Ргс мед регистратура: Главная | Ргс-мед поликлиника

265 W 122ND ST.
НЬЮ-ЙОРК , NY
10027

1800 JEFFERSON AVE.
МАЙАМИ-БИЧ , FL
33139

3775 MACK AVE
CINCINNATI , OH
45248

8535 ВЕНДИ ЛЕЙН
ЗАПАДНЫЙ ПАЛМ БИЧ , FL
33411

ЛЮКС 302
КОЛУМБИЯ ,
210443340

3310 Вт.БОЛЬШАЯ БОБЕРНАЯ ДОРОГА, ЛЮКС 104
ТРОЙ , MI
48084

557 CULPEPPER RD
ЛЕКСИНГТОН , KY
40502

9401 КОЛЛИНС АВЕНЮ, КВАРТИРА 607
ПОВЕРХНОСТЬ , FL
33154

УЛИЦА ВТОРАЯ ЗАПАДНАЯ, 455, П.О. КОРОБКА 11
ВАТЕРФОРД , PA
16441

12 РОДЖЕРС РД БЛОК № 6
HAVERHILL , MA
01835

640 MOJAVE TRAIL
МЕЙТЛЕНД , FL
32751

4511 НЕПТУН ДОРОГА
ST.ОБЛАКО , FL
34769

2549 ROYAL PALM WAY
ВЕСТОН , FL
33327

УЛИЦА ГРОВА 344, # 4138
ДЖЕРСИ СИТИ , NJ
07302

1700 ДЖЕЙ ЭЛЛ ДР
РИЧАРДСОН , TX
75081-1600

АТСБ, А / Я 938
ДУБЮК , IA
520040938

1300 OKEECHOBEE ROAD
ЗАПАДНЫЙ ПАЛМ БИЧ , FL
33401

720 СВ УЛИЦА 62, БЛОК 403
МАЙАМИ , FL
33138

КРАСНОЕ КРЫЛО ,
550662377

5844 ФРАНК РИДЕР RD
PENSACOLA , г. FL
32526

1515 РИНГЛИНГ БУЛЬВАР, ЛЮКС 1000
SARASOTA , FL
34236

899 BLUEGRASS LANE
ROCKLEDGE , FL
32955

42 AUGUSTA WEST
LAGUNA VISTA , TX
78578

1818 NW 208 WAY
ПЕМБРОКОВЫЕ ПИНЫ , FL
33029

2495 СКРЫТЫЙ ПРИВОД
НАВАРРЕ , FL
32566

1044 JAGUAR BLVD
ЛЕХАЙ-АКРЕС , FL
33974

2158 ОТВОД КРЫЛЬЕВЫЙ
ВЕЛЛИНГТОН , FL
33414

320 ЦЕНТРАЛЬНЫЙ АВТОМОБИЛЬ 507
SARASOTA , FL
34236

700 UNIVERSE BLVD., ATTN ЗАКОН / JB
JUNO BEACH , г. FL
33408

3624 ТРАССА ДЛЯ СУМАСШЕДШИХ ЛОШАДЕЙ
СЕНТ-АВГУСТИН , FL
32086-5312

6597 НИКОЛАЙСКИЙ БУЛЬВАР, ЛЮКС 1503
НЕАПОЛЬ , FL
34108

2324 ВИНТАЖНЫЙ ПРИВОД
МАЯК , г. FL
33064

1725 с.W. 13-й СУД
FT. ЛАУДЕРДЕЙЛ , FL
33312

ДОРОГА КЕНТЕРБЕРИ, 68
ИНГЛИС , FL
34449

2026 с.51-Я УЛИЦА
ТАМПА , г. FL
33619

3603 MADACA LANE
ТАМПА , г. FL
33618

2217 S OCCIDENT AVE
ТАМПА , г. FL
33606

17340 NE 12 СУД
МАЙАМИ , FL
33162

4566 HWY.20 E., ЛЮКС 108
НИЦВИЛЬ , FL
32578

1440 VANDERBILT DR
ЭЛЬ ПАСО , TX
79935

5252 NW 85 ПРОСПЕКТ
МАЙАМИ , FL
33166

5801 ЮЗ 70-Я УЛИЦА
МАЙАМИ , FL
33143

6260 УЛИЦА 39 N
ПИНЕЛЛАС ПАРК , FL
33781

6544 PINECASTLE AVENUE
ОРЛАНДО , FL
32809

4701 MARKET STREET SUITE A
ФРЕДЕРИКСБУРГ , ВА
22408

5031 КАМЕННЫЙ КРУГ
WIMAUMA , FL
33598

8635 SADDLEBROK CIR, APT 2104
НЕАПОЛЬ , FL
34104

18800 SW 137TH AVE
МАЙАМИ , FL
33177

9730 NW 74 ТЕРРАСА
ДОРАЛ , FL
33178

2101 BRICKELL AVENUE
МАЙАМИ , FL
33129

5464 2-я ПРОСП.
ФОРТ МАЙЕРС , FL
33907

760 БАРРОУС МОЛОЧНАЯ ДОРОГА
ПОРТ ОРАНЖЕВЫЙ , FL
32127

6912 АКСЕССУАРНЫЙ СУД, 207
ОРЛАНДО , FL
32818

8119 262ND ST
ДУБЫ GLEN , NY
11004

106 ВЕТРОВОЙ ПУТЬ
ПЛЯЖ ИНДИЙСКОЙ Гавани , FL
32937

106 ВЕТРОВОЙ ПУТЬ
ПЛЯЖ ИНДИЙСКОЙ Гавани , FL
329375310

670 WESTWARD CIR
ХОЛЛИ ХИЛЛ , FL
32117

174 PARADISE CIR
ЮПИТЕР , FL
33458

9226 CORNISH CT
ОРЛАНДО , FL
32817

3036 СТАРАЯ ПУТЬ
НЕАПОЛЬ , FL
34119

6778 GREENLAND CHASE BLVD
ДЖЕКСОНВИЛЬ , FL
32258

19333 SW 119TH CT
МАЙАМИ , FL
33177

16090 SW 184 ST
МАЙАМИ , FL
33187

13818 SW 152ND ST, 289
МАЙАМИ , FL
33177

400 Н.ФЛАГЛЕР ПРИВОД, КВАРТИРА 1001
ЗАПАДНЫЙ ПАЛМ БИЧ , FL
33401

Беверли Хиллз ,

РИТЭГ Медицинский

Мы работаем, чтобы помочь уменьшить нехватку поставщиков медицинских услуг в стране, подбирая путешествующих медицинских специалистов с медицинскими учреждениями по всей стране.Узнайте, что делает RTG Medical лучшим в бизнесе для наших путешественников, наших учреждений и наших сотрудников.

Кто мы

RTG Medical — это ветеранское кадровое агентство, специализирующееся на найме профессионалов в сфере путешествий и постоянных медицинских услуг. В сфере медицинского персонала с 2000 года мы набираем и размещаем профессионалов в области сестринского дела, радиологии, терапии, аптек и лабораторий во всех 50 штатах.Наша цель — помочь медицинским учреждениям удовлетворить свои потребности в персонале квалифицированными и компетентными специалистами по справедливой рыночной цене.

RTG стремится повышать качество обслуживания пациентов по всей стране, обеспечивая при этом беспрецедентное обслуживание клиентов.

