический анализ проводился с использованием пакета программ GraphPad Prism 5 (Сан-Диего, Калифорния, США). Для расчета статистической значимости использовали односторонний дисперсионный анализ (ANOVA).Было выбрано значение p <0,05, чтобы указать, что разница статистически значима.

5. Выводы

Эксперименты in vitro на трехмерных клеточных культурах (т. Е. Сфероидах) являются более реалистичными моделями для изучения эффектов лекарств по сравнению с двумерными моделями. Пептид грамицидин А и лекарственный препарат доксорубицин, вводимые отдельно, можно успешно использовать в качестве химиотерапевтических агентов против сфероидов толстой кишки HT-29, снижая жизнеспособность клеток, а также истощая клеточную энергию (т.е.е., уровень АТФ). Грамицидин А и доксорубицин, вводимые одновременно с сфероидами HT-29, имели сильный синергетический эффект при применении в течение 48 часов, как показал комбинированный индекс.

Хотя необходимы дополнительные исследования для лучшего понимания механизмов синергии лекарств, наши данные демонстрируют, что этот подход может стать действенной стратегией лечения рака, по крайней мере, для клеток HT-29. Основываясь на этих выводах, мы можем далее сказать, что AMP являются хорошими кандидатами для будущих противораковых применений и исследований in vivo, даже в клинических испытаниях.

Введение

Рак является ведущей причиной смертности во всем мире, в настоящее время на него приходится примерно 1 из 6 случаев смерти [1]. Согласно недавнему отчету Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), в 2018 году было диагностировано 18 миллионов случаев рака и произошло 9,6 миллиона смертей, связанных с раком. Колоректальный рак и рак желудка являются третьим и пятым наиболее часто диагностируемыми видами рака, на них приходится 10% и 6% диагнозов рака, соответственно. Поэтому неудивительно, что эти типы рака ответственны за высокие показатели смертности, в основном из-за их плохого прогноза [1].В настоящее время лечение рака состоит в основном из хирургического вмешательства, химио- или лучевой терапии, а также генной или гормональной терапии. К сожалению, до сих пор явно не хватает доступных целевых методов лечения, несмотря на недавние разработки, включая терапевтические препараты с использованием антител, пептиды и другие низкомолекулярные терапевтические средства [2–4].

Мелиттин — широко изученный цитолитический пептид, полученный из пчелиного яда, и считается моделью как для катионных, так и для других цитолитических пептидов. Интересно, что он демонстрирует эффективность широкого спектра в качестве противовирусного, антибактериального, противогрибкового, противопаразитарного и противоопухолевого агента [2, 5–7].Это связано с тем, что цитолитическое действие мелиттина неселективно, влияя как на передачу сигнала, так и на регуляторные пути. Как таковой, мелиттин вызывает множественные механизмы гибели клеток, включая апоптоз, ингибирование пролиферации или ангиогенеза, остановку клеточного цикла и ингибирование подвижности, миграции, метастазирования и инвазии рака. Для лечения рака цитолитическая активность мелиттина в последние годы изучалась на различных типах клеток [8–15]. Во время апоптоза лизис клеток индуцируется за счет разрушения фосфолипидного бислоя, образования пор и увеличения проницаемости [6].Для клеток рака желудка было показано, что мелиттин индуцирует дозозависимый и зависящий от времени апоптоз и некроз, ингибируя пролиферацию клеток AGS. Эти эффекты визуализировались как сокращение клеток, неправильная форма клеток, отслоение клеток и повреждение мембран [11]. Более того, клеточные линии рака толстой кишки (HCT-116, CT26 и LS174T) тестировались только с конъюгатами мелиттина [6]. Мелиттин также индуцировал апоптоз через митохондриальные пути в клетках рака желудка SGC-7901 [10]. Кроме того, при сравнении чувствительности раковых клеток к мелиттину и нормальных клеток, одно исследование показало, что мелиттин был значительно более цитотоксичным для клеток рака легких человека, чем для контрольных клеток фибробластов легких человека [16].

Хотя известно, что мелиттин убивает раковые клетки, вызывая апоптоз, исследования по визуализации были несколько ограничены. Недавние исследования с помощью атомно-силовой микроскопии (АСМ), проведенные на липидных монослоях, выявили отчетливые морфологические изменения и четкое образование пор после добавления мелиттина [17]. Однако в исследованиях на целых клетках преимущественно изучалось влияние мелиттина в длительные периоды времени (6–24 часа), а это означает, что немедленные эффекты описаны плохо. Несмотря на обширные исследования, разработка мелиттина в качестве терапевтического средства для лечения рака остается сложной задачей, в основном из-за его неспецифической клеточной литической активности, а также его короткого времени жизни в крови и способности вызывать тяжелые токсические реакции при внутривенной инъекции [6].Наиболее серьезный побочный эффект мелиттина связан с его гемолитической активностью, то есть его способностью лизировать эритроциты [18]. Исследования показали, что мелиттин прочно связывается с эритроцитами человека, в результате чего каналы становятся достаточно большими для утечки гемоглобина и, в конечном итоге, лизиса клеток, причем 50% лизис происходит только при 10% занятости сайтов связывания мелиттина [18, 19]. Однако более поздние исследования были сосредоточены на конъюгатах и производных мелиттина в качестве альтернатив для использования в комбинированной и таргетной терапии рака.Кроме того, иммуно-конъюгация, нанотехнологии и генная терапия используются для разработки методов лечения на основе мелиттина с повышенной специфичностью и селективностью, пониженной токсичностью и ограничением цитолиза вне мишени [5, 20-25].

В этом исследовании мы изучаем быстрое воздействие лечения мелиттином на клетки рака желудка и толстой кишки. В частности, линии раковых клеток AGS, COLO205 и HCT-15 были исследованы в качестве модельных систем для наблюдения за эффектами мелиттина в короткие промежутки времени. Во-первых, дозовая зависимость мелиттина от гибели раковых клеток была исследована в диапазоне концентраций 0.5–20 мкг / мл. Для всех исследованных типов рака диапазон эффективных концентраций составлял 5–10 мкг / мл. При низких концентрациях (0,5–5 мкг / мл) мелиттина не наблюдалось значительного влияния на жизнеспособность. При более высоких концентрациях все образцы проявляли значительную степень цитотоксичности, вызванной мелиттином, с почти полной клеточной инактивацией при дозах 20 мкг / мл. После этого в короткие промежутки времени проводилась визуализация с высоким разрешением в дозе 10–20 мкг / мл для наблюдения клеточных изменений, которые происходят при немедленном добавлении мелиттина.Комбинация сканирующей электронной микроскопии (SEM), AFM и замедленной конфокальной лазерной сканирующей микроскопии (CLSM) была использована для более полного понимания мембранных изменений, которые происходят, когда мелиттин оказывает цитотоксическое действие на раковые клетки. Знание быстрой кинетики цитолиза является важным шагом в разработке направленной терапии рака на основе мелиттина.

Методы Культура клеток

Клеточные линии аденокарциномы человека AGS, COLO205 и HCT-15 были получены из Cell Bank Australia.Клеточные линии были аутентифицированы с использованием профилей коротких тандемных повторов и контроля качества с использованием набора для обнаружения микоплазм Biotool-QuickTest. Клетки культивировали в 25 см ² и 75 см ² колбах для тканевых культур в стерильных условиях с использованием полной среды RPMI 1640 с L-глутамином (содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) и 1% пенициллин-стрептомицин) при 37 ^— C с 5% CO ₂. Клетки разделяли при 70% конфлюэнтности с использованием 0,25% трипсина-ЭДТА и культивировали максимум до 15 пассажей.Клетки периодически собирали в замораживающей среде (FBS с 10% ДМСО) для хранения при -80 ^o ° C и для длительного хранения в жидком азоте.

Проточная цитометрия (FACS)

Клетки высевали из расчета 1 × 10 ⁵ клеток на лунку в 96-луночный планшет и обрабатывали мелиттином в концентрации 0,5–20 мкг / мл в полной среде RPMI в течение 4 часов при 37 ^o ° C с 5% CO ₂. Положительный контроль обрабатывали 0,1% Triton X-100 в PBS в течение 15 минут. Клетки промывали, а затем ресуспендировали в 1 мкг / мл раствора йодида пропидия (PI) в PBS в течение до 5 минут перед анализом в FACS Canto (10000 клеток на образец).Полученные данные были проанализированы с помощью программного обеспечения FlowJo, где популяции клеток были ограничены по размеру и сложности клеток для исключения дублетов, после чего были отобраны популяции с положительным PI (выброс PE> 10 ³). Двусторонние тесты ANOVA использовали для оценки статистической значимости гибели клеток между концентрациями мелиттина для каждой клеточной линии. Данные представлены в виде графика как среднее ± стандартное отклонение с n = 4.

Оптическая микроскопия

Покровные стекла покрывали поли-D-лизином в концентрации 1 мг / мл, и клетки засевали в течение ночи в полной среде RPMI.Клетки исследовали с помощью оптической микроскопии (микроскоп Nikon Eclipse TS100) для визуализации изменений, которые происходят при добавлении 10 мкг / мл или 20 мкг / мл мелиттина, разведенного в PBS, в течение 15-минутного периода времени.

Живое / мертвое окрашивание и флуоресцентная микроскопия.

Стеклянные покровные стекла покрывали поли-D-лизином в концентрации 1 мг / мл, и клетки засевали в течение ночи в полной среде RPMI. Клетки обрабатывали мелиттином в концентрации 0,5–20 мкг / мл в течение 1 минуты, 15 минут или 4 часов при 37 ^o ° C с 5% CO ₂.Затем образцы инкубировали с раствором 4 мкМ гомодимера этидия (EthD-1) и 2 мкМ кальцеина-AM в PBS в течение 45 минут при комнатной температуре (Invitrogen). Покровные стекла помещали на предметные стекла и исследовали с помощью флуоресцентной микроскопии на наличие красной (мертвой) и зеленой (живой) флуоресценции. Образцы были исследованы с использованием эпифлуоресцентного микроскопа Leica DM2500 с цифровой камерой DFC310, и изображения были получены с использованием программного обеспечения LAS (V4.1; Leica Microsystems).

Окрашивание мембран и конфокальная визуализация.

Стеклянные покровные стекла покрывали поли-D-лизином в концентрации 1 мг / мл, и клетки засевали в течение ночи в полной среде RPMI.Образцы инкубировали с 2 мкг / мл мембранного красителя Dil (1,1′-диоктадецил-3,3,3 ‘, 3’-тетраметилиндокарбоцианин перхлорат) в PBS в течение 30 минут в темноте при 37 ^o ° C с 5% СО ₂. Клетки исследовали с помощью конфокальной микроскопии (микроскоп Olympus FV1200) для визуализации изменений, которые происходят при добавлении 20 мкг / мл мелиттина, разведенного в PBS, в течение 15-минутного периода времени. Показанные изображения представляют клетки в каждом образце.

Подготовка образца AFM

Покровные стекла покрывали поли-D-лизином в концентрации 1 мг / мл, и клетки засевали в течение ночи в полной среде RPMI.Клетки обрабатывали мелиттином в течение 1 минуты при 20 мкг / мл в PBS, а затем фиксировали либо в 2,5% глутаровом альдегиде, либо в 8% формальдегиде.

АСМ-визуализация

Все клетки были визуализированы в PBS для изучения морфологии. Каждую систему изучали с использованием MFP-3D Bio (Oxford Instruments, Asylum Research, Санта-Барбара, Калифорния, США) при комнатной температуре (25 ° C) с использованием АСМ с амплитудной модуляцией (AM-AFM). Консоли BL-TR400PB (Oxford Instruments, Asylum Research, Санта-Барбара, Калифорния, США, номинальная жесткость пружины kc = 0,09 Н / м).Чтобы минимизировать визуализирующую силу, соотношение уставок (амплитуда изображения (A) / свободная амплитуда (A0)) поддерживалось> 0,7–0,8, что, как было показано, сводит к минимуму любое искажение и повреждение зонд-образец для различных материалов [26 –28]. Каждый кантилевер был откалиброван с использованием метода теплового спектра перед использованием, а чувствительность рычага была определена с помощью силовой спектроскопии; жесткость пружины определялась с помощью обратной чувствительности оптического рычага (InVOLS) с использованием измерений кривой силы на твердой стеклянной поверхности перед погружением в жидкость.

Анализ изображений АСМ

Данные АСМ были обработаны с использованием комбинации программного обеспечения Asylum research, пользовательских кодов MATLAB и программного обеспечения Gwyddion [29]. Фильтрация изображения (деконволюция шума, удаление рубцов или фильтрация с быстрым преобразованием Фурье (БПФ)) не применялась.

SEM

Кремниевые пластины были предварительно покрыты поли-D-лизином в концентрации 1 мг / мл, и клетки засевали в течение ночи в полной среде RPMI перед обработкой мелиттином в течение 1 минуты в PBS. Перед визуализацией SEM все образцы были зафиксированы с использованием 3% глутарового альдегида, обезвожены серией этанола (20%, 50%, 70%, 90%, 100%) и, наконец, покрыты тонкой пленкой золота (10 нм).Сканирующие электронные микрофотографии получали с использованием автоэмиссионного сканирующего электронного микроскопа (FE-SEM). Использовали FEI Verios 460L FEGSEM (компания FEI, Орегон, США) на 5 кВ. Некоторые изображения были модифицированы для яркости и контрастности с помощью Adobe Photoshop.

Результаты. Смерть раковых клеток, вызванная мелиттином, как функция концентрации

. Для определения диапазона концентраций, при котором мелиттин вызывает гибель раковых клеток, цитотоксичность измеряли по поглощению пропидия йодида (PI) нежизнеспособными клетками и анализировали с помощью FACS.На рис. 1 показана относительная нежизнеспособность линий раковых клеток AGS, COLO205 и HCT-15 в зависимости от концентрации мелиттина. Изучение данных показывает, что мелиттин подавляет рост как желудочного, так и колоректального рака (желудочная линия AGS и колоректальная линия COLO205 и HCT-15) дозозависимым образом (рис. 1 (i)). Как и ожидалось, количество нежизнеспособных клеток увеличивалось по мере увеличения концентрации мелиттина. Не наблюдалось значительного снижения жизнеспособности в диапазоне концентраций 0.5–5 мкг / мл мелиттина (рис. 1 (i)). Оценка жизнеспособности клеток как функции концентрации мелиттина показала, что эффективный диапазон концентраций для всех типов рака составлял от 5 до 20 мкг / мл, с 24,8 ± 9,4%, 31,2 ± 17% и 43,9 ± 12,4% гибели клеток, наблюдаемой для AGS, HCT-15 и COLO205 соответственно для лечения 10 мкг / мл (P = 0,0009). По сравнению с необработанными контролями все образцы, обработанные 20 мкг / мл мелиттина, показали значительную гибель (P = 0,0009). При концентрации мелиттина 20 мкг / мл AGS показал самую низкую гибель клеток — 80.6 ± 20% гибели клеток, тогда как HCT-15 и COLO205 показали аналогичные проценты — 93,8 ± 9,6% и 99,7 ± 0,17% соответственно. Положительные контрольные образцы показали примерно 95% снижение жизнеспособности клеточных линий, обработанных 0,1% Тритоном Х-100 в PBS. Фазы плато не было достигнуто для 4-часовой обработки (рис. 1 (i)), и аналогичное снижение жизнеспособности клеток наблюдалось после 12-часовой обработки (данные не показаны). В целом нежизнеспособные клетки в популяциях легко поглощают краситель PI, и визуально видно, что они уменьшаются как по размеру клеток, так и по внутренней сложности, что указывает на цитотоксичность.Для сравнения, жизнеспособные клеточные популяции не окрашиваются ИП и имеют больший размер клеток [30, 31]. Это позволило провести значимое сравнение живых и мертвых клеток.

10.1371 / journal.pone.0224028.g001 Рис.