Мы понимаем, что наша репутация хороша настолько, насколько хороши наши сотрудники, и в RTG Medical искренне верим, что «люди — это наша единственная ценность».

Мы считаем не менее важным удовлетворение всех требований наших клиентов по обеспечению соответствия и гарантии качества, а также соблюдение требований государственного лицензирования.RTG сертифицирован Совместной комиссией и по-прежнему стремится работать на высшем уровне.

Почему РИТЭГ?

Наши специализированные услуги предоставляют медсестер и смежных медицинских специалистов для различных условий и на любой срок контракта по вашему выбору, активно укомплектовывая специалистов по РИТЭГам в следующих областях здравоохранения:

• Пункты неотложной и подострой помощи
• Клиники / Хирургические центры
• Квалифицированный медперсонал / реабилитационный центр
• Аптека
• Домашнее Здоровье
• Долгосрочный уход
• VA, Федеральные и индийские больницы здравоохранения
• Мобильные услуги

страниц — шаблоны документов

Шаблоны ответных писем для исследователей

Эти шаблоны предназначены для использования исследователями, которым требуется предоставить дополнительную информацию комитету по этике (подкомитету или Комитету по этике исследований на людях) или Управлению исследований в отношении заявки на исследовательский проект.Их можно загрузить в СГО в качестве подтверждающего документа при повторной подаче форм или документов.

WA Шаблоны протоколов медицинских исследований

Эти шаблоны предоставляются в качестве руководства для исследователей, у которых еще нет протокола для своего исследовательского проекта. WA Health требует, чтобы протокол был представлен вместе с заявлением по этике.

Эти шаблоны основаны на Интегрированном Управлении терапевтическими товарами (TGA) Приложение к ICH E6 (R1): Руководство по надлежащей клинической практике ICH E6 (R2) ”2016 и мир Организация здравоохранения (ВОЗ) Рекомендуемый формат «протокола исследования».Чтобы соответствовать рекомендациям по надлежащей клинической практике, Протокол должен содержать, но не ограничиваться, информацию, содержащуюся в этом шаблоне.

Формы информационного согласия участников (PICF)

WA Исследователям здравоохранения рекомендуется использовать стандартные PICF Национального совета по здравоохранению и медицинским исследованиям. Эти документы содержат рекомендации по составлению форм согласия как для одноцентровых, так и для многоцентровых исследовательских проектов.

Шаблоны следует использовать как минимальную отправную точку перед добавлением информации о юрисдикции и конкретном проекте. Разделы, не относящиеся к исследовательскому проекту, могут быть удалены.

Эти 12 форм включают три категории участников, как указано в Национальном заявлении:

• Индивидуальный участник
• Детский участник
• Участники не могут дать согласие. Прочтите требования к специальному модулю WA по законодательству WA относительно согласия.

В каждой категории участников доступны три шаблона конкретных типов исследований:

• Генетические исследования
• Исследования в области здравоохранения и социальных наук
• Интервенционные исследования
• Нетрадиционные исследования.

Декларация

Внешний исследовательский персонал, который будет либо проводить исследовательский проект в WA Health, либо иметь доступ к участникам WA Health, их тканям или данным для исследовательского проекта, должен будет заполнить одно или оба из следующих заявлений о конфиденциальности:

• Заявление о конфиденциальности WA Health должно быть заполнено в RGS всем исследовательским персоналом, который не является сотрудником WA Health, имеющим доступ к проекту.Это включает в себя исследовательский персонал с совместными назначениями, когда сотрудник WA Health выполняет проект в качестве сотрудника, не являющегося сотрудником WA Health.

• Заявление о научных исследованиях и конфиденциальности студентов должно быть заполнено всем исследовательским персоналом студентов (независимо от того, являются ли они сотрудниками WA Health). В RGS Декларация об исследованиях и конфиденциальности студентов должна быть приложена в качестве подтверждающего документа к заявке на корпоративное управление.
  

Соглашение о раскрытии конфиденциальности

WA Health заключило стандартное соглашение о раскрытии конфиденциальности (CDA), которое рекомендуется для использования в клинических исследованиях и реестрах данных, которое может быть согласовано с внешней стороной в соответствии с правовой и законодательной политикой правительства штата Вашингтон. руководящие указания.

Соглашения о клинических испытаниях и клинических исследованиях

Имеется стандартный общесистемный подход к соглашениям и возмещениям, применимым к исследовательским проектам, проводимым в WA Health. Для получения дополнительной информации об управлении исследовательскими проектами в WA Health обратитесь к Структуре управления научными исследованиями в WA Health.

В соответствии с другими юрисдикциями, WA Health использует типовые соглашения Medicines Australia (MA) и Ассоциации медицинских технологий Австралии (MTAA).Каждое из этих соглашений предусматривает внесение изменений в условия, изложенные в тексте соглашения. WA Health определило ряд поправок, которые должны быть включены в соответствующий график к соглашению в соответствии с правовой и законодательной политикой и руководящими принципами правительства штата Вашингтон. Эти соглашения были обновлены в марте — мае 2017 года.

Соглашения об исследованиях

Применяется стандартный общесистемный подход к соглашениям и возмещениям, применимым к исследовательским проектам, проводимым в WA Health.Для получения дополнительной информации об управлении исследовательскими проектами в WA Health обратитесь к Структуре управления научными исследованиями в WA Health. WA Health имеет соглашения об исследованиях для исследовательских проектов, не связанных с клиническими испытаниями, клиническими исследованиями или реестрами.

Формы возмещения убытков

Для коммерческих клинических испытаний спонсоры (или контрактная исследовательская организация) должны предоставить соответствующую форму возмещения Medicines Australia для клинических испытаний.Эти формы ссылаются на «Рекомендации по компенсации за травмы, возникшие в результате участия в клинических испытаниях, спонсируемых Компанией», которые спонсор соглашается соблюдать, если участник получил травму во время участия в исследовании (проекте). Исследователи должны прояснить участникам, что проект осуществляется в соответствии с этими Руководящими принципами.

Для коммерческих клинических исследований спонсоры (или контрактная исследовательская организация) должны предоставить соответствующую стандартную форму возмещения ущерба Ассоциации медицинских технологий Австралии для клинического исследования.

Соблюдение руководящих принципов отчетности и политики регистрации клинических испытаний в онкологических журналах: перекрестный обзор

Принадлежности Расширять

Принадлежность

• ¹ Департамент психиатрии, Центр медицинских наук Университета штата Оклахома, Талса, Оклахома, США.

Элемент в буфере обмена

Cole Wayant et al. BMJ Evid Based Med. 2018 июн.

Показать варианты

Формат АннотацияPubMedPMID

Принадлежность

• ¹ Департамент психиатрии, Центр медицинских наук Университета штата Оклахома, Талса, Оклахома, США.

Элемент в буфере обмена

Показать варианты

Формат АннотацияPubMedPMID

Абстрактный

Руководства по отчетности (RG) направлены на повышение прозрачности исследований и обеспечение высококачественной отчетности об исследованиях.Аналогичным образом, политика регистрации клинических испытаний направлена ​​на снижение систематической ошибки в отчетности о результатах путем обеспечения проспективной регистрации всех результатов испытаний. Несоблюдение стандартов качества, задокументированных в RG, может привести к некачественному и невоспроизводимому исследованию. Здесь мы исследуем соблюдение общих правил и политики регистрации клинических испытаний в 21 онкологическом журнале. Мы изучили страницу с инструкциями для авторов для каждого из включенных онкологических журналов на предмет соблюдения общих правил отчетности и политик регистрации испытаний.Мы связались с редакторами, чтобы определить приемлемые типы исследований, и сопоставили эту информацию с RG журнала и политиками регистрации испытаний, чтобы рассчитать процент журналов, которые придерживаются определенных рекомендаций или политик. 76,2% (16 из 21) опрошенных онкологических журналов придерживаются Сводных стандартов отчетности по клиническим испытаниям, в то время как только 33,3% (7 из 21) придерживаются рекомендаций по усилению отчетности по обсервационным исследованиям в эпидемиологии для обсервационных исследований. Аналогично 76.2% (16/21) онкологических журналов придерживаются политики регистрации клинических исследований. Мы также демонстрируем, что соблюдение журналом RGs положительно влияет на отчетность авторов, несмотря на то, что соблюдение правил регистрации проб не показывает такой выгоды. Наши результаты показывают, что онкологические журналы придерживаются RG и политики регистрации клинических испытаний чаще, чем другие специализированные журналы, но тем не менее оставляют желать лучшего. Мы пришли к выводу, что соблюдение онкологических журналов RG и политикой регистрации клинических испытаний обнадеживает, но, тем не менее, является неоптимальным.Мы рекомендуем всем онкологическим журналам принять РГ и политику регистрации клинических испытаний.