(i) Поглощение йодида пропидия (PI) свидетельствует о гибели клеточных линий желудочного и колоректального рака после 4-часовой обработки мелиттином. Клетки обрабатывали 0,5–20 мкг / мл мелиттина, а положительный контроль обрабатывали 0,1% Triton X-100. Данные показаны как среднее ± стандартное отклонение, где n = 4.*** представляет p = <0,001. Значения EC50 составляют 14 мкг / мл для AGS, 11 мкг / мл для COLO205 и 13 мкг / мл для HCT-15. (ii) Флуоресцентные изображения, показывающие окрашивание в реальном / мертвом состоянии клеточных линий желудочного и колоректального рака после 4-часовой обработки мелиттином. A) AGS, B) COLO205 и C) Клетки HCT-15 выращивали на покровных стеклах, покрытых поли-D-лизином, в течение ночи и обрабатывали мелиттином в концентрации 5 мкг / мл, 10 мкг / мл и 20 мкг / мл в течение 4 часов. Положительный контроль обрабатывали Тритоном Х-100. Все клетки окрашивали живым красителем кальцеином-AM (зеленый) и мертвым красителем EthD-1 (красным).Средняя жизнеспособность была определена для AGS (78% для 5 мкг / мл, 17% для 10 мкг / мл и 0% для 20 мкг / мл), COLO205 (86% для 5 мкг / мл, 40% для 10 мкг / мл и 0% для 20 мкг / мл) и HCT-15 (73% для 5 мкг / мл, 50% для 10 мкг / мл и 4% для 20 мкг / мл). Жизнеспособность всех отрицательных и положительных контролей составляла 99–100% и 0% соответственно. Масштабные линейки соответствуют 100 микронам.

Хотя ИП является полезным маркером клеточной гибели, его нельзя использовать для точного определения цитотоксических эффектов, вызванных воздействием мелиттина.Чтобы преодолеть это экспериментальное ограничение, использовался набор для окрашивания живых / мертвых клеток для прямого измерения соотношения живых и мертвых клеток при концентрациях мелиттина 5 мкг / мл, 10 мкг / мл и 20 мкг / мл (рис. 1 (ii). ) после 4 часов воздействия. Микрофотографии CLSM показывают соответствующие изображения флуоресценции, полученные после окрашивания линий раковых клеток AGS, COLO205 и HCT-15, а также соответствующих контролей (рис. 1 (ii) A – 1C). Для всех клеточных линий цитотоксическая активность мелиттина следует за значительным дозозависимым уничтожением, при этом доля мертвых клеток (окрашенных красным EthD-1) резко увеличивается по сравнению с живыми (окрашенными зеленым кальцеином-AM) по мере увеличения концентрации мелиттина (рис. (ii)).Эффекты мелиттина сравнивали с необработанными образцами, показывающими 100% жизнеспособность, и обработанными Тритоном X-100 образцами, показывающими 100% гибель клеток во всех клеточных линиях.

Интересно, что AGS, обработанный 5 мкг / мл и 10 мкг / мл мелиттина, показал заметный сдвиг в цитотоксичности, при этом более 50% популяции клеток были окрашены в красный цвет при 10 мкг / мл (рис. 1 (ii) A). Для COLO205 было трудно измерить пропорции живых и мертвых клеток из-за полуадгезивной природы этой клеточной линии, хотя резкое снижение количества живых клеток наблюдалось при 10 мкг / мл мелиттина (рис. 1 (ii) B).Высокие уровни гибели клеток наблюдались для HCT-15 при 5 мкг / мл мелиттина, и эта пропорция существенно не различалась при 10 мкг / мл (рис. 1 (ii) C). При концентрации мелиттина 20 мкг / мл AGS и COLO205 показали 100% гибель клеток. Однако из-за природы скопления клеток HCT-15 клетки, расположенные в центре скоплений, демонстрируют некоторую жизнеспособность, в то время как клетки по внешнему краю скоплений были мертвыми, что приводило к гибели примерно 95% клеток (рис. 1 (ii)). C). Вместе эти результаты предполагают, что цитолитические эффекты мелиттина несколько различаются в зависимости от клеточной линии, а также клеточной адгезии и агрегации.Важно отметить, что результаты, полученные при окрашивании живых и мертвых клеток, были соизмеримы с результатами, полученными с помощью FACS (рис. 1).

Мелиттин вызывает быстрые изменения клеточных мембран.

Мелиттин (20 мкг / мл) добавляли к каждой линии раковых клеток и наблюдали с помощью оптической микроскопии, чтобы выяснить влияние мелиттина в зависимости от времени. Была выбрана самая высокая доза, чтобы вызвать наблюдаемый ответ. Перед визуализацией клетки рака желудка (AGS) показали нормальную морфологию, о чем свидетельствуют гладкие края мембраны, неповрежденные ядра и правильная веретенообразная форма (рис. 2А).Сходные морфологии наблюдались для всех других линий раковых клеток, COLO205 и HCT-15, однако с добавлением адгезии и агрегации, присущих каждому типу клеток, как описано выше (рис. 2B и 2C, соответственно). Первоначальная морфология каждой клеточной линии служит базой для визуализации клеточных изменений, вызванных введением мелиттина. Интересно, что при добавлении мелиттина наблюдались очень быстрые изменения AGS на клеточной мембране (рис. 2). В течение 30 секунд после добавления мелиттина можно увидеть пузыри, когда на периферии клеток начинают появляться небольшие выпуклости.В течение 15 минут этот процесс продолжается с изменениями, заметными в мембране в каждый момент времени. Кроме того, отслоение клеточной поверхности происходило после изменений мембраны (Рис. 2A, S1 Movie).

10.1371 / journal.pone.0224028.g002 Рис. Изображения с оптической микроскопии, показывающие набухание мембран, грануляцию и образование пузырей у клеток рака желудка и толстой кишки после добавления мелиттина.

A) AGS, B) COLO205 и C) Клетки HCT-15 выращивали на покровных стеклах, покрытых поли-D-лизином, в течение ночи и отображали в PBS с использованием светового микроскопа до (T0) и после (T0.5, 30 секунд; Т1, 1 минута; Т5, 5 минут; Т10, 10 минут; T15, 15 минут) добавление 20 мкг / мл мелиттина. После добавления мелиттина влияние на клетки можно увидеть почти сразу. Желтая стрелка указывает на изменения мембраны. Масштабные линейки соответствуют 50 микронам.

На тестируемых линиях клеток колоректального рака наблюдались различные эффекты, при этом клетки COLO205 выглядели как обычные сферические клетки с гладкой поверхностью. Клетки набухали в промежутках времени от 30 секунд до 1 минуты с последующей грануляцией в присутствии мелиттина.Из-за полуслипчивой природы этой клеточной линии клетки начинают двигаться в растворе почти сразу после добавления мелиттина, и очень мало клеток остается прилипшими после 15 минут обработки (рис. 2В, фильм S2). Для сравнения, клетки HCT-15 образовывали большие прилипшие скопления и сохраняли агрегированное поведение во время обработки. В течение 15 минут можно увидеть лишь незначительные изменения, в основном затрагивающие ячейки, расположенные на краях агрегатов; клетки в этих положениях сокращались и становились более грубыми в присутствии мелиттина (Рис. 2C, S3 Movie).Это наблюдение согласуется с флуоресцентными изображениями, полученными во время дифференциального окрашивания живым / мертвым (рис. 1С).

Обработка мелиттином приводит к гибели клеток в течение 15 минут

Чтобы определить, привели ли изменения мембран, наблюдаемые под оптической микроскопией, к гибели клеток, окрашивание живых / мертвых клеток выполняли на раковых клетках в более короткие сроки обработки. Желудочные (AGS) и колоректальные клетки (COLO205 и HCT-15) обрабатывали мелиттином в концентрации 10 мкг / мл и 20 мкг / мл в течение 1 и 15 минут соответственно (рис. 3).До обработки все клетки имели регулярную гладкую морфологию с> 95% жизнеспособностью, как и ожидалось в естественной популяции (рис. 3). Эти данные обеспечивают основу для анализа после лечения. В целом, по мере увеличения концентрации и времени обработки увеличивалась и гибель клеток, причем полная гибель клеток наблюдалась при более высокой дозе через 15 минут для всех клеточных линий (рис. 3). В этих более коротких временных рамках мелиттин, по-видимому, демонстрировал наивысшую эффективность уничтожения на AGS, при этом более 50% клеток окрашивались в красный цвет (мертвые) при 10 мкг / мл через 1 минуту, а 100% гибель наблюдалась при 20 мкг / мл через 1 минуту. .Полная смерть также наблюдалась для более высокой концентрации через 15 минут (рис. 3А). Для колоректальных линий COLO205 и HCT-15 только небольшой процент клеток был убит с использованием 1-минутной обработки 10 мкг / мл, и это число увеличилось для образца 20 мкг / мл. После 15 минут обработки 10 мкг / мл некоторые живые клетки все еще наблюдаются (<25%) (рис. 3B и 3C). Для HCT-15 следует отметить, что гибель клеток начинается через 1 минуту для клеток, в основном расположенных на окружающих краях скоплений клеток.По прошествии времени эффект киллинга затем наблюдается для клеток, расположенных более центрально в сгустках (рис. 3C), что, вероятно, демонстрирует механизм лизиса клеток, основанный на диффузии.

10.1371 / journal.pone.0224028.g003 Рис. Изображения цветения, показывающие окрашивание живых / мертвых линий клеток рака желудка и толстой кишки после короткой обработки мелиттином.

A) AGS, B) COLO205 и C) Клетки HCT-15 выращивали на покровных стеклах, покрытых поли-D-лизином, в течение ночи и обрабатывали мелиттином в концентрации 10 мкг / мл или 20 мкг / мл в течение 1 или 15 минут.Все клетки окрашивали живым красителем кальцеином-AM (зеленый) и мертвым красителем EthD-1 (красным). Средняя жизнеспособность определялась через 1 минуту для AGS (53% для 10 мкг / мл и 1% для 20 мкг / мл), COLO205 (59% для 10 мкг / мл и 12% для 20 мкг / мл) и HCT-15. (62% для 10 мкг / мл и 51% для 20 мкг / мл), и через 15 минут для AGS (3% для 10 мкг / мл и 0% для 20 мкг / мл), COLO205 (38% для 10 мкг / мл). мл и 3% для 20 мкг / мл) и HCT-15 (34% для 10 мкг / мл и 0% для 20 мкг / мл). Жизнеспособность всех отрицательных контролей составляла 96–99%. Масштабные линейки соответствуют 100 микронам.

Мембранные изменения

Чтобы подтвердить мембранный эффект, наблюдаемый до сих пор, мембранный краситель (1,1′-диоктадецил-3,3,3 ‘, 3’-тетраметилиндокарбоцианин перхлорат-Dil) был использован для изучения изменений, происходящих после введения мелиттина. . Клетки окрашивали, а затем наблюдали с помощью конфокальной лазерной сканирующей микроскопии (CLSM) при введении высоких доз мелиттина (20 мкг / мл). На рис. 4 показаны характерные покадровые изображения CLSM in situ трех клеточных линий до и после обработки (рис. 4, видеоролики S4 – S6).Важно отметить, что для всех клеточных линий наблюдались разные эффекты. Для AGS клетка имела удлиненную морфологию с длинным прикреплением клеток, типичную для их клеточного типа [32]. После добавления мелиттина клетка начала немного набухать, после чего образовался большой мембранный пузырек (см. Желтую стрелку, фиг. 4A), который продолжал расти с течением времени. Морфология самого прикрепления также изменилась из-за набухания с последующей усадкой и возможным отрывом от поверхности. Кроме того, поверхность самой клетки AGS, по-видимому, стала более гранулированной к 15-минутной временной точке (Рис. 4A, S4 Movie), соизмеримым с данными оптической микроскопии (Рис. 2) и изображениями живой / мертвой флуоресценции (Рис. 3).

10.1371 / journal.pone.0224028.g004 Рис.

Мембранные изменения до и после обработки мелиттином в разные моменты времени для A) AGS, B) COLO205 и C) HCT-15. После добавления мелиттина клетки подвергаются набуханию мембраны с последующим образованием пузырей на мембране. Клетки выращивали на покровных стеклах, покрытых поли-D-лизином, в течение ночи и окрашивали мембранным красителем DIL (красный) и отображали с помощью конфокальной микроскопии до (T0) и после (T0,5, 30 секунд; T1, 1 минута; T5, 5 минут; Т10, 10 минут; Т15, 15 минут) добавление 20 мкг / мл мелиттина.Желтая стрелка указывает на изменения мембраны. Масштабные линейки соответствуют 10 микронам.

Подобные эффекты наблюдались для COLO205, где видно набухание клеток, после чего начинают появляться множественные маленькие мембранные пузырьки (Рис. 4B, S5 Movie). По сравнению с AGS (рис. 4A) эти пузырьки составляют лишь небольшую часть размера, но, по-видимому, покрывают большую часть клеточной мембраны COLO205 (рис. 4B). Для HCT-15 эффекты мелиттина более тонкие; агрегат клеток первоначально показал набухание через 30 секунд, а затем начал сокращаться через 15 минут.Это можно увидеть по истончению окрашенной области по периферии, что указывает на сжатие цитоплазмы, хотя на уровне отдельных клеток наблюдаются только намеки на повреждение клеточной мембраны (Рис. 4C, S6 Movie).

Визуализация с высоким разрешением мембран и повреждений клеток, вызванных обработкой мелиттином

Хотя использованные методы широко продемонстрировали, что гибель клеток происходит из-за изменений мембран, в основном мембранных пузырей, для детальной оценки этих эффектов были необходимы методы визуализации с высоким разрешением.АСМ выполняли на клетках AGS, чтобы лучше охарактеризовать наблюдаемые морфологические изменения. Во-первых, необработанные клетки AGS были визуализированы в качестве исходного уровня, где наблюдались множественные морфологии клеток (рис. 5). Все клетки были интактными и имели четкие ядерные области либо сферической, либо удлиненной формы, также наблюдались различные клеточные прикрепления. После кратковременной обработки мелиттином высокой дозой (20 мкг / мл) клеточная мембрана AGS стала «липкой» (синие стрелки), на что указывает полосатый характер соответствующих изображений АСМ.Это «липкое» качество, скорее всего, соответствует потере целостности мембраны, описанной до сих пор, и подтверждает, что повреждение клеток происходит почти сразу после обработки (рис. 5). Определение характеристик АСМ не проводилось на линиях колоректальных клеток COLO205 и HCT-15 из-за их соответствующей полуслипчивой и слипающейся природы, что затрудняло их отображение с помощью этого метода. Однако для подтверждения быстрых мембранных изменений была проведена сканирующая электронная микроскопия.

10.1371 / journal.pone.0224028.g005 Рис.

АСМ-изображения, показывающие морфологию клеток AGS A) в нормальных условиях (без обработки) и B) после обработки мелиттином 20 мкг / мл.Клетки AGS выращивали на покровных стеклах, покрытых поли-D-лизином, в течение ночи, обрабатывали обработкой мелиттином 20 мкг / мл в течение 1 минуты и затем фиксировали в 2,5% глютеральдегиде или 8% формальдегиде. Клетки были визуализированы в PBS на Asylum MFP-3D. Синие стрелки указывают на повреждение клеток. Масштабные полосы указаны на соответствующих изображениях.

Визуализация

SEM была выполнена на всех линиях клеток для визуализации морфологии раковых клеток без / с обработкой мелиттином. Перед лечением изображения SEM показали типичную морфологию клеток AGS, COLO205 и HCT-15 с видимыми ядерными областями и без явного повреждения мембраны (контроль на рис. 6).После обработки мелиттином морфология клеток AGS изменилась из-за потери целостности мембраны. При концентрации мелиттина 10 мкг / мл внутриклеточное вещество просачивалось из клетки AGS (рис. 6А). При концентрации мелиттина 20 мкг / мл наблюдается большой выступ в мембране, а верхняя часть клеточной мембраны, по-видимому, разорвана, чтобы высвободить внутриклеточное вещество через поверхность (рис. 6А). Для сравнения, высвобождение внутриклеточного вещества для COLO205 происходит по-другому. Как при обработке мелиттином 10 мкг / мл, так и при 20 мкг / мл ядерная область больше не видна четко, а клеточная мембрана выглядит более зернистой и изгибается нерегулярным образом.На поверхности мембраны наблюдались небольшие видимые поры, указывающие на потерю целостности клеточной мембраны (рис. 6В). Для HCT-15 клеточное повреждение не так четко видно при более низкой концентрации, но есть заметное клеточное повреждение при более высокой концентрации. На исходном уровне скопления клеток имеют неправильную форму и формирование. После обработки мелиттином на поверхности виден дополнительный клеточный материал, что указывает на потерю целостности мембраны с некоторым видимым повреждением мембраны (рис. 6С).К 15 минутам лечения мелиттином клетки колоректального рака были полностью повреждены, на поверхности остались поврежденные клетки и мелкие гранулы.