Ключевые слова: онкология.

© Автор (ы) статьи (или их работодатель (ы), если иное не указано в тексте статьи) 2018. Все права защищены. Запрещается коммерческое использование, если иное прямо не оговорено.

Заявление о конфликте интересов

Конкурирующие интересы: не заявлены.

Похожие статьи

• Оценка руководящих принципов отчетности и требований к реестру клинических испытаний среди журналов по пластической хирургии.

  Чекеттс Дж. Х, Кук С., Имани С., Дакетт Л., Вассар М.Checketts JX и др. Ann Plast Surg. 2018 август; 81 (2): 215-219. DOI: 10.1097 / SAP.0000000000001476. Ann Plast Surg. 2018. PMID: 29794510

• Оценка руководств по отчетности и требований к регистру клинических испытаний в журналах по ортопедической хирургии.

  Чекеттс Дж., Симс М. Т., Детвейлер Б., Миддлмист К., Джонс Дж., Вассар М. Checketts JX и др.J Bone Joint Surg Am. 2018 7 февраля; 100 (3): e15. DOI: 10.2106 / JBJS.17.00529. J Bone Joint Surg Am. 2018. PMID: 29406351

• Гематологические журналы недостаточно соблюдают правила составления отчетов: систематический обзор.

  Вайант К., Смит К., Симс М., Вассар М. Wayant C, et al. J Thromb Haemost. 2017 Апрель; 15 (4): 608-617. DOI: 10.1111 / jth.13637. Epub 2017 27 февраля.J Thromb Haemost. 2017 г. PMID: 28122156 Обзор.

• Регистрация испытаний и соблюдение правил публикации в сердечно-сосудистых журналах.

  Sims MT, Bowers AM, Fernan JM, Dormire KD, Herrington JM, Vassar M. Sims MT и др. Сердце. 2018 Май; 104 (9): 753-759. DOI: 10.1136 / heartjnl-2017-312165. Epub 2017 1 ноя. Сердце. 2018. PMID: 2

  15

• Способствуют ли журналы экстренной медицины регистрации испытаний и соблюдению правил отчетности? Обзор «Инструкции для авторов».

  Симс М.Т., Хеннинг Н.М., Вайант С.К., Вассар М. Sims MT и др. Scand J Trauma Resusc Emerg Med. 2016 24 ноября; 24 (1): 137. DOI: 10.1186 / s13049-016-0331-3. Scand J Trauma Resusc Emerg Med. 2016 г. PMID: 27881175 Бесплатная статья PMC. Обзор.

Процитировано

• Утверждение руководств по отчетности и регистрации исследований журналами эндокринной медицины и внутренней медицины: метаэпидемиологическое исследование.

  Суньига-Эрнандес Х.А., Дорси-Тревиньо Э.Г., Гонсалес-Гонсалес Я.Г., Брито JP, Монтори В.М., Родригес-Гутьеррес Р. Zuñiga-Hernandez JA, et al. BMJ Open. 2019 26 сентября; 9 (9): e031259. DOI: 10.1136 / bmjopen-2019-031259. BMJ Open. 2019. PMID: 31558457 Бесплатная статья PMC.

• Использование утверждения CONSORT для оценки полноты отчетов о рандомизированных исследованиях зависимости: перекрестный обзор.

  Вассар М., Джеллисон С., Вендельбо Х., Вайант С., Грей Х., Бибенс М. Vassar M, et al. BMJ Open. 6 сентября 2019; 9 (9): e032024. DOI: 10.1136 / bmjopen-2019-032024. BMJ Open. 2019. PMID: 31494625 Бесплатная статья PMC. Обзор.

Условия MeSH

• Клинические испытания как тема * / стандарты
• Клинические испытания как тема * / статистика и числовые данные
• Соблюдение рекомендаций / статистика и числовые данные *
• Медицинская онкология * / стандарты
• Медицинская онкология * / статистика и числовые данные
• Периодические издания как тема / стандарты
• Периодические издания как тематические / статистические и числовые данные
• Реестры * / статистика и числовые данные

LinkOut — дополнительные ресурсы

• Источники полных текстов

• Другие источники литературы

• Медицинские

цитировать

Формат: AMA APA ГНД NLM

Регулятор стенки сосудов G-белка-сигнализатора-1 (RGS-1) необходим для опосредованного ангиотензином II контроля артериального давления.

Vascul Pharmacol.2018 сен; 108: 15–22.