10.1371 / journal.pone.0224028.g006 Рис.

СЭМ-изображения раковых клеток, показывающие различия в клеточной морфологии до и после обработки мелиттином (10 мкг / мл и 20 мкг / мл) для A) AGS, B) COLO205 и C) HCT-15. Клетки выращивали на силиконовых чипах, покрытых поли-D-лизином, в течение ночи и обрабатывали мелиттином в течение 1 или 15 минут.Желтые стрелки указывают на повреждение клеток и мембран. Масштабные полосы указаны на соответствующих изображениях.

Обсуждение

В обширной литературе показано, что мелиттин вызывает гибель клеток посредством неспецифического литического механизма, что побудило его изучить в качестве потенциального противовирусного, антибактериального, противогрибкового, противопаразитарного и противоопухолевого средства. . Кроме того, известно, что мелиттин является катионным порообразующим пептидом [6, 33]. Что касается рака, эффекты мелиттина на раковые клетки и липидные (би) -слои изучались множеством методов в течение продолжительных периодов времени (т.е.е. От 6 до 24 часов) в диапазоне концентраций от 0,5 до 10 мкг / мл [8–15, 17, 34]. Однако цитолитические эффекты в более короткие сроки в значительной степени игнорировались.

Здесь было обнаружено, что мелиттин вызывает дозозависимый эффект лизиса клеток в отношении клеточных линий AGS, COLO205 и HCT-15, что сопоставимо с результатами нескольких исследований в этой области. Некоторые из этих исследований были выполнены на раковых клетках с использованием мелиттина или конъюгатов мелиттина [8–15], в то время как другие изучали мелиттин на липидных слоях [17, 34].Однако в нашем исследовании доза, необходимая для инактивации всех клеток, была несколько выше, в частности более чем в два раза, чем доза, необходимая против других линий раковых клеток [9–11, 14, 15]. Кроме того, на каждой исследованной клеточной линии наблюдались различные эффекты, хотя доза мелиттина в 20 мкг / мл приводила к полной гибели клеток для всех исследованных систем. Вместе эти результаты могут указывать на то, что предыдущие исследования не являются общим показателем эффекта мелиттина против всех линий раковых клеток, а это означает, что активность мелиттина может быть специфичной для линии клеток.

Важно отметить, что наши результаты демонстрируют быстрое действие мелиттина на клетки рака желудка и толстой кишки. Мелиттин вызывает повреждение клеточной мембраны в течение 1 минуты после обработки, при этом наблюдались грануляция, образование пузырей и набухание клеток с последующим уменьшением (рис. 2–6), при этом полная гибель клеток наступала в течение 15 минут (рис. 3). Ранее в исследовании с самой короткой продолжительностью наблюдался мелиттин на монослоях DPPC в течение 4 часов [17], в то время как в исследованиях с самой короткой временной точкой рассматривалось лечение мелиттином клеток рака желудка и лимфобластоидных клеток человека после 1 часа инкубации [10, 35].Что касается рака желудка, то предыдущее исследование выявило менее 15% жизнеспособности клеток AGS, обработанных 8 мкг / мл мелиттина, который был извлечен из иранских пчел после 6–24 часов лечения [11]. Насколько нам известно, на тестируемых здесь линиях колоректальных клеток не проводилось никаких исследований, хотя в некоторых исследованиях изучались эффекты конъюгатов мелиттина на другие колоректальные клетки [6]. Понимание непосредственного повреждения мембран, вызываемого мелиттином, дает важную информацию для разработки целевых терапевтических препаратов с мелиттином.

Мембранные эффекты хорошо изучены при раке с использованием раковых клеток и липидных слоев различными методами и при более длительном лечении, часто с учетом формирования пор, а также мембранных изменений, включая возмущение и разрушение мембран [11, 14, 25, 34, 36– 38]. В ряде исследований также изучали механические эффекты мелиттина, рассматривая пути, ведущие к апоптозу и гибели клеток, включая индукцию рецепторов смерти [5, 6, 9, 10, 37, 39, 40]. В целом считается, что мелиттин разрушает липидные мембраны посредством тороидального и детергентного механизмов, в зависимости от соотношения липидов к пептидам в мембране [41].При более низких концентрациях мелиттин вызывает небольшие или временные поры, в результате чего клеточное содержимое не просачивается из клетки, а трансмембранные ионы переориентируются, изменяя заряд мембраны [38, 42]. Временные поры возникают после того, как мономеры α-спирального пептида мелиттина взаимодействуют с поверхностью клетки, димеризуются и неглубоко проникают через мембрану [43, 44]. При агрегации мелиттина образуются более крупные и стабильные поры, и трансмембранная утечка происходит при концентрациях в микромолярном диапазоне [43–45]. При концентрациях пептида, превышающих липидное соотношение, мелиттин может разрушать мембраны [46].Эти результаты соизмеримы с результатами этого исследования, в котором некоторый уровень гибели клеток отмечается от 5 мкг / мл, предполагая, что временные поры возникают при более низких концентрациях мелиттина. В то время как полный лизис клеток наблюдался при максимальной дозе мелиттина для всех клеточных линий (рис. 1). Кроме того, переменный размер пор, вызванный мелиттином, можно объяснить структурными изменениями при взаимодействии с бислоями или взаимодействиями между пептидными мономерами. В то время как порообразование здесь не наблюдалось в более короткие сроки, наблюдались несколько других повреждающих мембранных эффектов почти сразу после введения мелиттина (рис. 2–4).СЭМ-изображение показало образование пор на поверхности мембран некоторых клеток после обработки (рис. 6). В соответствии с нашими выводами, предыдущее исследование также продемонстрировало образование везикул и потерю целостности мембраны с помощью электронной микроскопии после кратковременной обработки очень высокими дозами мелиттина (2 минуты 200 мкг / мл) [35]. Однако это исследование проводилось на лимфобластоидных клетках человека, а на солидных опухолях была проведена ограниченная работа.

Интересно, что эффекты мелиттина, по-видимому, изменяются на исследуемую линию агрегированных клеток.Клетки AGS и COLO205 кажутся намного более чувствительными к мелиттину по сравнению с HCT-15, с очень заметными мембранными изменениями, затрагивающими все обработанные клетки в образцах (рис. 2–5). Однако для HCT-15, который образует скопления клеток, мелиттин сначала убивает клетки, расположенные на периферии, а затем медленно диффундирует в центр скоплений, что в конечном итоге приводит к гибели клеток в зависимости от дозы и времени. В этом отношении скопления клеток HCT-15 действуют как солидные опухоли. Было продемонстрировано, что проникновение лекарств и антител в солидные опухоли проблематично по ряду причин, связанных с микросредой опухоли, включая повышенное давление и крупные сосудистые системы, а также механизмы, которые могут привести к устойчивости, такие как насосы экспорта лекарств и изменения. в метаболических путях [47, 48].Эти результаты дают некоторое представление о влиянии мелиттина на солидные опухоли и могут частично влиять на разработку методов доставки мелиттина или подобных цитолитических пептидов в опухоли для лечения рака.

Несмотря на обширные исследования, разработка мелиттина в качестве терапевтического средства для лечения рака остается сложной задачей, в основном из-за его неспецифической клеточной литической активности. Это включает его способность лизировать эритроциты [6, 18]. В попытке преодолеть это, исследования мелиттина были сосредоточены на разработке конъюгатов и производных мелиттина.Примеры включают мелиттин, присоединенный расщепляемыми линкерами [23], чувствительные к окружающей среде системы доставки пептидов [20] и ряд слитых белков на основе мелиттина [5, 21, 22, 24, 25]. Кроме того, благодаря разработке новых линкерных стратегий, наночастицы и наноносители, нагруженные мелиттином, также были изучены для доставки мелиттина в микроокружение опухоли [49–51]. Несмотря на эти предостережения относительно реализации, понимание основного механизма действия является обязательным для разработки методов лечения на основе мелиттина следующего поколения.Важно отметить, что мелиттин оказался токсичным для раковых клеток и может вызвать смерть опухоли. Разработка альтернативных методов доставки пептидов позволит разработать новые лекарственные средства против рака с повышенной специфичностью и селективностью и значительно сниженной токсичностью за счет ограничения цитолиза вне мишени. Знание быстрой кинетики цитолиза является важным шагом на пути к достижению цели таргетной терапии рака на основе мелиттина.

ЕПЕНИ РЕЗЮМЕ 1

% PDF-1.6 % 1 0 obj > эндобдж 4 0 obj > эндобдж 2 0 obj > транслировать application / pdf

ЕПЕНИ РЕФЕРАТ 1

2017-10-11T12: 53: 20 + 03: 002017-10-11T12: 53: 20 + 03: 002017-10-11T12: 49: 23 + 03: 00Adobe Illustrator CS6 (Macintosh)

188256JPEG / 9j / 4AAQSkZJRgABAgEBLAEsAAD / 7QAsknaGmah + 0AAAAAABABLAAAAAEA AQEsAAAAAQAB / + 4ADkFkb2JlAGTAAAAAAf / bAIQABgQEBAUEBgUFBgkGBQYJCwgGBggLDAoKCwoK DBAMDAwMDAwQDA4PEA8ODBMTFBQTExwbGxscHx8fHx8fHx8fHwEHBwcNDA0YEBAYGhURFRofHx8f Hx8fHx8fHx8fHx8fHx8fHx8fHx8fHx8fHx8fHx8fHx8fHx8fHx8fHx8fHx8f / 8AAEQgBAAC8AwER AAIRAQMRAf / EAaIAAAHAQEBAQEAAAAAAAAAAAQFAwIGAQAHCAkKCwEAAgIDAQEBAQEAAAAAAAAA AQACAwQFBgcICQoLEAACAQMDAgQCBgcDBAIGAnMBAgMRBAAFIRIxQVEGE2EicYEUMpGhBxWxQiPB UtHhMxZi8CRygvElQzRTkqKyY3PCNUQnk6OzNhdUZHTD0uIIJoMJChgZhJRFRqS0VtNVKBry4 / PE 1OT0ZXWFlaW1xdXl9WZ2hpamtsbW5vY3R1dnd4eXp7fh2 + f3OEhYaHiImKi4yNjo + Ck5SVlpeYmZ qbnJ2en5KjpKWmp6ipqqusra6voRAAICAQIDBQUEBQYECAMDbQEAAhEDBCESMUEFURNhIgZxgZEy obHwFMHR4SNCFVJicvEzJDRDghaSUyWiY7LCB3PSNeJEgxdUkwgJChgZJjZFGidkdFU38qOzwygp 0 + PzhJSktMTU5PRldYWVpbXF1eX1RlZmdoaWprbG1ub2R1dnd4eXp7fh2 + f3OEhYaHiImKi4yNjo + DlJWWl5iZmpucnZ6fkqOkpaanqKmqq6ytrq + v / aAAwDAQACEQMRAD8A9GWt5FpNlNNfu0cNujGa 4k / dxKsdSzMzGgHuaDNPoOLGOEiRO45dznampmwQAknnx9Z1PTLKfyrcz3a3NwlrM + nXKoEjL8pJ DInIUHp8W3DDs6jmh38yeEgDn17vx + OlYUedsxsLaS1sbe2kne5kgiSN7mWnqSFFCl3pQcmpU4UK + Kqc9tb3CBJ4klQGoWRQwr0rQ5XlwwyCpgSHmLZQnKJuJph + paBoXmuZbOOO906Kwlcz3WnzQWys 8ZUehL6TtN8Vaj4R0NSOho / k / T / 6nD / Sj9TaNTk / nS + ZZPDp + jl2MVpBzhbiSIlBVgA3h7jCNDgB sY4X / VCDqMh / il8yjcyml2Ksd82635a0ZYh2Jbb67fMYrRJhHykdQP5yCRUqvzZR3GY2TS4ZyuUI yJ6kAtsMuQCoyIA8 / P8Aakdv5q01mo + hxTVNKwpCAuxPxVLdabYP5P0 / + pw / 0o / Un8zl / nS + ZTq0 1DR5tDutUk0lYYrYtztzHEWb01BqKfD + 1j + QwVXhw / 0o / Uv5nJ / Ol8yxDWP0R5kWwuo47 / S44pxH Fb2AjjM8h4pIQ0XJdgONT8sqn2biJ2hAf5gZx1c + pl / pi9Gg0vTGijc2MKOVDFWijDAkVoaAiv05 YNBgH + Th / pQxOpyfzpfMsL85SadJq0Xl + ANYSToOc9tFBWkh3IYr6iFePVTkJdnYTyhAf5oSNVMc 5S + ZVvy40 / T20xrcub + CAlI3vhHLcgijEs5BkcHn1ZjTpgj2bhB3hA / 5gU6qZ5Sl / pizmOOOJBHG gRF2VFAAA9gMzYQERURQDRKRJs812SQpT2lrcBRcQxzBfsiRQ1K + FQcqy4MeT64iVd4tnDJKP0kh ItZ8iaLqt9p9273Fn + j5PU + r2Un1eGfcELcIg / eKOPSo6nKf5P0 / + pw / 0o / U2fmcv86XzKcx6Zps biSO0hR13V1jUEh3IGShosMTcYRBH9EMZZ8hFGR + aJzJanYq7FWMfmTq76b5QvWhljjvLoC1tPUe OMlpTRzH6kkIZ44Q8oUNX4TTIZJGMSQLr8ebKIs0xT8jb6MprWnxzwyRRvb3SJCYQQbiMgkpHNcv RljRgWahr8OU6bNLJG5R4T / nf76MWeXGInY38v0EvUsyWp2KuxV5vcagll50ufqNrHczepUwMrrQ sK8gyRnieQ + 0aj7xhQzfRnldr8ygLJ9Z + JFYOFPoxkrUBehwJTHFXYqwH8zpbhLixEU7Qhkk5Kr8 Adx1HB8IQWJWj6hGGJeZw9CpDr / xtbthVmemUm8iasJnejeqGaQByP3adgsNRgVIfL2madJpMC38 ols0uTKbZU3IKMpIBb4fiVd / 1Yq9I0e406WzC2CiOGMkejShWpJ6e / XAlgHm9oU / MS0dpfTb0oQf giNByavxSMO39mEITH8rkso7a6KO7XDycSfREK8QoI2Quteu5OJUM8wJdirsVYNrPmXzPBfJOtnL HYW8pR4rZb + YzcJmQh510e4k4mL4 + UcgBYBQeJ5lVlWhXt / faTbXl / bJZ3M68zbxtM4VWNVr9Ygt JQ3GnJXiUqdsVR + KuxV2KsB1zy15Raea90 + 0tri9uZ / UvEa9ezVm4hTJVElDh5AvT6dhmH / KWn / n x + bf + Vy / zSgtN8keSLiP6tq2kWVpCsYhtYob6S6jaFh8aHkkKon7tduhp7YntHT2Bxx381 / K5OfC Xo1oLYWsK2oC2yoqwqoooQCi0HhTpmTCYnESHItUomJo81XJsUPf39rYwetctxQsFHiSe2Y + q1UM EeKZocm3DhlkNRYbLDY3msy3cWrSxNOahbVZ0cpxoVNCfCvz3zDj21ppGoys / wBWX6m46DKBZFfE J5pOraXDNPb / AFoySzTAqZAyttEiHkX71T237YcfbGnnLhEvVdb7ff8AL3rLQ5YiyNk + zZuI7FWO + Z9BGqXVq5MZSAMJI3KgkNToSDkTOI5lPCStt / KPlgRqkkaNMoBf49xX5U / Vj4se8LwHuVdZs7ey 8qahbaWlGEMhjjiNWLsO3Wpx8SPeF4D3MKnm1 + x8maVPZ / WRqc00q3ENeTBQz8fgIIGyg7DD4ke8 LwnuZt5Qu9Ul0SOXWTGt25LAiiMYyAR6igIAykldh3yJyR7wkQPcxrzPpGpXXnS31G0Eb2qQqGkk lQRgqGJqDvXAM8P5w + afCl3FHflzZXenWNz9dljVJnDRgtGWI4j4gyH7OJzw / nD5qMcu4s0VlZQy kMp6EbjJggiwxIpvChC3 + p2VgiNcycA5oo6k065i6rW4sABmatuw4J5D6QhovMmjyuUilaRwK8Vj ckj / AIHMaHbGnmajIk + UZfqbZaHKBZFfELrXzDpV1OIIZqyE0AYFa / 8ABU / rksHa2nyy4Yy3 + X3 / ANqMmiyQFkbJjmxcV2KuxVhPmS0s7C1LadDBcSkOtZJQPTcD4SY0jYuK9RyU5pZdiYByjfy / U547 QydT + Pmlfk1r69iEPmT6q8vqScLiDnAqR8QyJ6Uolqa1HLmPl4k9j45EAx294 / Uv56QGx / HzZslj p1rEiJeNBERyjUSqikHeo298ysfZ8YR4YylEeRaZaoyNkAlKobfWv8QTyza7a / 4f9NRbWqcvrfqU + JnmMvpgA12EZqPCm9n5T + nP5sfH / ox + SZz2Ol3UJE14ZokIY85VZVO4HUbZVl7OhkFTMpDzN / oZ w1com4gBgHmyXUYpkh0GOzijWVed3cLJdc461IEcYg4nbf4j7ZhnsXD / ADftH6m / + UJ9 / wCPmzLR dGsLu1ju3tjbS8qiMMGpShBDGNK / dk8XY2EGzGiDty / Uxnr58rv8e9R8y3WqWMLJpbfWZyjjnNdc RE9PgLxBeTr3IDA5ly0p6Sn / AKb9jQM46iPyS7ydqHmKe3WLzFcJ6wLVvLaX0U8VUwuZGqB + 0Gof AYBpZXvKdf1v2JOYVyj8kb5mufK2l3EI1WWQXNyp9FmBflwoKFlRz3A6ZTn7IxTuRBlLzr76bMeu nHYbD8ebGdBlu73XLqWdbaTQmASyihtrlZg / PZmndCrDjUECMb0oRvXFPY2OhUPtH / Eto18v532f tZbf2flnT9MlvbjmtojqHYpQ16DZlX + bMkdiaeqr7v1NX8oZLtjGq3Ok3sunp5d1O1tg8lb0Xllc XLlCoZViWIwjl1Bq36qEfyHp + 77v1J / lHIzC38vaHMSY1c8aV5Lx6 / 6yDB / Ien7vu / Uv8o5WPT3H lO5gvbfTLuODVYS8MIvI3MXrJt8SoELLXb4Wrg / kHT9x + z9Sf5Syq + jado0Wl28esXsNzqar / pM1 rC8MLNX9hH9VhQUFeW / Wg6AnsHT934 + SP5Rypnd6hoek3kWmy3VzAxTkioGKBd / 5VPh5ZlY9BGER GMpADuLTLUkmyIk + 5S0G11 + 71C + urnV4p9FZuOnQW8c0c69GBmlkcgniaECP3qOmT / Kf05 / NHj / 0 Y / JF + YItGsbA3urTym2iYDnIwbiXNNuQ75Tl7Mx5dpmUq7zf6GcNZKH0gBiurTaDJe6e + k67plvp 6uW1IXMZmkkjpssJR4lUnxPTY77qaf5C0 / d936mz + Ucneym00zQKm4tWesas4kVSKAbEqeA3GSx9 jYIS4o2CPd + pjLX5JCjySS584aLeadc / ojW2t9RUUha8SaSINUh51j4MQRUbNt + GZX5P + nP5tXj / ANGPyRmgaxYSWFvBqPmBbnU1WlzPCHtYWbc / Ckpem3 + Xv7Vpj + T / AKc / mvj / ANGPyZX6f7n0uTfZ 486 / F0pWvjmRwenhs8ufVq4t7eJatNY / pS8rdEh25Kig2 + M / 5WWsFKC60lDykuXZgdqBONKeBJxV lfm27t49P8vv6yrG1mpVWkki5AolD + 6IGBWPLq1qrBlmjDKagi6uqgj / AGWFU1l1CO68p6sXukuF D2tR6003Hk7bh2iaV / ycCsXj1hlVUjuiqr8CqGIA4jp8sKsm8iaxczeZrK2a59RH9Wqlgx2hc / Pt gKobVNakGpXaEuQJpF / Y7MR / LhVCJrLRqETmqjoBw / 5oxVNPzDkurq28vSK6mWezDsZJOBZmVDU7 gYAqQW3lvzTMlYkrTqokkNPnxrhVllpp2oWP5f30OpJ + 9a8V1VvVf4SIwOg5dQcCpBZQRNJX0Iiu 4q / 1lQD1r8IBwqzXydKjanRiPU9Jv7uS5YHcdVlHGlPfrgKvK9QtoJNdvlmuHhBu5RyIQqF9TrUP X8MKpjH5b0AuBJ5jhRO7BZDT6OIxVkn5k2LT + ZgUeIMYEHBlctsW / lwBUig8pa3NHzihUoeh9OUV 79xhVkx0u4sPy8vLe8qrNdq4CjjQH09vjDdwcCsZgtNMlj5h2Aa0IrH / AB44VZr5TlvTNdxTz3Mk C2cnGKZgUFCo2AOxpgKvLLY2XPjcQL6e / wAayMW9qjmowqmwt / K5AIglodx ++ jH / ADNxV7zkUvE9 S06WTU71ivH / AEiX7Stv8Z32U5JCHXSZmIVQCx2ACSVJ / wCBxV7BpWm2smjaWt1bpJJb20IXmtSp CLWnIVHTIpRv1Cx / 5Z4v + AX + mKobU9C0 / ULCSykjEcUpUv6YCklDUdBiqQ / 8qy8v / wA0v3j + mG0U i9I8iaNpeoRX1uZDNDy48jUfEpU / g2NpRr + V9GeWSVoSXlYu1WbqetN8FqirfSLG3I4JUAcQrksA PYHFWD / mieF1pvCg4JJwoPs7r08MIQWN6bPqDzqU1NrdqE81MpI278BXvTCrJtQmvR5Cu2e9e9mF yoE / OVGA + DargHb7sCsch856rCV4Wy0QUVTcXBWlKdOWFWR + TvN + p6hr0NnNbxxxSq / Ng8rn4VLC gYkdRgKvPL6bRl1jUfrlu8j / AFqbjwcqKczuffCq71 / Jn / LPcff / AM34qzfz9aWs / mmNp54oeEKM jSqzgMOVDQA4AqNsvMZjhWJ / MUUKRKqRrHbcloBSgHpCgGKrvNGqJd + Q7qeK / wD0jxuEQ3EcXGh5 KePGi9K9cVYJD5gsQgEunF3H7SpSv0b4VZn5K8yW + pXd5bx2TW8kdlI5mYt8VCgpvtvWuAqlH5f6 Lpeoepd38qXCICj2YRndCT8LEooArTbriVZ / baH5ZM6iO25PvQOj8enfkKYpT3ArFpo5VjmaPVo7 iWIMTBG8fqMwB + Ac3VQxIp8RA8Tmm / Ian / VS5 / 5nF / MQPl59cvLN5tSf9DzrM6xW0tzBcO0YNUkL wu6jlX7NdsJ0Gp / 1UqNTi / mJvLb3cZiWTWUjaRaoGehcdarU77YDodT / AKqV / M4v5iUR3fmJvML2 XJ00sRFjrD3Vv6bSClESBZXloQx + JlXcdOhw / kNTX96V / M4v5idGx1AW7THVgIRuZuXwgCoPxVpg / Iamv70r + ZxfzEm12712ztopNMlfWJZHX4ILm3gVVqCWd55o9qdAoavenXEaDU / 6qV / M4v5ibw2t 68qqmsLI1fsK1SabnYHEaHUg / wB6VOpxfzEPOLtIJpItXFxJErfuIpEDsyivpqXdEDHp8TAeJGP5 DU / 6qV / M4v5iD0CbX7zTxNqdx + ibkOyC0kuYrhuCmiOXidlqw3pXbCdBqf8AVT + Pio1OL + YjtR0j 1JIkvdRi9TifTWanI / zFQxxOh2PTKgajF / MS + wsfMb63NaC1lttKjgBg1ZpYDHK4agSOGOR5ApQ8 gzAdKEdKj8jqa / vSn8xi / mJtcaLdm1eO5v19JmUn1B8O1fE + NMI0Oor + 9R + YxX9CT65YeZLGOz / Q 9lJrHqOFf0ZYII4otgXYzOpbY1VVU9O22I0Op / 1Up / MYv5idR6FqUbhlveJHcKQaYBodTf8AelTq cX8xJr / R7VILi4jmhv7hCS1vCYBK713UGWSJA2 / 7TjH8jqf9VX8xh / mLPLnl29vtJt7y8t4tOvTU S2fOK5MTIxC1miJRqA23jhOh2P + qlA1GL + YmN5pMbXi / WtSgF0FXiJCvqUG9QCa ++ J0Op / 1VfzG L + YlmmRa3da7eWbwm2sY1 / 0bUHnt5BOymhCQRSSOi0 + IFqV7gYnQ6mv70p / MYv5icXWizRWjrdah HHbFgW9SipX3qQK1wDQ6n / VSv5nF / MSXVYtUsZrCDTI11CKWYLczRz28EVvETR5GEkgeQjlUKqGv iDSpGh2P + qlfzOL + Ynltps3JjFqcbHg3IIR0pSpoegOMdDqBzylB1OL + Ylsts1jp1xLpd4l0 / a1s pIY3kbYbNJJEgoDXdumD8jqf9VT + ZxfzEVoNt5lvtItrq8mewupFPq2bSrcGMqStPViZkfpWoOJ0 Gpv + 9KjU4v5jI / Rm + pej6n7 / ANPh63fnxpy + / fNn4cvC4b9XDV + dc3E4hx3W18nztqx1G38yagLe 4WCcXUok5rxIHJj3X + VsyGpPdP038xr9edjMJ4kohYCArU0Iq3E9sVTP8zbPU1tPLqTW5nuobPhc MqB6ScUV9wKDeuAKwq0k8w2fqTWdjdVBAf04SxILVFfauFXpuk6hrF7 + WuuS656qTKZ0X119NhGI 0I7dOROBWFaTp3mKe2WbTI5ZIAAivEQRSgIFePhTCrL / ACZpPmi38xWst + HNsPU5liaCsTgbcV7k YCrC9TkMOuX0kYcP9YlqecnaQmnTpUdMKpjYeePMFjbLbW7gRJ9kOgcivarRk4qyj815biK / 0ySA fGsctHA3FSoNDUYApYbb6x5lVw9vLPyToycqiu3Z8KsqF5qd5 + XGoSamXmmF4qr69a8AIyKElj1J wKxO3u5ERBEkaxKtIyFB + E0PcYVZX5B1vUn162sXnVoXD81KIGIWIkAECo3SuAql07C01a9eFWXl cSuQk6J8Zf7Xw0NdsKp9p3mfU4rYJFKSK1b1ZIWapArvI9SMCqPny1upvNCC3jjeU26qvIoDSrE / aI8MQqCs4vOsLCOzHBiKBYniqQo8A3YYVR3mNdc / 5V5fLrSc7lrpAqTlTWM8KdD41wK8 + 0bWtQ0m 4FzbQwet1blRlr7BmNN98KvQfIfnjV9fv7y2uxCIUs5pVaJQDzR0Tfr / ADHArENOv763LyWF3HAe R5lBAh5U3rsO2FWS2A / Mi8iSW2upmgevCUGLhsSD09xgV6ngS + c9ZMUmt6i09 / IpFzIATIpqA5HX 