988 Jyoti Patel

^b Центр генетики человека Wellcome, Оксфордский университет, Оксфорд, OX3 7BN , UK

Surawee Chuaiphichai

^a Отделение сердечно-сосудистой медицины, Центр передовых исследований British Heart Foundation, Медицинский департамент Рэдклиффа, Больница Джона Рэдклиффа, Оксфордский университет, Оксфорд, OX3 9DU, Великобритания

^b Wellcome Center по генетике человека, Оксфордский университет, Оксфорд, OX3 7BN, Великобритания

Джиллиан Дуглас

^a Отдел сердечно-сосудистой медицины, British Heart Foundation C Центр передовых исследований, Медицинский факультет Рэдклиффа, Госпиталь Джона Рэдклиффа, Оксфордский университет, Оксфорд, OX3 9DU, Великобритания

^b Центр генетики человека Wellcome, Оксфордский университет, Оксфорд, OX3 7BN, Великобритания

Кэролайн М.Горвин

^c Академическое эндокринное отделение, Оксфордский центр диабета, эндокринологии и метаболизма, Медицинский факультет Рэдклиффа, Оксфордский университет, Оксфорд, OX3 7LE, Великобритания

Кейт М. Ченнон

^a Отдел сердечно-сосудистой медицины , Центр передового опыта Британского кардиологического фонда, Медицинский факультет Рэдклиффа, Госпиталь Джона Рэдклиффа, Оксфордский университет, Оксфорд, OX3 9DU, Великобритания

^b Wellcome Center for Human Genetics, Оксфордский университет, Оксфорд, OX3 7BN, Великобритания

^a Отделение сердечно-сосудистой медицины, Центр передовых исследований Британского фонда сердца, Медицинский факультет Рэдклиффа, больница Джона Рэдклиффа, Оксфордский университет, Оксфорд, OX3 9DU, Великобритания

^b Центр генетики человека Wellcome, Оксфордский университет , Oxford, OX3 7BN, UK

^c Академическое эндокринное отделение, Оксфордский центр диабета, эндокринологии и метаболизма, Рэдклиф fe Департамент медицины, Оксфордский университет, Оксфорд, OX3 7LE, UK

Поступила в редакцию 26 апреля 2017 г .; Пересмотрено 18 марта 2018 г .; Принято 5 апреля 2018 г.

Это статья в открытом доступе по лицензии CC BY (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).

Дополнительные материалы

Дополнительный Рис. 1 Проточно-цитометрический анализ внутриклеточной экспрессии FLAG. Клетки MOVAS трансфицировали пустой векторной контрольной плазмидой или плазмидой FLAG tag Rgs1 и через 48 часов проводили внутриклеточное окрашивание с использованием антитела против FLAG-FITC.Серая кривая представляет собой пустой векторный контроль, а зеленая кривая представляет интенсивность флуоресценции FLAG-FITC-положительной популяции. Популяция клеток, трансфицированных Rgs1, была 72% FLAG-положительной в этот момент времени.

GUID: 88CA281F-8966-4D55-8197-9519512E0565

Abstract

Рецепторы, связанные с G-белками (GPCR), активируют внутриклеточные сигнальные пути путем связывания с гетеротримерными G-белками, которые контролируют многие физиологические процессы, включая гомеостаз артериального давления.Регулятор G-Protein Signaling-1 (RGS1) контролирует величину и продолжительность передачи сигналов GPCR, действуя как белок, активирующий GTPase, для определенных Gα-белков. RGS1 играет противоположную роль в гематопоэтических и негематопоэтических клетках. Rgs1 ^{— / —} ApoE ^{— / —} мыши защищены от разрыва аневризмы аорты, вызванного ангиотензином II (Ang II). И наоборот, обработка Ang II увеличивает систолическое артериальное давление в большей степени у Rgs1 ^{— / —} ApoE ^{— / —} мышей, чем ApoE ^{— / —} мышей, независимо от мышей. его роль в миелоидных клетках.Однако точная роль RGS1 в гипертонии и клетках сосудистого происхождения остается неизвестной. Мы определили влияние делеции Rgs1 на функцию сосудов у мышей ApoE ^{— / —} . Делеция Rgs1 привела к усилению сужения сосудов в аорте и брыжеечных артериях у мышей ApoE ^{— / —} в ответ на фенилэфрин (PE) и U46619 соответственно. Было показано, что Rgs1 играет роль в сосудистой сети с нарушением эндотелий-зависимой вазодилатации и усилением эндотелий-независимой дилатации до SNP в Rgs1 ^{— / —} ApoE ^{17 — / —} брыжеечных артерий.Чтобы обратиться к нижестоящим сигнальным путям в клетках гладких мышц сосудов (VSMC) в ответ на стимуляцию Ang II, мы оценили активацию pErk1 / 2, pJNK и pp38 MAPK в VSMC, временно трансфицированных Rgs1. Передача сигналов pErk1 / 2, но не передача сигналов pJNK и pp38 нарушалась в присутствии Rgs1. Кроме того, мы продемонстрировали, что усиленный сократительный ответ на PE в аорте Rgs1 — / — ApoE — / — был снижен ингибитором MAPK / Erk (MEK) и антагонистом потенциалзависимых кальциевых каналов L-типа, что позволяет предположить, что Erk1 / 2 передача сигналов и приток кальция являются основными эффекторами Rgs1-опосредованных сократительных реакций сосудов, соответственно.Эти данные указывают на то, что RGS1 является новым регулятором гомеостаза артериального давления, и подчеркивают контролируемые RGS1 сигнальные пути в сосудистой сети, которые могут быть новыми мишенями для разработки лекарств для лечения гипертензии.