1NgBtkkJlZ2WnpAvDzWLYN8RiEsooT48RStMVZB59if6j5beGf6xwsgFueX958CDnuCTy674AqCt brVJUUreMWbY8VUCp7H90f14VZdbG9 / wBq63czSuomCMaGi8FNBwCdycCvP9EQzKogvDBK5pxl9a IivavNVpthV6B5W0N7bV7e5fW4Luit / oqyu7ksh / ZMrj4evTArBrrUXtNU1FGsIroNcysGmDkr8Z FFKyLthVWj80vRUGhaeeigtC1fDcmXFWUfmmP9L05gkpYJLR4jKKVIH + 68AUsW0rU / ql2s721xcE GghkMxiPhUEH9eFWXahqn17yLez / AFVLErcqgjEfNTTgeRQkV60wKxrTtV8upbqJrCOSLgfTCQIr cWoah2ORwqynybqOg3uroLSxEFwsTSK7rEjLsAQOCglvipSvSuAqxK8i8tzajetqE7RzpdTen6Mo I4kkV3jBB3O2FUZYf4BhjX1b6ZjViyOscnUn9sgHFUZ + Ysxi8zI6onqJChSQopYbt0JFcAVJIPMu tW5JguTGT1KgDp8hhVPb2 + 1DU / y4vpbySW4l + uIqtHu4Uemabe5OBWFQ3F5C4dEvOQPIcg7UP04V ejeS9fvL2S7tJ7BbZUtpJfWKlWY1UEF2ZqVrWlMBVgCPEaOkagg7E3MQNR81wqmtr5h2kqoa / kiU U5IL9R16hSFP6sVez5FLzO / 8h36tc6jdaStP3lxOeRYd2Y8ROSfkM0X5jtD / AFOP2f8AVR2Phab + cfx / mpd5e8uaD5i043 + laZHc2fqPD6pSWIMyGh5iWZCw / wAobHthOp7Q6Y4 / Z / 1UR4Wm / nH8f5rK b3y7eXltZW9xpMMsdlEIYA1PhRaKF / v / AAUYnUdofzI / Z / 1UXwtN / OP4 / wA1I7MaM / mCfy1DpFtJ qtpGJp4DbSHgjAMC0xl9LcOKDlXH8x2h / qcfs / 6qJ8LTfzj + P81kQ0nVF0q50yLSoIbO6qJYogqV 5LxY1E / XYY / mO0K + iP2f9VEeFpv5x / H + awvzD5e0HQI7Z9Us2g + tyrBbKnrzs8jEfCqwyu1d / DEa ntD / AFOP2f8AVRPhab + cfx / msn0nyjcaZqMN9a6Wkc8RPF + VaBlKNsZz + yxxjqO0L3hGvh / 1UQcW m / nH8f5qh2Dy49sl1ql1YLEkSyXNxMHPwqAXdqLOTsK9MH5jtD / U4 / Z / 1UT4Wm / nH8f5q3QOOvaZ HqWmWKz2cpKpK0ckPIqaEhZpUalehpQ4TqO0P9Tj9n / VRfC0384 / j / NTrV9P1bUPTkvNOhk9JT8R 4ildz / u8eGM9TrwL4I / Z / wBVEDFpj / Efx / msd0fW9Om1q50axgglvbSMvLC0b + mo58TSV5fRY8uy tX6MrOt1oH0Q / wBj / wBVGY0 + n75fb / xLJ3tdZkspLWTSrdoXdWMJROJ8TT1uuwy0Z9fX0Rv4f9VG Hh6a / qP4 / wA1Idb1e28vPYW + oabbW7ahKYbOJLV5md9qgCGR6faFS22D8x2h / qcfs / 6qJ8LTfzj + P81Pre21uCZZYtKtonH7aogIB2O4m8MRqO0L3hH7P + qiDj0384 / j / NY7rPlyK1t7vVdQ05Y4Iw89 zKCzBRXkzcUnY0GD8x2h / qcfs / 6qJ8LTfzj + P81D6FoFnrOl2uradpoms7lecMjiSLkASK + nNMjg VHcYTqO0P9Tj9n / VRHhab + cfx / msh2PRtS1G5FxdaXDLLwVeZp0G9P78dzidR2h0hH7P + qijFpv5 x / H + akWj3GnX + q3 + j2Wl21xeaYeN2ptpAEatCpmeURs1eyt0xOo1 / wDqY + z / AKqL4Wm / nH8f5qeX Gi6jPpcmmtpMCWkjiRoowqAsKfF8M / X4Rj + Y7Q / mR + z / AKqL4Wm / nH8f5rFtS07RtD1PTbK909Uv NUkMNhD6c05kcUrQxyuF41FWagHfH8z2h / qcfs / 6qL4Wm / nH8f5rK9N0fU7GaSS30yKNpI2jYgjc Hen9 + epAwx1Gv6wj9n / VRTj03SR / H + ax / VfLFtpenT395pyxWtuvKWX45OIJAqVSdmpvvtgGp7Q6 44 / Z / wBVF8LTfzj + P81vQvL9tqem2 + qWOlrNa3Sc4XlWSIlSevpzTI69O4xOo7Q / 1OP2f9VF8LTf zj + P816Nzu / qPPgPrnpV9Panq8a8ftdOX + V9ObXiyeFdfvOHl / Srlz7 / AD + Lh2Hjq / Tf2fjyeB6r 5v1 + DWL + OPWNQVFuJVVPVbioVyAFFNhtmS1JroX5p6vYxf6Ss + pPyJSSZnoARSlFUA7 + OClZX5u8 y6itpoeo2001qbu1 + sSQRvxQmRFajclb7PLEKk1p551ZHZ5J5LmJgDEDIQKU7lKVw0rIB5iudQ8l XV8sslnNHcih2UkcMCOFaMwcgfF0wKgNN85ahAB8ZvGjAFZJJW7UqwVQN8aVP9D84X2o6pBZy20c aS8quvqVHFC37QA7Y0l5xJ5u812us3yR6rzjFzKqRTzSEKqudh8OwoMKExj / ADE8xrxEhsnAFCfr NwCduvWn4YKVkf5maje2l9pwgu7mCORJPUht2IWTcCjABgeuCgRRTdMYtfMVxblm9K4kc9HdWLD6 eFch5GP + aPky8SXeWRXPmC / ufIV7eiW5t7hLpYklR3SUCiHZipNPi8MsYMZs / PeswSRepcXU0MbA vG8pqyjqpf0uW / jhVm / k7zmNb1V7RLOWHhC0rPJcPKKBlGysiitW8cBViV75h8zW + qXccd9eeglw 5VTLbkcQxHAVFQu2FUfZ + a / MMTxSuslwq78JLmABq7jkA6n6MCpl508w6vpvmFEtL4wQCFWaH0w4 LGoru1PwxCoaz / MW6VSLyV5TQcDFHGnz5VDfhjS2mV / 5lkvvJ91qFvLPC8VwkQkVlSTbgSAVWlDy xVj9p541hWXi007rUnk3Ktdt14074aVlXl / zdf6xcXNtLafVwlu8qyDlXkCqgb / 62ClYXaeZvNcE RR5p5yWJ5uZK0PQdcKpxB5s8weinPTrmRqbyK1wA3v1wK9IwJfPf6RuovMmpGO5WhuZOXNVkUcZG p8PFx + GSQyqz8xzxxj0b8hK1ZEsoytdqiohxVM / O8tjOuhz3kZkilti7KpeMkMqkbKVpuemAKkcS eSFjRfRuE4qBwBkoKDoP3wwqyOW40RfIt2 + lxzR2 / wBYVZQzcW9WiVK1Mm1KYFSmw89XFmfggDx0 A9NyCKAEDtUYaVkflzzrdapq1vaNYJFFNzrMoO3FGbr06rTBSvLNUQya7fL9Wd / 9Il2AQE / GehK4 VRFtDNGQWsrjbbgViYU + lMVZ7 + Zs5t9Q02ZELSLHLxIcKBUqPslWBwBSx2w82anDKgSEVWtGrAG3 B / beI4VZDf6zc33kS8ubmiOl0kY5COcUHA9IljH7XhgViOna5bxTJ9dSCa3AoyJZBXPT9ok + / UHC rNfJeu6DdayYLC1ME7xNV2RE + EEEgFUFenjgKsIvmt21e + 9QsvC5kFKBg3xnuGBwqmuj2fl1Jg91 qCRQvy58PX9QeHUMKVGKpt58nhTzEoljgdPQWpfl6nVqDZSKYAqU2k3l5 + X1r04aU4cEMleta7JT CqfanLpB8hXJ0gukQnjWV1rGTKOHIjc9RTArFbDzFe2kgk5SzuBSss85B2puocL + GFWYeU / Nl3qs 11ZzwRJHFaySh05lyQyihJYmnxYCrziO9iiDLG86BiSQJbjqaf5XthVOLHzvfWJBgC8h0Z0dyOvQ tXxxV7RkUvKU8qWkepXF9GsxknkeTjJHC4Ack0oWoeuaX + Wh / qc / 9j + tz / 5PP84fb + pPLHUdUQIf VZoVJUxpDbUop40BFN9sJ7aH + pz / ANj + tRoD / Oj9v6kXqx0jVRbm / sLiV4UIRldU6mhqFYD9nAe2 QP8AJy + z9a / kP6Q + 1Kxo / lQytH + i7ioAYD1xyoajccum2P8ALX + 1z / 2P61 / k / wDpD7U80 + / 0zT7V 7e10yVIGfm0ZKEFiAK7t / kjH + WR / qcv9j + tfyB / nD7VSTzDZIoJ00gFlWreko + IgePXfYYjtkf6n P / Y / rT + QP84farReYYAyhLCRN6Aj0xSvyOI7ZBNeHL7P1oOgP84fawGfyokl1cTqJR68rygbinM1 p8Mow / y0P9Tn / sf1r / J5 / nR + 39SnF5XEkaurSMGFaqzMPoIm3xPbQ / 1Of + x / Wv8AJ5 / nR + 1lvmBN M1l4Hu7S5DRKePBkGzUO + / tie2QP8nL7P1qNAT / EPtSYeX / LxlZPq11VQGoJI + VGqNxXbptg / lr / AGuf + x / Wv8n / ANIfamN1Z2E3l2bSUguRHJKsjO5R2Lde7eCUwjtkVfhy + z9a / kDdcQ + 1jT + TtOQp USgMeNSIxuelPi3OI7aH + pz / ANj + tf5PP86P2 / qT / wAsaZpmhXxu4Le5kmkiMLcvSCjkysSKGv7O AdtAn + 7l / sf1r + QP84fal135X0 + 4up7jnfKZnaTiBb0BY1pXH + Wx / qc / 9j + tf5PP84fath8saO8K P / pjclB5KYCDUdQR1GJ7aH + pz + z9a / yf / Sh3sh2eHQtUuxc3mnXDzcFXksgUUG42De + J7ZA / ycvs / Wv5D + kPtQVvp / ldXki / REjcaHeVXbfxBbbphPbQ / wBTn / sf1r + QP84fairmHSJdGm0uGxuLa3lk WRvTMZPIU3 + In + TB / LQ5 + HL / AGP61 / If0h9qUv5f8vK0am2uhzJUVkjBJ4lvhFdztj / LX + 1z / wBj + tf5P / pD7Uz0Oz0jS7mWa2tbotLC8Tc2QjiaMe / X4cMe2Qf8nL7P1qdBX8Q + 1LX8u6AEJW0uyQNg ZIwPvqcA7aH + py / 2P61 / k8 / zh9rdr5f8sbTtY3MvqIK0kSh7ghlYV64ntr / a5 / 7H9a / yf / Sh3vQv rQ + o / WuDU9L1fT25fZ5cfCubPxv3XiV / DddeV04nh + vhvrTzy / 8APOrC81CwuEsrmwZnhCzBzyQ1 VldAB1Gx3OZFNVqXlXzJpGgWP6P0 + wsdMszIZWjtI5AGZ6Bnepqz7DcmvQdsaTaZ + dPPOraOdJn0 5YJYL2BppFmBFaqCtPiBh3vHGkMetfNelRa7Nrw0Oy / T86iObUFU + sVUBaBiWK / CFBp12rjS2zeD zbJfeVtR1e2g9CW05qiM3MEoitXZf8rwxSwnVPOGg6 / a2sXmLR7fUfqjiWJJ4WlT1AtC1DQUPdSK Y0i2W + XfzDtdW1KHTvQZZ5y / FwpVQEQvvWv8vjjSpLqX5izSTXmk32nwzW8rzWrKwco8O6MHpyHx LWuNLaI0DzL5Y0TTUsNLgttOtlJb6vb27BeR6uSGHJmpux3ONJtMPPfmrWNDvLFbB7QRTJI0yXXO pK0C8eNPHxxCse8p + YvLsGv3mt6nBpVlqd9H6c99Zwv6z0IYhpWZjxbiCQBuaE9MaW2W635tgHlq fVdFmW49KRYg4UkciRUUbj2bFWDav5q0fXpbV9f0K21IWLGS0WaAOEdqVPF5WU / ZHUeGNItnPlvz xZa1cpZpBOl1wMjsyKIwF9w7nvjSWGaz5 / u5zqOkala211p0kklvJHJDLJyj5FaEKU8Po8caRaYe VfzA8q6Totvp0Nn9TtrdeMNrZWpiiTkSxorOTVi3InqSSTvjSbTLzX5y1HR / MMdtHJCLP00eVJEk ZviJBoUHh79caQlGk + ZPJthqt9q9vZWtpqd + a3d7FbSNLLU1YM5IIBIBIGxO / XGk2n2o + dHbypc6 vpjrJJDOsILRui1PGtVPM9H640hht35x07V7 + xvtd0iyu59NYyWcj28kjRyGh5JzYgUKgioNDuKH Gltn2i + eNL1l5rezEouYYGnYyR8E + GgNN27t0xpLEJPPK6lpU + n67Zw3tvcErLCyckZAQVB3XcEV 9saRaZaV588taRp8OnaXpP1KwtxxgtYAkcaAksaKoA3JJPid8aTb0DArxDUNM0uTXr + 3vrd5B67s PSMIU1YsPjdqdTkkJtY + S / Lc8bTNP9XLHeKe6gqKAdAocAYFV / zDSxs4NBi9WVY4bX04ZYAZAVUI oNUIrX2GIVL9F0 + W / gea2lLIrcGeZ2QlgATQNID3GFWVwW0kPkPWYy0c7 / vdlfktfTUULAyU6YFe eaXbafK4W / iigUBasodyTUcj9odu1MKs88oWnkWPVrc2HqNqihzC7hgCfTIcAVI + zy64CrDby401 NZvRdxRSp9YmrxtmV6cjQV5EdfbCqZQax + XyLHz0VpJFA5NRqMR1NKd8Cpp + a8bXF9pSQjkZYpTG 4L8duJ / YBxClikHlLW5ow8duZFP7Su9PH + Xwwqyj9E3Nl + Xl9by2oMjXiusM8hoQRGK8iE8MCpLp OlaVIvLUorC2RAvIh53c7 / EaK56Dt44VZr5R0vyhbXMT2UkEmpHkUah2B8JXfaQsenjgKvP755Rq d + Bdywj6zN8IRSD8Z37YVTqw8sS3VuJpPMkNvy3VHaOpUgEGnLbr0OKoj8xfrI8yKY7WCdPQWpll ZDX4qDirL398AVK9JngMgivNLskRmFZjO54jYHYs5OFWUeZV0eLyLdfodo1hM8Zk48pFEpKchtQ9 KYFYVBe + XgqevHKzf7s4K6g / KpamFWX + Sp9Ce6u0sLaeJzaSM0k4JUpVNq8QfDAVYNbT2kKFWttP mq1eUkV3UDbbZhVkenf4FZY31BrJaqDJHFbXgYGu / xEsOmBXrGBLy268maVcX89w2skRzSPJxEc tRyJIh55r / 5W0 / 8AO + с qcn8ll7vtC1fI + gMKjWZadN0lHTbuMJ7W04 / i + с qX8ll7vuWefNGk1C DRoNNmWZLG29B3fmpPEKoO478cf5V0 / 877D + pfyeXu + 5i0PkrWXqPXhjI6qzSDr32QjCe1dOP4vs P6kfksvd9zN / LmnNYeSNV0i5uIjeXckrRU5lKPEirUlPFD2yP8q6fnxfYf1J / JZe77QxceS7sfbu YBWnQOdz / wA8sI7W05 / i + w / qX8ll7vuTvyj5dbSvMVpfz3MRih9QMEDcvjjZBT92O7YjtXTnbi + w / qX8ll7vtCf3HlvyDPPLPJJNzlZnejz0qxqaCmD + VtP / ADvsP6k / ksvd9oWxeWvy + UVDSsGAI5NO f1jE9racfxfYf1I / JZe77kL5 / sI9cubFrO4RVhjcMXVgPiK0 / YOH + VdOP4vsP6l / J5T0 + 5j0Og65 Cohh2VURBsqmQAA + H7vH + VtP / O + w / qX8ll7vuZELaabyfcabfXi3l0Z0ZDMZGUIAtFBCKR9hqDH + VdPV8X2H9S / k8vKvtDH08rwI45wWcgbYKWuaV6 / sgY / ytp / 532H9S / ksvd9zIPLGkaRpOqxXSLbQ hQy1h + s8viBFKPVSMH8q6c / xfYf1L + Sy932hL73yPoNzeT3P6XK + tI8nH0CacmLU + z74 / wAraf8A nfYf1L + Sy933Ll8g + UGAI1aehFR + 5A / 5l4ntbTj + L7D + pfyWXu + 5G + a9Ftta1n63Hqi20PoovExO 5qCT / L4HD / KunH8X2H9S / ksvd9yTL5KtSzKNeFV6 / wCjOOv0YntXT / zvsP6l / JZe77k4XSILbyjd aRFqCXM81ys6yNG8agUQcdlP8mD + VtPz4vsP6l / JZe77QlCeV4kAV7uByx2JWfw9hh / lbT / zvsP6 l / JZe77k88sadbabd3EklzFSW2kiXgJq1JVv2gdqLiO1dOeUvsP6l / JZR0 + 5jK + TKR8pNQRSNyo9 Zv1LiO1tOf4vsP6l / JZe77ly + S0YAjUloRUbTD / jXE9racfxfYf1L + Sy933PX / rEP1f6zy / c8PU5 0P2aVrTr0zL8WPBx36av4c2ngPFw9bp5 / eecdBF1d6dLp4tuJeFL2KaFqHcc1qGIIPSqnfrlH8n4 P5gZ / msn84t + Xrzytpli0T6iNSaeRrgzahco8y + pQ + mPThjVUXstNvlhOgwfzI / JfzOT + cUz17zB oukjT2OmrdQ3sfqLLEy0VdiCOQHIHlj + QwfzQv5nJ3lI9Lu9GvfMkmrR / XWQRen + i5J7dbQBuPxJ CVRmccCal + 5x / IYP5kfkv5nJ3lmN42kW + j3Oox2STLbozmEFakp2qCyg4PyGD + YF / M5P5xYPqete X9fggty95oVCJJJLSSONiRRgjuYZ2pUfs0r0O2EaDAP4I / JfzOTvLLdJ1fytqF2ttEsP1h / 7pEDk txBY7lEAoBg / IYR / AF / M5P5xY9qvmfTpY7u0gt49OuI3lgWZlEx2 + ESKBQDfxyrJ2bjNcIiO / wBN / pDOGrkLsk / FS8lX + h6fYtbavqIvHDM / rXCSSSMZGJoh4oqjYLTBHs2PFchAx7uGvtv9CTqzWxN + / wDYyPzLqmnaLPbRtpBu0mViXip8HClBQjetcv8AyGE / whr / ADOTvKQ6K9nc + YJ9RittQmE0forp s7xfVI6uHDxxrGHDAmnJmOxoego / kMH8yPyX8zk7yybX7nTtH0STUTpnrBWUG2 + FHJLcQa1K98fy GHlwhfzOTvLA9a8x6HrJtIxDqekiGRXc2EsEYkPIbSsySMUWm4WlQTWuI0GAfwR + S / mcn84vQ9OO hXjBUS0MhAaNIpVkYjqfhoCKYPyGD + YF / M5P5xYteeaNEuPrenvYT6fIsjwC8iQll4ED1E5QyL96 nH + T8H8wL + ayd5R3ltNGtNNi06h2NTa3DVur15JblwzlvjcQJy48uI26UwnQYP5kfkv5nJ / OLvMn mbR9E1ZbCXSROpjVzOssS0rWg4OQf2cfyGA / whfzOTvKC8snyzLqV3rFxqbol2Cg02 + u7Yww0bkP SiRE47GnLmajrXE6DD / Mj8l / M5P5xT3WdT8uafosuqW0EN / BFIsbC3YOOTECnJOfTlXB + QwfzAv5 nJ / OLEp9X0fzHe6eLO31G0a2mWY2tpJFCkzK1RHOXRiVIUjirCtfGlCNBgH8Efkv5nJ3lnFtDE3q NNpItlSNm5sykGg + zt0qMA0GAfwhfzOTvLEn81aFqdrLam2GmSuQEuYri35ijA1VnWRBXp8S9MP8 n4P5g + S / msn84pl5an8sWdjDp1zdxTrboQL6 + vLeaeQ8qj1GThU0PWnbAdBg / mR + S / mcn84sy9GL 0fR4j0uPDh340pT7syPDjw8Nemqrya + I3fV4LqOl3NzreopDEjyJcSF0qgYAuaVBWuWsETbeVdeu WCw2cDk8eixmhbsaR0GKp / 5 / gmtbDy9bzsYZIbQRSqi8gGVUDbKp2FOwwBUk0nQZtTdY7S95zsCR GEANBX + YL2GFWdx6BdaL5E1i0vJhM8gllDqK0UxqtKU / ycCvP9P8rx3fHnf29uHClfUKg1bsfh39 64VZX5P8nJp3mK0vBqdpcGL1P3MToXblEy7Ab7VrgKsXvHH6YvkliaYm4l4cIyGpzO20u + FUysb7 R4xW90e4mYE / DHGqLxptWpY1r74qnf5rLGbrTi / Oqq5Xhx68l3 + IHAFLBjQp8M88ZPcGOo / 4XCrJ vVVPyy1B / XMYW9XlLKQ3aP2GBWOabpeqXNyqQ3sSvSoZeJ2Pw9QaddtzhVm / kvQNbs9einu9QWWF UcGJWWrErQCgZq064CrDtQ0c3Os3qw3kRY3EtVpFt8RNCTIKYVTGDyPrhjDRQu6GtHEUDV38eWKr / wA1rgR + aUBSNlNulXZUYj7VOqs2AKx + zOlSyLHcNHDXiHcJCyitQT / d1oKdsKs4uYtPh / Ly6XR7 5LiL60hNxDH6Hxfu6qVUJvxpvgViSWHmSgZJZRWhHxuP + N8Ksr8iWHmKHULyXUDMbV7GQIZC5HMs hBHJmh3a4CrCbe0M4alwEKniQ68fDp8PTfCrJNN / L2 / 1GAT2t8pjIBq8TJ9oVFOSiv0Y2r13IpeI 6n5R843Oq308NvcsjTycX + EVHI06uNqZJDSeVfzDRQqR3qgCgAZRsP8AnpirMte8r + ZdS0vQ1tm4 z21okd2JJmjb1OCVrQMCag98CpUn5eeb1owuQrU3pcPt9NMbVkdjoGt2fk3VLC5P1u9n9RoVLetU NGoC / GV7qdsVYvb6Z5oijRH8uJIFpyYxQ8j47ljirJfLsV7 + loWl8tR6ci8q3Y48lqjdKMevT6cV YbOPMVpqV / 6WnSSo9zKylkegBY / ZogwqirbU / NxAjj0ZG4gmrxEnr4svviqefmXFI17p0iwTzBEl qIo + amtNm + B8AUpHp2uXVp6nq6PJd86U9aB / hpXpxRetcKpzq9xeX / kS8aOxk0 + UXKL6NvExYgcD y4fCd60 + jArBBZ6jFT / S9VBY0BFk / fttJhVl35dQamNc / e3OoSW8cbu0dzC8MXIjiDvIwJ38MBVj epaTrz6veiHTpiHuJSCIWANXJrWtMKr7aw87WsgltrS6hkAIDorKaHr0fFU1 / M6yvZvNKSR29zLC LdB + 5jZlJJYfaXwwBUo0 + AfYuNBu5okPIcUdX5V2qzh6j2wqyie2Wf8AL69httHlih2tP9CmTkzU 9P4wqiPb + mBWIxeXdYXjJHoLKdipEcgOw2 / 3ZhVm / kSTzLGbuwvLN7ey + rySxclYh2iUUAMWc9K7 YCrCotK80ytxS1uyQK7vIP1jCqIGkedAABBeADoPWkxV7bkUvPtQvPI8AuYBqrQ3sIdQJoCVWQA0 5KIVJAK70OaL / Q9h75f7D / iXY / ynk7h9v60P5Ngsb3T + Grahb3Gplnk46XbyrAIiRx / vomctv8R2 + WE + z + E8zL / Yf8Sv8pz7h9v6081Wy8paZNb2 + o6gbaWZW9BZPSHIKatT93TauJ7AwnrLb + r / AMSj + UsncPt / Wk1jpZn8yTv + kbOXy48Y + ppBC7XzSACvN + PpcQeX2VO3hj / ofw98v9h / xKf5Tn3D7f1p / caJ5ettPnvbi5litIBzmldEHEKNzQxV7 + GP + h / DVXL / AGH / ABK / ynk7h9v62La2dLu4bQ + WNb07 kZUa8bUEMgWE71jSFYzz8AxGI9n8I6y / 2H / Er / Kc + 4fb + tldroOhTPG0E8z8qPG3pqFIpyB5ekB + OMewMIN3L / Y / 8Sg9pZD0h3 / rSK + uPJ3pXVvZ6nTUUEkUIniPpC4HwqJeMIPEORyoemD / AEPYe + X + с 4lP8p5O4fb + tH + V / Kks2kRvrF5a3F9Vg76Yqi2AB + FV9RXYkDqfwxPs / hPWX + с wCJX + U8ncPt / Wv1uHyfo8kMeq6g1o0qExc1ShVOpqIiBTJHsDCesv8AY / 8AEoHaWQdB9v60j0uHT5 / MV36utafc aLIirp0VrGfrpkJH96xDxkCtBxXfrt0wf6H8PfL / AGH / ABKf5Tn3D7f1sivdN8tWGmy3l3dTQ2au oklaNdm6D4RFX9rwwjsDDVXL / Y / 8Sj + Usl3Q + 39bGtRWz1G509PK + rWKq0hN62pQyV9IgEehxSEc zU / aOD / Q / h75f7D / AIlP8pz7h9v62ZR + UdLPF0lkYbMpAhII6jpHgHs / hBu5f7D / AIlT2lk7h9v6 2LajdeUGtbuDTdXjj1SP1IoVu4j6InTbjKFiRuNdiR0674 / 6HsPfL / Yf8Sv8p5O4fb + tHeX9Dtm0 a1bVrpJtQKf6RJp8DLak1NPSEkbvQCg3P9MT7P4T1l / sP + JX + U8ncPt / Wib + 08o2d + lleX7Q3bqp SJlSpX7IP90RhPs / hPWX + x / 4lA7SyDoPt / WlmkaBdnWtRfUbiD9Ek005La1mW5pyoDO8kfpk0BFE X3riewMJ24pf7D / iV / lKfcPt / Wm2oad5X07TpL + 9u5bezRlV5XjUUY7Db0q / teGP + h / DVXL / AGH / ABK / ynk7h9v62MXk2m6hqenr5c1W1ks0ctqoubWeS49Pan1YRRovIiteXT3x / wBD + Hvl / sP + JT / K c + 4fb + tmFt5f0SSBrqOab0lDhi8aIacSG + FolbpjHsDCDzl / sf8AiUHtLIeg + 39bENY1Ly / c2Lp5 escapeLq9PwhrsBYkI3IZREhao2 + 0P4ZXLsHHE7cR / 0n / Esx2jIjev9l + tMPKmnLc6Yg1pkF9GAJJLF A0DA7qVQxyMm21CxwR7Bxk78Q / 0n / Eqe0ZAbV / sv1s7 + pxfUfqVT6XpejXavHjx8ONae2br8vHwv C / h5eh5VXu + xwPFPHx9bt4R5m1BbvX7 + eW1j5mZ1NGWh5HhXfxpmS1K / l7zhdaE5e1tI3JqAHlPE A9fhVlHbvirJvP8AqF7d2egXiiRGu7UTSLCvNVaRUY70bpXAFYkLvV4wStxdUA + FVjI + 74RhVnGg T30n5ca1JM8zTcpuDSAo4HpR9CQNuuBWCWFl5juF9ayMzBSPiS4iBBpUdwcKsx8kQ + d / 8RWjX8l2 + nR8xOJLhZIxWJwnJQx / apTAVYxqkky6xekwq6ieX4S5APxnwFcKomy13zBBHwsxKkAO0cU0oUEC n7PtTFU + / OEKdQ0oSSPHEYpuTRhWIoRT4WePr0wBSwzT9OsbmRQurSW1SAXljRAu4FTxmY / dhVl9 9pyWf5a38MOoR6tW9R / XXmFBpGOBpyO1K / TgVhVnb6WSPrfqpt / uvmfir7jCrNvIFr5ZPmC1a0mu DexJI6rKjhTVCrCvIjYN3GAqxfUrPU7jWL / 6vaetS4l + xbI / 7Z8MKo211D8wbS3S3tfrcMEYokSW 9FAJrsBiqffmSLs + YFEFslxWBaCkbPVSzUo5U9tsAVKdNl81owksU + rzlaSk8IyAaEjciu9O + FU + 1p / MsX5e3jayZPr / ANaTiVNG9OqUpQttWuBWBWX6ak + OOS7jQg0kDHehpTYYVZr5BS + F7fNdXVzM DYzfu5 + RQHkm4JPWmAq8 / sLOO4JZGtgASCkskkdafOnjhVO7Xy00yB1utLRTQENeupH0Fhir3XIp eB6nfRJrOoCS2Mo + sScfgYEUdq7ht8khGW + v + XEERl0iaQooEigoFYilT9gsPvxVO / P11E1n5ent IpIeVmJII1kdeCMqURgrJWgNMAVjFt5huIQaWhuHo6MZnldlBJP7MwO + FWdaVrMWrflrq1x9UWCG NZYxAFbdfTR9wTIa / HT6MCvN4ePL91AqkbjqvT5qMKs28ia1q03mKytbieZoW9QFDKSlFhYqChG9 CPHAVY / fnUrfWb1obaUj61I / EmYqTzP7PqUoadMKpva + Z / MvpnjoME4r9v6q + 2w2 + BwMCov84wv1 / SmaEzKI5aqOQ / aXaoxClh2nHoUiEy6fdE9P3auR378zhVlE6acn5XX4s4JreP68pdJyVYvSPcVD bUoMCsUsNP8ALksCSXerPbSH7cIiMhA / 1hQVwqzH8vrLyvB5mhfT9Umubn05AsLxMqkcd9xtt7 / r wFWLXt3cWeuX0lsnpn6xPXjJcAHk5rUVphVM7b8w / MltQwxWyMF48vSepHuae2NKyH8wQ / 8AiFGC TtxgTiY2PHct2oRXAFWaP5iubC3VLLQeXFeDTcZHY78qM1PE4qjPNOtXeo + Qry6vLU2siXMcYiJe OoBQ1rTlvypirzu316WFyxkZqinAzzFRvWtDXfCrOfIXmm51Ge / sHWMQLZyz0SvLkCidSOlDgKvN bEaQ7EXxniWuzQ8ZNvkwT9eFU7jj / Lda8p9UevT93CKfc + Kve8iliU3l64dJ5Y5YruaMM7RRiEyM 254 / EqqGYinxMB75pfyes / 1X7v8AiXYePg / mfj5oPQ9B1W + smmu7GTSpBI6i2vPqskjKDUODbmde LV6Fq + 1KVTo9X / qv3f8AEr4 + D + Z + Pmm9z5d1G5EYmuUk9MFV5KhpU9qx / LE6PV / 6r93 / ABKPHwfz Px80jTQdUfzA9k2mSrbJGHTV2FmbZmA + yqhjMDvT + 77eFCX8nq / 9V + 7 / AIlfHwfzPx809l0TU / qk sMt6gt3B9VWCBCCN6 / BTH8nq / wDVfu / 4lPj4P5n4 + bHda8sXNlBBJZaU + rmZ1HCyFohVdjzZrhoF 408Ca4RpNZ / qv3f8SjxsH8z8fNOrPydLaXKXFvJFFLGfhdEQEVFDuE7g4jSau98v3f8AEqc + D + Z + PmqzWGt / V5pobw3bxqx9GExc3dRXgpdUQMenxMB4kZH8lq / 9V + 7 / AIlPj4P5n4 + aH0GHzVeack1y LjSpalfqt01u8lF2D1gMy0b3NfEYTo9X / qv3f8Svj4P5n4 + aKutG1CeaET3sbTKP3QcIWqNyVqnt hOj1fTL93 / EoGfB / M / HzQFnb + Z5NYubJra5trWJAyalI1obeVgacURGeYEg1q0Y6GtNqj8nq / wDV fu / 4lPj4P5n4 + aOvdDvpbJ4L28jeBmUkShOG1fFKdaYRo9XX97v8P + JR4 + C / o / HzSDVPLt7p31V9 O0p9VW4ekjWX1JBGu1Hf6w0HIfFUca9O21R + U1f + q / d / xK + Pg / mfj5p7beV722mWaGeOORejIiA0 PXcR4jR6v / Vfu / 4lfHwfzPx80Nc6JfxQz3tswvbiPkfSthB6rv3VTII05b / tMMfyes / 1X7v + JT4 + D + Z + Pm3o + m + YLzTLe5uVk02eRfjsrn6u8sZBI + JoRKhrSo + KtDvQ1ATo9X / qv3f8Svj4P5n4 + aOk sNWaYRnUk9UgUjJTkaDwKVxOj1f + q / d / xKBnwfzPx80t06PzZLq17aPDeWdtDvHfzPamCYg0 / dJG 8kgqN / iQe9Dtj + T1f + q / d / xKfHwfzPx80df6LqM9o8V / fJJbsVLCXhx2O3VKdcRo9X / qv3f8Sjx8 H8z8fNJNS8u6jY3Njb2mlyX8U8hWWe2Fmkdup6vKJmiZhvWig9 + 9AX8nq / 8AVfu / 4lfHwfzPx806 tPLN7ayM8M8cZZGRiiICQw6GkfStMMdJq + uX7v8AiVOfB / M / HzSnUvJJt7GWaGzW9kQfDa26QLK9 TT4TKIk267sPvwflNZ / qv3f8SvjYP5n4 + btG8nTz2FvdTWS6bcsvx2lwtu8sZ3FGaESxmvXZj70O 2J0ms / 1X7v8AiV8fB / M / HzZn6Vx9R9L1P9I9Lj63 + Xxpy6eO / TNnwT8Lhv18NX51z / AcTijx3Xpv l5PD9UkuU1a / 4LTlcSk0civxkeGZLUjrfzF5wt4EghaVIoxxRQTQD / gcVT3zpeXBsNBmm5fWZbMP I4d0fmyoW3Qr3OAKlVn5z1mzAEDAKP2SWYE0pUgnfCrLbLWb / WvJGrXFyFeZfViUKCtQI0b9gg / t dsCsM0m480aY6S2NmygAlKxTuvxChNGYg1HfCrLvLGv + db3V7ePUIAlgxcTP6LRkUjYruT / NTArF Zb3W7LVL9LVrVEluZGZnSNj9oipLEnphVH / 4r87 / APVzs / 8AgI / 6YKVGfmrfXFnqWlzQOEkWOWhP uVHQsuIUsM / xXrP + / wBf + BX / AJqwqyUahe6l + Wd89xW4eO9WNAikkL + 7bYI3ix74FYlDd6wsi + lH Orj7JEbjt / rYVZl5C1HXH8w29vM10LRhI0iSVMZIjNK77bgb4CrHdRZotZvHDOR9ZdihdippITSl ehwqmsfm1I + PHSLKqU4sVkJqO9eeKoz8xFvU81R3EEBl9OBCpNStasDVaFTgCoCDzf5zg5ejGsfK nLjEgrTp / uvDSpprGoatqf5c3suso / q / WkVAqBSY / wB2QQAF2qTvgVgemXdvp9yLiO2LyAsfjjFD z + 1sPHCr03yj56vdcuLqxktUt44LSSVCiuu6FVA3Zv5sFK87g1 / W4GrDfXiDkX4C4n41P + T07YVZ LB + amtQ8qWkT8qfbad + nhU4KW3reBLwzUtVaDXr6aKNEYzSBkpOUNGIrxLFckhHWPn7UbNV42tnI 6klZXhlLCvaoYY0qd + db6C5ttBurwQqbm19WRSzx0LqrfAKNtU98AVKLJ / Jn1gfWZVaKh39R1Fab VIDHCrMF / wAOjyPqp0eQPZlZDOQ77S + mvIczxbpx6YFea2upR2pBhlK0INDPIQaGu9X3wqzLyd5u ur3zDbWZECpOJA / pqoYhY2ft7qMBVJ3uPKceoX5v + TT / AFmWgVnZePL / AIyrvWuFUWmofljxHOC5 L0HIhqCven7zAqO / Ne6MGoaW3NwAkpMYYBW3XqCR + GIUsWh84TQRhIokVfmN + 1T8WFU + utXl1L8t b6c / uXS8WPkhoTT02r9qn7VMCsZ0 / wAx3NsQyJbc0FOUi15A + I50OFWZeQvMlxqOvfV7hLWnou0Z hQI4YEdxXtXAVY9cappdtqt2JoUnIupGJZlrTmfh4BwqmMXnDykiBX0OCRh2cvGCfoCAYFV / zD06 5uvNC + hZC5cwRgHjI37R / lYL9OIVSsbvz5ZLxgsgFpTi0TMO29GY77dcVTPWbvXbzyFePq0axXa3 KLGvBkHpgoRsrKepPfFWNW7KWCfUywpRUju5Qdv + eh7YVZb5Sliae8h2B7eQWsh9QzGRStV + Hg3L f3wFXnFrfWUSsJ7BLgk1UlQlB4fDHhVOLXzH5Yh3fy5HOoBADuK1JrWohBxV7TkUvPr7yzEPrF9d acsaDnPPIZJAqjdmY / vNgM0f5vXf6mPx / nOx8DT / AM4 / j4Jd5f07Rtcszf6Tax3trHM8JmRpvTLx tQgcn + Ie42PbJHVa3 / Ux + P8AOQMOn / nH8fBkd9pF1eQ2sVxpUUiWsfpwghvhUbU + 34KMB1Wt / mD8 f5y + Dp / 5x / HwSS1n0Jtel8uxadYzatbxetLaCJnkRNjWR + RUfbWgJrj + a1tf3Y / H + cvg6f8AnH8f BkMVpqEVhNYxaTBFaz19WFFKq3IUYmj + AGP5rW1 / dj8f5y + Dp / 5x / HwY / rUuh + XraB9U02xtlnkW KD1Y2kkkdmA4oqszsfi7DYbnbEarWn / Jj8f5ynDp / wCcfx8E9stNuLS6juLfRbaCVD8MqR0YBhxN Dz8DiNVrb3gPx / nKcOn / AJx / HwQF3o0Uh2jUbvSbZEjEk9xNKDwUAFndqvSg3OD83rv9Th5 / zk + B p / 5x / HwQ + hHS9d05NR0vSLK6s3LIs6wMqsyHi3HmQSKjr0wnVa6 / 7sfj / OQMOn / nH8fBM9d0q71Y wyX + no5hUhWqy05UqNnHhjLV6wfwR / H + cowYD / Efx8GN2VpoEutXGkwWkM1 / bRCSe3rKwRS3h5nL 8OVR9mvKm / Q5E67WVfBH8f5yfy + C / qP4 + DIxotwdHm00aZGtrLIsrRLyFWp9qof / ACFyY1Wtq + AX + P6SPB09 / Ufx8GN6zb6F5ee0XUYY7Nr + T0baMtMzyvsKIqOTsWFTSg74jVa0 / wCTj + P85Th0 / wDO P4 + DJ9M0zUNPmSS209UcVUuSxJDda1ffANVrb3xj8f5ynDp / 5x / HwQ2pWlvawXGoahpFjDDGGluL mVAqrU1LMxfB + b13 + pj8f5yfA0 / 84 / j4IfQfqOr6bbatpej2c9pcKWguFgZAwBKkhXZWG4PUYZar W3 / dj8f5yBh0 / wDOP4 + DI2vvMYaosoyaDehr03h3 / HE6rW9MY / H + cow6f + cfx8Ep07zvd6hrF9pN n9XuL7T6fWoI1c + kalSrvy4cgeqg1HfCdTra / ux + P85fB0 / 84 / j4IrV4db1XT3s7mzURuyn4Kg / C a / ze2AarW / 6mPx / nKcOn / nH8fBhupaXpOj32n22oAR3Ooy + hZWpMjSTOdqKIzyoCRyboO / XJDVa0 / wCTh5 / zkeBp / wCcfx8GVaXo93p7ObfTUQyRPGzksxKtvTdz3AwR1WtPOA / H + ck4dP8Azj + PgxjU vJlhptjLe3sC2trCAZLiVqItSFBY8ulTiNXrf9Th5 + KPAwfzvx8l + geV9J1PS7bU7KwW8tLlRJBO fVQMvT7DMhAqO4xlqtbf92Px / nJGHT / zj + Pg9N9S5 + o + pwh2r0uXp9vU4149fh4zZ8c / CuvXw8vO uXzcPhjx1fpv7Hk935x1G11W8UXt40azuoiZiVUK5FF + CoGZLUiY / wAyZVQK0UrsOrmSYE / dQYKV NPOXmO / SDRb22vGsjd23rvEsvpqS6qRVWR68eW2IVC6R + Yt9CB9buba5QVHGWbg9Ox5JB + vGlZL / AIjOq + U9Sv4GEDwiRFe2lLlSqK1Q7RpQ / F / Lilg1v5z1mLiJLu4kVFAq0gq1BSpoo + eFDK / Lnn + 4 1bV7ewa2REm51kViSOCM3 / GuClYfea / 54j1O7W2ub1reO4kCoEZ1orEca + mTSnviqa2Xm7zeQn + g s8i / EfU + titD3AHHFUf + Z + qGzvNPjkUXFpIkjS2chHoyEEcSy1U1WtRgMQeabIYT + nNEpT9B2nSn 7XjX / fmR8GHcPknjl3svuPNt9d / l7dahFI9jNb3S28clu1WC / A3Vmf8AnpkgANggm2Lab + Yur20y td31zeRKtPSYhKmlKlko3v1yVIZ35H8 + nX9Rk070DGIoGn9RmZmNHVaEsT / PgIViZ84edrLVr1Le O6u4kuJVCyIZFVeRCgUToOO2KokfmJ58oK6ZKD3HoN / zTjSpl558yanpXmiP6tdSpEkKP9XHIxEk tuVA3xCoOP8ANfV1QK0EMjDq5jkBP3EDGltMb7zfqOo + RbzU0c2dxFdLAr29UNPgP7Z / y8VY1p35 h6vFOrX1xLdQ1qyI4iNAOgPJu + GlZj5X862 + tXV1bQ280DxWsk3OS49UfCVXYdj8XXArEtP88a5a xskszXZY1DzXAqPYcJV2w0qaW / 5ga7GfUWC2bkOkl0rCh46NP1wUr0 / Al5CyaWfMl9Ffi3Fp6rkX HqT1qX3rGq1r9OSQmf1LyD / y2Rf8Ddf1wK7z7JBDb6GtuiT2otSIiQN0CrwILhiK7dcQqWaPeaHL bH9IzS2kymiRxRxSJwoKblF3 + jCrMbebSH8nao + muzWwEgdnRa8 + C1 + HYHamBWDWOo6TFzF3aRXA NPTIjKEUG9aPvU4VZZ5X1ryvNq9ta2OlC3uW9T07g0LCiMzb9dxUYFef3OpRWmqaiqXUluz3UpYQ kKD8Z3PwdcKqkWugcZBrE8bg1FXNQQdukZxVlv5sSwx6hpfqorp6cvIMXB6jpxkj74ApYvBqvlZI + MlgWYHYh36fTMcKsgvbjSrn8tr1tLtxbxC7RZEnbmpkAjJYbnalNq4FYTa3FqnBbjT7GVRs7h5V Y ++ 0nH8MKvQ / y9fyu + rE6da + lfeg5k41YKvJQfiLn2h3cBVg858z / pPUhpizND9bmL + gCw5Fz141 7YVTK3v / AM1FhUQpdLFvxURgDrvtTFUy / MmS2TzWpmht5UFvHyEhcOd2 / lZcAVA2Op + SynG706GJ lChSnKTke9ayLTCqdapNok35c3jaNCqQC7QSIyniZapU0DSH7PHvgVidiPLPpRveRD1t / UjSCUp3 pQ + qpwqzPyU / lM317 + iYHiuBZyl2ZHUenySoq0jd6YCrCdKutARmOpRFgGqnpFyaeBrOo / DCqfJq v5ZcRzsbwvQciGQCven77Ar13Al5pdaB5euLmadnvVMztIVh2egLGv8ANml / l7F / Nn / sf + Kc / wDk 2fePt / U6Ly / 5WCAOl6zCtSTCD19nphPbuL + bL / Y / 8Uo7On3j7f1Jlqtp5b1GHT4riK89OxiEUQR4 1qgotGpJ / kYntzGP4Zf7H / il / k6fePt / Ugv0B5JqR9Tvtu / rin / J3H + XcX82X + x / 4pf5On3j7f1J tYP5cstJuNNgtbn6ncsTKrujMS6hTRjJUbJg / lzHz4Z / 7H / il / k6fePt / Ul50nyUP + lfdHem0i / 9 VcI7dxfzZf7H / il / k6fePt / UmGnnyrZ3kVza6fLHOhIR6x7cgVP + 7PA4jtzGTXDP / Y / 8Up7OmOo + 39TFpNHvPr9zcpeF0mleURzRI9AzV47zY / y7i / mz / wBj / wAUv8nT74 / b + pM7GS8tY6RtGOdCytbx NQ07cpjTE9u4v5s / 9j / xS / ydPvh3 / qV / OMVtrstrIpkh9FGFGSNq8yD / AL8HhhPbmMfwz / 2P / FI / k + Z6j7f1JBB5XtBLWWWQqtCKRRbmvvKcH8u4v5sv9j / xSf5On3j7f1JzNp1lJ5VudHRpF9W4SX1P ShoDQbcQ9P8AdeH + XMdXwy / 2P / FI / k + d1Y + 39THF8mRxmiXcg5dSIYe3j + 9wfy7i / my / 2P8AxS / y dPvh3 / qT7yrpsOianHefWZ5SVaOSMRwqrK3TpJXYgHEdu4jtwz / 2P / FJ / k6fePt / Ulc / ly5a9urm HVbuEXEskpjQIo + NidwJutO + P8u4v5s / 9j / xS / ydPvj9v6m4tI1 + NVCeZdTVABSMuCAAOm8xxPbu L + bL / Y / 8Uv8AJ0 + 8fb + pPfMUFrqmpi9V5Iv3SpweC1lG29ayMfHE9uYh / DP / AGP / ABS / ydM9R9v6 ksGkQFiPUIp3NlY0Py3wntzF / Nl / sf8AikfydPvh3 / qR09pbyeV7nSAxLyzrMJfQgRRTjtwjdB + x 1wfy5i58M / 8AY / 8AFJ / k6fePt / Uki + V4QFDlCx6lbeGg ++ XH + XcX82X + x / 4pf5On3j7f1J35XsbT Sbu4lIL + tbvDWOKJGFaMdxJ / k4R25jP8Mv8AY / 8AFIPZ8x1h3 / qSJPJ1gAxluLlqfZCLGD + MuAdu 4v5sv9j / AMUk9nT7x9v6lQeTtJIB9e7FexEf / VXE9u4v5sv9j / xS / wAnT7x9v6nrh2tPqX1vi3p + n6vHblTjyp1pX6c2XjjwvErbh5vPlfu + 1xPDPHw9bp5pqP5lal9avdPu7S1nsuclu8fpzVeOpQhq sRute2ZFNVq3lDzT5N8v6aLDT7YadZeo8rW0UUzsXfq7O7OSSR3rjSbTrzX51vNOTTZtOa0 + r30X rVuxIG4kKVKhCOzb1xpCRaFqnlRPMU / me + k0yDWrpFimuYkuWlMYCilWYovwqAeK9t640m2aXHmW zn0C91TSbiKcWqsA8nMRiRVDUbYN0YdMCvPdT8yaP5iazj80WenX1taSLPEitMvGVeppyow9mFMN LbPdL88eXtTvorG0mL3E3LgpFK8VLHv4LjSsWl / MzTZZNS0jX7dJLKRprV / q / MFojWMqwJrVh2IY Y0i1Xy / 52 / L3QdMj07RbKe1sELMsSRlhyY1ZizOzMSepJxpNpl52883Xl65sFggimhukd3MpdHHG lKUHvvXEBWPeX / NvkW21q78wzWcNlrOoRiO7ngSRncBgaEk8QDxBNBudzjS2yTWPzAtU8q3Gu6MF uRBOtuVnDovI8a / ZBPRxjSvPtS8 + 6L5lnsH8xaLZzfo6T1bZ3kuGCSNx5MEVFDdOjeGNLb0bQfzA 0XVr6HT4bmKW7l5UCLMteKlthJGo6D + bGlY6 / nuDVTq2h67BbNZs72wjXlSSLkUPNpJIuLdKFTt1 2pjSLTryrfabZ6fDo2gQQQWdmvG3tIfTfipJY0pcOx3JJJxTap5k84X + la3HZRx272zIrOX9T1QW qNgo4npjSEt0e78oaXrV7rFtZiLUNSJa / ukgmMklTypV3cKOW9AKY0m091PzWF8vzappqKzRSrFx uQyCppXpv0bGlYNrPmPTtYvtP1DVdFtLy70qQyWDmWU + m5oeXh5EahUU5Vp2xpFs30HzdHqkk8Ss nqxRNKFVXAopAqST4t0pjSWPzecNO1rSbjT9fjt3trgcJbcRyMrKDUbh2INQGBBxpFpnoWs6FpWl wabpphsLG1Hp29qLaeir12oW6k9zjSbZjgV4LeaXa3Ou30chuISbmSjG2kK7uxJr6g2FO2SQnVr + WUdxCso1WCJWoVWQMrUIBBp6hp174LVMvO + lyJD5f0 + O4t6wWnoiWV1RW9NUHJSzDY8dsQqQReVN YlFYpbKQbGqyo3Xp0bCrMdG0q8sfIWsW1zxMrmV1 + r8ZNjEg6VpXbArBLPRZbqhWSaOoqfVhVadd jv7YVZv5T8lDT9ZtdQOpxzGL1P8ARuKBzyRk / ZZvGuBWFXd7qMGtX / poJ63Mp4yTRvtzOwBNR0wq n2na / wCeHUW1no6SemtQvGMkLXxPzwKifzeXlqOkqzSJGySB3TcKOS7kd8QpYlY6Zo01BNqNypNS QkLMwHyAPf3wqyS + trSz / LPUEsbqWdDeoxkmQxNyIjBUA9qDAqR6R5b0rULWF / 0463LorS26W08v Bj2LIpGxwqzDyX5TtNM1uO5 / SU1zIFYRwm3ljQkoQSzOtNgTTfAVYfEkDa3qEn1u1VY7qcMsqqfi LEU4t8JwqyuweC1Qqb7Tif2eESJQfQmBXefo4H8xxo8bcnijAkEcjKN2pVkNBiFUtP8AJ6XCpNJd W0UZqeLu / LY0oRzBFcbVM9a0q1sPJV3brPEI2uEcyQsxUElBQlzLvtirFbTydqd3IqQeo3I8edV4 g9dz6dMKst8p + T9Q0W6u7q7YMr2zxLR1fclW + yEX + XxwKweJoZHCg1 / m426sQPGlcKotUgVgyzTB gag / U16j / Z4q9kyKXhmp + VtTm1K7mia2Mck0jofrFKqzkjauYf8AKem / 1SPzb / ymX + aUPB5P1WU / 3lpGN93uGHQ0 + eJ7T03 + qR + a / lMv80su8yabLdaboUNvPavLY2iwykmNwHVVU8WkBNKqcf5S0 / 8A Pj81 / KZf5pSizsfMFpKzWt7BBJx4syGFaqTWlePtj / Kem / 1SPzX8pl / mllunPcT + U7 + w1TUoHvbo yLE7spCqyKFDcaftKTg / lPTfz4 / NP5TL / NLFk8iQ8Ky6xZISaAKrv16dGx / lTTfz4 / NH5TL / ADSn HljytZ6TrltqD6vaSrDzHpopVjzjZBQlj / NiO09OduOPzX8pl / mljeo + WtQk1G7nhlsfTlmkkU8Y akMxIJ96Yf5T03 + qR + a / lMv80orQ9L8yWU / 1mz1GwtJCAPVZIi3FutKqfpxPaem / 1SPzX8pl / mlk P5gWkOr3NjLay28ohR + XN1h3iCOvyx / lLTj + OPzX8pl / mljsflpGk4eraqdqsVjAAPvXH + U9N / qk fmv5TL / NPyTq60Nf8EXmkQ3do9xLdJMvGQRJT4Op4tv8Bx / lLT8 + OPzX8pl / mlItM8s3lpQc7KJy ahxdOxJG4qVApj / Kem / 1SPzX8pl / mln2gavexMsGo3lq8IWgkE3qSFvCpAO9e5OD + U9Mf44 / NP5T L / NLzC / 8s6hPq95L8BhlmldHEluNi5IP2T29sP8AKem / 1SPzR + Uy / wA0rovK + oBBRoSp3HKS2rQ / OKuP8p6b / VI / NfymX + aWa + bdIh2bVRdwalbxp6SLxZ6Goqa7fPB / KenH8cfmv5TL / NKTQeUopJHS TWbeMINz8R3PhXjXD / Kem / nx + a / lMv8ANKfw6JpyeWLnRzq8DPNcCYT9hsvw0r / kYP5T038 + PzX8 pl/mlL/8H6KpC/p1RyO1OnSvY4/yppv58fmv5TL/ADSnHlnStJ0e/kuRq6XHOJo+BI2FVYnr24Yj tPTnlOPzX8plH8JT86t5djBf14BQb8aE0+jfB/Kem/1SPzT+Uy/zSuXWdBZQwuYKEVFSB19jj/Ke m/1SPzX8pl/mlHevD6h2jmPR4+p6lfh50ryr4UzK8WPBx36au/LvaeA3w1u//9k=