Ключевые слова: Rgs1, передача сигналов G-белков, ангиотензин II, гладкомышечные клетки, функция сосудов

Сокращения: Rgs1, регулятор передачи сигналов G-белков 1; VSMC, гладкомышечные клетки сосудов; Ang II, ангиотензин II; GPCR, рецептор, связанный с G-белком (GPCR)

Графический реферат

1.Введение

Гипертония является ключевым фактором риска развития сердечно-сосудистых заболеваний, которые могут быть связаны с усилением передачи сигналов рецептора, связанного с G-белком (GPCR). Вазоактивные вещества, активирующие GPCR, могут регулировать гомеостаз артериального давления, резко влияя на тонус сосудов. Однако более длительные изменения системного давления и сердечного выброса, ведущие к сосудистой дисфункции, могут привести к клиническим осложнениям, указывая на то, что для контроля артериального давления требуется жесткая регуляция сигнальных путей GPCR [1].Многие физиологически важные вазоактивные вещества, такие как ангиотензин II (Ang II), норадреналин, ацетилхолин (ACh), передают сигнал через несколько GPCR, которые соединяются с семействами гетеротримерных G-белков субъединиц Gαq и Gαi [2]. Гладкомышечные клетки сосудов (VSMC) ответственны за сократительную и дилататорную активность стенки сосуда и тем самым модулируют периферическое сопротивление [3]. В SMC и Ang II, и норадреналин опосредуют сужение сосудов за счет активации рецепторов, связанных с Gαq.Передача сигналов с помощью Gαq-сопряженного рецептора активирует несколько внутриклеточных путей, включая диацилглицерин (DAG) и инозитол-1,4,5-трифосфат (IP ₃ ), что приводит к активации протеинкиназы C (PKC) и высвобождению кальция из внутриклеточных хранилищ, соответственно [ 4]. Поступление кальция через плазматическую мембрану и высвобождение из внутриклеточных запасов, следовательно, приводит к фосфорилированию легкой цепи миозина (MLC), активации и, в конечном итоге, сужению сосудов.

Белки-регуляторы передачи сигналов G-белков (RGS) могут модулировать передачу сигналов G-белков, действуя как белки, активирующие GTPase (GAP), ускоряя внутреннюю активность GTPase субъединицы Gα, ведущую к реформации и инактивации гетеротримеров [5].Способствуя инактивации G-белка, внутриклеточный ответ на повторную стимуляцию лигандом снижается. Ранее мы показали, что RGS1 играет критическую роль в регуляции Ang II-опосредованного разрыва аневризмы аорты у мышей ApoE ^{— / —} посредством ослабления передачи сигналов хемокинового рецептора Gαi в лейкоцитах [6]. Экспрессия Rgs1 активируется в активированных воспалительных клетках, где она действует, подавляя миграцию, тем самым способствуя накоплению лейкоцитов во время воспаления.Кроме того, есть указание на то, что RGS1 участвует в Ang II-опосредованном контроле артериального давления посредством передачи сигналов Gαq, независимо от его роли в миелоидных клетках и образовании аневризмы. Другие белки RGS участвуют в контроле артериального давления [1], однако на сегодняшний день роль RGS1 в негематопоэтических клетках и в качестве регулятора сосудистого тонуса не исследована. Понимание механизмов, лежащих в основе сигнальных путей G-белка в гомеостазе артериального давления, может предоставить новые терапевтические цели для лечения гипертонии.

Чтобы идентифицировать физиологические механизмы, с помощью которых RGS1 регулирует кровяное давление, мы исследовали роль Rgs1 в активации стенки сосуда и влияние делеции Rgs1 на функцию сосудов в проводящем канале и резистентную сосудистую сеть. Мы использовали Rgs1 ^{— / —} мышей на фоне ApoE ^{— / —} , поскольку гиперлипидемия является частым сопутствующим заболеванием с гипертонией. Наши результаты являются первым доказательством того, что RGS1 опосредует артериальное давление, способствуя релаксации резистентной сосудистой сети за счет своей способности ослаблять передачу сигналов, индуцированную вазоконстрикторами.

2. Методы

2.1. Мыши

Поколение мышей Rgs1 ^{— / —} было описано ранее [7]. Rgs1 ^{— / —} мышей скрещивали на фоне ApoE ^{— / —} (Чарльз-Ривер, Великобритания) для создания подходящих пометов Rgs1 ^{— / —} ApoE ^{— / —} и ApoE ^{— / —} мышей.Мышей содержали в индивидуально вентилируемых клетках с 12-часовым циклом свет / темнота и контролируемой температурой (20-22 ° C). Стандартный корм (B&K Universal Ltd., Великобритания) и вода были доступны без ограничений. Все исследования на животных проводились с этического одобрения Местного комитета по этике и в соответствии с Законом Министерства внутренних дел Великобритании о животных (научные процедуры) 1986 года. Для исследований трансплантации костного мозга самцы мышей в возрасте 10 недель получали летальную дозу цельного облучение тела (2 × 5 Гр) с последующим i.v. инъекция 5 × 10 ⁶ клеток костного мозга от самцов мышей Rgs1 ^{— / —} ApoE ^{— / —} и ApoE ^{— / —} .

2.2. Количественная ОТ-ПЦР в реальном времени

Тотальную РНК выделяли с использованием наборов RNeasy (Qiagen, UK) и обратно транскрибировали в кДНК с использованием обратной транскриптазы SuperScript II (Invitrogen, UK). Количественная ПЦР в реальном времени была проведена с 10-50 нг кДНК на системе обнаружения в реальном времени iCycler IQ (Bio-Rad Laboratories Ltd., ВЕЛИКОБРИТАНИЯ). Экспрессию генов определяли с помощью анализа экспрессии генов TaqMan (Applied Biosystems, Великобритания) относительно уровня β-актина домашних генов для мыши и GAPDH для человека с использованием ОТ-ПЦР в реальном времени. Относительное количественное определение экспрессии генов проводили с использованием сравнительного метода Ct (ΔΔCt).