uuid:e8ce769c-7156-644d-bd5a-e345d2669ae1xmp.сделал: 078011740720681183D1ABDF564D421Auuid: 5D208

BFDB11914A8590D31508C8proof: pdfuuid: cae8923e-59b7-9d44-b058-8ae5c31242ddxmp.did: 0380117407206811822AD256F70B9343uuid: 5D208

BFDB11914A8590D31508C8proof: pdf

savedxmp.iid: 0380117407206811822AD256F70B93432017-09-14T12: 21: 48 + 03: 00Adobe Illustrator CS6 (Macintosh) /

savedxmp.iid: 078011740720681183D1ABDF564D421A2017-10-11T12: 49: 15 + 03: 00 Adobe Illustrator CS6 (Macintosh) /

EmbedByReference / Users / erhan / Library / Caches / TemporaryItems / Apimondia.jpg

EmbedByReference / Users / ebru / Desktop / masaustu / APIMONDIA 2017 / YEPYENI ABSTRACT BOOK / LAYDIN.jpg

PrintTrueTrue121.00013129.699996Centimeters

Helvetica-CondNormalTrHelvetica TrCondensed NormalOpen TypeOTF 1.000; PS 001.001; Core 1.0.38FalseHelvetica-CondNormalTr.otf

Helvetica-CondItalicTrHelvetica TrCondensed ItalicOpen TypeOTF 1.000; PS 001.001; Core 1.0.38FalseHelvetica-CondItalicTr.otf

Helvetica-CondBoldItaTrHelvetica TrCondensed Bold ItalicOpen TypeOTF 1.000; PS 001.001; Core 1.0.38FalseHelvetica-CondBoldItaTr.otf

MyriadPro-RegularMyriad ProRegularOpen TypeVersion 2.102; PS 2.000; hotconv 1.0.67; makeotf.lib2.5.33168FalseMyriadPro-Regular.otf

KozGoPr6N-RegularKozGoPr6N Regular-83pv-RKSJ-HRegular-83pv-RKSJ-HUnknown11.0d7e4False ヒラギノ角ゴシック W3.ttc

Helvetica-CondBoldTrHelvetica TrCondensed BoldOpen TypeOTF 1.000; PS 001.001; Core 1.0.38FalseHelvetica-CondBoldTr.otf

DINTBoldTrDIN TrBoldOpen TypeOTF 1.000; ПС 001.001; Ядро 1.0.38FalseDINTBoldTr.otf

Голубой

пурпурный

Желтый

Черный

Группа образцов по умолчанию 0

Белый CMYKPROCESS0.0000000.0000000.0000000.000000

Черный CMYKPROCESS0.0000000.0000000.000000100.000000

CMYK красный CMYKPROCESS0.000000100.000000100.0000000.000000

CMYK ЖелтыйCMYKPROCESS0.0000000.000000100.0000000.000000

CMYK зеленый CMYKPROCESS100.0000000.000000100.0000000.000000

CMYK Голубой CMYKPROCESS 100.0000000.0000000.0000000.000000

CMYK BlueCMYKPROCESS100.000000100.0000000.0000000.000000

CMYK, пурпурный CMYKPROCESS 0,000000100,0000000,0000000,000000

C = 15 M = 100 Y = 90 K = 10CMYKPROCESS14.999998100.00000090.00000010.000002

C = 0 M = 90 Y = 85 K = 0CMYKPROCESS0.00000090.00000085.0000000.000000

C = 0 M = 80 Y = 95 K = 0CMYKPROCESS0.00000080.00000095.0000000.000000

C = 0 M = 50 Y = 100 K = 0CMYKPROCESS0.00000050.000000100.0000000.000000

C = 0 M = 35 Y = 85 K = 0CMYKPROCESS0.00000035.00000485.0000000.000000

C = 5 M = 0 Y = 90 K = 0CMYKPROCESS5.0000010.00000090.0000000.000000

C = 20 M = 0 Y = 100 K = 0CMYKPROCESS19.9999980.000000100.0000000.000000

C = 50 M = 0 Y = 100 K = 0CMYKPROCESS50.0000000.000000100.0000000.000000

C = 75 M = 0 Y = 100 K = 0CMYKPROCESS75.0000000.000000100.0000000.000000

C = 85 M = 10 Y = 100 K = 10CMYKPROCESS85.00000010.000002100.00000010.000002

C = 90 M = 30 Y = 95 K = 30CMYKPROCESS90.00000030.00000295.00000030.000002

C = 75 M = 0 Y = 75 K = 0CMYKPROCESS75.0000000.00000075.0000000.000000

C = 80 M = 10 Y = 45 K = 0CMYKPROCESS80.00000010.00000245.0000000.000000

C = 70 M = 15 Y = 0 K = 0CMYKPROCESS70.00000014.9999980.0000000.000000

C = 85 M = 50 Y = 0 K = 0CMYKPROCESS85.00000050.0000000.0000000.000000

C = 100 M = 95 Y = 5 K = 0CMYKPROCESS100.00000095.0000005.0000010.000000

C = 100 M = 100 Y = 25 K = 25CMYKPROCESS100.000000100.00000025.00000025.000000

C = 75 M = 100 Y = 0 K = 0CMYKPROCESS75.000000100.0000000.0000000.000000

C = 50 M = 100 Y = 0 K = 0CMYKPROCESS50.000000100.0000000.0000000.000000

C = 35 M = 100 Y = 35 K = 10CMYKPROCESS35.000004100.00000035.00000410.000002

C = 10 M = 100 Y = 50 K = 0CMYKPROCESS10.000002100.00000050.0000000.000000

C = 0 M = 95 Y = 20 K = 0CMYKPROCESS0.00000095.00000019.9999980.000000

C = 25 M = 25 Y = 40 K = 0CMYKPROCESS25.00000025.00000039.9999960.000000

C = 40 M = 45 Y = 50 K = 5CMYKPROCESS39.99999645.00000050.0000005.000001

C = 50 M = 50 Y = 60 K = 25CMYKPROCESS50.00000050.00000060.00000425.000000

C = 55 M = 60 Y = 65 K = 40CMYKPROCESS55.00000060.00000465.00000039.999996

C = 25 M = 40 Y = 65 K = 0CMYKPROCESS25.00000039.99999665.0000000.000000

C = 30 M = 50 Y = 75 K = 10CMYKPROCESS30.00000250.00000075.00000010.000002

C = 35 M = 60 Y = 80 K = 25CMYKPROCESS35.00000460.00000480.00000025.000000

C = 40 M = 65 Y = 90 K = 35CMYKPROCESS39.99999665.00000090.00000035.000004

C = 40 M = 70 Y = 100 K = 50CMYKPROCESS39.99999670.000000100.00000050.000000

C = 50 M = 70 Y = 80 K = 70CMYKPROCESS50.00000070.00000080.00000070.000000

Серый1

C = 0 M = 0 Y = 0 K = 100CMYKPROCESS0.0000000.0000000.000000100.000000

C = 0 M = 0 Y = 0 K = 90CMYKPROCESS0.0000000.0000000.00000089.999405

C = 0 M = 0 Y = 0 K = 80CMYKPROCESS0.0000000.0000000.00000079.998795

C = 0 M = 0 Y = 0 K = 70CMYKPROCESS0.0000000.0000000.00000069.999702

C = 0 M = 0 Y = 0 K = 60CMYKPROCESS0.0000000.0000000.00000059.999104

C = 0 M = 0 Y = 0 K = 50CMYKPROCESS0.0000000.0000000.00000050.000000

C = 0 M = 0 Y = 0 K = 40CMYKPROCESS0.0000000.0000000.00000039.999401

C = 0 M = 0 Y = 0 K = 30CMYKPROCESS0.0000000.0000000.00000029.998802

C = 0 M = 0 Y = 0 K = 20CMYKPROCESS0.0000000.0000000.00000019.999701

C = 0 M = 0 Y = 0 K = 10CMYKPROCESS0.0000000.0000000.0000009.999103

C = 0 M = 0 Y = 0 K = 5CMYKPROCESS0.0000000.0000000.0000004.998803

Brights1

C = 0 M = 100 Y = 100 K = 0CMYKPROCESS0.000000100.000000100.0000000.000000

C = 0 M = 75 Y = 100 K = 0CMYKPROCESS0.00000075.000000100.0000000.000000

C = 0 M = 10 Y = 95 K = 0CMYKPROCESS0.00000010.00000295.0000000.000000

C = 85 M = 10 Y = 100 K = 0CMYKPROCESS85.00000010.000002100.0000000.000000

C = 100 M = 90 Y = 0 K = 0CMYKPROCESS100.00000090.0000000.0000000.000000

C = 60 M = 90 Y = 0 K = 0CMYKPROCESS60.00000490.0000000.0030990.003099

Библиотека Adobe PDF 10.01

Helvetica Tr1.00000 — OpenType — PS4255847738Helvetica-CondBoldTr4255847738

Helvetica Tr1.00000 — OpenType — PS1408378325Helvetica-CondNormalTr1408378325

DIN Tr1.00000 — OpenType — PS457689432DINTBoldTr457689432

Helvetica Tr1.00000 — OpenType — PS33029Helvetica-CondItalicTr33029

Myriad Pro 2.10200Adobe SystemsOpenType — PS55235293MyriadPro-Regular55235293

Helvetica Tr1.00000 — OpenType — PS1395777759Helvetica-CondBoldItaTr1395777759

Козука Готика Пр6Н6.01400Adobe SystemsOpenType — PS2363480839KozGoPr6N-Regular 2363480839

конечный поток эндобдж 3 0 obj > эндобдж 5 0 obj > эндобдж 6 0 obj > эндобдж 7 0 объект > эндобдж 8 0 объект > эндобдж 9 0 объект > эндобдж 10 0 obj > эндобдж 11 0 объект > эндобдж 12 0 объект > эндобдж 13 0 объект > эндобдж 14 0 объект > эндобдж 15 0 объект > эндобдж 16 0 объект > эндобдж 17 0 объект > эндобдж 18 0 объект > эндобдж 19 0 объект > эндобдж 20 0 объект > эндобдж 21 0 объект > эндобдж 22 0 объект > эндобдж 23 0 объект > эндобдж 24 0 объект > эндобдж 25 0 объект > эндобдж 26 0 объект > эндобдж 27 0 объект > эндобдж 28 0 объект > эндобдж 29 0 объект > эндобдж 30 0 объект > эндобдж 31 0 объект > эндобдж 32 0 объект > эндобдж 33 0 объект > эндобдж 34 0 объект > эндобдж 35 0 объект > эндобдж 36 0 объект > эндобдж 37 0 объект > эндобдж 38 0 объект > эндобдж 39 0 объект > эндобдж 40 0 объект > эндобдж 41 0 объект > эндобдж 42 0 объект > эндобдж 43 0 объект > эндобдж 44 0 объект > эндобдж 45 0 объект > эндобдж 46 0 объект > эндобдж 47 0 объект > эндобдж 48 0 объект > эндобдж 49 0 объект > эндобдж 50 0 объект > эндобдж 51 0 объект > эндобдж 52 0 объект > эндобдж 53 0 объект > эндобдж 54 0 объект > эндобдж 55 0 объект > эндобдж 56 0 объект > эндобдж 57 0 объект > эндобдж 58 0 объект > эндобдж 59 0 объект > эндобдж 60 0 объект > эндобдж 61 0 объект > эндобдж 62 0 объект > эндобдж 63 0 объект > эндобдж 64 0 объект > эндобдж 65 0 объект > эндобдж 66 0 объект > эндобдж 67 0 объект > эндобдж 68 0 объект > эндобдж 69 0 объект > эндобдж 70 0 объект > эндобдж 71 0 объект > эндобдж 72 0 объект > эндобдж 73 0 объект > эндобдж 74 0 объект > эндобдж 75 0 объект > эндобдж 76 0 объект > эндобдж 77 0 объект > / XObject> / Шрифт> >> / MediaBox [0 0 594.95996 840.95996] / Аннотации [399 0 R 400 0 R 401 0 R 402 0 R 403 0 R 404 0 R 405 0 R 406 0 R 407 0 R 408 0 R 409 0 R 410 0 R 411 0 R] / Содержание 412 0 руб. / StructParents 0 / Родитель 17 0 R >> эндобдж 78 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC / ImageI] / XObject> >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 79 0 объект > / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 80 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 81 0 объект > / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 82 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject> >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 83 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 84 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 85 0 объект > / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 86 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 87 0 объект > / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 88 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 89 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 90 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 91 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 92 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 93 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 94 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 95 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 96 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 97 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 98 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 99 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 100 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 101 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 102 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 103 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 104 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 105 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 106 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 107 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 108 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 109 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 110 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 111 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 112 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 113 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 114 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 115 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 116 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 117 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 118 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 119 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 120 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 121 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 122 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 123 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 124 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 125 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 126 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 127 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 128 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 129 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 130 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 131 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 132 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 133 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 134 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 135 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 136 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 137 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 138 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 139 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 140 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 141 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 142 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 143 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 144 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 145 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 146 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 147 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 148 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 149 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 150 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 151 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 152 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 153 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 154 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 155 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 156 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 157 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 158 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 159 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 160 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 161 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 162 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 163 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 164 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 165 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 166 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 167 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 168 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 169 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 170 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 171 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 172 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 173 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 174 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 175 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 176 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 177 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 178 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 179 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 180 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 181 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 182 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 183 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 184 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 185 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 186 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 187 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 188 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 189 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 190 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 191 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 192 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 193 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 194 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 195 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 196 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 197 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 198 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 199 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 200 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 201 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 202 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 203 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 204 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 205 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 206 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 207 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 208 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 209 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 210 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 211 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 212 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 213 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 214 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Затенение> / XObject> >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 215 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 216 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 217 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 218 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 219 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 220 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 221 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 222 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 223 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 224 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 225 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 226 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 227 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 228 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 229 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 230 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 231 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 232 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 233 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 234 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 235 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 236 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 237 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 238 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 239 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 240 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 241 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 242 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 243 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 244 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 245 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 246 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 247 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 248 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 249 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 250 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 251 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 252 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 253 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 254 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 255 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 256 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 257 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 258 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 259 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 260 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 261 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 262 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 263 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 264 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 265 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 266 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 267 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 268 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 269 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 270 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 271 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 272 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 273 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 274 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 275 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 276 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 277 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 278 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 279 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 280 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 281 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 282 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 283 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 284 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 285 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 286 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 287 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 288 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 289 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 290 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 291 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 292 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 293 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 294 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 295 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 296 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 297 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 298 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 299 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 300 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 301 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 302 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 303 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 304 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 305 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 306 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 307 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 308 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 309 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 310 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 311 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 312 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 313 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 314 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 315 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 316 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 317 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 318 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 319 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 320 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 321 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 322 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 323 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 324 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 325 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 326 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 327 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 328 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 329 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 330 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 331 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 332 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 333 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 334 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 335 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 336 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 337 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 338 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 339 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 340 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 341 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 342 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 343 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 344 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 345 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 346 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 347 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 348 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 349 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 350 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 351 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 352 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 353 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 354 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 355 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 356 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 357 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 358 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 359 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 360 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 361 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 362 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 363 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 364 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 365 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 366 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 367 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 368 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 369 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 370 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 371 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 372 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 373 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 374 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 375 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,281 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 376 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 377 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.0 0,0 595,279 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 378 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 379 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 380 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0,0 0,0 595,28 841,89] / Тип / Страница >> эндобдж 381 0 объект > / ExtGState> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / TrimBox [0.