2.3. Выделение первичных клеток, культивирование и трансфекции клеточных линий

Первичные клетки и цельные грудные аорты были получены от 16-недельного ребенка ApoE ^{— / —} и Rgs1 ^{— / —}

Ранее мы показали, что инфузия Ang II в течение 14 дней приводила к значительному повышению артериального давления у Rgs1 ^{— / —} ApoE ^{— / —} мыши.Сначала мы стремились установить, присутствует ли повышение артериального давления, которое наблюдалось при медленной прессорной дозе, использованной ранее, при более высокой прессорной дозе Ang II. Регистрацию инвазивного кровяного давления у мышей без сознания проводили после 14 дней инфузии Ang II (3 мг / кг / день). В соответствии с нашим предыдущим исследованием [6], мы обнаружили значительные различия в систолическом артериальном давлении между мышами ApoE ^{— / —} , которым трансплантировали ApoE ^{— / —} костного мозга и Rgs1 ^{— / —} ApoE ^{— / —} мыши с трансплантированными Rgs1 ^{— / —} ApoE ^{— / —} костный мозг (101.3 ± 3,944 мм рт. Ст. Против 137,5 ± 3,056 мм рт. P <0,0001; А). Кроме того, повышение систолического артериального давления также наблюдалось у мышей Rgs1 ^{— / —} ApoE ^{— / —} мышей, которым трансплантировали ApoE ^{— / — 101,3 ±} костного мозга ( 3,944 мм рт.ст. против 132,4 ± 5,218 мм рт.В соответствии с изменениями, наблюдаемыми в систолическом артериальном давлении, значительное повышение диастолического артериального давления у мышей ApoE ^{— / —} , которым трансплантировали ApoE ^{— / —} костного мозга и Rgs1 ^{— / —} ApoE ^{— / —} мышей, которым трансплантировали ApoE ^{— / —} костный мозг был значительно изменен (65,18 ± 3,462 мм рт.21 ± 2,652 мм рт. B; P = 0,0002). Частота сердечных сокращений была одинаковой у мышей ApoE ^{— / —} и Rgs1 ^{— / —} ApoE ^{— / —} мышей (450,2 ± 25,29 уд / мин по сравнению с 470,2 ± 13,06). мин; C).

Химерные мыши Rgs1 — / — ApoE — / — имели повышенную реакцию артериального давления после инфузии Ang II в течение 14 дней.

Chimeric ApoE ^{— / —} и Rgs1 ^{— / —} ApoE ^{— / —} мышам вводили Ang II-3 мг кг ^{в день ) в течение 14 дней, а артериальное давление измеряли на 14 день у анестезированных мышей с использованием катетера Миллара.(A) Систолическое артериальное давление (B) Диастолическое артериальное давление (C) Частота сердечных сокращений у химерных мышей Rgs1 — / — ApoE — / — и ApoE — / -. (D) Репрезентативные следы систолического артериального давления у химерных мышей с использованием катетера Миллара (*** P <0,001; n = 10-11 животных на группу). WT = ApoE - / -; KO = Rgs1 - / - ApoE - / -.}

3.2. Подавление мРНК

Затем мы исследовали возможную регуляцию Rgs1 эффектов опосредованной Ang II активации рецептора AT1 в сосудистой сети.Чтобы оценить это, мы измерили экспрессию Rgs1 после введения Ang II in vivo и in vitro. Сначала мы измерили экспрессию мРНК Rgs1 в грудной аорте от мышей ApoE ^{— / —} , имплантированных физиологическим раствором и Ang II в течение 5 дней, и обнаружили, что экспрессия мРНК Rgs1 была значительно снижена в аортах от Ang II-. обработанных ApoE ^{— / —} мышей по сравнению с мышами, получавшими физиологический раствор (A).Затем мы измерили экспрессию в изолированном и культивированном первичном эндотелиале и VSMC, стимулированных Ang II in vitro (B), и обнаружили, что экспрессия Rgs1 снижалась при стимуляции. Эти данные указывают на то, что RGS1 является вероятным кандидатом на негативную регуляцию белков Gαq, связанных с рецептором Ang II типа 1 в сосудистой стенке, а также эндотелиальных и VSMCs.

мРНК Rgs1 подавляется после стимуляции Ang II.

qRT – PCR анализ мРНК Rgs1 в грудной аорте (A) от ApoE ^{— / —} мышей после 5-дневной инфузии физиологического раствора или Ang II (0.8 мг / кг / день) (B) первичные эндотелиальные клетки и первичные VSMC от мышей ApoE ^{— / —} , стимулированных в течение 24 часов с помощью Ang II (1 мкМ) in vitro после 5-дневной культуры, представленной относительно мРНК в нестимулированных клетках — 1 (n = 4–7; * P <0,05).

3.3. Делеция

VSMCs экспрессируют ряд GPCR, таких как адренергические рецепторы, которые необходимы для передачи сигналов симпатической нервной системы.Альфа-адренорецепторы связаны с Gαq и индуцируют активацию фосфолипазы C (PLC) и последующее увеличение внутриклеточного кальция, который необходим для инициирования кальцийзависимого сокращения SMC и в сосудах; кальций-зависимая вазоконстрикция.

Чтобы проверить влияние RGS1 на вазомоторную функцию Gαq, мы определили сосудистую реактивность в сосудах кондуита из ApoE ^{— / —} и Rgs1 ^{— / —} ApoE — — мышей.Не было обнаружено никакой разницы между реакцией сокращения на 60 ммоль ∙ л ^-1 KCl в ApoE ^{— / —} (7,872 ± 0,59 мНмм ^-1 ) и Rgs1 ^{— / —} ApoE ^{— / —} аорты (7,561 ± 0,30 мН · мм ^-1 ) (A). Рецептор-опосредованное сужение сосудов к α-адренергическому агонисту, фенилэфрину (PE), было значительно усилено в Rgs1 ^{— / —} ApoE ^{— / —} аортах по сравнению с — — ApoE — ApoE 909 элементы управления (B).В отличие от PE, рецептор-опосредованного сужения сосудов к агонисту AT1, Ang II имел очень слабый эффект на сужение сосудов в аорте как от ApoE ^{— / —} , так и от Rgs1 ^{— / — 90po993 — / —} мышей (C). Кроме того, эндотелий-зависимая вазодилатация была нарушена в Rgs1 ^{— / —} ApoE ^{— / —} аорты по сравнению с ApoE ^{— / — в контроле не было различий в эндотелий-независимой вазодилатации до SNP между генотипами (E).Для решения вопроса о том, что усиленный сократительный ответ на вазоконстрикторы в Rgs1 — / — ApoE — / — аорте частично был связан с передачей сигналов MAPK, мы оценили вазоконстрикцию PE в присутствии ингибитора MAPK / Erk (MEK) и обнаружили, что ответ был затупился (F). Сокращение гладких мышц также зависит от передачи сигналов кальция, поэтому мы оценили ответ Rgs1 — / — ApoE — / — аорты на вазоконстрикцию PE в присутствии антагониста потенциалзависимых кальциевых каналов L-типа. Мы наблюдали, что усиленный сократительный ответ на PE в аорте Rgs1 — / — ApoE — / — был снижен антагонистом потенциалзависимого кальциевого канала L-типа в той же степени, что и у ApoE — / — аорты (G).Эти наблюдения показывают, что передача сигналов кальция и передача сигналов MAPK являются основными эффекторами Rgs1-опосредованных сократительных ответов сосудов, которые, как известно, активируются ниже передачи сигналов рецептора Gaq.}

Rgs1 — / — ApoE — / — аорты изменили сосудосуживающие и сосудорасширяющие реакции.

(A) Максимальное сокращение аорты до 45 ммоль · л ^-1 KCl. (B) Сужение сосудов к фенилэфрину (PE) было усилено в аорте Rgs1 — / — ApoE — / — по сравнению с аортой ApoE — / — .(C) Ang II не вызывал сократительной реакции аорты ни в одной из групп. (D) Эндотелиально-зависимая вазодилатация до ацетилхолина (Ach) была изменена в Rgs1 — / — ApoE — / — аортах, и (E) Эндотелий-независимая вазодилатация в ответ на нитропруссид натрия (SNP) не изменилась между группами (F) Сужение сосудов к PE отменяется в присутствии ингибитора MEK (10 мкМ PD98059) в аортах Rgs1 — / — ApoE — / — и ApoE — / — . (G) Сужение сосудов PE частично ослаблялось в присутствии антагониста потенциалзависимых кальциевых каналов L-типа (50 нМ нифедипина) в аортах Rgs1 — / — ApoE — / — и ApoE — / — (* Р <0.05; A-E; n = 6 животных на группу F-G n = 4 животных на группу).

Для дальнейшего исследования взаимосвязи между артериальным давлением и изменениями сопротивления сосудистой сети, брыжеечных артерий от ApoE ^{— / —} и Rgs1 ^{— / —} ApoE — / — ApoE — / — Было выделено мышей и определена сократительная реакция на вазоконстрикторы и вазодилататоры. В Rgs1 ^{— / —} ApoE ^{— / —} мезентериальных артериях рецептор-опосредованные вазоконстрикции к тромбоксану A _{2 агониста рецептора} , U466 — 9, были значительно усилены по сравнению с U466 — / — органы управления (А).Кроме того, рецептор-опосредованное сужение сосудов агониста рецептора AT1, Ang II, также заметно усилилось у Rgs1 ^{— / —} ApoE ^{— / —} по сравнению с ApoE — (В). Эндотелий-зависимая вазодилатация в ответ на ACh и активированный протеиназой агонист рецептора 2, SLIGRL, были значительно нарушены в Rgs1 ^{— / —} ApoE ^{— / —} мезентериальных артериях по сравнению с мезентериальными артериями. ApoE ^{— / —} брыжеечные артерии (C, D).Сосудорасширяющий ответ на ACh был нормализован в присутствии неселективного ингибитора синтазы оксида азота (L-NAME) и не показал изменений между группами (E). Кроме того, эндотелий-независимая вазодилатация до SNP была усилена в Rgs1 ^{— / —} ApoE ^{— / —} брыжеечных артерий по сравнению с брыжеечными артериями из